Extracto
Antecedentes
El carcinoma de la vesícula biliar (GBC) es una neoplasia agresiva. La mayor incidencia de cáncer de vesícula biliar en las mujeres se ha atribuido en parte a factores hormonales. Por tanto, el presente estudio fue diseñado para explorar el papel de las variantes genéticas de los estrógenos (
ESR1, ESR2
) y progesterona (
PGR)
receptores en conferir riesgo de cáncer de vesícula biliar.
Materiales y Métodos
El presente estudio de casos y controles reclutados total de 860 sujetos, incluyendo 410 pacientes, 230 pacientes GBC de cálculos biliares y 220 controles. Examinamos las asociaciones de 6 polimorfismos seleccionados en tres genes:
ESR1 gratis (rs2234693, rs9340799, rs1801132),
ESR2 gratis (rs1271572, rs1256049) y
PGR gratis (rs1042838) con el riesgo de GBC. Genotipado para todos los polimorfismos se realizó mediante PCR-RFLP. enfoques de reducción de dimensionalidad multifactorial y árboles de clasificación y regresión se combinaron con la regresión logística para descubrir de orden superior interacciones gen-gen en la vía hormonal.
Resultados
En la comparación de la distribución de frecuencias de genotipo en cálculos biliares y GBC pacientes con la de sujetos sanos, los genotipos homocigotos variantes de
ESR1
-397TT (rs2234693) mostraron polimorfismo de riesgo significativo para el desarrollo de cálculos biliares [odds ratio: OR = 2,9] y GBC [OR = 1,8], respectivamente. El análisis detallado haplotipos sugerido que
ESR1
T
rs2234693G
rs9340799C rs1801132
tienen asociación significativa en conferir riesgo tanto para los cálculos biliares [OR = 2,2] y GBC [OR = 3,0]. Sin embargo, los genotipos que contienen variantes-DI + (II) de
PGR gratis (rs1042838) mostraron un riesgo bajo tanto en GBC [OR = 0,4] y los pacientes de cálculos biliares [OR = 0,4] .En la realización del análisis MDR,
ESR1
IVS1-397C & gt; T,
ESR1
IVS1-351A & gt; G, y
ESR2
-789 A & gt; C produjeron la más alta exactitud de las pruebas de 0.634. Estos resultados fueron apoyados además por el análisis Carro que reveló que los individuos con los genotipos combinados de
ESR1
-397 CT o TT,
ESR1
-351 AG o GG y
ESR2
-789 AA tuvo el mayor riesgo de GBC [OR = 3,9].
Conclusión
el uso de enfoques multi-analíticos, nuestro estudio mostró importante papel de
ESR1
IVS1- 397C & gt; T,
ESR1
IVS1-351A & gt; G, y
ESR2
-789 a & gt;. C variantes de susceptibilidad GBC y el riesgo parece estar mediada a través de vía dependiente de cálculos biliares
Visto: Srivastava a, Sharma KL, Srivastava N, S Misra, Mittal B (2012) El papel considerable de estrógeno y receptor de progesterona variantes en la secuencia de la vesícula biliar cáncer Predisposición: una estrategia multi-analítica. PLoS ONE 7 (7): e40162. doi: 10.1371 /journal.pone.0040162
Editor: Amanda Ewart Toland, Ohio State University Medical Center, Estados Unidos de América
Recibido: March 1, 2012; Aceptado: June 2, 2012; Publicado: 10 de julio 2012
Derechos de Autor © 2012 Srivastava et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. El estudio fue apoyado por becas de investigación y becas del Consejo indio de investigación médica (ICMR) y el Departamento de Biotecnología Gobierno (DBT). de la India. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el carcinoma de la vesícula biliar es una enfermedad muy grave con diagnóstico tardío, opciones limitadas de tratamiento y el pronóstico privado [1]. Es la lesión maligna más común del tracto biliar y el sexto más común entre los tumores malignos del tracto digestivo [1], [2], [3]. Un estudio de registro de cáncer de Utah (UCR) y base de datos familiar de cáncer de Suecia informó la agrupación familiar de GBC [4]. Existen pruebas convincentes también existe para la función de los antecedentes familiares de cálculos biliares en la vesícula biliar etiología del cáncer [5], [6]. Por otra parte, el gráfico de la incidencia de carcinoma de vesícula biliar fluctúa con el sexo y etnia, y se reportan las frecuencias más altas en las mujeres que pertenecen a los nativos americanos, América del Sur y Norte de la India [7].
