Extracto
Aplicaciones
Para investigar el papel predictivo y asociación de survivina nuclear y el ADN doble hebra se rompe la reparación de genes en el cáncer no microcítico de pulmón no microcítico (CPNM): dependiente de ADN proteína quinasa subunidad catalítica (DNA-PKcs), Ku heterodimérica regulador complejo subunidad de 70 KD (Ku70) y la ataxia-telangiectasia mutada (ATM).
Métodos
La expresión de la proteína survivina nuclear, ADN-PKcs, Ku70 y ATM se investigaron mediante técnicas de inmunohistoquímica en tumores de 256 pacientes con NSCLC resecado quirúrgicamente. Además, se analizó la correlación entre la expresión de survivina nuclear, ADN-PKcs, Ku70 y ATM. Se realizaron análisis univariados y multivariados para determinar los factores pronósticos que inuenced la supervivencia libre de enfermedad y la supervivencia global del NSCLC.
Resultados
La expresión de survivina nuclear, ADN-PKcs, Ku70 y ATM fue significativamente mayor en los tejidos tumorales que en los tejidos normales. De la dicotomización de los especímenes como expresando niveles altos o bajos de survivina nuclear, survivina nuclear correlacionó significativamente con el estadio del tumor (p = 0,009) y el estado de los ganglios linfáticos (P = 0,004). Los niveles de survivina nucleares eran un factor pronóstico independiente tanto para la supervivencia global y la supervivencia libre de enfermedad en los análisis univariados y multivariados. Los pacientes con baja expresión de Ku70 y DNA-PKcs tenían un mayor beneficio de la radioterapia que los pacientes con alta expresión de Ku70 (P = 0,012) y la DNA-PKcs (P = 0,02). survivin expresión nuclear correlacionó positivamente con la DNA-PKcs (P & lt; 0,001) y la expresión de Ku70 (P & lt; 0,001).
Conclusiones
survivina nuclear puede ser un factor pronóstico para la supervivencia global en pacientes con resecado la etapa I-IIIA. ADN-PKcs y Ku70 podrían predecir el efecto de la radioterapia en pacientes con NSCLC. survivina nuclear puede también estimula ADN de doble filamento se rompe la reparación por su interacción con el ADN-PKcs y Ku70
Visto:. Hu S, P. Y, Xu X, Xu Q, J Geng, Xu J (2013) Nuclear survivina y su relación con ADN genes de reparación de daños en células no pequeñas de cáncer de pulmón investigado utilizando la matriz de tejido. PLoS ONE 8 (9): e74161. doi: 10.1371 /journal.pone.0074161
Editor: John D. Minna, Univesity de Texas Southwestern Medical Center en Dallas, Estados Unidos de América
Recibido: 4 de Junio, 2013; Aceptado: July 29, 2013; Publicado: 16 Septiembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Hu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Songliu Hu fue apoyada por un fondo de inicio de investigación del hospital del Tercer hospital Afiliado de la Universidad médica de Harbin (JJ2010-08), y Xiangying Xu recibió el apoyo de los proyectos de tecnologías de Heilongjiang Provincial de Ciencia y (WB12C101). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado que no tienen intereses en competencia exsits
Introducción.
de células pequeñas no cáncer de pulmón (NSCLC) es la causa principal de muerte relacionada con el cáncer en todo el mundo, con una incidencia cada vez mayor y un mal pronóstico. Como las características clínico-patológicas no pueden predecir con exactitud el resultado del paciente, la comprensión de la biología de NSCLC en el nivel molecular ayudará en el desarrollo de nuevas y eficaces modalidades de tratamiento y la predicción del pronóstico.
