Extracto
En el cáncer colorrectal esporádico (CRC), el
BRAF
V600E
mutación se asocia con la reparación de genes deficientes estado (MMR) e inversamente asociada con mutaciones de KRAS. En contraste con deficiente MMR (dMMR) CRC, los datos sobre la presencia de
KRAS
mutaciones oncogénicas en CRC dominio del MMR (GMANS) y su relación con la progresión tumoral son escasos. Por lo tanto, hemos examinado el estado de MMR en combinación con
KRAS
mutaciones en 913 pacientes chinos y correlacionado los resultados obtenidos con las características clínicas y patológicas. El estado de MMR se determinó con base en la detección de MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2 expresión.
KRAS
mutación y el estado dMMR se detectaron en el 36,9% y el 7,5% de los casos, respectivamente. Cuatro subtipos fueron determinados por MMR y
KRAS
estado de mutación:
KRAS gratis (+) /GMANS (34,0%),
KRAS gratis (+) /dMMR (2,9%) ,
KRAS gratis (-) /GMANS (58,5%) y
KRAS gratis (-) /dMMR (4,6%). Un mayor porcentaje de tumores GMANS con
KRAS mutación
eran más probabilidades de ser mujeres (49,0%), situada proximal (45,5%), una histología mucinosa (38,4%), y tener una mayor ganglio linfático metástasis (60,3 %), en comparación con los tumores GMANS sin
BRAF
V600E
y
KRAS
mutaciones (36,0%, 29,3%, 29,4% y 50,7%, respectivamente; todo
P
& lt; 0,01). Por el contrario, en comparación con aquellos con
KRAS gratis (-) /dMMR tumores, los pacientes con
KRAS gratis (+) /dMMR tumores demostraron diferencias estadísticamente significativas en cuanto al sexo, localización del tumor, profundidad pT de la invasión, metástasis en los ganglios linfáticos, la etapa pTNM, y el grado histológico. Este estudio reveló que las características específicas epidemiológicas y clínico-patológicas están asociadas con el estado de MMR estratificado por
KRAS
mutación. El conocimiento de la triple vírica y
KRAS
estado de mutación puede mejorar la clasificación patológica molecular de pacientes con CRC y la progresión metastásica en el CCR puede ser estimado basado en la combinación de estos biomarcadores
Visto:. Li W, W Zhi , Zou S, T Qiu, Ling Y, Shan L, et al. (2015) Patrones clinicopatológicas distintivas de falta de coincidencia en el estado de la reparación del cáncer colorrectal estratificado por
KRAS
mutaciones. PLoS ONE 10 (6): e0128202. doi: 10.1371 /journal.pone.0128202
Editor Académico: Hiromu Suzuki, Universidad Médica de Sapporo, Japón
Recibido: 3 Febrero 2015; Aceptado: April 24, 2015; Publicado: 4 Junio 2015
Derechos de Autor © 2015 Li et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por una beca del programa de Jóvenes Backbone (a Jianming Ying) del hospital del cáncer, CAMS, Beijing, China, el programa de Investigación básica natural de China (973 programa 2014CB542002 ), y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81401984). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer colorrectal (CCR) es una enfermedad heterogénea evolución de diversas vías genéticas y una evaluación precisa de cáncer en base a las características tumorales que permitan personalizar el tratamiento del cáncer [1,2,3]. Actualmente, la estadificación anatómica y patológica sigue siendo el factor de predicción más precisa de la evolución del paciente [4]. Por tanto, el descubrimiento y validación de los marcadores genéticos que determinan la eficacia de la progresión metastásica de CRC es un área importante de la investigación, con el valor potencial de la definición del subconjunto de pacientes con riesgo alto o más bajo de recaída. Uno de los marcadores moleculares prometedores investigados en CRC es la presencia de inestabilidad de microsatélites del tumor (MSI) [5,6,7,8].
