Extracto
El proteasoma es un regulador clave de la homeostasis de proteínas celulares y es un objetivo contra el cáncer clínicamente validado. El immunoproteasome, un subtipo de proteasoma expresa principalmente en células hematopoyéticas, se reconoció inicialmente por su papel en la presentación de antígenos durante la respuesta inmune. Recientemente, el immunoproteasome ha sido implicado en varias condiciones de enfermedad que incluyen cáncer y enfermedades autoinmunes, pero muchos de los factores que contribuyen a estos procesos patológicos siguen siendo desconocidos. En particular, el codón 60 polimorfismo de la
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gen que codifica la subunidad catalítica β1i immunoproteasome ha sido investigada en el contexto de una variedad de enfermedades. A pesar de esto, estudios previos han reportado hasta el momento resultados inconsistentes con respecto al impacto de este polimorfismo en la actividad del proteasoma. Por lo tanto, nos propusimos investigar el impacto de la
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codón 60 polimorfismo en la expresión y la actividad de la subunidad immunoproteasome β1i en un panel de líneas celulares de cáncer humano. El sustrato fluorogénico β1i selectivo acetil-Pro-Ala-Leu-7-amino-4-metil-cumarina se utilizó para medir específicamente β1i actividad catalítica. Nuestros resultados indican que el codón 60 Arg /His polimorfismo no altera significativamente la expresión y actividad de β1i entre las líneas celulares ensayadas. Además, también se examinó la expresión de β1i en muestras clínicas de pacientes de colon y cáncer de páncreas. Nuestros análisis de inmunohistoquímica mostró que ~ 70% de las muestras de cáncer de colon clínicos y ~53% de las muestras de cáncer de páncreas tienen expresión β1i detectable. Tomados en conjunto, nuestros resultados indican que la subunidad β1i del immunoproteasome se expresa frecuentemente en cánceres de colon y de páncreas, pero que el codón 60 variantes genéticas de β1i presentan actividades catalíticas similares y es improbable que contribuya a la inter-línea celular significativa e inter- variabilidades individuales en la actividad immunoproteasome
Visto: Parque. JE, Ao L, Z Miller, Kim K, Wu Y, Jang ER, et al. (2013)
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codón 60 polimorfismos no tienen ningún impacto sobre la actividad catalítica de la subunidad immunoproteasome B1i Expresado en múltiples tipos de cáncer sólido. PLoS ONE 8 (9): e73732. doi: 10.1371 /journal.pone.0073732
Editor: Wael El-Rifai, Vanderbilt University Medical Center, Estados Unidos de América
Recibido: 10 de mayo de 2013; Aceptado: July 20, 2013; Publicado: 9 de septiembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Park et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado por las becas del National Cancer Institute, R15CA156601 y R01CA128903 y Programa de Investigación de cáncer de pulmón Kentucky. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el proteasoma es responsable de la degradación de las proteínas específicas y es un jugador clave en el mantenimiento de la homeostasis de proteínas celulares y la regulación de procesos celulares que son esenciales en el desarrollo y progresión del cáncer [1], [2]. El immunoproteasome, una forma alternativa de la proteasoma, se encuentra en las células de origen hematopoyético, pero su expresión puede ser inducida también en condiciones inflamatorias y el estrés en otros tipos [3] de células. El immunoproteasome se forma cuando los tres tipos de subunidad catalítica encuentran en el proteosoma constitutivo, β1 (Y,
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), β2 (Z,
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) y β5 (X,
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), se sustituyen por tres subunidades homólogas inmuno-: β1i (LMP2,
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), β2i (MECL-1,
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) y β5i (LMP7,
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). En comparación con el proteasoma constitutiva, la immunoproteasome se encuentra que tiene ligeramente alteradas especificidades proteolíticas que son capaces de péptidos que producen más adecuado para la unión al complejo mayor de histocompatibilidad I moléculas que facilitan así la presentación de antígenos [4]. Sin embargo, estudios recientes indican que la immunoproteasome puede tener funciones importantes más allá de la respuesta inmune adaptativa. Por ejemplo, se ha encontrado la immunoproteasome que se expresa en no inflamadas tejidos, inmunes previleged (por ejemplo, la retina y el cerebro [5], [6]) y en el contexto de varios estados de enfermedad (por ejemplo, cáncer, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades autoinmunes, [3], [7] y las referencias en él). A pesar de estas observaciones, la importancia biológica de la immunoproteasome en tales estados de enfermedad no se entiende completamente.