La evasión de las células apoptóticas la muerte es fundamental para el crecimiento del tumor y se informó a ser un sello distintivo de las células del cáncer [1] que desarrollan resistencia a los tratamientos contra el cáncer. Por lo tanto, la orientación de las vías de apoptosis puede representar una estrategia prometedora para contrarrestar la resistencia y sensibilizar a las células cancerosas a las modalidades contra el cáncer, incluyendo la radioterapia [2]. Entre estos factores anti-apoptóticos, survivina, una proteína de 16,5 KD de residuos de ácido 142 aminoácidos que es el miembro más pequeño del inhibidor de la apoptosis de proteínas de la familia (IAP), merece mucho la atención debido a su carácter universal de expresión en tumores humanos, y su papel destacado en la regulación de una variedad de redes celulares, incluyendo aquellos que controlan la proliferación de células tumorales y la adaptación a un entorno desfavorable [3]. Survivina existe en piscinas subcelulares distintos, incluyendo el núcleo, el citoplasma y la mitocondria [4] - [6]. La distribución subcelular de la survivina desempeña un papel distinto en la capacidad de esta molécula para regular la división celular y la supervivencia. La localización de survivina en el citoplasma se considera que es citoprotector debido a las actividades anti-apoptóticos de esta molécula [7]. La localización nuclear de la survivina está asociada con la división celular, como survivina es una subunidad del complejo de pasajeros cromosómica (CPC) [8].
En células de mamíferos, el ADN de doble filamento se rompe (DSBs) se reparan principalmente a través la recombinación homóloga (HR) o recombinación no homóloga (NHEJ) [9]. Un elemento clave de la vía NHEJ es el ADN dependiente de la proteína quinasa (DNA-PK), que consiste en una subunidad catalítica de 465 KD de la proteína quinasa dependiente de ADN (DNA-PKcs) y un complejo regulador heterodimérico, Ku, que incluye una subunidad de 70-KD (Ku70) y una subunidad de 86-KD (Ku80) [10]. Los modelos actuales sugieren que las proteínas Ku heterodiméricas rápidamente se unen a los extremos de ADN de cadena doble de reclutar y proteína quinasa ADN (DNA-PK), generando un complejo DNA-PK holoenzima. La proteína ATM ha sido identificado como el principal regulador de activador y maestro de la respuesta celular a las DSB. La quinasa ATM parece ser el controlador de activador y maestro principal de la respuesta celular a RBC de ADN y fosforila los jugadores clave de la red de respuesta al daño del ADN, incluyendo la apoptosis detención del ciclo celular y la reparación del ADN [11].
Recientemente se se demostró que la survivina es capaz de provocar tanto la supresión de la apoptosis y la estimulación de la reparación del ADN. Los mecanismos subyacentes parecen ser multifacética e involucrar a las vías de caspasa-dependiente y la caspasa-independiente. Algunos informes confirman una mayor incidencia de daño de ADN en líneas celulares de cáncer de pulmón de células colorectal- y no pequeñas después del tratamiento con survivin siRNA o el YM155 represor transcripcional basado en la detección de la detección de γ-H2AX fosfo-histona como marcador de radiaciones DSB inducidos [12], [13]. Los análisis de Co-inmunoprecipitación reveló una interacción entre survivin, Ku70 y DNA-PKcs en focos nucleares [14]. Estos resultados sugieren que la acumulación nuclear de survivina estaba relacionado con la reparación del ADN-OSD.
El objetivo de este estudio fue examinar la correlación potencial y el valor pronóstico de la survivina nuclear, ADN-PKcs, Ku70 y ATM mediante inmunohistoquímica . Para nuestro conocimiento, este es el primer estudio.
