Extracto
Antecedentes
5-fluorouracilo (5-FU) es uno de los más clásicos de la quimioterapia fármacos. vehículos de administración de fármacos de nanopartículas ofrecen superioridad sobre mejora de efecto objetivo y la reducción de efectos secundarios. Poco se sabe sin embargo que el efecto específico de nanopartículas de diseminación peritoneal del cáncer de colon. El objetivo de este estudio es preparar un NP (nanopartículas) cargado con 5-FU e investigar las características de los PN y el papel de la misma en la metástasis peritoneal nódulos formación de cáncer de colon humano.
Metodología /Principales conclusiones
Preparado los PN (nanopartículas) cargadas con 5-FU (5-fluorouracilo) por PEG-PLGA con el método de doble emulsión. Entonces evaluar las características de los NPs por microscopía electrónica de barrido, análisis de la distribución del diámetro de partícula y la determinación de la eficiencia de carga. Detectar las características de liberación de los NP in vitro e in vivo. Los ratones desnudos con metástasis peritoneales fueron tratados con una solución de 5-FU o 5-FU-PN a través de la cavidad peritoneal. Contar los nódulos en peritoneo y mesenterio y examinar el tamaño de ellos. Llegamos PN con un promedio de diámetro de 310 nm. Ensayo in vitro de liberación muestra NP pueden liberar equably durante 5 días con velocidad de liberación del 99,2%. In vivo, el grupo de NPs puede mantener la concentración en plasma más alta de 5-FU más largo que en el grupo de solución. El número de nódulos diseminación peritoneal por debajo de 1 mm en 5-FU-sol grupo (17,3 ± 3,5) y 5-FU-NP grupo (15,2 ± 3,2) es menor que en el grupo control (27,2 ± 4,7) (P & lt; 0,05). El número total de nódulos en 5-FU-NP grupo (28,7 ± 4,2) es significativamente menor que en 5-FU-sol grupo (37,7 ± 6,3) (P & lt; 0,05).
Conclusiones /Importancia
Las nuevas nanopartículas antitumorales cargadas con 5-FU por PEG-PLGA pueden liberar mantener 5 días y tienen una acción inhibidora de diseminación peritoneal del cáncer de colon en ratones
Visto:. Tang Q, y Wang , Huang R, Q, Wang G, Chen Y, et al. (2014) Preparación de anti-tumor de nanopartículas y su inhibición a peritoneal Difusión de cáncer de colon. PLoS ONE 9 (6): e98455. doi: 10.1371 /journal.pone.0098455
Editor: Vipul Bansal, Universidad RMIT, Australia |
Recibido: 19 Enero, 2014; Aceptado: May 4, 2014; Publicado: 4 Junio 2014
Derechos de Autor © 2014 Tang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el "Wu Jie-ping" Fundación Medicina China, (Nº 04.102.303) y la Fundación Especial de Harbin Innovación técnica para la persona con talento (núm 2006RFQXS075) y el Fondo de Ciencia para jóvenes Académicos Distinguidos de la provincia de Heilongjiang de China bajo Grant Nº JC04-02. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer colorrectal es la tercera causa de muerte por cáncer en todo el mundo. metástasis peritoneal de cáncer colorrectal es común con incidencia de aproximadamente 13% que se informó en el estudio en gran muestra anteriormente [1] metástasis .Peritoneal ocurrió en 7% de los pacientes con cáncer colorrectal en el tratamiento inicial y en 4% ~19% de los pacientes después de cirugía radical [2] .El pronóstico de metástasis peritoneal cáncer colorrectal es pobre cuya supervivencia media es de sólo 5~9 meses [3] .Los regímenes de quimioterapia sistémicos actuales basados en 5-FU para el cáncer colorrectal no han logrado resultados satisfactorios, en particular en el tratamiento de la diseminación peritoneal [4]. Uno de los problemas con este tipo de terapia es la entrega limitado de medicamentos administrados por vía sistémica a la peritoneal [5]. administración intraperitoneal directa puede causar 5-FU absorbe en la circulación sanguínea rápidamente como resultado la dosis insuficiente llegar al nódulo local en la cavidad peritoneal. Es necesario desarrollar nuevas estrategias para el tratamiento de la diseminación peritoneal en el cáncer colorrectal para lograr mejores resultados. Nanopartículas, como un nuevo vehículo para fármacos antitumorales, se ha prestado una especial atención a la campo de la medicina a principios de 1978 hasta ahora [6]. En los últimos años, los estudios sobre la nanopartícula de polímero han hecho un tremendo avance en virtud de la biocompatibilidad y biodegradabilidad de las nanopartículas de polímero [7]. Las esferas poliméricas pueden proteger el medicamento de condiciones externas adversas y controlar su liberación [8]. En comparación con las microesferas, NPs tienen su propia superioridad sobre mejora de efecto objetivo y la reducción de efectos secundarios [9] - [10]. Neovasos en el tumor son más permeables para las nanopartículas menores de 400-600 nm a paso, que no sólo puede mejorar la función objetivo, pero también puede disminuir los efectos secundarios de los fármacos anti-tumorales [11]. Mientras que, la administración intraperitoneal de nanopartículas de agentes antitumorales para el tratamiento de la diseminación peritoneal cáncer colorrectal no se ha investigado ampliamente. En vista de esto, preparamos el 5-FU nanopartículas con una técnica novedosa en primer lugar, y demostramos nanopartículas antitumorales pueden inhibir la formación de diseminación peritoneal del cáncer colorrectal.