CRC se divide generalmente en dos vías moleculares bien conocidos, incluyendo el cromosómica la inestabilidad (CIN) y la vía y la vía de la inestabilidad de microsatélites (MSI). MSI es el resultado de la deficiencia de desajuste de reparación del ADN (dMMR) [9]. Una mutación germinal en uno de los genes MMR, incluyendo
MLH1
,
MSH2
,
MSH6
o
PMS2
, es la causa de dMMR en pacientes con el síndrome de Lynch, que es un trastorno hereditario que aumenta el riesgo de desarrollar CCR [10,11]. Deficiente MMR también se observa en 10% a 20% de los pacientes con CCR esporádico, de los cuales la mayoría de los tumores dMMR son debido a la hipermetilación de
MLH1
promotor del gen, con
MSH2
y
MSH6 Accounting para un porcentaje menor [5]. tumores dMMR esporádicos, pero no el síndrome de Lynch, con frecuencia llevan la mutación V600E activación somática en el exón 15 del
BRAF oncogén
[12,13,14]. Tanto los tumores esporádicos asociados con el síndrome de Lynch y con estado dMMR tienen características clínico patológicas, como la ubicación preferencial en el colon proximal, prominente infiltrado linfocitario, diferenciación mucinosa o anillo de sello, y la asociación con un pronóstico favorable. Los datos de la pista de PETACC-3 informó que las muestras de tumor con el estado dMMR son más comunes en la enfermedad en estadio II que en la enfermedad en estadio III (22%
vs
12%,
P Hotel & lt; 0,001) y con un porcentaje de 3,5% en los tumores en estadio IV. Estos resultados indican que los tumores dMMR tienen una menor probabilidad de metástasis y sugerir un resultado más favorable [9,15].
El /ERK quinasa cascada Ras /Raf /MEK está implicado en el control de la proliferación celular, célula la supervivencia y la invasión en las células de cáncer de CRC [16].
KRAS
está mutado en el 35% -40% CRC y la mutación de la
KRAS
protooncogén es un evento temprano en el desarrollo de estos cánceres, ejerciendo una fuerte influencia en el crecimiento de pólipos colónicos y principios tipos de cáncer [17,18]. evidencia robusta sugiere el valor predictivo de
KRAS
mutación en el CCR metastásico tratados con anti-EGFR terapia dirigida [19,20]. Sin embargo, la importancia clínica de
KRAS mutación
como marcador pronóstico es controvertido. Algunos estudios informaron ninguna asociación con la supervivencia, mientras que otros sugieren que los pacientes con
KRAS
tumores mutados tienen peor pronóstico para cualquier subtipo mutación [21,22,23,24].
La asociación de MMR estado,
KRAS
y
BRAF
mutaciones en los resultados clínicos son frecuentemente documentada. Sin embargo, el desarrollo de una predicción más precisa sobre el resultado clínico utilizando combinaciones de biomarcadores sigue siendo un área digna de investigación. Por otra parte, en contraste con dMMR CRC, los datos sobre la presencia de
KRAS
mutaciones oncogénicas en CRC dominio del MMR (GMANS) y su relación con la progresión tumoral son escasos. El objetivo de este estudio fue evaluar el papel pronóstico de la condición de MMR en combinación con
KRAS
mutaciones en 913 pacientes chinos y caracterizar los subtipos específicos con respecto a las características clínico-patológicas.
Materiales y Métodos
Estudio de la población
Los pacientes con resecado, histológicamente probada CRC fueron elegibles. Los registros clinicopatológicas de 913 pacientes con materiales incluidos en parafina correspondientes disponibles para el análisis molecular se recogieron de forma retrospectiva desde el Departamento de Patología, Hospital del Cáncer, Academia China de Ciencias Médicas, Beijing, China, de 2011 a 2013. Una revisión patológica central se llevó a cabo. Los factores de estratificación incluyen: número de ganglios linfáticos regionales metastásicos (N1: 1-3
vs
N2: ≥4), el grado histológico (G1-2: bien /moderadamente diferenciado
vs
G3: mal diferenciada /indiferenciada), el diámetro del tumor, la clasificación pT, subtipo histológico, localización del tumor, el tamaño del tumor, así como la etapa de pTNM. Se utilizó el sistema pTNM puesta en escena de la 7ª edición AJCC Cancer Staging. Evaluación de la etapa M fue de acuerdo principalmente a los resultados patológicos confirmados y /o datos radiológicos. sitio del tumor proximal incluye ciego, ascendente, ángulo hepático y el colon transverso; El sitio distal incluye ángulo esplénico, descendente y colon sigmoide. diferenciación mucinosa en el tumor se definió por la presencia de grupos de grupos que contiene mucina extracelulares de las células tumorales. Cuando & gt; 50% de tumor analizado demostró diferenciación mucinosa, el tumor se clasificó como carcinoma mucinoso. El estudio fue aprobado por el Comité de Revisión del Instituto del Cáncer del Hospital de la Academia China de Ciencias Médicas. Cada participante firmó un Comité Institucional de Revisión aprobó el consentimiento informado de conformidad con las disposiciones vigentes.
