Extracto
función paracrina es un importante mecanismo de comunicación entre células dentro microambiente del tejido en el desarrollo normal y la enfermedad.
in vitro y modelos de cultivo de células que simulan el tejido o tumor microambiente son herramientas necesarias para delinear las interacciones epitelio-estroma incluyendo la función paracrina, sin embargo, un (3D) modelo tumoral ideal tridimensional estudiar específicamente la función paracrina se carece actualmente. Con el fin de llenar este vacío que hemos desarrollado un novedoso modelo de co-cultivo 3D en microesferas de alginato de hidrogel de dos capas, que incorpora epitelial cáncer de próstata y las células del estroma en compartimentos separados de las microesferas. Las células se mantuvieron confinados y viable dentro de sus respectivos ámbitos durante más de 30 días. Como una prueba de principio en relación con la función paracrina del modelo, que mide la componente shedded de E-cadherina (SE-cad) en el medio condicionado, una importante molécula adhesiva unida a la membrana celular que es muy dysregulated en los cánceres incluyendo el cáncer de próstata. Además de demostrar que sE-cad se puede cuantificar de forma fiable en los medios acondicionados, los experimentos de tiempo también demostraron que la cantidad de sE-cad está influenciada por la interacción epitelial-estromal. En conclusión, el estudio establece una novela 3D
in vitro
modelo de co-cultura en la que se puede utilizar para estudiar la interacción célula-célula paracrina
Visto:. Colmillo X, Sittadjody S, Gyabaah K, Opara CE, Balaji KC (2013) Novela 3D Co-cultivo Modelo de células epiteliales del estroma interacción en el cáncer de próstata. PLoS ONE 8 (9): e75187. doi: 10.1371 /journal.pone.0075187
Editor: Elad Katz, AMS Biotecnología, Reino Unido
Recibido: 3 Junio, 2013; Aceptado: August 11, 2013; Publicado: 20 Septiembre 2013
Derechos de Autor © 2013 de Fang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo con el apoyo de la Universidad Wake Forest fondos institucionales a KC Balaji y por el NIH subvención CA079448 a X. fang. el sitio web del proveedor de fondos es http://www.wakehealth.edu/. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito.
Conflicto de intereses: Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
Varios de los
modelos in vitro
células de co-cultivo disponibles para. estudiar las interacciones célula-célula utilizar fuentes o platos [1,2,3] bidimensionales (2D) de Petri. Sin embargo, en la mayoría de los organismos vivos células están incrustadas en un microambiente en tres dimensiones (3D), rodeada por otras células y la influencia de factores solubles secretadas en el medio extracelular. Alternativamente modelos de sándwich se pueden utilizar para el crecimiento de múltiples capas de las células, pero las limitaciones son evidentes, como células alterarían sus patrones de características morfológicas, metabolismo y la expresión génica en cultivo 2D, especialmente cuando son de organismos superiores [4,5]. Además, los cultivos de células 2D convencionales limitan las comunicaciones celulares y el transporte de factores solubles, oxígeno y nutrientes, eliminación de desechos y el metabolismo celular como presente en ambientes biológicos nativos [6,7]. Por lo tanto, es fundamental para el desarrollo
in vitro
sistemas de modelos que simulan los microambientes de tejido para producir resultados experimentales fiables y biológicamente significativas.
Los sistemas de modelado 3D que simulan microambiente del tejido fueron desarrollados para abordar las limitaciones asociadas con 2D modelos [8]. Mientras 3D
in vitro
modelos de cultivo celular superar varias limitaciones de los modelos 2D, la mejora en el modelado 3D es necesario discriminar los tipos específicos de interacción célula-célula, tales como funciones directas, autocrina o paracrina célula-célula. Los avances en biomateriales y técnicas de bioingeniería permiten el uso de nuevos materiales tales como geles de colágeno, laminina y Matrigel ™ en cultivo celular, el desarrollo de la matriz extracelular sintética y crear una variedad de modelos 3D [5,9,10,11,12,13,14, 15]. Entre los biomateriales disponibles, hidrogel de alginato que posee las propiedades para el trasplante de células, administración de fármacos y la ingeniería de tejidos preferido. El alginato es un polisacárido y un polímero biocompatible derivado de algas pardas. Mediante la adición de cationes divalentes tales como calcio o bario, polímeros de alginato pueden ser iónicamente reticulado para formar un hidrogel. La naturaleza hidrófila de los andamios de alginato permite la carga alta de células que permanecen viables y funcionales en la cultura [16,17,18]. Además, la producción de hidrogel de alginato es relativamente simple y encapsulación se puede lograr bajo condiciones no estrictas. Varios tipos de células, incluyendo células neuronales, osteoblastos, condrocitos, mioblastos, se han encapsulado, culta y ampliado en los hidrogeles de alginato [19,20,21,22,23].