Una interacción entre las hormonas de múltiples facetas, alteraciones metabólicas , infecciones, e incluso las anomalías anatómicas se han dilucidado en la etiología del carcinoma de la vesícula biliar [1]. Por otra parte, un gran número de estudios epidemiológicos han demostrado una fuerte asociación de GBC con la enfermedad de cálculos biliares de colesterol [8] y con muchos de sus factores de riesgo como la obesidad, el alto consumo de carbohidratos y el sexo femenino [9]. En las mujeres posmenopáusicas, la terapia de reemplazo hormonal aumenta significativamente el riesgo de enfermedades de la vesícula biliar [10], [11] lo que sugiere un papel notable de las hormonas sexuales en la etiología del GBC [12], [13], [14], [15], [16] .También las mujeres son de dos a seis veces más afectadas que los hombres. En conjunto, estas evidencias han planteado la posibilidad de que los esteroides sexuales (estrógenos y progesterona) podrían desempeñar un papel fisiopatológico fundamental en el desarrollo del carcinoma de la vesícula biliar. Las hormonas estrógeno y progesterona actúan sobre los tejidos diana mediante la unión a sus receptores respectivos. Los receptores de estrógenos (
ESR1, ESR2
) y del receptor de progesterona (
PGR)
genes están localizados en el cromosoma 6q25.1, 14q21-22 y 11q22, respectivamente, y su expresión se han detectado en la vesícula biliar humano normal mucosa [15] y GBC se ha demostrado [16] Las variantes alélicas de los genes del receptor de estrógeno para ser asociado con la susceptibilidad o la progresión de diversos trastornos tales como infarto de miocardio [17], cálculos biliares de colesterol y las enfermedades del tracto biliar [18]. Por otra parte, los ensayos funcionales sugieren que
ESR1
IVS1-397C & gt; T polimorfismo afecta a un sitio de unión para la familia de factores de transcripción myb [19], [20] y el polimorfismo también se ha estudiado en diversos estudios de asociación de cáncer de mama [17], [21], [22]. Por el contrario, la hormona progesterona juega un papel importante en la regulación del nivel de estrógeno y ofrecer protección contra varios tipos de cáncer [23], [24].
Dado el potencial papel hormonal en enfermedades de la vesícula biliar, y también el exploradas hasta ahora papel de
ESR /PGR
polimorfismos en los cánceres relacionados con el sexo femenino, la hipótesis de que las variantes genéticas en
ESR1
,
ESR2
y
PGR
genes pueden tener importantes impacto en el riesgo de cáncer de vesícula biliar. Por lo tanto, en el presente estudio, se determinó un panel de 6 polimorfismos bien estudiados en
ESR1, ESR2 Opiniones y
PGR
genes en un diseño de casos y controles que involucran a 410 pacientes, 230 pacientes GBC de cálculos biliares y 220 de cáncer /controles libres de cálculos biliares procedentes del norte de la India. Además de regresión logística (RL), dos enfoques no paramétricos, la reducción de dimensionalidad multifactorial (MDR) y árboles de clasificación y regresión (CART) se aplicaron para explorar de orden superior interacciones gen-gen en la modulación de riesgo de cáncer de vesícula biliar. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer informe que ha investigado el papel de las variantes genéticas en los genes de los receptores hormonales usando enfoque multi-analítica para definir su perfil de riesgo para el cáncer de la vesícula biliar y la enfermedad de cálculos biliares.
Resultados
características de la Población
las características demográficas de los pacientes de cálculos biliares y GBC con respecto a su edad y sexo controles pareados se presentan en la Tabla 1. La edad media en los tres grupos fueron comparables y no demostraron estadísticamente significativa diferencias. Más del 90% de los pacientes GBC estaban en etapas avanzadas de cáncer (estadios III y IV) fueron encontrados y los cálculos biliares a estar presente en el 50,5% de los pacientes del GBC. Alrededor del 31% de los pacientes del GBC se asociaron con el uso del tabaco en alguna forma (fumar, masticar, o ambos). Se observó durante la recopilación de los datos que la mayoría de los pacientes de sexo femenino eran amas de casa y los pacientes de sexo masculino no realizaban ninguna ocupaciones peligrosas. Todos los pacientes con cáncer y de cálculos biliares eran casos incidentes, y ninguno de los controles tenían antecedentes familiares de cáncer.