KRAS
y
BRAF
V600E
análisis de mutaciones
Evaluación de
KRAS
y
BRAF V600E
estado mutacional se realizó en el Laboratorio de Patología Molecular del Departamento de Patología, hospital del cáncer, CAMS, utilizando los procedimientos de control de calidad adecuado. estado de la mutación se determinó usando ADN genómico extraído de tejido tumoral incluido en parafina y fijado en formalina macrodissected. Tanto
KRAS
(codones 12 y 13) y
BRAF
(p.V600E), ensayos de mutación se realizaron usando un ensayo multiplex alelo-específica basada en PCR (ACCB, Pekín, China), junto con la Stratagene Mx3000P (Agilent Technologies Inc, Santa Clara, CA), que evalúa siete posibles mutaciones diferentes en
KRAS
codones 12 y 13 (
Gly12Ala
,
Gly12Asp
,
Gly12Arg
,
Gly12Cys
,
Gly12Ser
,
Gly12Val
, y
Gly13Asp
). Ni
KRAS
ni
BRAF
V600E
tumores mutados fueron designados como de tipo salvaje
KRAS
subtipo.
DNA reparación de genes de expresión
expresión de proteínas de proteínas MMR (MLH1, PMS2, MSH2 y MSH6) se realizó como una práctica rutinaria en nuestro departamento patológico. Todas las muestras fueron teñidas en un sistema de tinción automática (Autostainer Enlace 48, Dako, Dinamarca). Cuatro secciones de tejido micras de espesor se desparafinaron en xileno, se rehidrataron en alcohol graduado y se lavaron en agua destilada. Listo para usar anticuerpos monoclonales de ratón primarios incluidos anticuerpos MLH1 (ES05, Dako) y el anticuerpo MSH2 (FE11, Dako). anticuerpos monoclonales de conejo primaria listos para usar incluyen anticuerpos MSH6 (EP49, Dako) y el anticuerpo PMS2 (EP51, Dako). la pérdida de proteínas MMR se definió como la ausencia de tinción nuclear en las células tumorales, pero la tinción nuclear positiva en las células epiteliales colónicas normales y linfocitos. Los tumores fueron designados como estado dMMR si se ha detectado la pérdida de al menos una proteína de triple vírica y GMANS si todas las proteínas estaban intactos.
MLH1
la metilación del promotor análisis
Todas las muestras de ADN se sometido a modificación con bisulfito usando el EZ metilación del ADN Kit (Zymo Research, CA, EE.UU.) según las instrucciones del fabricante. Una g de ADN genómico de cada muestra fue de bisulfito convertido y se eluyó en tampón de elución 18μl. PCR específica de metilación (MSP) se llevó a cabo como se describe anteriormente [25]. Los cebadores utilizados para este análisis fueron: 5'-AAT TAA TAG GAA GAG CGG ATA GC-3 'y 5'-AAC AAC CCC TAA GAC TAC TAC CCG-3' para metilado
MLH1
promotor y 5 ' -TGA ATT AAT AGG AAG AGT GGA GAT T-3 'y 5'-TCC CTC CCT AAA ACA ACT ACT CAC CA-3' para no metilado
MLH1
promotor. MSP cebador de PCR especificidad se confirmó, ya que no amplifican las plantillas de ADN genómico no bisulfito tratados, y los productos MSP de varios tumores primarios han sido confirmados por secuenciación directa con BigDye v3.1 (Applied Biosystems), lo que indica que nuestro sistema MSP es específica.