En este estudio se estableció un cáncer de próstata en 3D interacción epitelial-estromal en microesferas de hidrogel de alginato por las células co-cultivo de cáncer de próstata (C4-2 transfectadas de forma estable con la proteína quinasa D1 (PKD1) o vector de control) y las células del estroma de próstata normales (WPMY-1 células) en la misma microcápsula, pero en sub-capas separadas. Este sistema es ideal para estudiar la influencia paracrina entre los dos tipos de células porque no se permite la interacción directa entre las células epiteliales y estromales. Como una prueba de principio para estudiar la función paracrina, medimos derramamiento de E-cadherina (SE-cad) en los medios solubles. El SE-cad es un fragmento de 80 kDa escindida de E-cadherina, una proteína de adhesión celular transmembrana que se desregula en varios cánceres incluyendo el de próstata [3,24,25,26]. Elevada sE-cad se ha informado en los líquidos y suero de pacientes con una variedad de cánceres y otras enfermedades [25,27,28,29,30] y los niveles séricos se han demostrado que se correlaciona positivamente con el cáncer de próstata metastásico y recurrencia de la enfermedad. Por lo tanto, SE-cad se sugiere a ser un nuevo marcador biológico para el pronóstico del cáncer. Hemos descrito anteriormente en la regulación a la baja de PKD1 en el cáncer de próstata avanzado [31], y que PKD1 promueve la E-cadherina vertimiento mediante el aumento de las metaloproteinasas de matriz (MMP) -2 y -9 secreción [24].
Materiales y métodos
Cell Cultura y
C4-2 células establemente transfectadas con el vector pcDNA3.1 (células vector) o PKD1-GFP (células PKD1) fueron desarrollados en nuestro laboratorio como se describe anteriormente [31]. las células del estroma de próstata normales (WPMY-1) se obtuvieron de ATCC. Las células se cultivaron en medio DMEM (glucosa alta) (Hyclone, Cat#SH30243.01) con 10% de FBS y 1% Antibioltic-antimicóticos (Hyclone Cat#SV30079.01) en 15-cm placa de cultivo estéril, y se incubaron a 37 ° C con 5% de CO
2. Cuando las células alcanzaron 80% de confluencia, los medios se retiraron de cada placa y las células se lavaron con PBS estéril tres veces, se trató con tripsina (Hyclone, Cat#SH30236.01) durante 20 minutos y se transfirieron a tubos de centrífuga estériles. Se lavaron con PBS de nuevo, y luego se resuspendieron en medio DMEM para la encapsulación.
Fabricación de microcápsulas
El estroma, células de vectores y de PKD1 se encapsula en hidrogel de alginato usando un dispositivo de micro-fluídica con algunas modificaciones de encapsulación como los descritos por Tendulkar et al. y Khanna et al. [32,33]. En pocas palabras, primero tipo de células (estroma o vector o PKD1) se mezcló con 1,5% (w /v) ultrapura de baja viscosidad de alginato de alta manuronato (LVM) (NovaMatrix, Sandvika Noruega) y se extruye a través del dispositivo de encapsulación de micro-fluídica. Las gotitas generadas se recogieron en solución de cloruro de calcio 100 mM. Después de la reticulación de alginato durante cinco minutos en CaCl
2, las microcápsulas se lavaron con 0,9% de NaCl que contiene CaCl 20 mM
2. Las microcápsulas fueron incubadas con (v 0,1% w /) durante 20 minutos para crear una capa OLP, que sirve como una membrana basal selectiva perm. Poli-L-ornitina (OLP) Las microcápsulas recubiertas-OLP se mezclaron luego con el segundo tipo de células (estroma o vector o PKD1) suspendido en 1,5% (v /w) LVM y encapsulado de nuevo utilizando el dispositivo de micro-fluídica con el fin de obtener microcápsulas de múltiples capas. Las microcápsulas se lavaron con 0,9% de NaCl que contiene CaCl 20 mM
2 y se cultivaron en DMEM que contenía suero bovino fetal (10% v /v) a 37 ° C con 5% de CO
2.