Materiales y Métodos
Los pacientes
El estudio fue aprobado por el Comité de Revisión Ética de la Universidad Médica de Harbin, Harbin, China. Todos los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito para participar en el estudio. Este estudio fue retrospectivo. especímenes de resección quirúrgica se obtuvieron de 256 pacientes con cáncer de pulmón en estadio IA a IIIB entre diciembre de 2004 y diciembre de 2006. Ningún paciente recibió quimioterapia preoperatoria y radioterapia. Había 176 hombres y 80 mujeres con una edad media de 57,7 años. Los tumores se clasifican de acuerdo a la versión revisada del cáncer de pulmón de estadificación TNM publicado en 1997 [15]. El diagnóstico histopatológico se realizó de acuerdo a los criterios de la Organización Mundial de la Salud (OMS). En total, 20 (8%) pacientes tenían enfermedad en estadio IA, 94 (35%) tenían IB, 8 (3%) tenían IIA, 50 (20%) tenían IIB, 69 (27%) tenía IIIA, y 15 (6 %) tenía IIIB. La clasificación histológica incluyó a 145 adenocarcinomas, carcinomas de células escamosas 101, 5 carcinomas adenoescamosos y otros 5 tipos. En total, 234 pacientes fueron sometidos a lobectomía, 18 pacientes fueron sometidos a neumonectomía y 4 pacientes fueron sometidos a segmentectomıa. Después de la cirugía, 217 pacientes recibieron tres a cuatro ciclos de quimioterapia adyuvante basada en cisplatino. Un total de 92 pacientes recibieron radioterapia postoperatoria administrada con una técnica de alta tensión a una dosis total de 50 Gy, con 2 Gy por fracción dada de 5 días por semana.
Construcción de microarrays de tejidos
El microarray de tejido de cáncer de pulmón (TMA) se construyó como sigue. Brevemente, se utilizó un instrumento de tejido arraying para crear agujeros en un bloque de parafina receptivo y adquirir núcleos de tejido desde el bloque de tejido donante con una aguja de pared delgada con un diámetro interior de 2 mm que se realizó en una guía de precisión X-Y. Las muestras de núcleo fueron recuperados de la región seleccionada en el donante y se extruyen directamente en el bloque receptivos en las coordenadas matriz definida. Un alambre de acero sólido que se encaja estrechamente en el tubo, se utiliza para transferir los núcleos de tejido en el bloque receptivo. Después de la construcción del bloque de matriz, todos los bloques de tejido fueron cortadas con un microtomo de 4 micras y se fijan a la diapositiva. Manzanas de 256 pacientes fueron dispuestos en forma de manchas por triplicado de 2 mm de diámetro en las diapositivas.
La inmunohistoquímica
Las secciones de tejido fueron deparaffinized en xileno y rehidratada con concentraciones de alcohol graduadas utilizando procedimientos estándar. Las secciones se sumergieron posteriormente en tampón de citrato (pH 6,0) y trataron en autoclave a 121 ° C durante 5 min para recuperar la antigenicidad. Después del lavado en solución salina tamponada con fosfato (PBS, 0,1 M, pH 7.4,3 veces durante 5 min), la peroxidasa endógena fue bloqueada por incubación en peróxido de hidrógeno al 3% durante 15 min a temperatura ambiente. A continuación, las muestras se incubaron con un anticuerpo survivin (71G4B7, Cell Signaling Technology, Beverly, MA) diluido a 1:400, un anticuerpo DNA-PKcs, un anticuerpo Ku70 (MS-423-P0, Neomarkers, Fremont, CA) ( EPR4027, Epitomics, CA) y un anticuerpo ATM (Y170, Epitomics, CA) diluido a 1:200 en PBS que contenía 0,5% de BSA durante una noche a 4 ° C en una cámara húmeda y se lavó con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos. Las secciones se incubaron con el anticuerpo secundario biotinilado seguido de estreptavidina conjugada con peroxidasa durante 30 min. Se añadió tetrahidrocloruro 3-3'diaminobenzidine (Dako, Alemania) para visualizar la reacción. Después de enjuagar en agua desionizada y la contratinción con hematoxilina comercial, los portaobjetos se deshidrataron y se montaron. secciones de tejido apropiadas como controles positivos para cada anticuerpo primario se tiñeron simultáneamente para ser utilizados como controles positivos. IgG1 de ratón o IgG de conejo (Cell Signaling Technology, Beverly, MA) se utilizaron como controles negativos en las mismas diluciones como los anticuerpos primarios correspondientes.