La subunidad β1i del immunoproteasome es codificada por el
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gen localizado en el cromosoma 6. Este gen alberga a /H polimorfismo R genética que ocurre comúnmente en el codón 60 (p.60R & gt; H; c.179G & gt; a; rs17587) con frecuencias H alelos de 1,1% a 34%, variando a través de grupos étnicos ([8] y las referencias en él) . Varias investigaciones han informado de posibles asociaciones entre el codón 60
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estado polimorfismo y aumento de la susceptibilidad a diversas enfermedades tales como la diabetes mellitus dependiente de la insulina, la artritis reumatoide y la esclerosis múltiple [8] - [16]. Sin embargo, es difícil de descifrar a partir de estudios anteriores si las asociaciones observadas están directamente relacionados con la actividad alterada de la subunidad β1i como resultado de la variación de aminoácidos R /H. Esto es en parte debido a la naturaleza interdependiente de las subunidades del proteasoma y la falta de sondas moleculares apropiados. Una investigación previa por Mishto et al. [17] examinó más de cerca el impacto de este polimorfismo en la actividad del proteasoma en el cerebro envejecido usando el sustrato peptídico fluorogénico N-succinil-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC (Suc-LLVY-AMC). Los resultados de este estudio sugieren que los resultados H alelo en una disminución de la actividad del proteasoma en el cerebro envejecido [17]. Sin embargo, desde Suc-LLVY-AMC se utiliza convencionalmente para medir el tipo quimotripsina general (CT-L) la actividad proteolítica del proteasoma y por lo tanto pueden ser hidrolizados por múltiples subunidades tanto de la immunoproteasome y el proteasoma constitutiva, esta disminución en la hidrólisis de Suc-LLVY-AMC no necesariamente indica cambios en la función β1i. Por otra parte, un estudio posterior por el mismo grupo usando péptidos recombinantes que imitan sustratos endógenos no hubo diferencia en los perfiles de hidrólisis del sustrato entre los codones 60 genotipos [18].
La mayor parte de la discrepancia respecto del impacto funcional de los codones PSMB9 60 polimorfismo surge de la falta de una herramienta para observar específicamente la función de la subunidad β1i. En este sentido, Lin et al. [19] y Blackburn et al. [20] informó recientemente en el desarrollo y la aplicación del sustrato fluorogénico acetil-Pro-Ala-Leu-7-amino-4-metil-cumarina (Ac-PAL-AMC) que se hidroliza selectivamente por β1i. Esta nueva herramienta ha hecho posible evaluar el impacto funcional directa de
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codón 60 polimorfismo en la subunidad β1i. En nuestro estudio, se determinó la expresión de β1i en los tejidos clínicos sobre el cáncer de colon y páncreas, así como en líneas celulares de cáncer humano establecidos. Uso de la β1i selectivo sustrato fluorogénico Ac-PAL-AMC, también se evaluó la actividad catalítica de β1i en múltiples líneas celulares de cáncer que llevan diferentes genotipos en el codón 60. Nuestros resultados indican que β1i se expresa frecuentemente en cánceres de colon y de páncreas, pero el codón 60
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polimorfismo no tiene un impacto significativo sobre la actividad catalítica de β1i expresado en múltiples tipos de líneas celulares de cáncer.