El análisis estadístico
El objetivo principal de este estudio fue identificar las características clínico patológicas asociadas con el estado de MMR y
KRAS
mutación. Modelos de regresión logística se utilizaron para detectar las asociaciones de estas características con cada uno de los
KRAS mutaciones
y el estado de MMR. Kruskal-Wallis y χ
2 (o exacta de Fisher) pruebas se utilizaron para comparar las variables continuas y categóricas, respectivamente. modelos de regresión logística univariado fueron utilizados para categorizar y definir mejor las covariables finales utilizados para el análisis multivariable. Las pruebas estadísticas fueron de dos caras, y
valores de P de 0,05 se consideraron significativos. Para comparaciones múltiples, Bonferroni ajustado o por
fueron reportados valores de P
de las diferencias entre
KRAS
mutación y el estado de MMR (α = 0,05 /6). características estadísticamente significativas basadas en modelos univariantes A continuación, se incluyen en los modelos multivariables para cada parque y hacia atrás procedimientos de selección de modelos. Se calcularon los odds ratios y los intervalos de confianza del 95%. Las estadísticas se llevaron a cabo utilizando el software SPSS (versión 16.0 de SPSS, Chicago, IL, EE.UU.).
Resultados
Un total de 913 de los casos se evaluaron por inmunohistoquímica (IHC) para detectar la presencia o ausencia de MLH1, MSH2, MSH6 y expresión de proteínas PMS2. De los 69 casos (69/913, 7,5%) con dMMR, 49 tenían una ausencia de expresión de la proteína de MLH1 /PMS2, 9 para MSH2 /MSH6, 5 para MSH6 y 6 para PMS2 solo. Con el fin de CRC relacionados con el síndrome de Lynch distinto de los cánceres esporádicos MSI, se realizó el
MLH1
estudio de la metilación del promotor. Entre 49 casos con ausencia de expresión de la proteína de MLH1 /PMS2, el 32,6% (16/49) de los casos tenían
MLH1
la metilación del promotor. De ellos,
KRAS
mutaciones en
MLH1
MSI tumores esporádicos metilados eran 25% (4/16) y la frecuencia de mutación fue mucho menor que la de las mutaciones en general, el 36,9% (337/913 ) (figura 1).
las características del paciente y del tumor con respecto a la situación de MMR se muestran en la Tabla 1. la edad media de presentación para los tumores dMMR fue de 53,3 ± 12,7 años, lo que era más joven que la GMANS de tumores (
P
= 0,003). En general, los tumores con mayor frecuencia dMMR se encuentran en la parte proximal del colon (72,4%
vs
18,9%,
P Hotel & lt; 0,0001) y tenían más probabilidades de ser pobremente diferenciado (34,8 %
vs
18,0%,
P Hotel & lt; 0,001), en comparación con los tumores GMANS. Además, los tumores con dMMR también se asoció significativamente con el subtipo histológico mucinoso (63,8%
vs
32,7%,
P Hotel & lt; 0,0001) y la reducción de la metástasis de los ganglios linfáticos (39,1%
vs
54,6%,
P
= 0,01). No hubo diferencias estadísticamente significativas en el género y el estadio pT.
Las mutaciones en
KRAS
y
BRAF
V600E
eran mutuamente exclusivo. Hubo 6 casos con tumores que albergaban dMMR
BRAF
V600E
mutaciones y estos casos fueron excluidos del análisis.