tinción inmunohistoquímica Evaluación
Evaluación de la tinción de survivina , DNA-PKcs, Ku70 y expresión ATM se llevó a cabo con el microscopio óptico de campo claro de forma independiente por dos patólogos experimentados de forma independiente. survivin Nuclear, DNA-PKcs, Ku70 y proteína ATM niveles de expresión fueron clasificados semicuantitativamente mediante la combinación de la proporción y la intensidad de las células tumorales teñidas positivamente. El porcentaje de células tumorales teñidas positivamente se puntuó como sigue: 0 (no hay células positivas tumorales), 1 (células tumorales positivas 1-25%), 2 (células tumorales positivas 26-50%), 3 (51 a 75% de tumor positivo células), y 4 (células tumorales positivas 76-100%). intensidad de la tinción se puntuó como sigue: 0 (sin tinción); 1 (tinción débil); 2 (tinción moderada) y 3 (fuerte tinción). La puntuación intensidad de la tinción multiplicado por el porcentaje de tinción positiva se utilizó para definir los niveles de expresión. Se introduce la puntuación media entre las tres secciones de tejido para los análisis estadísticos. Posteriormente, se utilizó el valor de la mediana de todas las puntuaciones como el punto de corte para la clasificación de la expresión de las 4 proteínas, por lo tanto los pacientes con cáncer de pulmón se clasificaron en dos grupos: baja expresión y grupos de expresión altos. Además, se revisaron de forma simultánea casos con discrepancias por los dos patólogos originales y un patólogo alto hasta que se alcanzó un consenso.
Análisis estadístico
Las asociaciones entre los parámetros de IHC, así como la IHC /parámetros clínico-patológicas se analizaron mediante la prueba de Chi-cuadrado, la prueba exacta de Fisher y el rango de correlación de Pearson. La supervivencia global (OS), la supervivencia libre de enfermedad (DFS) y supervivencia libre de recidiva local, (LRS) se obtuvieron de acuerdo con el método de Kaplan-Meier. La persistencia de la enfermedad y la aparición de recaídas eran los puntos finales para DFS, la incidencia de recidiva local fue el punto final de LRS, y la muerte por cualquier causa se consideró un evento para el cálculo del sistema operativo. Las comparaciones entre cada variable pronóstica se realizaron utilizando la prueba de log-rank. Una de riesgos proporcionales de Cox se utilizó para el análisis multivariado de los factores pronósticos independientes (edad, sexo, tabaquismo, histología, grado de diferenciación, el estadio patológico, estadio T, N etapa, la quimioterapia, la radioterapia, la expresión de survivina, la expresión de DNA-PKcs, Ku70 la expresión y la expresión ATM) que influyen en el sistema operativo, el DFS. El criterio de significación elegido fue p & lt; 0,05, y todas las pruebas fueron de dos colas. El análisis de supervivencia se realizó mediante el paquete estadístico SPSS versión 13.0 para.
Resultados
inmunoreactividad nuclear survivina se detectó en 166 (64,8%) de los 256 tumores examinados. inmunorreactividad positiva para survivina estaba presente sólo en las células tumorales y no en las células epiteliales de pulmón normales vecinas. En los tejidos tumorales, la tinción de DNA-PKcs, Ku70 y ATM era predominantemente nuclear con tinción minutos en el citoplasma. Los tejidos normales mostraron una intensidad de tinción débil para ATM y una intensidad de tinción moderada para DNA-PKcs y Ku70. El porcentaje de núcleos positivos fue significativamente mayor en el tejido tumoral en comparación con el tejido normal. DNA-PKcs inmunoreactividad se observó en 190 (74,2%) de los 256 tumores y 56 (51,9%) de 108 tejidos normales; Ku70 inmunoreactividad se observó en 189 (73,8%) de los 256 tumores y 48 (44,4%) de 108 tejidos normales, y se observó ATM inmunoreactividad en 125 (48,8%) de los 256 tumores y 26 (24,1%) de los 108 tejidos normales. Cuando los tumores se clasifican de acuerdo a la puntuación de intensidad de la tinción y la puntuación de tinción positiva, 124 tumores tenían una baja expresión y 132 tenían una alta expresión de survivina, 121 tumores tenían una baja expresión y 135 tenían una alta expresión de DNA-PKcs, 107 tumores tenían una baja expresión y 149 tenían una alta expresión de Ku70 y 156 tumores tenían baja expresión y 100 tenía alta expresión de ATM (Fig. 1).