Materiales y Métodos
cultivo celular y reactivos
líneas celulares establecidas derivadas de diversos tipos de cánceres humanos (colon, HCT-8, DLD-1, HCT-116, SW480; pulmón, H23, H358, H460, H727, H1299; próstata, PC-3, DU145; páncreas, BxPC-3, PANC-1, AsPC1; mama, MCF-7, HS578T, MDA-MB-231) se adquirieron de la American Type Culture Collection (ATCC) y se mantuvieron en las condiciones recomendadas. Los sustratos fluorogénicos Suc-LLVY-AMC y Ac-PAL-AMC fueron sintetizados por encargo siguiendo la estrategia de síntesis de péptidos estándar. Los inhibidores del proteasoma UK-101 y epoxomicina se sintetizaron y se purificaron como se informó anteriormente [21], [22]. Purificada 20 S proteosoma constitutivo y immunoproteasome se adquirieron de Boston Biochem.
Análisis inmunohistoquímico
microarrays de tejidos que contienen identificados de-armarios de archivo, de colon humano y muestras de tejido de cáncer de páncreas se obtuvieron de los Estados Unidos Biomax. El uso de muestras sin identificación de la matriz de tejido de una fuente comercial para el estudio actual se considerará exento del Reglamento de Sujetos Humanos de la Junta de Revisión Institucional. Un ensayo de estreptavidina-biotina-inmunoperoxidasa se realizó después de que el procedimiento de recuperación de antígeno (tampón de citrato, pH 6) utilizando un anticuerpo monoclonal contra β1i (dilución 1:100, Enzo Life Sciences) de acuerdo con el protocolo previamente informado [23]. reacción inmune se visualizó usando 3,3'-diaminobencidina (DAB), y los núcleos se contratiñeron con hematoxilina. La especificidad de las señales inmunorreactivas se verificó mediante la omisión ya sea el primario o el anticuerpo secundario. Las secciones de microarrays de tejidos inmuno fueron analizados por un patólogo experimentado (Dr. Eun Lee Y.). La intensidad de la inmunotinción fue asignado en una escala de 0 a 2 o 3.
Determinación de
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Estado polimórfica en el codón 60
El
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genotipos en el codón 60 se determinaron inicialmente utilizando métodos estándar de PCR y digestiones de ADN enzimáticas como se informó anteriormente [24]. El amplicón que cubre todo el marco de lectura abierto se clonó posteriormente y se analizó por secuenciación directa para verificar que las líneas celulares no contienen variaciones genéticas adicionales en el gen PSMB9.
Análisis de inmunotransferencia
Una cantidad equivalente de extractos de tejidos o celulares se resolvieron en geles de poliacrilamida y transferidas a membranas de PVDF. Las membranas se bloquearon en leche desnatada al 5% y se sondaron con anti-β1i (1:1000, Abcam) y anti-β-actina (1:1000, Novus) anticuerpos. Después del lavado, las transferencias se incubaron con anticuerpos secundarios de rábano picante y conjugado con peroxidasa. Los anticuerpos unidos se detectaron usando un sustrato de quimioluminiscencia (Pierce Biotechnology). Con el fin de comparar los niveles relativos de expresión de β1i entre múltiples líneas de células, extractos de células H23 diluidas en serie se utilizaron como patrones de calibración y las intensidades de banda se cuantifican densitométricamente usando el software Una Cantidad (Bio-Rad).