Ensayo de viabilidad
para la evaluación de la viabilidad de las células encapsuladas, se tomaron unas cuantas cápsulas de cada grupo transfectado a cabo y se transfiere a limpiar placas de 24 pocillos, los medios se aspiraron cuidadosamente y células teñidas. tinción de control de tipo de una sola célula: CFDA SE (Vybrant® CFDA SE kit trazador celular, Invitrogen) reconstituido en DMEM libre de suero (SFM, Hyclone) (1: 400) se añadió a cada pocillo (500 l /pocillo) y se incubó durante 15 minutos a 37 ° C, 5% de CO
2 en la incubadora. Entonces SFM con CFDA SE fue reemplazado por DMEM con 10% FBS y se incubó de nuevo durante otros 30 minutos a 37 ° C, 5% de CO
2 en la incubadora. A continuación, el medio que contiene suero se reemplazó con 50 g /ml de yoduro de propidio (PI) (Life Technologies /Invitrogen, Grand Island, NY) y se incubó a temperatura ambiente durante 2 min y las microcápsulas se lavaron 3 veces para eliminar el exceso de PI. Las microcápsulas fueron entonces observadas bajo microscopio de fluorescencia invertido (Zeiss Axiovert 200M) y la imagen. Se determinó el número de células vivas y muertas cualitativamente de la imagen compuesta adquirió usando el software Image-Pro Plus (versión 6.3.1.542). Doble tinción tipo de células: Para demostrar la compartimentación diferencial de los diferentes tipos de células en las micro-cápsulas y en capas múltiples, las células del núcleo interno se pre-teñidas con verde Cell Tracker (Invitrogen, cat#C2925) y las células de la capa exterior eran pre manchado con Cell-tracker Orange (Invitrogen), antes de la síntesis de las microcápsulas de múltiples capas. Antes de la observación, las microcápsulas se tiñeron con azul SYTOX de ácido nucleico de la mancha (Invitrogen, cat#S11348) para las células muertas. Las múltiples capas micro-cápsulas se imágenes utilizando el microscopio de fluorescencia (Zeiss Axiovert 200M).
inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA): perfil
Para evaluar las funciones paracrinos de las células encapsuladas, los niveles de sE-cad se midió en los medios de cultivo. Cada grupo de microcápsulas se cultivó en cuatrillizos y el medio gastado se recogió cada dos días. Durante la percepción de los medios gastados, los medios de comunicación en cada pocillo se mezclan a fondo; 1 ml (media del volumen total) se extrajo de cada pocillo y se reemplazó con 1 ml de DMEM completo fresco con 10% de FBS y 1% de antibióticos. Los medios de comunicación muestra se almacenó en un tubo de Eppendorf limpio a -20 ° C. Para las células que crecen en cultivo de tejidos 2D placas de Petri tratadas, se recogieron los medios de comunicación cuando las células alcanzaron 90 a 100% de confluencia (de tres días de incubación). El número de células se contó para cada línea celular para la normalización más tarde. Los niveles de sE-cad se cuantificaron utilizando el kit ELISA de I + amp;. D Systems, Quantikine (SE-cadherina humana) según las instrucciones del fabricante
Resultados
La viabilidad celular mantuvieron durante al menos una mes de microesferas
sobre la base de los informes anteriores de microcápsulas de múltiples capas producidas para la entrega de proteínas [32,33] hemos diseñado microcápsulas de doble capa que se componen de un núcleo de alginato interior y capa exterior de alginato (Figura 1 ) separados por una capa electrostática -vinculada policatiónico permeabilidad selectiva de poli-L-ornitina (OLP) con un tamaño de poro & lt; 150 kDa [32]. Mientras que la interacción célula-célula directa impedido modelo, secreciones celulares podrían penetrar a través de la capa de la OLP que permite la actividad paracrina. Como un primer paso hacia la validación del modelo para la función paracrina, se evaluó la viabilidad celular.