tinción débil para ATM (e), DNA-PKcs (F), Ku70 (G ) y survivina nuclear (H) en tejidos de cáncer de pulmón.
la correlación con factores pronósticos
Las correlaciones entre los pacientes que expresan survivina nuclear, ADN-PKcs, Ku70 y ATM en diferentes niveles y sus características clínico-patológicas se presentan en la Tabla 1. survivina Nuclear correlacionó significativamente con el estado de los ganglios linfáticos y la etapa patológica. Nucleares niveles de expresión de survivina en pacientes con tumores en estadio III fueron marcadamente superiores a las de los pacientes con estadio I y II tumores (P = 0,009). survivin expresión nuclear en pacientes con N2 y N3 enfermedad fue mayor que en los pacientes con enfermedad N0 y N1 (P = 0,004). No hubo diferencia estadísticamente significativa entre el ADN-PKcs, Ku70 o expresión ATM y las variables clínico-patológicas.
Expresión de survivin ADN nuclear y los genes de reparación del OSD en relación con el pronóstico
La mediana El tiempo de seguimiento fue de 64 meses. La mediana de SG de los pacientes fue de 47 ± 5,8 meses, y la mediana del tiempo DFS fue de 25 ± 4,5 meses. análisis de supervivencia univariante reveló que la histología del tumor, grado de diferenciación, el estadio patológico, el estado T, el estado de N, survivin expresión nuclear, la expresión de ADN-PKcs y la expresión de Ku70 influidas significativamente el OS y DFS (Tabla 2). El análisis multivariante se realizó de acuerdo con los resultados del análisis univariado. Los resultados indicaron que el grado de diferenciación del tumor, el estadio patológico y la expresión de survivina nuclear fueron los factores pronósticos independientes (Tabla 3). Los riesgos relativos calculados de muerte y recurrencia fue de 1,68 (p = 0,047) y 1,83 (p = 0,041) en los pacientes con alta expresión de survivina, 1,67 (p = 0,001) y 1,59 (p = 0,003) en los pacientes con una alta estadio patológico y 0,63 (p = 0,015) y 0,51 (p = 0,002) en los pacientes con baja diferenciación, respectivamente.
El análisis de Kaplan-Meier reveló que los pacientes con survivina nucleares de alta expresión tuvieron una SG más baja (44,8 vs 55,7 meses, p = 0,001) (figura 2A) y DFS (35,7 frente a 49,7 meses;.. P = 0,001) (figura 2B), en comparación con los pacientes con niveles más bajos de survivina nuclear. Los pacientes con un grado de diferenciación moderada o fuerte tenían una mejor supervivencia que los pacientes con bajo grado de diferenciación (SG, P = 0,007; DFS, P = 0,008). Por otra parte, una mayor estadio patológico (SG, P & lt; 0,001; DFS, P & lt; 0,001) se asociaron significativamente con un mal SG y SLE. Los pacientes con altos DNA-PKcs o expresión de Ku70 tenían una significativamente peor OS y DFS que aquellos con menor expresión pero no eran factores pronósticos independientes.
A. La supervivencia global de los pacientes con bajo survivin nuclear (n = 124) en comparación con la de los pacientes con alto survivin nuclear (n = 132). El valor de p para la prueba de log-rank es 0.001.B. supervivencia libre de enfermedad de los pacientes con bajo survivin nuclear (n = 124) en comparación con la de los pacientes con alto survivin nuclear (n = 132). El valor de p para la prueba de log-rank es de 0,001.
