Extracto
Objetivo
En este estudio se analizó la correlación clínico-patológica entre el cáncer de ovario (CO) y RECQL1 helicasa de ADN para evaluar su potencial terapéutico.
Métodos
OC resecado quirúrgicamente de 118 casos retrospectivos, para el que los bloques de parafina y todos los datos clínicos se completa, se utilizaron en este estudio. RECQL1 y inmunotinción Ki-67 se realizaron en secciones que se correlaciona con la tinción RECQL1 subtipo y la supervivencia del paciente. A continuación se examinaron diez OC y dos líneas celulares normales para la expresión RECQL1 y fueron tratados con siRNA contra RECQL1 para evaluar su efecto sobre la proliferación celular.
Resultados
De los 118 casos de adenocarcinoma (50, serosa; 26, endometrioide; 21, de células claras; 15, mucinoso; 6, otra histología), 104 (90%) mostraron niveles variables de expresión RECQL1 en los núcleos de las células de AO. El modelo de riesgos de Cox confirmó que difusa y fuerte tinción de RECQL1 se correlacionó con el tipo histológico. Sin embargo, la expresión RECQL1 no se correlacionó con la supervivencia global del paciente o de la etapa FIGO.
In vitro
, expresión RECQL1 fue excepcionalmente alto en las líneas celulares de OC de crecimiento rápido, en comparación con las células normales. El uso de un análisis del curso temporal de RECQL1-siRNA transfección, se observó una inhibición significativa de la proliferación celular.
Conclusiones
DNA helicasa RECQL1 es un marcador de células que se reproducen. RECQL1-siRNA puede ofrecer una nueva estrategia terapéutica contra varios subtipos de OC, incluyendo los cánceres resistentes al platino, o en los cánceres recurrentes que adquieren resistencia de platino
Visto:. Sanada S, K Futami, Terada A, Yonemoto K, Ogasawara S, Akiba J, et al. (2013) RECQL1 reparación del ADN helicasa: una posible diana terapéutica y un marcador proliferativa contra cáncer ovárico. PLoS ONE 8 (8): e72820. doi: 10.1371 /journal.pone.0072820
Editor: Rolf Müller, Universidad Philipps, Alemania |
Recibido: 28 Octubre, 2012; Aceptado: 9 Julio 2013; Publicado: 9 Agosto 2013
Derechos de Autor © 2013 Sanada et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Los autores no tienen el apoyo o la financiación para reportar
Conflicto de intereses:. tenemos los siguientes intereses. Kazunobu Futami y Yasuhiro Furuichi se emplean por Gene Care Institute Co., Ltd. No hay patentes, productos en desarrollo o los productos comercializados que declarar. Esto no altera nuestra adhesión a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales, como se detalla en línea en la guía para los autores.
Introducción
El cáncer de ovario (CO) representa aproximadamente el 30% de todos los cánceres del sistema reproductivo femenino. La tasa media de supervivencia a 5 años en etapa avanzada es tan bajo como el 31% (el estadio IIIC FIGO) al 51% (FIGO fase III A) (Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia (FIGO)). Aproximadamente el 75% de los pacientes con OC avanzado (estadio III) representan con la recurrencia después de la cirugía, que es fatal [1]. Esto se atribuye en gran medida a la falta de síntomas de alerta temprana y la falta de pruebas de diagnóstico que permiten la detección temprana de OC y su recurrencia [2]. El tratamiento inicial para OC es la resección mayor seguida de quimioterapia combinada postoperatoria para los pacientes con un estadio IC o mayor grado del tumor. Por lo tanto, la primera línea de tratamiento está dirigido a un tratamiento curativo. En comparación, sólo se proporciona cuidados paliativos para la recurrencia del cáncer o en pacientes que desarrollan resistencia a la quimioterapia. En OC avanzado con diseminación peritoneal, mientras se logra la regresión completa, algunas células OC residuales pueden favorecer la aparición de células resistentes a los medicamentos bajo la quimioterapia prolongada. Dos subgrupos de los anticonceptivos orales notorios, histológicamente subclasificar como del adenocarcinoma de células claras y adenocarcinoma mucinoso, son conocidos por ser resistentes a varios medicamentos contra el cáncer, incluyendo los derivados del platino ADN interactuando. Estos perfiles de los anticonceptivos orales representan serios problemas entre los oncólogos ginecológicos.