se observaron KRAS
mutaciones en los codones 12 y 13 en 36,9% (337/913) de todos los tumores. Una mayor frecuencia de
se detectaron mutaciones de KRAS
en tumores dMMR (27/69, 39,1%) en comparación con los tumores GMANS (310/844, 36,7%), aunque esta diferencia no alcanzó significación estadística. De los 27 dMMR y
KRAS
tumores -mutated, 16 casos fueron definidos con la pérdida de MLH1 /PMS2, 7 con MSH2 /MSH6 y 4 con PMS2 sola
características
paciente y del tumor con respecto. tanto a la 2. de los 913 casos en los casos
KRAS
estado de la mutación se resumen en la tabla tanto la triple vírica y
se define KRAS
estado de mutación, 27 (2,9%) y con MMR fueron dMMR
KRAS gratis (+) y 42 (4,6%) eran
KRAS gratis (-), mientras que 310 (34,0%) casos con GMANS fueron
KRAS gratis (+) y 534 (58,5%) fueron
KRAS gratis (-). Entre estos cuatro grupos, se observaron diferencias significativas para el género {
KRAS gratis (+) /dMMR casos más probabilidades de ser varón,
P Hotel & lt; 0,0001}, {edad
KRAS gratis (+) /dMMR más propensos a tener una edad más temprana en el diagnóstico de la enfermedad,
P = 0,0001
}, {grado
KRAS gratis ( -) /dMMR más probabilidades de tener la enfermedad menor grado,
P = 0,002
}, {localización del tumor
KRAS gratis (+) y
KRAS
(-) casos /dMMR más probable que se encuentra en el colon proximal,
P
& lt; 0,0001} y metástasis en ganglios linfáticos {
KRAS gratis (+) /GMANS casos más probables a tener una mayor etapa de pN,
P = 0,004
}. Sin embargo, no se observaron diferencias en el estadio pT entre estos cuatro grupos
Cuando se compara con aquellos con
KRAS
. (-) /GMANS tumores, los pacientes con
KRAS
(+) /GMANS tumores eran más probabilidades de ser mujeres (49,0%
vs
36,0%; OR = 1,85; IC del 95% = 1.39 a 2.46;
P Hotel & lt; 0,0001) , para ser ubicada proximal (45,5%
vs
29,3%; OR = 2,00; IC del 95% = 1.30 a 3.8;
P
= 0,002), tener una histología mucinosa (38,4%
vs
29,4%; OR = 1,50; IC del 95% = 01.11 a 02.01;
P
= 0,007), y haber aumentado la metástasis de ganglios linfáticos (60,3%
vs 50,7
%; OR = 1,48; IC del 95% = 1,11 a la 1,96;
P
= 0,007) (Tabla 3). Por el contrario, en comparación con aquellos con
KRAS gratis (-) /dMMR tumores, los pacientes con
KRAS gratis (+) /dMMR tumores demostraron diferencias estadísticamente significativas en cuanto al sexo, localización del tumor, profundidad pT de la invasión, metástasis en los ganglios linfáticos, la etapa pTNM, y el grado histológico. Sin embargo, la edad media de presentación de
KRAS gratis (+) /tumores dMMR fue 51.051.051.0 presentación de s, n, que el de
KRAS gratis (-) /dMMR tumores (
P
= 0,001).
en el análisis utilizando modelos de regresión logística multivariable, se revisaron las características clínico-patológicas de la Tabla 4. Como se muestra multivariably, los tumores con
KRAS gratis (+ ) /GMANS fueron estadísticamente asociado con la localización proximal, histología mucinosa y el aumento de metástasis en los ganglios linfáticos.
Discusión
la definición de los subtipos de tumores de CCR en base a las alteraciones de la vía ha impulsado el potencial de mejorar el pronóstico y la guía de la terapia dirigida. siempre se han identificado las características clínicas y patológicas distintas de CRC con diferente estado MMR [6,26,27,28]. En este estudio, hemos demostrado características moleculares y clínico-patológicas de los tumores GMANS y dMMR estratificados por
KRAS
estado de la mutación en una gran cohorte de pacientes con CRC chinos consecutivos. tumores MMR Competente que fueron mutados por
KRAS
y
BRAF
V600E
fueron el subtipo más frecuente y representa el 58,5% (534/913) de nuestra cohorte de estudio . En comparación con este subtipo, los pacientes con
KRAS gratis (+) /GMANS tumores eran más comunes en el colon proximal y tener una histología mucinosa. Lo más importante, los pacientes con
KRAS gratis (+) /GMANS tumores mostraron un aumento de la metástasis de los ganglios linfáticos entre los cuatro subtipos y puede tener peor tasa de supervivencia.