Relación entre la survivina Nuclear y genes de reparación del daño en el ADN
Hemos investigado la posible relación entre la survivina nuclear y genes de reparación del ADN daños entre los 256 pacientes. Entre los tres genes relevantes, DNA-PKcs y Ku70 expresión fueron significativamente positivamente relacionados con la expresión de survivina nuclear (Tabla 4). En total, 91 (67,4%) de los 135 pacientes con altos DNA-PKcs que tenían una expresión de alto survivina concurrente en comparación con 44 (32,6%) de un total de 135 pacientes con altos DNA-PKcs que tenían baja expresión de survivina (P & lt; 0,001). En total, 99 (66,4%) de los 149 pacientes con alta Ku70 tenían una expresión de alto survivina concurrente en comparación con 50 (33,6%) de los 149 pacientes con alta expresión de Ku70 y la baja expresión de survivina (P & lt; 0,001). En los casos negativos survivina, DNA-PKcs expresión influenciada significativamente el sistema operativo (46,0 frente a 61,3 meses; p = 0,009) y DFS (35,0 frente a 55,1 meses; p = 0,02). Esto no se ha encontrado en los casos positivos de survivina.
Predicción del resultado del tratamiento
La radioterapia postoperatoria podría reducir significativamente el riesgo de recurrencia local. En nuestro estudio, 92 pacientes recibieron radioterapia postoperatoria. El análisis multivariado indicó que los de grado de diferenciación tumoral, DNA-PKcs y Ku70 expresión fueron los factores pronósticos independientes (Tabla 5). Los riesgos relativos calculados de la recurrencia local fue 2.025 (P = 0,007) en los pacientes con alta expresión de ADN-PKcs, 2.161 (P = 0,029) en los pacientes con alta expresión de Ku70 y 0.522 (P = 0,008) para los pacientes con bajo grado de diferenciación, respectivamente . En los pacientes con baja expresión de Ku70 y DNA-PKcs, el local de la supervivencia libre de recurrencia (LRS) fue significativamente mayor en comparación con los pacientes con alta expresión de Ku70 (P = 0,012; Figura 3A.) Y ADN-PKcs (P = 0,02; Figura. 3B). Se observó el mayor beneficio de la radioterapia en pacientes cuyos tumores tenían una baja expresión de Ku70 y DNA-PKcs.
A. supervivencia libre de recurrencia local de pacientes con baja expresión de Ku70 (n = 36) en comparación con la de los pacientes con alto survivin Ku70 (n = 56). El valor de p para la prueba de log-rank es 0,012. B. Local supervivencia libre de recurrencia de pacientes con baja expresión de ADN-PKcs (n = 49) en comparación con la de los pacientes con alto survivin nuclear (n = 53). El valor de p para la prueba de log-rank es de 0.02.
Discusión
En el presente estudio, se determinó la expresión de survivina nuclear y 3 componentes clave de la vías de reparación del ADN OSD en pacientes con NSCLC usando TMA. En comparación con el tejido pulmonar normal, la proporción de células con núcleos teñidos positivamente y la intensidad de la tinción fue mayor en los tejidos tumorales que en el tejido pulmonar normal. La reducción de expresión de ARN mensajero para DNA-PKcs y ATM en el tejido pulmonar normal también se ha demostrado en un estudio anterior [16]. expresión de survivina sólo se observó en muestras de tumores, no en los tejidos normales circundantes, que está de acuerdo con los resultados de estudios anteriores [17], [18].