Izquierda es un modelo de dibujos animados de microesferas de doble capa. El núcleo interno y la capa externa se separaron por recubrimiento OLP como se muestra. Las células que crecen en capas separadas se indican con flechas rojas. Justo es una microesfera real observado bajo microscopio de luz. Las células del estroma se cultivaron en el núcleo interno durante 7 días, y la capa externa está en blanco.
las células del estroma (WPMY-1), las células vector C4-2 (células C4-2 transfectadas establemente con pcDNA3 0.1) y las células C4-2 PKD1 (C4-2 células transfectadas de forma estable y expresar PKD1) permanecieron viables dentro del núcleo interior o capa externa de las microcápsulas de doble capa de 4 semanas, y permanecieron confinados en sus respectivas capas sin migración a través de la OLP ( Figura 2). A continuación, dos tipos diferentes de células se co-cultivaron en el núcleo interno o capa exterior de la misma microcápsula, y ambos tipos de células permanecieron viables en co-cultivo durante al menos 4 semanas, independientemente de la combinación de capas o tipo de célula (Figura 2). Los resultados demuestran que las microesferas de alginato se pueden usar para hacer crecer células epiteliales o estromales compartimentadas en diferentes capas
in vitro
durante al menos un mes.
BS, microcápsulas con núcleo de células del estroma y en blanco en interiores capa exterior. PS, microcápsulas con células C4-2 PKD1 en las células del estroma y el núcleo interior de la capa externa. Las células verdes, en directo en el núcleo interno. células vivas, de color rojo en la capa externa. , células muertas azules. Barra de escala, 100μm.
Las células cultivadas en microesferas demostraron la función secretora
Con el fin de probar que las células viables en microesferas también siendo funcional, que mide la concentración del fragmento de la E-cadherina soluble (sE-cad, o shedded E-cadherina) en el medio acondicionado como un marcador de la función secretora. E-cadherina es una importante molécula de adhesión célula-célula transmembrana que se dysregulated en varios cánceres humanos [3,34]. El dominio extracelular de la E-cadherina es escindido por varias proteasas extracelulares. La escisión resulta en el desprendimiento de un fragmento kDa aproximadamente 80, que se ha demostrado que es un biomarcador de fenotipo agresivo en varios cánceres humanos incluyendo el de próstata [25,27,28,29,30]. Nuestros estudios previos demostraron que la desregulación de PKD1 influye derramamiento de E-cadherina en células de cáncer de próstata [24]. Por lo tanto, hemos utilizado células transfectadas establemente C4-2 PKD1 para cuantificar el nivel de E-cadherina shedded. Con el fin de incluir una variedad de controles positivos y negativos, hemos probado el nivel de sE-cad en medios de diferentes líneas celulares humanas, incluyendo las células tanto normales como neoplásicas acondicionado. Mientras que algunos tipos de células no mostraron mucha evidencia de E-CAD perdiendo reflejada por el nivel bajo /rastro de sE-Cad, otros segregan altos niveles de sE-cad en los medios condicionados (Figura 3). Los resultados mostraron que las líneas de células metastásicas (MCF-7, PC3 y LNCaP) tienen un alto nivel de sE-Cad, y las líneas celulares benignos (células HEK293T, células 3T3 y células MS1) mostraron bajo nivel /rastro de sE-Cad. No hubo diferencias significativas entre los niveles de sE-Cad de células metastásicas y células benignas, que fueron confirmadas por la prueba t de Student (Figura 3). Estos resultados son consistentes con la literatura publicada ese nivel sE-cad se correlaciona con la invasión de células [25].
nivel de sE-Cad se midió por ELISA y se normalizó para reflejar la secreción de 10
7 células para cada línea celular. nivel de sE-Cad de líneas de células metastásicas (MCF-7, LNCaP y PC3) se compararon con HEK293T (como representante de las líneas celulares normales) y los valores de p se calcularon mediante la prueba t de Student. Cada columna representa la media de tres experimentos paralelos. barra de error representa el error estándar.
Co-cultivo de células epiteliales y del estroma influencias shedded la secreción de E-cadherina como una evidencia de la función paracrina
Para probar la interacción paracrina entre dos células diferentes líneas, células del estroma, células vector C4-2 y C4-2 células PKD1 se cultivaron en microcápsulas en una variedad de combinaciones y sE-cad en el medio acondicionado fue cuantificado. Cuando un solo tipo de células se cultivó en cualquiera de núcleo interior o la capa externa de las microcápsulas, las células estromales no secretan sE-cad, mientras que tanto las células vector C4-2 y C4-2 células PKD1 hizo cuando encapsulados juntos en compartimientos separados (Figura 4A ). La cuantificación de sE-Cad se realizó para las células cultivadas en el entorno 2D y se observaron resultados similares (Figura 4B). Los resultados validan fiabilidad del modelo para discriminar epitelial de las funciones de las células del estroma.