RECQL1 pertenece a una familia de helicasas de ADN, que son enzimas ubicuas que desenrollan el ADN de doble cadena para revelar ADN de cadena sencilla durante los procesos esenciales, como la replicación, la transcripción o la reparación. Bioquímicos y celulares muestran datos biológicos helicasa RECQL1 participa en el mantenimiento de la integridad genómica y es altamente regulados hasta en células que proliferan rápidamente, incluidas las de varios tipos de cáncer, como el pulmón, el hígado, el páncreas, colon, cerebro y los cánceres de cabeza y cuello [3-9]. Anteriormente, en el modelo de ratón con xenoinjerto de cáncer de hígado, mostramos una terapia RNAi que silencia específicamente la expresión de ADN helicasa RECQL1 fue un tratamiento eficaz contra el cáncer y tiene el potencial de ser desarrollado como nuevo método terapéutico [10]. Aunque la eficacia de RECQL1-siRNA se ha probado correctamente con los cultivos de líneas celulares obtenidas a partir de diversos orígenes de cáncer y también en los modelos de xenoinjerto de ratón, células OC hasta ahora no han sido estudiados de forma explícita [11]. En este trabajo, por lo tanto analizó la correlación clínico-patológica entre el cáncer de ovario y de expresión RECQL1
in vivo
y
in vitro
y hacer más referencia al potencial terapéutico de RECQL1.
métodos
Estudio de la población y las muestras
Una búsqueda retrospectiva de los pacientes diagnosticados con cáncer de ovario entre 1998 y 2005 se llevó a cabo utilizando los archivos de la Dirección del hospital Universitario de Patología Kurume, Japón. consentimiento escrito fue dado por los pacientes para su información que se almacena en la base de datos del hospital y se utiliza para la investigación. El estudio fue aprobado por el comité de ética de la Facultad de Medicina de la Universidad de Kurume. Se identificaron ciento dieciocho con cáncer de ovario que emparejan los bloques de parafina. La información clínica y patológica fueron revisados y los datos clínicos incluyeron la edad, el tratamiento, la etapa FIGO y seguimiento. Hematoxilina-eosina (H & amp; E) manchadas diapositivas fueron revisados y el diagnóstico confirmado de forma independiente por dos patólogos (SS, HY) guía
El análisis inmunohistoquímico
espesor de serie de secciones de cuatro micras se obtuvieron a partir seleccionado. bloques incluidos en parafina y se montaron en portaobjetos de vidrio recubiertos utilizando el XT de referencia (Ventana Automated Systems, Inc., Tucson, AZ, EE.UU.) y los métodos ChemMate ENVISION (Dako, Glostrup, Dinamarca). La inmunohistoquímica se realizó usando el anticuerpo monoclonal de ratón RECQL1 (Cell Signaling Inc. EE.UU.) a una concentración de 6,8 g /ml, y los anticuerpos Ki-67 que se obtuvieron pre-diluido. Cada portaobjetos fue el uso de solución de recuperación CC1 de Ventana durante 30 minutos, y se incubaron con anticuerpos primarios durante 30 min tratamiento térmico. Este sistema automatizado utiliza el método del complejo biotina estreptavidina con 3,3 'Diaminobencidina como cromógeno (kit de detección Ventana iVIEW DAB). Utilizamos estroma ovárico normal y atrófica RECQL1-negativo de mujer posmenopáusica (control negativo). Algunas de las muestras contenían OC estroma ovárico intacta, por lo que también podríamos verlos como controles negativos internos. La puntuación se basa en la cantidad y la intensidad de la tinción RECQL1 nuclear. La cantidad se puntuó como negativo (& lt; 1% de las células positivas), esporádicos (células positivas aisladas, pero & lt; 5%), focales (racimos de células pequeñas, pero & lt; 25% de las células positivas), difusa (& gt ; 25% de células teñidas). La intensidad se calificó como intensidad de la luz, moderada o fuerte. tinción difusa y fuerte era considerado como ++, tinción esporádica y focal, con cualquier intensidad se consideró como +, negativo -. El análisis estadístico se llevó a cabo para cada característica clínico-patológica entre el (-), (+) y (++) grupos. índice de proliferación se evaluó usando Ki-67 recuentos de células positivas por 10 campos de alta potencia (Ki-67 etiquetado índice (Li)). secciones de tejido teñidas se anotaron y se examinaron sin el conocimiento de los datos clínico-patológicos o el resultado del paciente.