Materiales y Métodos
Ética declaración
Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité Comité de Cuidado y uso de animales institucional y Ética de la Universidad médica de Harbin y de acuerdo con las directrices del Centro Experimental Animal de la Universidad médica de Harbin.
Preparación de 5-FU /nanopartículas PEG-PLGA
Para empezar, se añade PLGA-PEG en 80 ml de diclorometano. 4 ml de 10% (w /w) solución de NaOH que contiene 5-FU se inyecta lentamente en la mezcla a alta cizalladura emulsificación (Fa25 emulsionante, Fluko, EE.UU.), se obtuvo así ligeramente emulsión transparente. ellos goteada en 160 ml de solución saturada de 5-FU que contiene 5% (w /v) de PVA bajo una vigorosa agitación (Fa25 emulsionante, Fluko, EE.UU.) durante 5 minutos con el fin de obtener la emulsión doble (w /o /w) . La evaporación del disolvente se llevó a cabo bajo vacío con una (evaporador rotativo RE-85A, corporación Henan Yuxin Instrument) evaporador giratorio. PN se recuperan mediante centrifugación a 12000 rpm, y luego se lava con 5-FU solución acuosa y agua destilada que fueron todos liofilizó a última saturado.
Evaluar la calidad de los PN
Evaluar la morfología característico de los PN.
1 mg PN se dispersan en 1 ml de agua. NP suspensiones se dejaron caer en la diapositiva y brotaron oro en cuando está seco. La morfología de los PN es investigado por microscopía electrónica de barrido (JSM-6700F, JEOL, y Japón).
Análisis de tamaño de partícula.
distribución del tamaño de partícula se determina por el tamaño de láser Analysers (LS -13.320 tamaño láser Analysers, BeckmanCoulter, EE.UU.). Cada producto se analizó por 30 veces después de suspendidos en agua destilada.
Determinación de encapsular la eficiencia.
eficiencia de carga 5-FU se determina por análisis termogravimétrico (analizador STA409 térmica, Alemania). Una cierta cantidad de PN seco se calentó a la velocidad de calentamiento de 10ºC /min bajo atmósfera de nitrógeno.
Evaluación del Carácter liberación in vitro de los PN
50 mg de 5-FU era PN dispersa en 10 ml de PBS (pH = 7,4). Esta solución se añade en una bolsa de diálisis, que se puso en 90 ml de PBS (pH = 7,4), se selló y se agitó (~ 75 r /min) a 37 ° C. Una muestra de 10 ml se recogió a intervalos de tiempo especificados de PBS exterior y complementar cantidades iguales de PBS fresco.