proteasoma Ensayos de actividad
la actividad catalítica de β1i se determinó mediante el control de la velocidad de hidrólisis de fluorescente 7-amino-4-metilcumarina (AMC) de Ac-PAL-AMC [20]. Brevemente, se añadieron preparaciones proteasomal purificadas o extractos celulares que contienen la cantidad de proteína total equivalente (10 mg) a placas de 96 pocillos y se ajustaron a un volumen final de 50 l usando tampón de ensayo (Tris 20 /Cl, EDTA 0,5 mM, pH 8,0). La reacción se inició mediante la adición de Ac-PAL-AMC (100 M) y la fluorescencia de AMC liberado se controló durante 90 min usando un lector de placas SpectraMax M5 (Molecular Devices, excitación 360 nm y emisión 460 nm). Con el fin de verificar que la hidrólisis del sustrato está mediada por β1i, conjuntos adicionales de extractos celulares o preparaciones purificadas se proteasomal pre-tratados con inhibidores del proteasoma UK101 o epoxomicina para 1 h, después de lo cual se monitorizaron las señales fluorescentes. En experimentos separados, la hidrólisis de Suc-LLVY-AMC (100 mM) se controló para valorar la actividad general de la CT-L proteolítica.
se expresaron Análisis estadístico
Los valores de los datos como medias con desviaciones estandar. Una comparación entre los grupos se realizó a través de Student
t-test
y p & lt; 0,05 fue considerado significativo
Resultados
Expresión frecuente de β1i en Colón y cáncer de páncreas tejidos.
en la evaluación de la expresión de β1i en el cáncer de colon, primero se utilizaron cuatro pares de cáncer de colon y los tejidos adyacentes no malignas del colon de los donantes a juego. Nuestro análisis de inmunotransferencia indicó que los niveles β1i fueron muy elevados en todos los cuatro tejidos clínicos de cáncer de colon en comparación con los tejidos no malignos de colon emparejadas (Figura 1A). A fin de evaluar la frecuencia de expresión β1i en el cáncer de colon, se realizó un análisis inmunohistoquímico en una matriz tumoral que contiene 153 muestras de cáncer de colon evaluables de todas las etapas clínicas. La intensidad de la tinción β1i se evaluó en una escala de 0 a 3 y nuestros resultados indicaron que la mayoría (aproximadamente el 70%, n = 107 fuera de 153 muestras en total) de tejidos de cáncer de colon fueron positivas (la intensidad de tinción ≥1) para β1i tinción (Figura 1B). Se realizaron análisis similares utilizando una matriz de tumor que contiene 43 muestras de cáncer de páncreas evaluables de todas las etapas clínicas. Debido al tamaño limitado de la muestra, se evaluó la intensidad de la tinción β1i en una escala de 0 a 2 y nuestros resultados indican que aproximadamente el 53% (n = 23 de los 43 especímenes en total) de tejidos de cáncer de páncreas tenido positivo (el ≥ intensidad de la tinción 1) tinción β1i (Figura 1C). Para ambas matrices tisulares, se evaluó si existe alguna asociación entre la expresión β1i y los factores clínico-patológicas disponibles (por ejemplo, el género y el grado del tumor). Sin embargo, los resultados no revelaron asociaciones aparentes.
(a) Análisis de inmunotransferencia para β1i usando lisados proteicos preparados a partir de no maligno (N) y cancerosas (T) los tejidos del colon de los mismos donantes (n = 4 pares) . β-actina se utilizó como control de carga. Las intensidades de las bandas para β1i y β-actina se analizaron densitométricamente y se utilizaron para obtener la expresión β1i relativa normalizada para ß-actina niveles. (B) La tinción inmunohistoquímica para β1i utilizando una matriz tumoral que contiene 153 muestras de tejido tumoral de colon evaluables. Las intensidades de β1i tinción positiva se evaluaron en una escala de 0 a 3. Aproximadamente 70% (46 muestras tenían intensidad de grado 1, 38 con el grado 2, y 8 con el grado 3, de 153 especímenes total del tumor) de los tejidos colorrectales tienen positivo (la intensidad de la tinción ≥1) tinción β1i. (C) La tinción inmunohistoquímica para β1i utilizando una matriz tumoral que contiene 43 muestras de tejido pancreático tumorales evaluables. Las intensidades de tinción positiva β1i fueron evaluados en una escala de 0 a 2. Aproximadamente el 53% (9 especímenes con una intensidad de grado 1 y grado 2 con 14, de las 43 muestras de tumor total) de tejidos de cáncer de páncreas tenían ≥1 intensidad de la tinción β1i .