alélica Distribución de polimorfismos estudiados en los controles
La distribución genotípica y alélica de
ESR1
IVS1-397C & gt; T (rs2234693), IVS1-351A & gt; G (rs9340799), Ex4-122C & gt; G (rs1801132),
ESR2
-789 A & gt; C (rs1271572), 1082 G & gt ; a (rs1256049) y
PGR
ins /del (rs1042838) se muestran en la Tabla 2. La observado frecuencias genotípicas de todos los polimorfismos estudiados en los controles estaban de acuerdo con el equilibrio de Hardy-Weinberg (p & lt; 0,05). Las frecuencias de los alelos variantes en nuestro estudio fueron similares a los informes publicados anteriores [25].
Asociación de
ESR1
,
ESR2
y
PGR
polimorfismos con GBC y cálculos biliares
la Tabla 3 muestra el riesgo de carcinoma de vesícula y los cálculos en relación con cada uno de los SNPs de los
ESR1, ESR2
y
PGR.
al comparar la distribución de frecuencias de genotipo de nuestros grupos de estudio, es decir, GBC y los pacientes de cálculos biliares con la de los controles, los genotipos homocigotos variantes de
ESR1
IVS1-397C & gt; T (rs2234693) polimorfismo mostraron un aumento estadísticamente significativo del riesgo de desarrollar GBC ( p = 0,02; [OR] = 1,8) y de cálculos biliares (p = & lt; 0,001; [OR] = 2,9). Por otra parte, en pacientes de cálculos biliares
ESR1
IVS1-351A & gt; G confirió un riesgo más alto (p = 0,002; [OR] = 2,6). Por el contrario, no se observaron diferencias significativas en la distribución de
ESR1
IVS1-351A & gt; G, Ex4-122C & gt; G, (rs1801132) y
ESR2
-789 A & gt; C (rs1271572 ), Ex6 1082 G & gt; A (rs1256049) polimorfismos en cualquiera de los grupos, tanto en genotípicas y alélicas niveles. Los genotipos que contienen variantes-(DI + II) de
PGR
ins /del (rs1042838) mostraron un riesgo bajo, tanto en pacientes GBC y cálculos biliares, que también fue significativa (p = 0,004; [OR] = 0,4; p = 0,009; [OR] = 0,4 Tabla 2) en comparación con los homocigotos genotipo DD de tipo salvaje
en el estudio los sujetos fueron estratificados en machos y hembras.. En pacientes masculinos GBC, el TT variante de genotipo de
ESR1
IVS1-397C & gt; T (rs2234693) polimorfismo mostraron un aumento significativo del riesgo de GBC (p = 0,009; [OR] = 4,8), mientras que IVS1-351A & gt; G ( rs9340799) polimorfismo confiere un mayor riesgo de GBC en las mujeres (p = 0,026; [OR] = 2,4). Estos resultados contradictorios pueden deberse en parte al insuficiente número de varones en comparación con los pacientes femeninos GBC. Ninguna de las variantes genéticas de
ESR2
y
PGR
ins /del riesgo específico de género conferida por GBC tanto en genotípicas y alélicas niveles. Se obtuvieron resultados similares cuando se compararon los machos y las hembras de cálculos biliares con los controles respectivos segregadas sexo. (Datos no mostrados)..
ESR1
y
PGR
polimorfismos y la modulación del riesgo en la presencia de cálculos biliares
Dado que los cálculos biliares están presentes en más de 50% de los pacientes GBC, los casos de cáncer fueron separados en dos grupos sobre la base de la presencia o ausencia de cálculos biliares que acompañan y se comparan de forma independiente con los controles (Tabla 3). Se encontró que los pacientes con cálculos biliares GBC que acompañan a tener mayor riesgo de desarrollar la enfermedad con
ESR1
IVS1-397 CT + TT (rs2234693) genotipos (p = 0,002; [OR] = 1,6 Tabla 3). Por el contrario,
ESR1
Ex4-122C & gt; G (rs1801132) no se encontró una relación significativa tanto en los subgrupos. En caso de
PGR
ins /del (rs1042838), se observó un efecto protector en los pacientes GBC, independientemente de su estado de cálculos biliares (Tabla 3). Sin embargo, en la comparación de los pacientes que tienen cálculos biliares GBC con pacientes de cálculos biliares (no cancerosas), los resultados no mostraron asociación con todos los polimorfismos estudiados de
ESR1, ESR2
y
PGR, España, tanto en genotípicas y alélicas los niveles. (Datos no mostrados)..
