Extracto
Objetivo
Los microARN (miARN) expresión está alterada en las células cancerosas, y miRNAs podría servir como biomarcador diagnóstico y pronóstico de los pacientes con cáncer. Este estudio fue diseñado para analizar la expresión de miRNAs que circula por el derrame pleural maligno (MPE) y su asociación con la supervivencia del paciente en el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC).
Métodos
Derrame pleural de se recogieron 184 pacientes con NSCLC y el MPE. Mirna microarrays y la bioinformática interpretación se utilizaron para evaluar los perfiles de expresión de los genes miARN en 10 pacientes con CPNM con diferente pronóstico de supervivencia. Las asociaciones fueron validados en 184 pacientes (clasificados al azar en la formación y el conjunto de validación con igual número en cada grupo) mediante RT-PCR cuantitativa. Los puntajes de riesgo se formularon en base a la firma la expresión de miRNAs. Los datos clínicos, como la supervivencia de los pacientes, se recogieron para el análisis de correlación.
Resultados
Se encontraron treinta y tres miRNAs que alterarse más de dos veces por microarrays en los derrames malignos entre la supervivencia a largo y los grupos de supervivencia más corta, y los niveles de cinco miRNAs (miARN-93, miRNA-100, miRNA-134, miRNA-151 y miRNA-345) se asociaron significativamente con la supervivencia global. Alta expresión de miR-100 y baja expresión de los genes miARN-93, miRNA-134, miRNA-151 y miRNA-345 se asocia a peor supervivencia tanto en la formación y la cohorte de validación. Los pacientes con puntuaciones de alto riesgo tuvieron una supervivencia global pobre en comparación con los pacientes con puntuaciones de bajo riesgo. puntuación de riesgo es un factor pronóstico independiente de la supervivencia del paciente.
Conclusiones
Los patrones de expresión de miRNAs se alteran sistemáticamente en MPE de pacientes con NSCLC. Los cinco miARN firma del derrame puede servir como un predictor de la supervivencia global de los pacientes con cáncer de pulmón
Visto:. Wang T, Lv M, Shen S, S Zhou, Wang P, Chen Y, et al . (2012) Perfiles de expresión de microARN-Free Cell en maligno Derrame asociados con la supervivencia del paciente en células no pequeñas de cáncer de pulmón. PLoS ONE 7 (8): e43268. doi: 10.1371 /journal.pone.0043268
Editor: Sai Yendamuri, Roswell Park Cancer Institute, Estados Unidos de América
Recibido: 18 de mayo de 2012; Aceptado: 18 Julio 2012; Publicado: 24 Agosto 2012
Copyright: © Wang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81101552), la Fundación de Ciencias Naturales de la provincia de Jiangsu (BK2011571), Fondo de Investigación Especializada para el Programa de Doctorado de Educación Superior (20100091120002), y los Fondos de Investigación Fundamental para las Universidades central (1118021418 y 1118021406). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
cáncer no microcítico de pulmón no microcítico (CPNM) es una de las causas más importantes de muerte por cáncer en todo el mundo. El quince por ciento de los pacientes de cáncer de pulmón puede tener derrame pleural maligno (MPE) en el momento del diagnóstico inicial y media desarrollar derrame pleural en una etapa posterior de la enfermedad [1]. MPE es un signo de mal pronóstico para los pacientes con NSCLC. La diseminación del tumor a través de la supervivencia y la proliferación de las células tumorales en el derrame pleural es una vía importante de metástasis y una causa frecuente de morbilidad en el CPNM. A pesar de los avances en las modalidades de tratamiento, la supervivencia media es muy corta. El tratamiento estándar actual parece ser evacuación segura máxima del fluido pleural seguida de quimioterapia intravenosa o quimioterapia intrapleural [2] .Sin embargo, se encontró que no todos los pacientes se beneficiaron de la adición de la quimioterapia, especialmente en pacientes con tiempo de supervivencia global corta . Por lo tanto, la evaluación de pronóstico de la paciente es esencial para la elección de los mejores estrategias terapéuticas. Hsu et al. demostraron que los niveles de expresión de biomarcador angiogenetic se correlacionaron significativamente con la supervivencia del paciente y el control de derrame pleural [3]. Además, estudios recientes de perfiles moleculares y genéticas podrían identificar varios marcadores y firmas únicas como factores de diagnóstico y pronóstico de NSCLC. Estos hallazgos abren posibilidades para el diagnóstico de cáncer no invasivo y la predicción. Algunos de los hallazgos están a punto de ser traducido en el uso clínico.