El análisis estadístico
Los datos categóricos y la expresión RECQL1 fue examinado por el Χ
2 test. Ki-67 LI y RECQL1 expresiones fueron examinados por Wilcoxon la suma de rangos. El grado histológico y la expresión RECQL1 se evaluaron mediante la prueba exacta Cochran-Armitage tendencia. Cox modelo proporcional de una regresión logística condicional se realizó utilizando estadio FIGO y la expresión RECQL1. log-rank test con el modelo de Kaplan-Meier se utilizó para comparar las poblaciones de supervivencia entre las expresiones RECQL1. Todas las pruebas fueron de 2 caras, y un
valor de P Red de & lt; 0,05 se consideró estadísticamente significativa. Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software de análisis estadístico (SAS) versión 9.2 (SAS Institute, Cary, NC).
Células y condiciones de cultivo
En este estudio, hemos utilizado 10 líneas celulares humanas OC ( Tabla 1) OVCAR-3, OVCAR-5, SK-OV-3, TOV-21G, TOV-112D y ARPE-19 se obtuvieron de ATCC (Manassas, VA, EE.UU.). TIG-3 y MCAS se obtuvieron de Ciencia Banco de Recursos de Salud (Osaka, Japón). KOC-2S, 3S, KOC-KOC-5C y 7C se establecieron en la Escuela de Medicina [12] Universidad de Kurume. Las células se cultivaron en medio de Eagle o RPMI-1640 modificado por Dulbecco (Nacalai Tesque, Kyoto, Japón) y se incubaron a 37 ° C en una cámara humidificada suplementada con 5% de CO
2.
Línea celular
tipo de célula
sitio de establecimiento
OVCAR-3Serous adenocarcinomaATCC * OVCAR-5Serous celular adenocarcinomaATCCKOC-2SSerous adenocarcinomaKurume universityKOC-3SSerous adenocarcinomaKurume universityKOC-5CClear celular adenocarcinomaKurume universityKOC-7CClear celular adenocarcinomaKurume universitySK-OV-3Clear celular adenocarcinomaATCCTOV-21GClear adenocarcinomaATCCTOV-112DEndometrioid adenocarcinomaATCCMCASMucinous adenocarcinomaHealth Ciencia Banco de recursos ** celular APRE-19Normal para el control † celular ATCCTIG-3Normal para el control ‡ Ciencias de la Salud BankTable recursos 1. Tipos de Líneas celulares y Sitios de Establecimiento.
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inmunotransferencia
los niveles de proteína de RECQL1 y otras proteínas que participan en el sistema de reparación de daños en el ADN celular se controló mediante el uso de inmunotransferencia. Las células se lavaron con helado de salina tamponada con fosfato (PBS), se sedimentaron por centrifugación y después se lisaron en un tampón de dodecilsulfato sódico (SDS) que contiene 1% de SDS, 2% β-mercaptoetanol, 20% de glicerol, 30 mM Tris-HCl (pH 6,8) y 0,2 M de ditiotreitol. El lisado celular se sometió a ebullición durante 10 min y luego se sometió a electroforesis en gradiente de 5-20% de geles de SDS-poliacrilamida. Las proteínas fraccionadas en los geles se transfirieron electroforéticamente a membranas de difluoruro de polivinilideno (Immobilon, Millipore, MA, EE.UU.) y se bloquearon durante la noche con 5% de leche desnatada en PBS. Las membranas fueron incubadas con anticuerpos anti-RECQL1 monoclonal anticuerpo Q1N3 (Cell Signaling Technology, Tokio, Japón) o anti-β-actina anticuerpo monoclonal (ICN Biomedicals, Aurora, OH, EE.UU.) durante 60 min a temperatura ambiente. Las membranas se lavaron con 0,05% de Tween-20 en PBS, se incubaron con IgG anti-ratón conjugado con peroxidasa de rábano picante (DakoCytomation, Carpinteria, CA, EE.UU.) y se lavó. Las membranas se desarrollaron posteriormente usando un reactivo de quimioluminiscencia (ECL Plus, Amersham Biosciences, UK).