desequilibrio de unión y análisis de haplotipos de
ESR1 Hoteles en casos y controles Grupos en
En el análisis de LD,
ESR1
rs2234693 y rs9340799 se encontraron estar en desequilibrio de ligamiento (D '= 0,575). Haplotipos se construyeron para los tres polimorfismos en
ESR1
gen incluyendo IVS1-397C & gt; T (rs2234693); IVS1-351A & gt; G (rs9340799) y Ex4-122C & gt; G (rs1801132). Los haplotipos que comprenden los alelos homocigotos salvajes se tomaron como referencia y la diferencia de las frecuencias de haplotipos entre pacientes y controles fueron probados mediante la prueba de chi-cuadrado.
haplotipos análisis de los polimorfismos estudiados tres de
ESR1
puesto de manifiesto que la distribución de T
rs2234693G
rs9340799C
haplotipo rs1801132 fue significativamente mayor en ambos GBC (27,5% 13,7% v /s) de cálculos biliares y los pacientes (25,1% v /s 13,7) en comparación con los controles y se confiere un alto riesgo de GBC (p = & lt; 0,0001; [OR], 3,0 Tabla 4) y la enfermedad de cálculos biliares (p = 0,0012; [OR] = 2,2 Tabla 4). haplotipos Global análisis indicaron una diferencia estadísticamente significativa entre los casos y controles GBC basado en el patrón de distribución de la
ESR1
haplotipos (p = & lt; 0,001). Sin embargo, ninguno de los
se encontraron ESR2
haplotipos que se asocia con GBC y el riesgo de cálculos biliares.
La interacción gen-gen
Dado que puede haber interacciones significativas entre
PGR, ESR1
y
ESR2
, se realizó un análisis global de la interacción gen gene-. Los resultados que se muestran en la Tabla 5 reveló una interacción significativa de variantes específicas de los tres genes con la interacción global valor de p. & Lt; 0,0001
Asociación de interacciones de orden superior con GBC Riesgo Análisis por MDR
Nuestros resultados anteriores han demostrado la implicación de alto orden interacciones gen-gen de reparación del ADN y las vías inflamatorias en la susceptibilidad GBC [26]. Por lo tanto, buscamos este tipo de interacciones en las variantes genéticas de los genes de los receptores hormonales, mediante el análisis de MDR y CART.
La Tabla 6 muestra el mejor modelo de interacción mediante el análisis de la MDR. El mejor modelo de un factor para predecir el riesgo GBC fue
ESR1
IVS1-397C & gt; T SNP (prueba de precisión = 0,519, CVC = 10/10, la permutación p = 0,025). El mejor modelo de dos factores de
ESR1
IVS1 351A & gt; G y
ESR2
-789 A & gt; C tenían una precisión prueba mejorada de 0,564 (permutación p = & lt; 0,001), sin embargo, la CVC se redujo (6/10). El mejor modelo de interacción fue el modelo de tres factores incluyendo
ESR1
IVS1-397C & gt; T
ESR1
IVS1 351A & gt; G y
ESR2
-789 A & gt; C SNP, el cual dado la más alta exactitud de las pruebas de 0.634 y la máxima de CVC 10/10 (permutación p = & lt; 0,001). El modelo de cuatro factores que consiste en
ESR1
IVS1-397C & gt; T, IVS1 351A & gt; G, Ex4-122C & gt; G y
ESR2
-789 A & gt; C también mejora la precisión de pruebas en comparación con el modelo de un factor (CVC = 10/10 permutación p = & lt; 0,001). Para los tres SNPs identificados en el mejor modelo de interacción,
ESR1
IVS1-397C & gt; T, IVS1 351A & gt; G y
ESR2
-789 A & gt; C se combinaron y según una dicotomía entre el software MDR . Los individuos que portan el estrato riesgo combinado tenían un riesgo 4,0 veces mayor para GBC (p = & lt; 0,001). Por otra parte, un efecto combinado de
ESR1
IVS1-397C & gt; T, IVS1 -351A & gt; G y
ESR2
-789 A & gt; C se evaluó mediante análisis de regresión logística (Tabla 7) con el
ESR1
IVS1-397TT, IVS1-351GG y
ESR2
-789 AA como genotipos de riesgo. Los sujetos se clasificaron en cuatro grupos basados en el número de genotipos de riesgo que llevaban y los que no tienen ningún genotipo de riesgo fueron designados como el grupo de referencia. Se encontró que los valores de p para las personas con una y dos genotipos de riesgo fue de 0,46 y 0,015, respectivamente, Sin embargo, el valor py RUP para los tres genotipos de riesgo podría no puede determinarse debido a la ausencia de la combinación de variante en los controles (Tabla 7). Estos resultados sugieren un efecto de dosis génica significativa de