Los microARN (miRNA) son de 18 a 25 nucleótidos, moléculas de ARN no codificantes que regulan la expresión de muchos genes. Desde su descubrimiento, miRNAs se ha encontrado que regulan una variedad de procesos celulares, incluyendo la apoptosis, la diferenciación y la proliferación celular [4], [5]. expresiones anormales de miRNAs específicos están implicados en la patogénesis de diversos cánceres humanos, y la expresión de los genes miARN perfiles de tumores humanos ha identificado firmas asociadas con el diagnóstico, la estadificación, la progresión, el pronóstico y respuesta al tratamiento. El potencial pronóstico de miARN se ha demostrado para la leucemia linfocítica crónica [6], el cáncer de pulmón [7], [8], el cáncer de mama [9], y los neuroblastomas [10]. En el cáncer de pulmón, los altos niveles de pre-miR-155 y bajos niveles de se informó de let-7 que se correlaciona con mal pronóstico [11], mientras que miR-34a podría ser utilizado como marcador pronóstico de la recaída en el CPNM resecado quirúrgicamente [12 ]. Recientemente, varios informes sugieren que los miRNAs circulantes libres de células son detectables en el suero /plasma y los niveles de miRNAs derivados del tumor elevados en los pacientes con cáncer de pulmón [13], [14], lo que sugiere que los miRNAs basados en la sangre podrían surgir como fuentes revolucionarias de biomarcador para el diagnóstico del cáncer de pulmón y el pronóstico. Sin embargo, una firma de miRNA en el error máximo permitido que puede predecir el resultado clínico en pacientes con CPNM no se ha encontrado hasta el momento.
En nuestros estudios anteriores, hemos aislado con éxito ácido nucleico libre de células en los derrames malignos y ha demostrado que las células exento de BIRC5 mRNA podría ser utilizado como un biomarcador de diagnóstico potente para MPE [15]. También se encontró que el miR-24 y miR-30d se expresan de forma diferente en los derrames benignos y malignos, mientras que el de células libres de miR-152 puede ser usado para predecir la quimiosensibilidad al docetaxel [16], [17]. Dado el potencial pronóstico de miRNAs en el cáncer, el objetivo de este estudio fue determinar si los genes miARN libres de células de efusión pleural podrían ser utilizados para predecir el tiempo de supervivencia de los pacientes con derrame pleural maligno secundario a NSCLC.
Resultados
Detección de miRNAs de efusión y la bioinformática interpretación de miRNAs funcional
Todos los pacientes fueron seguidos hasta el 16 de septiembre de, 2011 o en la fecha de la muerte. Los 184 pacientes sobrevivieron durante una mediana de 6 meses (rango: 1-33 meses). La proporción acumulada global de los pacientes que sobreviven a los 3 meses fue de 0,70, a los 6 meses fue de 0,45, y a los 12 meses fue de 0,11.
Para detectar diferentes miRNAs entre grupo y grupo de supervivencia más larga-corta supervivencia, fue desarrollado microarrays en 10 pacientes. Como se muestra en la Tabla 1, 5 pacientes en el grupo de mayor supervivencia y 5 pacientes en el grupo de menor supervivencia fueron emparejados exactamente en las frecuencias del tipo histológico y el estadio, mientras que la edad, el tabaquismo, y el género no fueron significativamente diferentes entre los dos grupos. Se detectaron 113 miRNAs en estos 10 pacientes por miARN microarrays (Archivo S1). Utilizando el análisis de comparación de clases, se identificaron 33 miRNAs independientes que se expresó diferencialmente en dos grupos con los cambios veces & gt; 2 (Tabla S1). Un volcán parcela proporcionó más información acerca de la importancia y la magnitud de la alteración expresiva de estos miRNAs seleccionados (Figura S1), que era útil para juzgar a los candidatos más importantes para los estudios de seguimiento.