siRNA y ARN de interferencia
siRNAs (21 pb) dirigidos RECQL1 ARNm (RECQL1-siRNA) y negativo control de siRNA (NS-siRNA) se sintetizaron químicamente (GeneDesign, Inc, Osaka, Japón). Todas las secuencias de siRNA tenían un saliente 3 'dTdT en el extremo 3' [11]. silenciamiento génico específico de secuencia se confirmó mediante análisis de microarrays de ADNc con el sistema Affymetrix GeneChip (Human Genome U133 Plus 2,0 Array). Para la transfección en 24 h después de la siembra, las células fueron incubadas con 30 nM de ARNsi dúplex durante 4 horas en presencia de RNAiMAX (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.), se diluyó 2 veces con el suero que contiene medio fresco, y se cultivaron a 37 ° C para los términos indicados. ARN total fue extraído a partir de células cultivadas en diferentes puntos de tiempo usando un RNeasy Mini Kit (Qiagen GmbH, Hilden, Alemania) de acuerdo con el protocolo del fabricante después del tratamiento los compuestos químicos. La transcriptasa inversa-PCR análisis se llevaron a cabo utilizando el sistema de detección de secuencias ABI PRISM 7000 con sondas TaqMan y cebadores (ABI, Foster, CA, EE.UU.). El gen de β-actina se utilizó como estándar interno (TaqMan sonda de ID; 431088E; ABI). La proliferación celular se midió a las 24, 48, 72, 96 y 120 horas, mediante fluorescencia, usando celular Titulación Glo-luminiscentes (Promega, WI, EE.UU.) de acuerdo con un protocolo. Como para el análisis del ciclo celular, las células fueron transfectadas con RECQL1-siRNA o con NS-siRNA en las mismas condiciones descritas anteriormente, y se incubaron durante 72 horas a 37 ° C. Se recogieron las células y restos de células, se lavaron con PBS y se fijaron en metanol enfriado con hielo durante 2 horas. A continuación, las células se trataron con RNasa A pancreática (Nippon Gene, Toyama, Japón), se tiñeron con yoduro de propidio (Sigma, St Louis, MO, EE.UU.) durante 30 minites, y se analizaron por citometría de flujo. Se midió la fluorescencia utilizando EPICS XL (Beckman Colter, Tokio, Japón). Para cada muestra, se analizaron 7000 eventos. Estos análisis se repitieron 3 veces para cada líneas celulares. La etapa del ciclo celular y la población de células se muestran con la media ± SD de valores en cada
Resultados
Los hallazgos clínicos y microscópicos
El rango de edad de citometría de flujo perfil. para los pacientes con cáncer de ovario fue 20 a 82 (media, 57,1) años. Todos los 118 pacientes se sometieron a histerectomía total, salpingooforectomía bilateral, omentectomía y disección de los ganglios linfáticos o el muestreo. especímenes resecado quirúrgicamente reveló que 50 pacientes fueron adenocarcinoma seroso, 26 eran adenocarcinoma endometrioide, 21 eran adenocarcinoma de células claras, 15 eran adenocarcinoma mucinoso (invasión expansiva y el adenocarcinoma mucinoso invasivo) y 6 eran de otra histología, incluyendo 3 carcinoma de células escamosas, 2 mixta El carcinoma (carcinoma de células escamosas y el adenocarcinoma seroso o carcinoma de células escamosas y el adenocarcinoma de células claras) y 1 carcinoma de células transicionales.
resultados inmunohistoquímicos
resultados inmunohistoquímicos estaban disponibles para los AO 118 resecado quirúrgicamente. Se observó expresión RECQL1 en los núcleos de las células OC distinto grado en 104 (90%) de las muestras OC 118 (tipo seroso, 94%; tipo endometrioide, 89%; tipo de células claras, el 81%; tipo mucinoso, 87%; y otros, 100%). Basado en la cantidad e intensidad, 55 casos fueron considerados como (++), para los cuales eran de tipo seroso, 9 (16,3%) de tipo endometrioide, 9 (16,3%) del tipo de células claras, 3 30 casos (54,5%) ( 5.4%) de mucinoso y 4 (7,2%) de otros (Figura 1). Sesenta casos fueron considerados como (+) y (-), de los cuales 20 (31,7%) eran de tipo seroso, 17 (27,0%) de tipo endometrioide, 12 (19,0%) del tipo de células claras, 12 (17,5%) de mucinoso y 2 (1,6%) de otros. RECQL1 - (++) expresión en tejidos resecado quirúrgicamente tiene una propensión a la que se observa en el tipo seroso, y menos frecuentemente en endometrioide, tipos claros y mucinoso (P & lt; 0,03) (Tabla 2). Ki-67 índice de marcaje (LI) reveló el mayor potencial proliferativo en el adenocarcinoma seroso, con un promedio de 20,8% (endometrioide, 15,8%; de células claras, el 7,3%; y mucinoso, 9,4%). RECQL1 - (++) casos se asociaron significativamente con alta Ki-67LI (p = 0,02) (Figura 2A)
(++) expresión en los cánceres de ovario..