ESR1
IVS1-397C & gt; T, IVS1 -351A & gt; G y
ESR2
-789 A & gt;. C
Asociación de interacciones de orden superior con GBC Riesgo por Carrito análisis
el árbol resultante final se genera mediante el análisis CART (Tabla 8). En consonancia con el mejor modelo de un factor MDR, la división inicial del nodo raíz en el árbol de decisión fue
ESR1
IVS1-397C & gt; T, lo que sugiere que este SNP es el factor de riesgo más importante para el GBC entre los polimorfismos estudiados . Continuar la inspección de la estructura de árbol reveló patrones de interacción entre distintos individuos portadores del
ESR1
IVS1-397 CT o TT y los que tienen los genotipos
ESR2
-789 CA o CC. Los individuos que portan
ESR1
IVS1-397CC,
ESR1
-122CC y
ESR2
-789 AC o genotipos AA tenían la tasa más baja caso del 33,3%, y se toma como referencia. Usando el nodo terminal que comprende los
ESR1
Ex4-122 CC portadores del genotipo como referencia, los individuos que llevan tanto el
ESR1
-397 CT o TT,
ESR1
-351 AG o GG y
ESR2
-789 AC genotipos mostraron un riesgo significativamente mayor de GBC (OR ajustado 3,6; IC del 95%, 1.7 a 9.1), mientras que los individuos con los genotipos combinados de
ESR1 CD - 397 CT o TT,
ESR1
-351AG o GG,
ESR2
-789 AA tenían el mayor riesgo para la GBC (OR ajustado 3,9; IC del 95%, 2,0-9,8) (Tabla 8) . De este modo, combinando el análisis de locus único, CART y MDR que encontraron que las variantes genéticas individuales, ya sea en
ESR1
o
ESR2
pueden no ser responsables de conferir un alto riesgo para la enfermedad, sino más bien un gen orden superior -Gene interacciones son propensos a estar involucrados en la susceptibilidad genética a la GBC.
Análisis in silico, de variantes genéticas en el gen Actividad
a medida que el SNP se encuentra en secuencias no codificantes, era plausible que los SNPs puede tener influencia en la transcripción del gen. En silico análisis utilizando FAST-SNP y F-SNP mostraron cambios en la regulación transcripcional y empalme alternativo para la mayoría de los SNPs seleccionados (Tabla 8). Para un análisis en Silco de PROGINS, Polyphen "resultado mostró el cambio como benigna, mientras que SIFT sugirió" tolerado "cambio (Tabla 9).
Discusión
Las diferencias genéticas en los genes de hormonas sexuales puede tener un efecto en sus respectivas actividades, haciendo con ello que la divergencia entre individuos en la propensión a GBC. Además, la fuerte incidencia femenina ha planteado la posibilidad de que los estrógenos pueden desempeñar un papel fisiopatológico clave en la progresión de cáncer de vesícula biliar [27]. Además, la expresión y estudios funcionales han demostrado interacciones directas entre VSG y dominios del receptor de la PGR [28], [29]. Hay pruebas de que el riesgo inherente de GBC de colelitiasis en pacientes sin antecedentes familiares de cálculos biliares tenían un riesgo 21 veces, mientras que aquellos con ambos cálculos biliares y los antecedentes familiares positivos tenían un 57 veces mayor riesgo [6].
en el presente estudio, se aplicó una estrategia multi-analítica combinando LR, MDR y enfoques carro para examinar sistemáticamente las asociaciones entre el riesgo de GBC y un panel de polimorfismos genéticos implicados en la vía hormonal.
en la sola análisis de locus,
ESR1
IVS1-397C & gt; T (rs2234693) polimorfismo mostró asociación significativa con el riesgo GBC. Nuestros resultados de LR, MDR y CART también los análisis sugieren consistentemente que
ESR1
IVS1-397C & gt; T polimorfismo es el factor de susceptibilidad individual más importante para el desarrollo del GBC. Por otra parte, gen - análisis de la interacción gen mostraron interacciones significativas entre estas variantes hormonales. Además genethe estrategias múltiples de análisis también reveló orden superior interacciones gen-gen entre los
ESR1
IVS1-397C & gt; T, IVS1 -351A & gt; G y
ESR2
-789 A & gt; C polimorfismos en GBC riesgo.