Anotación de genes
David se utilizó para interpretar el efecto biológico de miRNAs filtrados por volcán parcela. De acuerdo con los resultados de la minería de datos, 31 GO fueron clasificados sobre la base de estos miARN objetivos (Figura S2A). Otro análisis funcional de miRNAs por KEGG reveló que 9 vías de transducción de señales, se mostró a participar en el diferente tiempo de supervivencia de pacientes con cáncer de pulmón (Figura S2B). Estos resultados representan novela evidencia del efecto de regulación de miRNAs en el cáncer de pulmón a través de los genes diana y vía de señalización. Además, la red de miARN-mRNA análisis de miRNAs y ARNm integrado por descripción de las interacciones de los genes miARN y determinados genes (Figura S3). Tomadas estas interpretaciones de la bioinformática miRNAs funcionales juntos, 5 miRNAs (miARN-93, miRNA-100, miRNA-134, miRNA-151 y miRNA-345) fueron seleccionados para su posterior análisis.
Asociación entre la expresión de miRNAs en el derrame y la supervivencia del paciente
a continuación, estudiamos los efectos predictivos de estos cinco miRNAs en la supervivencia del cáncer de pulmón entre los 184 pacientes, agrupados al azar en una cohorte de entrenamiento (n = 92) y una cohorte de validación (n = 92). Las características de estos pacientes con CPNM se muestran en la Tabla 1. En la cohorte de formación, alta efusión niveles de expresión de miR-100 (mediana, 0,02) y bajos niveles de expresión de miR-134 (mediana, 0,50), el miR-345 (mediana , 0.09) miR-151 (mediana, 0,05), y miR-93 (mediana, 0,03) se relacionaron de forma individual con MSTs más bajos (7,1 meses frente a 4,3 meses de miR-134, 7,1 meses frente a 3,9 meses de miR-151, 8,2 meses frente a 2,9 meses para el miR-345, 9,2 meses frente a 5,5 meses de miR-93, y 8,0 meses frente a 5,2 meses para el miR-100, Tabla 2 y la Figura 1a). Cuando estos valores umbrales se aplicaron al conjunto de validación, se observaron comparables de log-rank
P
valores y los CRI (Tabla 2 y Figura 1B).
A) 92 pacientes en el conjunto de datos de entrenamiento . B) 92 pacientes en el conjunto de datos de validación. C) la puntuación de riesgo y la supervivencia global en el conjunto de datos de entrenamiento D) la puntuación de riesgo y la supervivencia global en el conjunto de datos de validación.
El análisis de regresión de riesgos proporcionales de Cox para todas las 184 muestras mostraron que los niveles de expresión de los cinco miRNAs se asociaron significativamente con la muerte por cáncer (
P = 0,004
de miR-134,
P = 0,01 para
miR-151,
P = 0,008
para MIR -345,
P = 0,03 para
miR-93, y
P = 0,02
de miR-100, Tabla 3). Había cuatro miRNAs que eran de protección y un miARN que era un riesgo basados en la correlación de sus expresiones y la asociación con la supervivencia del paciente.
Naturaleza de 5 miARN expresión firma
Estos 5 miRNAs eran luego se usa para crear una firma mediante el cálculo de un índice de riesgo para cada paciente. De acuerdo con las puntuaciones de riesgo, los pacientes en la cohorte de formación se dividieron en grupos de alto y bajo riesgo mediante el uso de la mediana de la puntuación de riesgo como punto de corte. Los pacientes pertenecientes al grupo de alto riesgo tenían una mediana de supervivencia más corta que los pacientes con puntuación de riesgo bajo (9,4 meses frente a 4,0 meses,
P
= 0,003). El mismo punto de fórmula riesgo-score y de corte obtenida de la cohorte de formación se aplicaron a los 92 pacientes en la cohorte de validación. Al igual que en los resultados del conjunto de entrenamiento, la supervivencia fue mayor en el grupo de bajo riesgo que en el grupo de alto riesgo a lo largo del seguimiento (Tabla 4, Figura 1C).
Derrame miARN firma la expresión es independiente de la condición de fumador
con el fin de determinar si la puntuación de riesgo basada 5 miARN expresión firma es un predictor independiente de la supervivencia del paciente con cáncer de pulmón, se realizó un análisis de regresión de Cox. Como se muestra en la Tabla 5, el tabaquismo, la edad y la puntuación de riesgo fueron estadísticamente significativos factores de supervivencia utilizando un modelo de regresión de Cox univariante. Sin embargo, cuando se aplicó un modelo de regresión multivariante de Cox, puntuación de riesgo (
P
= 0,01) y el tabaquismo (
P
= 0,04) fueron predictores independientes de supervivencia de los pacientes (Tabla 5).