De acuerdo con los hallazgos anteriores, nuestros datos sugieren que los tumores con la condición de dMMR a menudo exhiben una pobre diferenciación, tipo de célula mucinoso, la localización proximal y la reducción de metástasis en los ganglios linfáticos. Además de su papel en la identificación de características patológicas únicas de CRC, el estado dMMR también se ha utilizado como marcador pronóstico y la guía para la quimioterapia adyuvante basada en fluorouracilo [8]. La evidencia reciente indica que el CRC se podría clasifica en cinco subtipos predefinidos utilizando una combinación de biomarcadores de
KRAS
y
BRAF
V600E mutaciones
, estado MMR y
MLH1
metilación con diferencias estadísticamente significativas en las características clínico-patológicas y las tasas de supervivencia de los pacientes [29]. Por lo tanto, un clasificador basado en biomarcadores proporciona información pronóstica importante en CRC con implicaciones para el manejo del paciente. La evidencia de otros informes apoya la idea de que
KRAS
mutación y el estado de MMR son marcadores genéticos que surgen temprano y permanecen biológicamente relevante en todas las etapas de la progresión tumoral [30,31]. Además,
KRAS
mutaciones encontradas en los tumores primarios se conservan en las recidivas y metástasis. En consecuencia, se evaluaron los subtipos de tumores pre-especificados con respecto a las características clínico-patológicas en las combinaciones de biomarcadores de
KRAS mutaciones
y el estado de MMR.
cánceres deficientes de MMR por lo general se originan en el colon proximal [15]. Como era de esperar, la gran mayoría de los tumores dMMR en este estudio (72,4%) estaban en el colon proximal y esta distribución no fue influenciado por
KRAS
mutaciones. Aunque la mayoría de los tumores no eran GMANS probable que se encuentra proximal, es interesante observar que cuando los tumores GMANS estratificados por
KRAS mutaciones
,
KRAS
mutante tumores (20,9% proximales) eran más propensos a ser proximal en comparación con
KRAS gratis (-) /GMANS tumores (14,7%) proximales. Tradicionalmente, los cánceres de colon se desarrollan en el intestino proximal a menudo crean un entorno en el que es más probable que surjan CIMP (isla CpG methylator fenotipo), y esta sinergia con
BRAF
mutación para permitir la progresión de pólipos serrados [32]. Sin embargo, la evidencia reciente sugiere que
KRAS
mutaciones podrían también ser encontrados en tumores de bajo CIMP alto y CIMP que a menudo se encuentran en el colon proximal [33]. Esto indicó que existían mecanismos más amplios que subyacen a la ubicación de cáncer de colon y los perfiles mutacionales. carcinoma mucinoso se diagnostica cuando al menos 50% del tumor comprende mucina secretoras y, a menudo está asociada con el estado de dMMR y adenocarcinoma dentada [34]. Esto es coherente con nuestra conclusión de que los tumores dMMR demostraron mayor diferenciación mucinosa que los tumores GMANS (63,8%
vs
32,7%). Sin embargo, cuando se estratificó por
KRAS
estado de la mutación, se observó que los tumores con GMANS mutante
KRAS
fenotipo exhibieron mayor diferenciación mucinosa que el tipo salvaje
KRAS
subtipo (38,4%
vs
29,4%). Esto es en gran parte debido a
KRAS mutación se
no sólo vinculada a los adenomas convencionales, pero también se asocia con adenomas serrados en el desarrollo del cáncer colorrectal [35].