Evaluación del Carácter de liberación in vivo de PN por HPLC
Kunming ratones fueron adquiridos de la Shanghai Laboratory Animal Center (Shanghai, china). Los ratones que fueron alojados en condiciones idénticas se les permitió el libre acceso a una dieta de agua del grifo y el estándar y se expone a un 12 h luz: 12 h oscuridad ciclo. 90 ratones Kunming se dividen en 2 grupos al azar. grupo 5-FU-PN (n = 45) es el grupo experimento, mientras que el grupo de contraste es el grupo solución 5-FU, ambos de los cuales están divididos respectivamente en 9 equipos con 5 ratones por el método aleatorio. Tratar los ratones a modo de intra-abdominal con la dosis de 40 mg /kg. Para aliviar el sufrimiento, los ratones se realizaron con anestesia por inhalación de éter etílico antes de entrar en la sangre. La sangre y la puso en un tubo de centrífuga con heparina durante 5 min a 3000 rpm de cuencas de los ojos correspondiente al 0.083,0.167,0.333,0.5,1.0,1.5,2.0,3.0,4.0 h. Tome el sobrenadante líquido 200 l en un tubo de EP en con 25 l de control interno (50 mg /ml de solución de 5-Bru) y éter acético precisamente se añadieron precisamente, de uniformidad de mezclado con agitación turbulenta durante 1 min, y se centrifugaron durante 5 min (800 l 5000 rpm). Filtrar el líquido sobrenadante por la película de microporos (0. 45 micras), y luego secarlo con gas nitrógeno y se disuelven por fase móvil 100 l. En última instancia, la muestra se inyecta en HPLC, de modo que podemos calcular la concentración en plasma de 5-FU.
Cultivo de células
La compra células de cáncer de colon HCT116 humano desde "El centro de recursos de celulares Shanghai Instituto de ciencias de la vida, de la Academia de Ciencias de china ", que se mantuvieron en 1640 que fue complementado con suero bovino fetal al 10%, 100 U /ml de penicilina G y estreptomicina 100 lg /ml a 37 ° C en una incubadora humidificada que contenía 5 % de CO2.
viabilidad de las células de ensayo
viabilidad celular se determinó usando un ensayo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-DipHE-145 bromuro nyltetrazolium (MTT) como descrito anteriormente [12].
colonia ensayo de formación de
células HCT116 se sembraron en placas de 3,5 cm (1000 células /placa) y se cultivaron durante 2 semanas para permitir la formación de colonias. 5-FU y 5-FU-PN se añadieron en los platos por separado. Las colonias fueron fijadas en metanol, se tiñeron con cristal violeta al 0,1% y se contaron.
Evaluación del 5-FU-NP Efectos sobre la diseminación peritoneal en el modelo de ratón
BALB /c-nu ratones desnudos ( 4 semanas de edad) fueron adquiridos de la Shanghai Laboratorio Animal Center (Shanghai, china). Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional de la Universidad Médica de Harbin. Los ratones desnudos fueron alojados en SPF en condiciones idénticas y se les permitió el libre acceso a un agua de la dieta y del grifo estándar y se expusieron a una de 12 h luz: 12 h oscuridad ciclo. células HCT116 (5 × 10
5 /ratón) /ml de solución salina se inyectaron en la cavidad peritoneal de los ratones 4 semanas de edad (BALBc nu /nu). Cinco ratones fueron asignados a cada grupo. 5-FU-sol y 5-FU-PN se administraron en la cavidad peritoneal en el MTD de 40 mg /kg de peso corporal por semana desde el día 7. Los ratones fueron sacrificados el día 28 después de anestesiado con ethyletherfor aliviar el sufrimiento. El número de nódulos peritoneales se contó respectivamente acuerdo con diámetro inferior a 1,0 mm o más de 3,0 mm por microscopía y los datos se muestran a partir del volumen experiments.Tumor representante se calculó sobre la base de la fórmula V = π × L × S × S /6 (L, el eje largo;. S, el eje corto)
ciclo celular y la apoptosis análisis de citometría de flujo
Véanse los métodos suplementarios en S1 archivo
resultados
Analizar la morfología, distribución de tamaño de partícula, y encapsulando la eficacia de 5-FU-NP
a medida que los presentes SEM fotográficas (Figura 1 a) la morfología de los PN revela una estructura esférica o elíptica con superficie lisa y no adherente con El uno al otro. foto SEM de PN en 10000 y 48000 de amplificación se muestra en Figure.S1 en S1 Archivo. El tamaño de partícula se demuestra en la determinación del tamaño de partículas, con el diámetro medio de 310 nm está bien distribuida (Figura 1B). Los parámetros originales de análisis de láser de tamaño de los PN se enumeran en Figure.S2 en S1 Archivo. Encapsular la eficiencia de los PN es (15,38 ± 0,56)% detectada a partir de 5 muestras
.