Discusión
el uso de un enfoque de la muestra de división, una firma la expresión de los genes miARN 5 que pueden predecir la supervivencia tanto en conjuntos de entrenamiento y validación fue identificado en este estudio. Más importante aún, el patrón de expresión de los genes miARN 5 fue un marcador pronóstico independiente de mal tiempo de supervivencia en el análisis multivariante. Para nuestro conocimiento, este es el primer informe de una firma miARN expresión en los derrames pleurales malignos que pudieran predecir la supervivencia de pacientes con CPNM.
Se utilizó genes miARN microarray para detectar de manera diferente expresado miRNAs. En comparación con el grupo-supervivencia más corta, 21 miRNAs fueron reguladas y 12 miRNAs se redujeron regulado en el grupo-supervivencia más larga. La mayoría de los estudios previos seleccionado miRNAs en base a los
P
valores y plegar cambios. En este sentido, además, utilizamos la bioinformática interpretación de miRNAs funcionales para seleccionar miRNAs. GO plazo y KEGG anotación vía se aplicaron a la piscina del gen diana. Como resultado, KEGG anotación mostró que importante proliferativa (MAPK y Wnt), la supervivencia (TGF-beta y mTOR), adhesivo, vías de señalización oncogénicas y metabólicas eran abundantes entre los enriquecidos significativamente queridos. La mayoría de ellos ya se han notificado a participar en la promoción del cáncer de pulmón. El Gos relacionado con la transducción de señales, el crecimiento celular, la apoptosis y el metabolismo representaron la mayor parte de los términos de GO enriquecido significativamente, lo cual era, de acuerdo con el análisis KEGG. Esta identidad funcional confirmó un cambio sistemático en miRNAs y sus genes diana durante la formación de tumores y promoción. El análisis de las redes de interacción de los genes miARN-mRNA, integrar aún más el hallazgo de la bioinformática, y luego destacó los principales objetivos de miRNAs. El centro de la red se representa por grado, lo que significa que la contribución de un miARN a los genes de todo. Se seleccionaron miRNAs con grados más altos para su posterior análisis. Por lo tanto, la bioinformática interpretación puede ayudarnos a recoger miRNAs con funciones importantes durante la progresión del cáncer de pulmón
.
La firma de cinco miARN identificado en este estudio incluyó un miARN (miRNA-100) que era arriesgado y cuatro miRNAs (miARN-93 , miRNA-134, miRNA-151 y los genes miARN-345) que eran de protección con respecto a su asociación entre su expresión y la supervivencia del paciente. La naturaleza protectora y arriesgado de estos miRNAs es sugerente de sus funciones son ya sea inhibidora o promotora de diversas propiedades de las células cancerosas tales como la proliferación, la migración y la invasión. El aumento de miR-100 se ha encontrado en el carcinoma de ovario [18], carcinoma hepatocelular y carcinoma esofágico de células escamosas [19], [20]. En buena correlación con nuestros datos, el miR-100 expresión se asocia con la progresión y pronóstico en el cáncer gástrico [21]. Zheng et al. demostró que miR-100 regula la diferenciación celular y la supervivencia por la orientación RBSP3, un supresor de tumor con fosfatasa como en la leucemia mieloide aguda [22]. Entre los cuatro miRNAs de protección, sólo el miR-134 se informó a aumentar la supervivencia celular mediante la inducción de la detención de G1 en células de cáncer de pulmón [23]. Nuestros resultados muestran que todas estas cuatro miRNAs fueron hasta reguladas en los pacientes con mayor tiempo de supervivencia. Las expresiones de estos miRNAs se correlacionaron positivamente con la supervivencia del paciente. La infiltración del derrame por lumophcytes puede dar lugar a una respuesta inmune del tumor. Por lo tanto, se especula que los miRNAs asociados con una mejor supervivencia pueden indicar una respuesta inflamatoria, que necesita ser probado.