A, las células se cultivaron en entorno 3D durante 6 días. BS, microcápsulas con núcleo de células del estroma y de interiores en blanco en la capa externa. BV, microcápsulas con núcleo interior en blanco y las células vector C4-2 en la capa externa. BP, microcápsulas con núcleo interior en blanco y las células C4-2 PKD1 en la capa externa. nivel de sE-Cad se midió por ELISA. B, las células se cultivaron en medio ambiente 2D (placa de Petri). nivel de sE-Cad se midió por ELISA y se normalizaron para reflejar la secreción de 10
7 células de cada línea celular valores de p se calcularon mediante la prueba t de Student. Cada columna representa la media de tres (cultivo 2D) o cuatro (cultivo 3D) experimentos paralelos. barra de error representa el error estándar.
C4-2 PKD1 células aumento de la secreción de sE-cad comparación con las células C4-2 vector (control) (Figura 4), lo cual es consistente con nuestras publicaciones anteriores [ ,,,0],24]. También hemos demostrado previamente que PKD1 hasta reguladas expresión de E-cadherina [24]. En el modelo experimental actuales células C4-2 PKD1, pero no las células vector C4-2 agregan para formar colonias compactas (después cultivadas durante tres semanas en microcápsulas) (Figura 5), que es un fenotipo bien establecido de aumento de la expresión de E-cadherina. Cuando las células epiteliales y del estroma fueron co-cultivadas en capas independientes dentro de la misma microcápsula, la cantidad de Se-cad secretada por las células C4-2 (tanto de vectores y células transfectadas PKD1) se redujo, lo que sugiere las células del estroma influencia en la secreción epitelial sE-cad (Figura 6). Debido a que el estroma y las células epiteliales son compartimentados e incapaz de interactuar directamente, postulamos que las células del estroma influyen en la función secretora de las células epiteliales a través del mecanismo paracrino.
Las microcápsulas se incubaron durante 23 días se muestran. PB, microcápsulas con células C4-2 PKD1 en el núcleo interno y la capa externa en blanco. VB, microcápsulas con células C4-2 vector en el núcleo interno y la capa externa en blanco. Green, tinción CFDA para células vivas. Red, el yoduro de propidio (PI) tinción de células muertas. Las flechas indican las colonias de células. Barra de escala, 100μm.
nivel de sE-cad se midió por ELISA tras la co-cultivo durante 30 días. SB, microcápsulas con células del estroma en el núcleo interno y la capa externa en blanco. BV, microcápsulas con núcleo interior en blanco y las células vector C4-2 en la capa externa. BP, microcápsulas con núcleo interior en blanco y las células C4-2 PKD1 en la capa externa. SV, microcápsulas con células del estroma en el núcleo interno y las células vector C4-2 en la capa externa. SP, microcápsulas con células del estroma en el núcleo interno y las células transfectadas C4-2 PKD1 en la capa externa. Los valores de p se calcularon mediante la prueba t de Student. Cada columna representa la media de cuatro experimentos paralelos. barra de error representa el error estándar.
Discusión
El modelo de microesferas de doble capa se describe en este estudio es un entorno 3D que simula el
in vivo
microambiente, susceptible a la producción fácil y escalable de material, la purificación y el procesamiento, no citotoxicidad discernible, y es químicamente compatible con soluciones acuosas y las condiciones fisiológicas. A diferencia de otros 3D
in vitro
modelo disponible en la actualidad, el modelo de microesferas en este estudio permite analizar específicamente la interacción paracrina entre diferentes tipos de células. Sin embargo, este modelo también exhibe ciertas limitaciones. La cantidad de secreción cuantificable de sE-cad de células que crecen en núcleo interno es menor que la de el mismo número y tipo de células cultivadas en la capa exterior de la microcápsula (datos no mostrados). Esta disminución de la secreción puede ser debido al hecho de que sE-cad secretada por las células en el núcleo interno tiene que difundirse a través de dos capas de hidrogel antes de entrar en los medios acondicionados. También es posible que la permeabilidad selectiva de la capa PLO disminuye la secreción de sE-Cad. Para optimizar este modelo para la detección de otras proteínas específicas, las características químicas de la capa PLO reticulado pueden necesitar ser optimizado para las necesidades específicas de estudio. La influencia de exosoma también debe ser tomado en consideración, como E-cadherina fue identificado en microvesículas purificadas a partir de células dendríticas murinas normales y células de cáncer humano [35,36]. Sigue siendo posible que sE-Cad podría ser atrapado en los exosomas, sin embargo, poco se sabe acerca de cómo microvesículas reguladores de la interacción célula-célula en el sistema paracrino.