(a) exploración SEM mostró los PN con forma esférica y superficie lisa. tamaño (b) de nanopartículas fue analizado por el tamaño de láser Analysers. Los resultados mostraron promedio de diámetro de PN es de aproximadamente 310 nm. Distribución de las nanopartículas fue rango de 255 nm a 469 nm y el 70% tenía menos de 385 nm. P & lt;. 0,05
liberación in vitro de 5-FU de PN
El resultado de la liberación in vitro de 5-FU de PN se muestra en (Figure.2). 5-FU puede liberar a mantener durante 5 días con la acumulación de cantidad liberada hasta el 99,2% .Linear ajuste de Q para liberar el tiempo (t) obtiene la función de liberación:. Q = 20,9037 + 0,80953 * t
5-FU-NP Farmacocinética in vivo
en esta investigación, el tiempo de retención del 5-FU es de 4,6 min, que se ilustra en el cromatograma (Figura 3A, 3B, 3C). ecuaciones curva estándar de Y (relación de área de pico de 5-FU y el patrón interno) y C es Y = 0.06266C + 0,01752 (R = 0,99687) (n = 5), el límite más bajo detectable es de 0,05 g /ml, RSD precisión en baja, media y alta concentración es 9,05%, 4,73%, 2,97%, respectivamente, y la tasa de recuperación es 87,43%, 102,91%, 108,64%, respectivamente.
cromatograma se muestra en (a) para el plasma en blanco, (b ) para el plasma con 5-FU y 5-Bru, y (c) para la muestra en el plasma con 5-FU y 5-Bru. (5-Bru como endo-parámetro). El C-T-curva indica que el tiempo medio de residencia para (d) 5-FU-PN es 0.490 más que la solución (e) 5-FU (0.271 h). Y la concentración no puede ser identificado 2 horas después para el grupo de solución al 5-FU.
Figura.3 ilustra el flujo de la TC en el plasma después de que los ratones se han administrado en el abdomen (Figura 3D, 3E) . El área de la curva de CT (AUC0~t) cuando se administran a los ratones y el tiempo medio de residencia (MRT0~t) se calculan mediante el uso de farmacocinética estadística DAS2.0 software, y luego continuar el T-test con SPSS10.0 software (Tabla 1).
5-FU-PN suprime el crecimiento de células de cáncer colorrectal
Para investigar la forma en 5-FU-PN afecta a la proliferación de células de cáncer de colon, nos realizado MTT y ensayos de formación de clones de células HCT116. resultados de MTT demostraron que el número de células viables en 5-FU-PN fueron significativamente menos de la de las células de control negativo a las 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, que también menor que el de grupo de 5-FU-sol a las 48 h, 72 h, 96 h (Figura 4A). Como era de esperar, 5-FU-NPs inhibe la tasa de crecimiento de las células en comparación con el grupo control. Después, las células se cultivaron durante 14 días para llevar a cabo ensayo de formación de clon. A medida que los resultados mostraron que el 5-FU-sol y 5-FU-PN ambos pueden disminuir el número de colonias en comparación con el grupo control. Más lejos más, 5-FU-NP resultó en una disminución mayor que 35% en el número de colonias en comparación con el grupo de 5-FU-sol (Figura 4B). ciclo celular se bloquea por tanto solución de 5-FU y 5-FU-NP en comparación con el grupo control (Figura S3 en Archivo S1). Además, el ensayo de análisis de la apoptosis también se realizaron para declarar cómo 5-FU-NPs efectúa en la capacidad de la célula de cáncer de colon. (Figura S4 en Archivo S1) La citometría de flujo resultados mostró que el 5-FU-sol y 5-FU-PN podría promover la apoptosis de las células de cáncer de colon Comparar con fingida o PEG-PLGA. A medida que los resultados mostraron que el 5-FU-PN podría mejorar los efectos de 5-FU en el ciclo celular o apoptosis en parte, en comparación con 5-FU-sol, pero los efectos no fueron significativamente.
(a) de células HCT116 la línea se añadieron con 5-FU-NP o 5-FU-sol o PEG-PLGA o maqueta y se sometieron a un ensayo de viabilidad celular en 24 h, 48 h, 72 hy 96 h. (B) Un ensayo de formación clon se realizó en maqueta, PEG-PLGA, grupos de 5-FU-sol y 5-FU-NP. * P & lt; 0,05, versus control. ** P & lt; 0,05, frente a 5-FU-sol. (C) fotos representativas después de añadir con PEG-PLGA, 5-FU-sol y 5-FU-PN y simulacro.