El valor predictivo pronóstico de la expresión de survivina y el de tinción nuclear frente a la tinción citoplásmica en varios tumores malignos, incluyendo NSCLC, se han investigado en una serie de estudios con resultados contradictorios. Del mismo modo, los resultados de estudios que investigan el valor predictivo pronóstico de la tinción nuclear de la survivina también son contradictorios. Estas controversias podrían explicarse, en los estudios de IHC, sobre la base de la utilización de anticuerpos de diferentes especificidades o concentraciones, y el empleo de diferentes puntos de corte y diferentes enfoques para el almacenamiento y procesamiento de tejidos. Nuestro estudio demostró que la expresión nuclear de survivina es un factor pronóstico negativo independiente para la supervivencia en pacientes con CPNM resecado quirúrgicamente. De acuerdo con nuestros resultados, otras series retrospectivas han identificado nuclear en lugar de la expresión de survivina citoplasmática como un factor pronóstico negativo independiente para la supervivencia en NSCLC [19] - [22]. Incluso en el CPNM, se demostró que la expresión de survivina nuclear que se correlaciona con un mejor resultado en una reciente serie de avanzado (estadio IIIA-IV) pacientes inoperables que se sometieron a la quimioterapia [17]. Sin embargo, un meta-análisis de la survivina realizado por Jiang Fan [23] a partir de datos de pacientes individuales encontraron resultados contradictorios. Los datos de tres estudios se combinaron para encontrar que el nivel de survivina nuclear no tuvo efecto en la SG de los pacientes con CPNM (RR1.58, IC 95% 0,87 a 2,85; p = 0,13). Sin embargo, los estudios sólo se incluyeron tres estudios y el número de los pacientes eran pequeñas, el resultado negativo puede ser debido al pequeño número de pacientes.
En nuestro estudio, la expresión de survivina nuclear correlacionada positivamente con el estadio patológico y el estado de los ganglios linfáticos. Los resultados actuales son consistentes con los que informó de que la survivina era un marcador de los ganglios linfáticos metástasis [18], [24], [25]. El vínculo entre la expresión de survivina y el potencial de metástasis en los ganglios linfáticos podría explicarse como sigue. Survivina podría ser un inhibidor de la apoptosis: la proporción de células cancerosas en un tejido, que de otra forma se elimina mediante apoptosis, aumentar con el crecimiento continuado y aumento del potencial de invasión y metástasis
En este estudio, se observó que alta. expresión de DNA-PKcs y Ku70 se asoció con la supervivencia global pobres en pacientes con CPNM pero no alcanzó significación estadística. ADN doble filamento se rompe (DSBs) son considerados como los más letales de todas las lesiones del ADN. la reparación rápida y eficaz de las DSB de ADN es fundamental para mantener la integridad genómica. Los defectos en la vía de reparación de DSB pueden causar alteraciones genéticas, la inestabilidad cromosómica, y, en definitiva, la transformación maligna. Por el contrario, las células tumorales con una mayor capacidad de reparación del ADN OSD serían más probabilidades de sobrevivir y proliferar, lo que lleva a la mal pronóstico en pacientes con cáncer. El valor pronóstico de estos genes fueron investigados y los resultados fueron contradictorios. En el estudio realizado por Jinliang et al en que se utilizó RT-PCR para medir la DNA-PKcs y la expresión de ATM en el cáncer de pulmón, los pacientes con alta tumor: normal (T /N) coeficientes de la expresión de ATM o DNA-PKcs tenía una notablemente más corto la mediana de supervivencia de los pacientes con bajas relaciones [16]. Sin embargo, también hay algunas inconsistencias en los resultados en términos del valor pronóstico de estos genes. En una revisión exhaustiva, Wynand informó que las células que exhiben un defecto en sus vías de reparación del ADN son susceptibles de sufrir daño en el DNA inducida por la apoptosis [26]. Por ejemplo, la supervivencia de los pacientes con alta expresión de DNA-PKcs o Ku86 fue significativamente mejor en comparación con la supervivencia de pacientes con baja expresión de DNA-PKcs o Ku86 [27]. Estas inconsistencias pueden ser el resultado de muchos factores, incluyendo diferentes tipos de cáncer, diferentes características de histología y tumorales, o las diferencias metodológicas, como la técnica utilizada para sondear la expresión génica o el anticuerpo que reacciona contra un epítopo específico
.