Actividad catalítica del β1i en un panel de líneas celulares de cáncer humano que sean diferentes el codón 60 variantes polimórficas que
Antes, Blackburn et al. [20] informó de que Ac-PAL-AMC (Figura 2A) se puede utilizar como una sonda selectiva para la medición de la actividad catalítica de β1i. Antes de la utilización de Ac-PAL-AMC en nuestro estudio, se verificó además que la hidrólisis de Ac-PAL-AMC fue mediada selectivamente por β1i usando preparaciones purificadas de immunoproteasome y proteasoma constitutiva. De hecho, Ac-PAL-AMC se hidroliza fácilmente por el inmunoproteasoma, pero no por el proteasoma constitutiva (Figura 2B). El pretratamiento con UK101, un inhibidor selectivo β1i proteasoma [21], inhibió completamente la hidrólisis Ac-PAL-AMC, además de validar Ac-PAL-AMC como una sonda β1i-selecitve (Figura 2B). De manera similar, aproximadamente el 90% de hidrólisis de Ac-PAL-AMC fue inhibida en los extractos de Panc-1 de células por UK-101 pre-tratamiento (Figura 2C). Por el contrario, la hidrólisis de Suc-LLVY-AMC fue bloqueado sólo parcialmente por UK101 pretratamiento en Panc-1 extractos, lo que sugiere que Suc-LLVY-AMC es hidrolizado por subunidades del proteasoma distintos de β1i (es decir β5 o β5i) (Figura 2C).
(a) estructura química de Ac-PAL-AMC. (B) la hidrólisis Ac-PAL-AMC con el tiempo por el proteasoma purificado constitutiva (cruz), immunoproteasome purificada (círculo cerrado), o immunoproteasome purificado previamente tratados con UK101 (cuadrado abierto). Un aumento lineal se observó en sólo pozos que contiene immunoproteasome. (C) La velocidad de hidrólisis de Ac-PAL-AMC o Suc-LLVY-AMC en presencia de Panc-1 extracto de células (10 g). La hidrólisis de Ac-PAL-AMC fue casi completamente inhibida por UK101 pre-tratamiento (10 M). La hidrólisis de Suc-LLVY-AMC se inhibió parcialmente por UK-101 pre-tratamiento. Epoxomicina (Epx, 10 mM), un inhibidor del proteasoma de amplia actuación, se utilizó como control positivo.
Después de la validación de Ac-PAL-AMC como una sonda β1i selectivo, que entonces evalúa la actividad β1i en un panel de líneas celulares de cáncer humano. Estas líneas celulares fueron seleccionados por su
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genotipos en el codón 60 (n = 6 para los que llevan HH o HR genotipo; n = 11 para los que llevan el genotipo RR) y no ha sido verificada para tener cualquier variación adicionales en el
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gen mediante secuenciación directa (Tabla S1). Nuestros resultados indican que las actividades catalíticas de β1i evaluados por la velocidad de hidrólisis de Ac-PAL-AMC varían sustancialmente entre estas líneas celulares, sin embargo, no parecen estar asociados con el estado polimórfico codón 60 (Figura 3) estas diferencias.
(a) La actividad catalítica de β1i medida por la tasa de hidrólisis de Ac-PAL-AMC en líneas celulares de cáncer humano con H /H o genotipo R /H (barras en blanco) y /R genotipo R (barras rellenas). se observó actividad variable entre líneas celulares. (B) Tasa de Ac-PAL-AMC hidrólisis en líneas celulares con H /H o genotipo R /H (círculos abiertos) o /R genotipo R (cuadrados cerrados). Velocidad de hidrólisis no mostró ninguna diferencia estadísticamente significativa entre las líneas de células H- H + y.