En la realización de un análisis detallado de los haplotipos, se encontró que el carcinoma de la vesícula biliar y los cálculos biliares sujetos que llevan a
ESR1
haplotipos IVS1-397T, IVS1-351G, Ex4-122C que le confiere un mayor riesgo tanto para GBC y los cálculos biliares que indica que
ESR1
haplotipo como un factor de riesgo. Por lo tanto, los portadores de
ESR1
haplotipos tenían un 3,04 veces mayor riesgo de carcinoma de vesícula biliar en comparación con los no portadores, mientras que los mismos haplotipos conferidas 2,2 veces mayor riesgo de enfermedades de cálculos biliares. Por el contrario,
Alu
polimorfismo de inserción de los receptores de progesterona (
PGR
) confirió menor riesgo de GBC y los pacientes de cálculos biliares.
Recientemente, un estudio realizado por Park et al. en la población china han evaluado las variaciones de receptores hormonales (
ESR1, ESR2
) en relación con el cáncer de las vías biliares (35) e informó de una asociación con
ESR1 gratis (rs1801132) y
ESR2 gratis (rs1255953) variantes en el riesgo GBC, pero no observó ninguna asociación significativa con estos polimorfismos exonic. En cambio, encontramos asociación con el intrónica (
ESR1
) y promotor (
ESR2
) polimorfismos. La razón de esta discrepancia podría ser la variación de la población. Las frecuencias alélicas de
ESR1
y
ESR2
polimorfismos no fueron comparables entre los dos estudios. Además, el número total de casos registrados GBC por Park et al fue relativamente menor en comparación con el presente estudio, que aumenta las posibilidades de error tipo II β en su estudio. También es posible que los SNPs de
ESR1
y
ESR2
puede no ser que confieren efectos directos sobre la susceptibilidad GBC y sus efectos pueden ser mediados a través de su vinculación con algunos polimorfismos funcionales clave.
La asociación entre el
ESR1
polimorfismos y el riesgo de cálculos biliares /GBC son biológicamente creíble. Los estudios en animales han demostrado que ESRs están presentes en el hepato-pancreático-biliar árbol [30], [31], [32] incluyendo células biliares conductos epiteliales y de la vesícula biliar, lo que sugiere que los estrógenos pueden jugar un papel en las enfermedades de la vesícula biliar. Además, inmunohistoquímica y estudios cuantitativos RT PCR también han revelado que el nivel de expresión de
ESR1
gen es de aproximadamente 50 veces mayor en comparación con
ESR2
[33] En modelos animales, estradiol 17 beta promueve cálculo biliar formación implica la regulación positiva de la expresión hepática de ERalpha pero no ERbeta, y las acciones litogénicos de estrógeno puede ser bloqueada por completo por los agentes antiestrogénicos ICI 182780 [34]. Estos estudios muestran que la ESR-1 es clave y los resultados pueden ofrecer un nuevo enfoque para el tratamiento de cálculos biliares y cáncer de vesícula biliar mediante la inhibición de la actividad hepática ER con unos específicos para el hígado, los antagonistas selectivos ERalpha. Algunos estudios han puesto de manifiesto el importante papel de
ESR-2
rs1271572 en el riesgo de cáncer de ovario [35], [36]. Además, un estudio realizado por MARIE-GENICA Consorcio sugirió que se observó un mayor riesgo en sujetos con genotipos combinados de ambos
ESR1
y
ESR2
genes que modifican el riesgo asociado con la monoterapia con estrógenos utilizados en el cáncer de mama [37 ]. Del mismo modo, en nuestro estudio, la aplicación de las interacciones entre genes y enfoques multianalytical revelaron que el riesgo GBC fue mayor cuando los genotipos variantes de
ESR1
y salvaje
ESR2
-789 A & gt; C estaban presentes en combinaciones .