Se encontró una asociación significativa entre la presencia de metástasis en los ganglios linfáticos y los tumores GMANS estratificados por
KRAS
estado de la mutación. Nuestros resultados revelaron que los tumores con GMANS
KRAS
mutación demostraron ganglios linfáticos positivos y pTNM estadio III-IV de la enfermedad que los tumores con
KRAS gratis (-) /estado GMANS. Esto es consistente con los hallazgos de un informe más pequeña, lo que demuestra que la frecuencia de
KRAS mutaciones
fue mayor en GMANS tumores de los ganglios linfáticos positivos, en comparación con los ganglios linfáticos GMANS tumores negativos [36,37]. Nuestros resultados indican que la mayoría de los tumores GMANS necesarios
KRAS
mutación para ser capaz de hacer metástasis y esta activación era crucial para las células neoplásicas para adquirir potencial invasivo. Las mutaciones en
KRAS
plomo oncogén a alteraciones en los aminoácidos codificados adyacentes al bolsillo de unión GTP y la reducción de la actividad GTPasa de
KRAS
proteína después del nucleótido guanina activación de la proteína (GAP) de unión [38]. Tanto
in vitro
y
in vivo
modelos experimentales, la transfección de las formas mutadas, constitutivamente activas de
KRAS
oncogen en células no cancerosas anteriormente pueden dar lugar a fenotipos invasivos y metastásicos. La expresión ectópica de activo
KRAS
en la línea celular de fibroblastos NIH 3T3 murino resultó en aumento de la invasión y la adquisición de propiedades metastásicas [39]. El uso de la inyección en la vena caudal de las células transformadas,
in vivo y modelos fueron observados por el hígado y metástasis de pulmón [40]. Además de la evidencia obtenida a partir de experimentos celulares y animales, los estudios clínicos también han mostrado significativa metástasis en ganglios linfáticos en
KRAS gratis (+) /tumores GMANS [36,41]. perfiles de expresión génica revela que los genes involoving transición epitelio mesénquima y la remodelación de la matriz que puede facilitar la invasión tumoral y la metástasis están regulados en
KRAS
-pMMR tumores mutantes [42]. En consecuencia,
KRAS
activación oncogénica ha demostrado ser un importante mediador de la invasión de células tumorales y la metástasis de tumores GMANS.
La frecuencia de
KRAS
mutaciones en el síndrome de Lynch relacionada CRC y esporádica CRC es casi la misma. Sin embargo,
KRAS
mutaciones son significativamente más frecuentes en el síndrome de Lynch CRC relacionados de lo que, en esporádicos MSI-H CRC [37,43]. síndrome de Lynch-relacionados CRC tienden a ser de aparición temprana y localización proximal. Así que esto puede explicar la menor edad y la localización proximal observada en
tumores KRAS
+ /MSI. A pesar de estos resultados positivos, nuestro estudio tiene algunas limitaciones. En primer lugar, porque se trata de un estudio de forma retrospectiva, es difícil de recoger la muestra de sangre o saliva de los pacientes para detectar mutaciones de la línea germinal para distinguir aún más la relacionada con el síndrome de Lynch CRC de cáncer esporádico. Así que no pudimos calcular la frecuencia precisa de
KRAS
mutaciones hereditarias en los CRC, sin embargo, es asegurarse de que el síndrome de Lynch-relacionados CRC en nuestro estudio mostró preferentemente
KRAS
mutaciones. En segundo lugar, no examinamos otras mutaciones menos frecuentes en
KRAS
codones 61, 117 y 146, lo que también contribuyó a la transformación oncogénica de las células tumorales.
Este estudio sugiere que epidemiológico y clínico patológica específica características se asocian con el estado de MMR estratificado por
KRAS
mutación en el CCR. El conocimiento de la triple vírica y
KRAS
estado de mutación puede mejorar la clasificación patológica molecular de pacientes con CRC y la progresión metastásica también puede ser estimado basado en la combinación de estos biomarcadores. La validación de biomarcadores genéticos adicionales permitirá perfilar las decisiones de gestión para los pacientes individuales basados en la biología del tumor. Es importante destacar que esto también puede ayudar al desarrollo de nuevas dianas terapéuticas para ayudar al tratamiento de estos cánceres agresivos.
Reconocimientos
Agradecemos a todos los participantes en el estudio del Departamento de Patología por su contribución a este proyecto. Este trabajo fue apoyado por una beca del Programa de Backbone Juvenil (a Jianming Ying) del Hospital del Cáncer, CAMS, Beijing, China, el Programa Natural de Investigación Básica de China (973 programa 2014CB542002) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81401984).