β1i expresión en líneas celulares de cáncer humano que sean diferentes el codón 60 variantes polimórficas que
Como paso siguiente , se examinó si los niveles de expresión β1i están influenciadas por el estado polimórfico codón 60 en las líneas celulares de cáncer de prueba. Con el fin de cuantificar los niveles de proteína β1i, que muestran una variabilidad sustancial a través de diferentes líneas de células, hemos utilizado diluido en serie extractos de células H23 como patrones de calibración (Figura 4). Una comparación de las líneas celulares con la H-alelo a los que carecen de la H-alelo no mostró diferencias estadísticamente significativas en la expresión β1i (Figura 5A). En cambio, encontramos una correlación altamente significativa entre la actividad catalítica β1i y su nivel de expresión (Figura 5B, r
2 = 0,86, p & lt; 0,0001, valores individuales se incluyen en la Tabla S1). Estos resultados sugirieron que los diferentes niveles de expresión de β1i cuenta probablemente de la mayor parte de la variabilidad observada en la actividad β1i a través de diferentes líneas celulares.
Una cantidad equivalente (10 g) de los extractos celulares se sometieron a inmunotransferencia con un anticuerpo a β1i junto con extractos de células H23 diluidas en serie (estándares de calibración). Se realizaron análisis densitométricos de las intensidades de banda para cuantificar los niveles de expresión de β1i. altos niveles de expresión de las líneas celulares β1i se muestran en (A) y líneas de células con baja expresión de β1i se muestran en (B).
(a) β1i expresión en líneas celulares con H /H o R /H (círculo abierto) y genotipos R /R (cuadrados cerrados). expresión β1i no mostró diferencias estadísticamente significativas entre las líneas de células H- H + y. (B) Correlación de Ac-PAL-AMC hidrólisis con expresión β1i en todas las líneas celulares ensayadas. Una correlación altamente significativa se observó entre los niveles de expresión de β1i y su actividad catalítica (R
2 = 0,86, p & lt; 0,0001).
Discusión
En nuestro estudio actual , se investigó el impacto de la
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codón 60 polimorfismos en la subunidad β1i del immunoproteasome expresado en varias líneas celulares de cáncer utilizando una sonda informaron recientemente de la actividad β1i, Ac-PAL-AMC. Nuestros resultados indican que el polimorfismo del codón 60 no tiene un impacto importante en los niveles de expresión o actividades catalíticas de β1i en el panel de líneas celulares de cáncer humano ensayadas. Estos resultados son diferentes de los resultados anteriores que indicaban que el tejido cerebral de personas de edad que llevan el alelo H codón 60 había disminuido la actividad del proteasoma en comparación con los tejidos de los que no llevan el codón 60 H alelo [17]. Una posible razón para estas discrepancias aparentes puede estar relacionado con los diferentes sustratos utilizados para evaluar la actividad proteolítica. El sustrato fluorogénico Suc-LLVY-AMC utilizado por Mishto et al. [17] se utiliza comúnmente para medir la actividad global similar a la quimotripsina del proteasoma. Sin embargo, ya que este sustrato se puede hidrolizar tanto por el inmunoproteasoma (β1i y β5i) y el proteasoma constitutiva (β5) [25], los resultados obtenidos utilizando Suc-LLVY-AMC no puede desentrañar la contribución directa del polimorfismo genético β1i. Nuestros resultados actuales se obtuvieron utilizando la informó recientemente sustrato Ac-PAL-AMC que se escinde selectivamente por la subunidad β1i (Figura 2) [20]. Nuestros resultados son consistentes con el informe anterior de que el
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codón 60 polimorfismo no tuvo impacto en los perfiles de degradación de un péptido 28-mer (Kloe 258) y una forma recombinante de IkBα, un regulador clave de NF clásica vía -κB y conocido sustrato proteasoma [18]. Aunque no podemos descartar completamente la posibilidad de que el impacto del codón 60 polimorfismo puede variar dependiendo de los tipos de sustrato y de la enfermedad, los resultados del presente estudio y otros sugieren que el polimorfismo del codón 60 no es probable que contribuya a la variabilidad interindividual en β1i niveles de actividad catalítica.