Efecto inhibidor de la 5-FU-NP en la formación de diseminación peritoneal del cáncer colorrectal in vivo
El efecto de 5-FU-NP en la diseminación peritoneal se evaluó. dessemination macroscópica con nódulos tumorales visibles estaban presentes en la cavidad abdominal (Figure.5B). Todos los ratones se sacrificaron el día 14, y se contó el número de nódulos tumorales en el mesenterio (mesa de debate2). El número medio de metástasis de nódulos de menos de 1 mm en 5-FU-sol grupo (17,4 ± 3,6) y 5-FU-NP grupo (15.2 ± 3.2) es menor en comparación con el grupo control (27,2 ± 9,7) (P & lt; 0,05) . El número total de nódulos en 5-FU-NP grupo (28,7 ± 5,5) es significativamente menor que en 5-FU-sol grupo (37,6 ± 5,4) (P & lt; 0,05) .Los incidencia de diseminación peritoneal fueron del 100% en todos los grupos . La incidencia de metástasis hepática en 5-FU-NP grupo (33,3%) es menor que el grupo control (100%) (p & lt; 0,05). (Figure.5A): perfil
(a) nódulos metastásicos en cavidad abdominal fueron contados de acuerdo con diámetro inferior a 1 mm, 1~3 mm o más de 3 mm. (B) nódulos tumorales visibles estaban presentes en la cavidad abdominal en fotos representativas de ratones desnudos se sacrificaron 4 semanas después de i.p. inyección con células HCT116.
Discusión
diseminación peritoneal es grave problema para los pacientes avanzados del cáncer de colon debido a su mal pronóstico y la falta de un tratamiento eficaz [13]. 5-FU, uno de los fármacos antitumorales más clásicos, que pueden restringir el procesamiento de la síntesis de ADN de las células tumorales, es ampliamente utilizado en el cáncer de sistema digestivo [14] - [15]. Sin embargo, la toxicidad dependiente de la dosis limita la administración por inyección venosa común y menos de dosificación llegar a nódulos peritoneal a través de resultado sistémica circulación en mal efecto del tratamiento para la metástasis peritoneal de cáncer de colon [16] - [17]. Por lo tanto, es imperativo para encontrar la nueva estrategia para la metástasis peritoneal de cáncer de colon. En el presente estudio, hemos preparado una carga PN antitumoral con 5-FU puede contribuir a la curación de diseminación peritoneal del cáncer de colon.
El 5-FU-PN se prepararon mediante emulsificación de alta cizalladura en lugar de la emulsificación ultrasónica, lo que agranda emulsionar energía para que los NP obtenidos con diámetro de 310 nm (Figure1A). Nuestros estudios anteriores mostraron que podemos obtener NPs en diferentes tamaños mediante el ajuste de volumen de la fase interna de agua y tiempo de dispersión [18]. En comparación con el uso de emulsificación ultrasónica informado antes, se simplifica el proceso del experimento y supera la restricción de la baja salida relativa debido al esfuerzo de la emulsificación ultrasónica [19]. Por otra parte, el tamaño de partícula de las microesferas se reduce de manera efectiva y bien distribuida. Examinada de la distribución de tamaño de partícula, el diámetro del 70% de las nanopartículas es inferior a 385 nm con el rango de distribución de 255 nm a 469 nm (Figure1B). Nos intentos de reemplazar PLA con PLGA (50:50) y la cadena de PEG a partir 5000 a 2000, lo cual contribuye a crear bien distribuidas en 5-FU-PN cuya eficiencia de encapsulación fue del 15,4%. Con respecto a que el PEG-PLGA con histocompatibilidad y biodegradabilidad favorable, que se emplean generalmente en los portadores médicos y biológicos [20] - [21]. Esta investigación pone de manifiesto que este 5-FU-PN puede seguir sacando mantener durante aproximadamente 5 días lenta y suavemente in vitro que simula el medio ambiente cuerpo humano dentro de la cavidad abdominal (Figura 2).