En este estudio, se detectaron perfiles de miARN libres de células en los derrames pleurales, por primera vez, que tiene un montón de ventajas. Para los pacientes con CPNM con MPE, los objetivos del tratamiento son controlar el volumen del derrame pleural y prolongar la supervivencia. Por lo tanto, toracoscópicamente evacuación de derrame es una rutina en la clínica. Recolección de la muestra derrame no aumentó carga para los pacientes. Además, los pacientes con cáncer de pulmón y los derrames malignos no pueden recibir tratamiento quirúrgico. muestra de derrame es más fácil de obtener que la muestra de tejido. Por otra parte, los miRNAs como biomarcadores para el pronóstico y en el entorno clínico tienen importantes ventajas en contraste con los ARNm. A diferencia de los ARNm, los miRNAs en los derrames siguen siendo en gran parte intacta y estable. Un número modesto de miRNAs puede ser suficiente para predecir la supervivencia del paciente. Se ha demostrado que la clasificación de varios tipos de cáncer basados en miARN firmas de expresión es más precisa que con base ARNm firmas [24]
.
A pesar de que se justifican más estudios prospectivos con un gran número de pacientes para confirmar el papel de los genes miARN como la firma un factor pronóstico, los presentes resultados pueden tener implicaciones clínicas importantes, ya que no existe ningún marcador de pronóstico establecidos, excepto el estado funcional pre-tratamiento para los pacientes con CPNM con MPE [25]. Los cinco miARN firma, identificados en este estudio, clasifica a los pacientes con éxito en grupos de bajo riesgo y de alto riesgo en ambos conjuntos de entrenamiento y validación. Esto puede ayudar a los médicos a identificar a los pacientes que pertenecen a un alto riesgo para la terapia adyuvante más eficaz, además de el protocolo de tratamiento estándar. Nuestro hallazgo de que cinco miRNA firma puede predecir la supervivencia del paciente también susceptibles de generar dianas moleculares potenciales para el desarrollo de la terapia contra el cáncer. Desde miRNAs pueden dirigirse a múltiples genes, se necesitan estudios más exhaustivos para comprender el mecanismo de regulación de estos miRNAs que es probable que resulte en una mejor comprensión sobre la metástasis pleural de NSCLC.
En conclusión, hemos identificado una firma de cinco miARN que pueden predecir la supervivencia del paciente en NSCLC avanzado. Efusiones con alta expresión de miR-100 y baja expresión de los genes miARN-93, miRNA-134, miRNA-151 y miRNA-345 se asociaron con un peor pronóstico de supervivencia. Estos hallazgos pueden tener implicaciones en el entendimiento de CPNM avanzado, el desarrollo de la terapia dirigida y selección de los pacientes de cáncer para la terapia adyuvante.
Métodos
Todas las investigaciones con seres humanos han sido aprobados por el "Tambor hospital de la torre comité de ética "y el consentimiento informado por escrito de todos los sujetos.
recogida de muestras y de aislamiento de ARN
muestras de efusión de 184 pacientes consecutivos con diagnóstico histológico de cáncer de pulmón fueron recogidos durante el período de marzo de 2006 de diciembre de 2010 a Torre del tambor y el hospital de Nanjing en el pecho. Ninguno de los pacientes recibió cavidad de administración de medicamento antes de la recogida de muestras. 5 ml derrame para la extracción de ARN se recogió en un tubo que contiene ácido cítrico libre de RNasa de cada paciente. El sobrenadante se obtuvo por centrifugación a 4000 g durante 20 min. 800 l sobrenadante se mezcló con 2,4 ml de reactivo TRIzol LS (Invitrogen, CA, EE.UU.). Otro 30 fmol ath-miR159a se complementó en cada tubo de muestra. A continuación, el total de ARN que contiene pequeños ARN fue extraído de derrames utilizando miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Alemania) de acuerdo con el protocolo del fabricante.
microarrays y la bioinformática interpretación de miRNAs funcional
Mirna era microarrays desarrollado en 10 muestras (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.). Tras el análisis significativo y análisis FDR, se seleccionaron los genes expresados diferencialmente de acuerdo con el p
-valor umbral y doblar los cambios [26]. Se aplicó análisis de GO para analizar la función principal de los genes de expresión diferencial de acuerdo con la ontología de genes, que es la clasificación funcional clave del NCBI [27]. Del mismo modo, se utilizó el análisis Pathway para averiguar la vía significativa de los genes diferenciales según KEGG, Biocarta y Reatome [28]. La relación de los genes miARN y los genes fueron contados por sus valores de expresión diferencial, y miARN -Gene de la red fue construida de acuerdo a las interacciones de los genes miARN y los genes miARN Sanger en la base de datos [29]. El centro de la red se representa por grado, lo que significa que la contribución de un microARN que los genes de todo. Los miRNAs con 5 grados más altos fueron elegidos para el estudio adicional.