The mecanismo molecular subyacente a la localización diferencial en las células tumorales todavía no está claro. La distribución subcelular de la survivina desempeña un papel distinto en la capacidad de la molécula para regular la división celular. Los datos recientes indican además que la interacción de la señal de exportación nuclear rica en leucina (NES) con el receptor de exportación de proteínas de mantenimiento región del cromosoma nuclear 1 homólogo (Crm1) es críticamente implicado en la localización y las funciones relacionadas con el cáncer intracelulares de survivina [28], [29 ]. daño del ADN puede estimular una rápida descarga de la piscina mitocondrial de survivina en el citosol, que conserva la viabilidad de las células tumorales durante un bloque G2 prolongada antagonizando dañan el ADN inducida por la apoptosis [30]. Utilizando el análisis de correlación de Pearson, se observó la correlación entre los niveles de expresión de survivina nucleares y las de ADN-PKcs o Ku70 en nuestro estudio. La survivina es un miembro de la familia inhibidor de la apoptosis (IAP), y que inhibe directamente la actividad de las caspasas, especialmente la caspasa-3. Recientemente, se demostró que la survivina también estimula la reparación de DSB por su interacción con DNA-PK [14], [31]. Por lo tanto, se especula que el daño del ADN estimula una descarga rápida de survivina al núcleo, que interactúa físicamente con los factores de las proteínas de reparación de DSB de ADN DNA-PKcs y Ku70. Por lo tanto estimula la survivina ADN capacidades de reparación de doble filamento mediante la regulación de DNA-PKcs y Ku70 actividad y, por tanto, inhibe el daño de ADN inducida por la apoptosis. Sin embargo, se necesitan más estudios para aclarar esta cuestión abierta.
El nuevo hallazgo de nuestro estudio es que los niveles de expresión de proteínas de las proteínas de reparación del OSD pueden ser de gran valor para la predicción del resultado del tratamiento. Los pacientes con baja expresión de Ku70 y DNA-PKcs tenido un mayor beneficio de la radioterapia que los pacientes con alta expresión de Ku70 y DNA-PKcs porque este último grupo tuvo una alta tasa de recurrencia después del tratamiento con radioterapia. Nuestra interpretación es que Ku70 y DNA-PKcs son necesarias para el reconocimiento de daños en el ADN y la señalización y que la pérdida de estas proteínas podría conducir a problemas de reparación del ADN, el aumento de la radiosensibilidad, y un mejor control local del tumor. Karin et al. informó que la baja expresión de Ku70 /Ku80 predijo un buen efecto de la radioterapia en el cáncer de mama precoz [32]. Beskow también encontró que el cáncer de cuello de útero radioresistant mostró una mayor frecuencia de DNA-PKcs, Ku70 y Ku86 células positivas [33]. Bouchaert et al. informaron que la tinción nuclear DNA-PKcs positivo estaba estrechamente asociado con la recurrencia bioquímica y sugirió que el ADN-PKcs podría ser un marcador predictivo de recurrencia después de la radioterapia en el cáncer de próstata [34]. Sin embargo, también hay resultados que no son consistentes con nuestros resultados [27], [32], [35]. Hay controversia sobre la DNA-PKcs o expresión de Ku70 podrían ser un factor pronóstico de la respuesta de los pacientes con cáncer de pulmón a la radioterapia.
En conclusión, se observó que la survivina nuclear se asoció significativamente con una baja supervivencia en pacientes con CPNM y que la survivina nuclear estaba fuertemente relacionada con el estadio patológico y la metástasis de los ganglios linfáticos. survivina nuclear se correlacionó positivamente con ADN-PKcs y Ku70 y por lo tanto puede estimular ADN de doble filamento se rompe la reparación por su interacción con el ADN-PKcs y Ku70. Los resultados actuales indican que la survivina nuclear puede ser útil para predecir los resultados clínicos de los pacientes con NSCLC.
Reconocimientos
Estamos muy agradecidos al Dr. Ji Hongfei en el Instituto de Prevención y Tratamiento del Cáncer de la Universidad médica de Harbin y el Dr. Wang Shuhuai en el Departamento de patología, hospital Tercer Afiliado de la Universidad médica de Harbin por su ayuda técnica.