Otra preocupación es la propiedad mecánica sostenida de hidrogel de alginato, como iónicamente alginatos reticulados mostraron una disminución de la resistencia del gel después de 90 días
in vitro
[37]. Para resolver este problema, estables reticulaciones covalentes se pueden introducir en los hidrogeles de alginato utilizando bi-funcionales reticulantes. Además, es posible que un período prolongado de
in vitro
incubaciones pueden dar lugar a un desequilibrio en las concentraciones de iones predominantes (que es necesario para mantener la estabilidad de microcápsulas), pero no bajo
in vivo
condiciones, ya que no hay degradación de estas microesferas de alginato se observó durante al menos tres meses en nuestra reciente
in vivo
estudios (datos no publicados). A pesar de estas limitaciones, el modelo tal como se describe se puede utilizar eficazmente para estudiar la interacción epitelial-estromal paracrina.
interacciones epitelio-estroma desempeñan un papel importante en el desarrollo normal y la transformación neoplásica. En la próstata humana normal de las células del estroma se componen principalmente de células de músculo liso y fibroblastos, mientras que el resto están hechos de células endoteliales, pericitos, linfocitos y macrófagos [38]. Se ha informado de que el estroma carcinoma-asociado (CAS) podría cambiar la morfología de la célula /tasa de crecimiento /agresividad de las células epiteliales prostáticas humanas neoplásicas, pero las células epiteliales prostáticas no normales [39]. Efectos similares se reportaron el uso de células de carcinoma de próstata en co-cultivo con células estromales de la médula pluripotentes [40]. fibroblastos normales no demuestran tal efecto transformador en las células epiteliales, lo que sugiere una interacción epitelio-estroma característico durante células neoplásicas proceso [39]. En este estudio, hemos demostrado que un posible mecanismo de influencia del estroma de las células de cáncer epitelial es a través de un mecanismo paracrino. Como una prueba de principio hemos demostrado la reducción en la secreción de sE-cad por las células de cáncer de próstata en presencia de las células del estroma y el modelo presumiblemente podría ser utilizado para estudiar otras funciones celulares influido por el mecanismo paracrino. Proliferación
influencias de interacción del estroma, apoptosis y la metástasis de las células epiteliales. En el cáncer pancreático, un antagonista de Hedgehog (Hh) inhibió el crecimiento del tumor sólo cuando existe estroma asociado al cáncer, lo que indica la vía de señalización dependientes de estroma [41]. En la próstata, se informó de que los factores del estroma, tales como la caveolina-1 y la timidina fosforilasa estaban relacionados con la agresividad del tumor [42]. Otras proteínas novedosas que juegan un papel en la interacción epitelial-estromal se han identificado con perfiles de transcripción en la próstata [43]. Uno de ellos, la decorina, se downregulated en el cáncer de próstata [43]. Disminución de la decorina resultó en una reducción significativa de E-cadherina tanto
in vivo
y
in vitro
, y la interacción física entre decorina y E-cadherina fue confirmado por la co-inmunoprecipitación [34]. la expresión de la decorina está estrictamente limitada en células mesenquimales /estroma, pero no en las células epiteliales de próstata en [43], y su expresión se reduce significativamente en el carcinoma asociado estroma [43]. Ya sea decorina también juega un papel en el derramamiento de la E-cadherina sigue siendo desconocido.
Otro grupo importante de proteínas de la matriz extracelular, las MMP, podría ser posibles candidatos de los reguladores del estroma que influyeron en el derramamiento E-cad. Anteriormente puso de manifiesto que la secreción de MMP-2 y -9 aumenta la transmisión de E-cadherina PKD1-inducida y suprime la proliferación celular [24].
En resumen, el estudio demuestra la viabilidad y utilidad de usar el modelo de microesferas de alginato 3D para estudiar la función paracrina de las células. En particular, se utilizó el modelo para explorar la interacción epitelial-estromal y se demostró que las células normales del estroma de próstata influyen en la secreción de sE-Cad por las células epiteliales de cáncer de próstata mediante la interacción paracrina. El modelo podría ser utilizado para validar las líneas celulares adicionales y la interacción paracrina de diferentes tipos de células.