RT-PCR cuantitativa
miRNAs se transcrito de forma inversa en ADNc con transcriptasa inversa AMV (Takara, Japón) revertir. El ARN total (1,5 l de cada miRNA) se utilizó como las plantillas, y la reacción se incubó a 16 ° C durante 10 min, seguido de 42 ° C durante 40 min y 70 ° C durante 15 min para desnaturalizar la transcriptasa inversa. Las reacciones de PCR cuantitativa para miRNAs se llevaron a cabo utilizando la sonda UPL (Roche, Basilea, Switerland) por el Sistema de Detección Plus stepone ABI (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.). Las condiciones de PCR fueron 95 ° C durante 10 min, seguido de 50 ciclos a 95 ° C durante 15 s y 60 ° C durante 1 min. Cada muestra se ensayó por triplicado. Niveles relativos de expresión de los genes miARN se calcularon de acuerdo con el método comparativo Ct usando ath-miR159a como referencia y una mezcla de ARN extraído de células humanas de cáncer de pulmón A549 y cáncer gástrico células BGC-823 (1:1) como el calibrador.
el análisis estadístico
las diferencias entre los dos grupos se evaluaron mediante la prueba t. Las asociaciones entre la supervivencia global y la efusión miARN niveles de expresión se analizaron mediante el método de Kaplan-Meier, test log-rank y modelos de regresión de riesgos proporcionales de Cox. Los puntajes de riesgo fueron asignados a todos los pacientes en función de una combinación lineal del nivel de expresión del miARN, ponderada por el coeficiente de regresión de las muestras de entrenamiento. La puntuación de riesgo se calculó de la siguiente manera: riesgo-score = (1.21 × nivel de expresión de miR-100) + (- 0,28 × nivel de expresión de miR-134) + (- 0,33 × nivel de expresión de miR-151) + (- 0,35 × nivel de expresión de miR-345) + (- 0,19 × nivel de expresión de miR-93). Cox modelo de regresión paso a paso y la estratificación también se realizaron análisis. El análisis estadístico se realizó utilizando el software (SPSS 18; SPSS Inc., Chicago, IL). La significación estadística fue aceptada por
P
valores. & lt; 0,05
Apoyo a la Información
Archivo S1.
se detectaron 113 miRNAs en estos 10 pacientes entre los grupos de supervivencia más larga y grupo-supervivencia más corta por miARN microarrays (Archivo S1). Fold cambios, el valor de FDR y el valor p se calcularon para todos los miRNAs
doi:. 10.1371 /journal.pone.0043268.s001 gratis (XLS)
Figura S1. Francia El volcán parcela muestra los miRNAs expresados diferencialmente en los derrames entre grupo y grupo de supervivencia más larga-corta supervivencia. El eje horizontal representa el factor de cambio entre dos grupos. El eje vertical representa el valor P de la prueba t para las diferencias entre las muestras
doi:. 10.1371 /journal.pone.0043268.s002 gratis (TIF)
figura S2.
IR y análisis de vías, sobre la base de los genes miARN objetivo. El eje vertical es la categoría de la vía (B) IR (A) y, y el eje horizontal es el enriquecimiento de GO y vías
doi:. 10.1371 /journal.pone.0043268.s003 gratis (TIF)
Figura S3.
red miARN-mRNA. los nodos de la caja rojas representan miARN y los nodos de ciclo azules representan ARNm. Los bordes muestran el efecto inhibidor de los genes miARN en mRNA. El centro de la red se representa por grado, lo que significa que la contribución de un microARN que los genes de todo. miARN-93 tiene las mayores grados
doi:. 10.1371 /journal.pone.0043268.s004 gratis (TIF)
Tabla S1.
miRNAs que son expresados diferencialmente en los derrames entre grupo y grupo de supervivencia más larga-corta supervivencia.
doi: 10.1371 /journal.pone.0043268.s005 gratis (DOC)
Reconocimientos
gracias Qian Qian y Yu Al igual que en el Hospital de Nanjing en el pecho para proporcionar parte de nuestra derrame
muestras.