Para declarar el carácter in vivo liberando de esta novela 5-FU-PN, los experimentos farmacocinéticos se practica en vivo. Los fármacos encapsulados por NPs, un nuevo tipo de soporte médico, se toman generalmente en por el hígado y el bazo en primer lugar, que contiene abundantes sistema endotelial [22] - [23]. De acuerdo con el estudio en ratones, se encontró que existe una especie de modelo de compartimentos falta de armonía entre los distintos datos individuales y nivel de fármaco en sangre. 5-FU-NP muestra dos modelo de compartimentos in vivo en comparación con el grupo de control que presenta un modelo de compartimentos, lo que resulta en la aplicación de momento estadístico. El tiempo medio de residencia (MRT (0-t)) del grupo de 5-FU-NP es 0.490 h (P & lt; 0,01), lo que es obviamente más largo que el grupo de control (0.271 h) (Figura 3D, 3E). Se muestra que la concentración de 5-FU no puede ser identificado en 2 h para el grupo de control, lo que demuestra común 5-FU se descompuso en vivo en breve. La zona en la curva de CT (AUC (0-t)) es de 4.372 mg /L • h Cmax es 17,06 mg /ml en 5-FU-PN grupo en comparación con el grupo control es 67.77 g /ml, lo que puede resultar de la ingesta de precedencia . en el tejido diana para fármacos cargados por nanopartículas (Tabla 1)
NPs anti-tumorales pueden inhibir la metástasis tumoral en la cavidad abdominal se ha indicado en muchos estudios [24] - [25]. Sin embargo, no está claro cómo el efecto del tratamiento de las nanopartículas anti-tumorales para la difusión peritoneal cáncer de colon. Los estudios de MTT confirmaron nuestra hipótesis de que 5-FU terapéutica de nanopartículas son más eficaces que la solución normal de 5-FU, especialmente después de 48 h (Figure4A). Los mismos resultados se mostraron en el ensayo de formación de clon (Figura 4B) .Por otra parte, la función del efecto 5-FU en el ciclo de la apoptosis o de células no fueron ni mejorado por 5-FU-NP en comparación con el 5-FU-PN, que eran demostrado en el análisis de la apoptosis y el ciclo celular por citometría de flujo métodos (Figura. S3, S4 en S1 archivo). Como se muestra en la Figura 4C, 5-FU-sol y 5-FU-NP llevó a características morfológicas alterados Comparar con fingida, que identifica por una distribución dispersa de células en el cultivo y una morfología de huso o en forma de estrella de las células ( Figure4C). Este cambio de las características morfológicas puede ser el resultado de 5-FU-PN efecto sobre la función de transición epitelio-mesenquimal de las células del cáncer [26], que debe ser de estudio en el futuro. Por otra parte, para demostrar la eficacia in vivo de 5-FU-NP terapéuticos para diseminación peritoneal, hemos desarrollado un modelo de metástasis peritoneal para imitar la condición humana. El número de nódulos fueron evaluados por diámetro y se dividieron en 3 grupos. Los resultados ilustra que el 5-FU-NPs tienen la capacidad de inhibir la formación de nódulos superior tanto al grupo de control positivo y grupo de control negativo (Figura 5A, 5B).
En conclusión, para lograr un mejor pronóstico para los pacientes con metástasis intraperitoneales, el establecimiento de la estrategia de tratamiento eficaz es crucial. En este estudio, hemos preparado con éxito nanopartículas antitumorales cargadas con 5-FU, lo que demuestra los efectos de inhibición en la línea celular de cáncer de colon y diseminaciones peritoneales en el modelo de ratón desnudo. Por lo tanto, puede ser una nueva preparación anti-tumor de metástasis peritoneales con profundas perspectivas en la aplicación clínica. Todavía hay que investigar más a fondo el mecanismo de detalle en el futuro.
Información de Apoyo
archivo S1.
1. resultados complementarios. exploraciones Fig.S1 SEM de 5-FU-PN. Fig.S2 análisis de tamaño de 5-FU PN. Ciclo celular Fig.S3 bloqueado por 5-FU-PN. Fig.S4 apoptosis promovida por 5-FU-PN. 2. Los métodos complementarios. El análisis del tamaño de partículas por láser de. La citometría de flujo y análisis del ciclo celular. análisis de citometría de flujo de la apoptosis con PI y anexina V tinción
doi: 10.1371 /journal.pone.0098455.s001 gratis (DOC)