también puede mencionarse que las variantes genéticas en varios otros genes de la biosíntesis de estrógenos, el transporte y el metabolismo han demostrado asociación significativa tanto con enfermedad de cálculos biliares y cáncer del tracto biliar, posiblemente, por la modulación de metabolismo de las hormonas [18]. El IVS1-397C & gt; T y IVS1-351A & gt; G polimorfismos han sido un área importante de la investigación en enfermedades como la osteoporosis [22], [38], [39] las enfermedades cardiovasculares [40] y el cáncer [41]. Un número de hipótesis para la importancia funcional de estos polimorfismos se han reportado en la literatura. Dada su ubicación, 397 y 351 pares de bases cadena arriba del inicio del exón 2, posibles mecanismos funcionales incluyen la expresión de ESR1 alteradas por la unión de factores de transcripción e influir splicing alternativo diferencial. Nuestros estudios in-silico apoyan aún más la influencia de las variantes genéticas de los receptores de estrógenos en la transcripción de genes y mecanismos de empalme. Por lo tanto, el estrógeno podría mejorar cholelithogenesis colesterol mediante el aumento de las funciones de los receptores de estrógeno en el hígado y la vesícula biliar [42]. Teniendo en cuenta la importancia de los receptores hormonales de la función de la vesícula biliar, las variantes hipótesis pueden resultar en cálculos biliares de colesterol, seguido de la inflamación crónica y más intensa metaplasia, en última instancia, progresando en GBC que a su vez pueden ser categorizados como la vía dependiente de cálculos biliares de los receptores de estrógeno.
Para el polimorfismo del receptor de progesterona, se sabe muy poco acerca de las consecuencias funcionales mediante el cual
Alu
inserción en los receptores de progesterona proteger a las personas de carcinoma de vesícula biliar y cálculos biliares. códigos de alelos para PROGINS PGR que consta de 306 pb inserción Alu en el intrón G.
PGR
ins /del se encuentra en perfecto desequilibrio de ligamiento (D '= 1,0) con V660L polimorfismo (rs1042838) [43] (es decir, el alelo portador de inserción (PGR I) presenta una mayor estabilidad del mRNA y se transcribe a una más estable y transcripcionalmente activa la proteína [44]. El alelo de inserción PROGINS se ha informado que correlaciona inversamente con el riesgo de cáncer de mama [45], [46], [47] y la endometriosis [48] en algunas poblaciones [49], [50 ], [51]. se cree que el aumento de PGR puede inhibir la actividad mitogénica de factores de crecimiento similares a la insulina (IGFs), posiblemente a través de la regulación del crecimiento de proteínas de unión al factor-similar a la insulina 1 (IBP-1) y por lo tanto influir en el cáncer riesgo [52], [53], [54].
Limitaciones del estudio
Aunque, tamaño de la muestra en el presente estudio es suficiente para producir una potencia del 80%, pero está limitada en el análisis de subgrupos. por lo tanto, el estudio puede requerir confirmación en cohortes más grandes. Debido a que este es un estudio de asociación, no podemos descartar la presencia de un posible desequilibrio en relación con otros genes vecinos que podrían explicar la asociación significativa con fenotipos de cáncer de vesícula biliar o un pronóstico adverso.
En conclusión, nuestro estudio mostró que
ESR1
IVS1-397C & gt; T (rs2234693),
ESR1
IVS1-351A & gt; gt G (rs9340799),
ESR2
-789 A & ; C (rs1271572) polimorfismos y sus interacciones de orden superior pueden conferir un mayor riesgo de carcinoma de vesícula biliar, probablemente a través de la vía mediada por cálculo biliar
Métodos
Declaración de Ética
El protocolo de estudio. fue aprobado por el comité de ética institucional de Sanjay Gandhi post Instituto Superior de Ciencias médicas (SGPGIMS), y los autores siguieron las normas de la Declaración de Helsinki de la Asociación del mundo. Todos los participantes se les proporcionó el consentimiento informado por escrito para el estudio.