Con los notables éxitos clínicos de bortezomib y carfilzomib en el tratamiento del mieloma múltiple y otras neoplasias hematológicas, el proteasoma es ahora reconocido como un objetivo quimioterapéutico importante. Sin embargo, las toxicidades indeseables limitan el amplio uso de las drogas del proteasoma-focalización disponibles en la actualidad. Para superar estas limitaciones, el inmunoproteasoma, una forma alternativa de la proteasoma constitutiva, se ha explorado como un objetivo terapéutico alternativo. Tales esfuerzos han dado compuestos prometedores immunoproteasome de metas con eficacia contra el cáncer y perfiles de toxicidad mejorados [7], [23], [26], [27]. En el estudio de enfoques immunoproteasome-dirigidos para el tratamiento del cáncer, es importante tener en cuenta la expresión immunoproteasome a través de diferentes tipos de cáncer. Si bien se conoce la immunoproteasome ser upregulated en neoplasias hematológicas, la expresión del inmunoproteasoma en el cáncer sólido no se ha examinado a fondo. En el presente estudio, mostramos que la subunidad β1i se expresa frecuentemente en muestras de tejido clínicos de cáncer de colon y páncreas, así como un panel de líneas celulares cancerosas humanas derivadas de tejidos de colon, pulmón, próstata y de mama. Aunque los hallazgos similares han sido reportados por nuestro grupo y otros [21], [23], [28], [29], nuestro estudio actual proporciona información más robusto en cuanto a la expresión de β1i en la mayoría de los puntos clínica y tejidos de cáncer de páncreas probado . Cabe señalar que la regulación a la baja de subunidades immunoproteasome También se ha informado en algunos tipos de cáncer [30] - [34] y es posible que el estado de la expresión de la immunoproteasome puede depender de los tipos de enfermedad y sus mecanismos patogénicos. Por otra parte, hay que señalar que nuestros resultados en las frecuencias de polimorfismos β1i de líneas celulares de cáncer derivadas de diferentes órganos no son necesariamente un reflejo de aquellos de entre estos tipos de cáncer. Esto es en parte debido al tamaño pequeño de la muestra y el diseño experimental de nuestro estudio actual. En particular, nuestro diseño experimental consistió en la exclusión de varias líneas de células que albergan los polimorfismos adicionales en los genes que codifica β1i y /o otras subunidades immunoproteasome como β5i con el fin de minimizar los posibles factores de composición. Nuestros resultados sugieren que el codón 60 polimorfismos no es probable que sean responsables de la variabilidad observada en la β1i expresión /actividad entre las líneas celulares ensayadas. Al validar aún más nuestros hallazgos, puede ser importante emplear un tamaño de muestra más grande de líneas celulares de cáncer o muestras clínicos derivados de los mismos órganos, tal vez la comparación de las muestras con niveles de expresión comparables β1i. Además, también se requieren estudios de asociación genética que examinan el polimorfismo en el codón 60 β1i en el contexto del desarrollo y progresión del cáncer.
En conclusión, nuestros resultados demuestran que la subunidad β1i del immunoproteasome se expresa con frecuencia en el colon y páncreas tipos de cáncer y, posiblemente, en otros tipos de cánceres sólidos. Además, el polimorfismo genético en el codón 60 no parece tener un impacto importante en la expresión y la actividad catalítica de β1i en células de cáncer. Tomados en conjunto, estos hallazgos pueden proporcionar información útil para el desarrollo de agentes anticancerígenos immunoproteasome de metas. Además, estos resultados no incluyen el codón 60 de estado polimórfico como un factor potencial de contribuir a la sensibilidad variable a los inhibidores de la orientación immunoproteasome β1i.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
doi: 10.1371 /journal.pone.0073732.s001 gratis (DOCX)