Población de estudio
El presente estudio de casos y controles reclutó a un total de 860 sujetos, incluyendo 410 pacientes GBC que incluyeron 230 casos anteriores [GBC ,,,0],26], 230 pacientes de cálculos biliares (GS) y 220 sujetos sanos. Todos los temas no relacionados eran de etnia del norte de India. Los pacientes fueron diagnosticados de forma consecutiva entre junio de 2006 y septiembre de 2011 en el Departamento de Gastro-cirugía, Sanjay Gandhi Post Instituto Superior de Ciencias Médicas y el Departamento de Oncología Quirúrgica, CSMMU Lucknow, India. GBC se definió como tumor que surge en la capa más interna (mucosa) y la difusión a través del peritoneo visceral (tejido que cubre la vesícula biliar) y /o en el hígado y /o a un órgano cercano (tal como el estómago, intestino delgado, colon, páncreas, conductos biliares o fuera del hígado), y a los ganglios linfáticos cercanos. El diagnóstico de cáncer para todos los casos fue confirmado por aspirado con aguja fina citología de la célula (FNAC) y la histopatología, dando una tasa de respuesta del 94%. La estadificación del cáncer se documentó según la AJCC /UICC puesta en escena [55]. En la enfermedad de cálculos biliares, cálculos biliares sintomáticos fueron detectados por ecografía transabdominal. Los controles sanos fueron reclutados de individuos no relacionados libres de cualquier enfermedad maligna de la población general. Las personas con cálculos biliares asintomáticos detectados por ecografía fueron excluidos de los controles. Los controles fueron emparejados a los pacientes por edad (± 5 años) y sexo. Durante el reclutamiento, el consentimiento informado se obtuvo de cada tema y la información sobre las características demográficas, como el sexo, la edad y el hábito de fumar, se recogió mediante un cuestionario.
Las muestras de ADN y genotipado
Sobre la base de los estudios funcionales y epidemiológicos anteriores [17], se seleccionaron un total de 6 polimorfismos funcionales literatura definidos en tres genes importantes implicados pertenecen a los receptores de estrógeno y progesterona. Candidatos polimorfismos de nucleótido único (SNP) se eligieron sobre la base de los siguientes: (a) la frecuencia de los alelos de más de cinco por ciento en la literatura o bases de datos publicadas [56] (b) sustituciones alélicas validados, y /o (c) cambios funcionales vinculados con alélica sustitución reportado en la literatura. Estos incluyen tres polimorfismos de nucleótido único (SNP) en los receptores de estrógenos 1 (ESR1
: IVS1-397C & gt; T rs2234693, IVS1-351A & gt; G rs9340799), y Ex4-122C & gt; G de genes (rs1801132), dos SNPs en el receptor de estrógeno 2 (
ESR2
: -789 a & gt; Crs1271572, 1082 G & gt; a rs1256049) del gen y un SNP en el receptor de progesterona (
PGR
: ins /del rs1042838). ADN genómico fue extraído de leucocitos de sangre periférica 5 ml de acuerdo con salificación método estándar [57]. La muestra de sangre y los datos clínicos se obtuvieron de cada participante al momento del reclutamiento. Los polimorfismos se genotipo utilizando el método de polimorfismo de longitud de fragmentos de PCR o PCR-restricción como se ha descrito anteriormente por Lai
et al
[58] y Rowe
et al
. [59]. Los fragmentos de PCR digeridos se separaron en gel de poliacrilamida, se tiñeron con bromuro de etidio y se observaron con el sistema de formación de imágenes ultravioleta (Bio-Rad modelo). La genotipificación se realizó sin el conocimiento de la causa o de control de estado. Una muestra de 10% enmascarado, aleatoria de casos y controles se probaron dos veces por diferentes personal de laboratorio y la reproducibilidad fue del 100%.
Análisis estadístico
La estadística descriptiva se presentan como media y desviación estándar [DE ] para las medidas continuas mientras que el valor absoluto y porcentajes se utilizaron para medidas categóricas. La bondad de chi-cuadrado de prueba de ajuste se utiliza para cualquier desviación de Hardy Weinberg en los controles. Las diferencias en las frecuencias alélicas y genotípicas entre los grupos de estudio se estimaron mediante la prueba de chi-cuadrado. LR multifactorial incondicionada se utilizó para estimar las odds ratio [OR] y sus intervalos de confianza del 95% [IC] de ajustar por edad y sexo. Las RUP se ajustaron por factores de confusión tales como la edad y el género. Un valor de p de dos colas de menos de 0,05 se considera un resultado estadístico significativo. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software SPSS versión 16.0 (SPSS, Chicago, IL, EE.UU.). El análisis del haplotipo se realizó utilizando SNPstatwww.snpstats.in [60].
Múltiples factores de reducción de dimensionalidad (MDR) es el método no paramétrico, método libre de modelo genético para superar algunas de las limitaciones de regresión logística (es decir, tamaño de la muestra limitaciones) para la detección y caracterización de las interacciones gen-gen [61].