(A) adenocarcinoma seroso, (B) adenocarcinoma de células claras (C) adenocarcinoma endometrioide, (D) adenocarcinoma mucinoso y (E) estroma ovárico intacta como control negativo. (recuadro: hematoxilina y eosina)
Anotó RECQL1Expression gratis (-) y (+) gratis (++)
tipo ParametersHistological
aserous type20 (31,7%) 30 (54,5%) endometrioide Type17 (27,0% ) 9 (16,3%) type12 de células claras (19,0%) 9 (16,3%) type12 mucinoso (17,5%) 3 (5,4%) otros2 (1,6%) 4 (7,2%) FIGO etapa
etapa soplador (fase I y II) 60 (50,8%) 45 (38,1%) en estadio avanzado (estadio III y IV) 3 (2,5%) 10 (8,5%) Tabla 2. Goles de expresión inmunohistoquímica RECQL1 y Relación con el Tipo histológico y la FIGO etapa.
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(A) Correlación entre el índice Ki-67 etiquetado y RECQL1 (++) casos. Microfotografía ilustra alta tinción Ki-67 en el adenocarcinoma seroso. RECQL1 (++) casos se asociaron significativamente con alta Ki-67LI (p = 0,02). (B) de Kaplan-Meier de supervivencia entre RECQL1 (++) y (+), (-) de los casos. Por el análisis de log-rank, no hubo significación entre la expresión RECQL1 y la supervivencia global (p = 0,72).
La inclusión de factores clínicos
Un modelo de Cox confirmó que difusa y fuerte tinción de RECQL1 (HR 2.3) se correlaciona con el tipo histológico, alta Ki-67 LI y estadio FIGO avanzado, aunque estadio FIGO perdieron su valor predictivo cuando se ajusta según el tipo histológico (Tabla 2). Por el análisis de log-rank, no hubo una asociación significativa entre la expresión RECQL1 y la supervivencia global (p = 0,72) (Figura 2B).
RECQL1 niveles de expresión en líneas celulares OC
A medida que una mayor cantidad RECQL1 de inmunoreactividad se observó en las muestras OC resecado quirúrgicamente, se investigó la expresión RECQL1 utilizando diversas líneas celulares de OC. Como controles, las células normales ARPE-19 y TIG-3 se caracterizaron de manera similar. La mayoría, si no todas, las células de cáncer examinados hasta ahora mostraron mayor nivel de expresión de proteína helicasa RECQL1 en comparación con las células normales (Figura 3A). Se encontró expresión RECQL1 ser excepcionalmente alto de las líneas de células de crecimiento rápido, como KOC-2S, 3S, KOC-OVCAR-3, OVCAR-5, KOC-7C, SK-OV-3 y líneas de células TOV-112D. Curiosamente, TOV-21G y MCAS mostraron una baja expresión similar a la línea TIG-3 normal de las células.
niveles (A) RECQL1 de expresión en líneas celulares de diez OC. Se encontró expresión RECQL1 ser excepcionalmente alta en KOC-2S, KOC-3S, líneas celulares de cáncer de ovario Tov-112D OVCAR-3, OVCAR-5, KOC-7C, SK-OV-3 y, en comparación con las dos líneas celulares normales (ARPE-19 y TIG-3). (B) El efecto de silenciamiento RECQL1 en el crecimiento de la línea celular OC por análisis del curso del tiempo. Un total de diez líneas celulares OC fueron transfectadas con cualquiera RECQL1-siRNA (círculo relleno) o NS-siRNA (triángulo) por un período de 120 horas como se describe en los Materiales y Métodos. La viabilidad celular disminuyó con el tiempo después del tratamiento siRNA. RECQL1-siRNA inhibió significativamente la proliferación de una amplia gama de líneas celulares de OC de acuerdo con la reducción de RECQL1 mRNA (que se muestra como histogramas). Durante el transcurso de tiempo, la expresión de ARNm se redujo RECQL1 diferencialmente, dependiendo de la línea celular. Los datos representan las medias ± SD, n = 3. (C) El efecto de silenciamiento RECQL1 sobre el ciclo celular de la línea celular OC medida por análisis de citometría de flujo. Las líneas celulares fueron transfectadas con cualquiera NS-siRNA (paneles superiores) o RECQL1-siRNA (paneles inferiores) durante 72 horas. El porcentaje de poblaciones de células en el subG1, G1 /S y G2 /M etapas se muestran como media ± desviación estándar en cada perfil de flujo de citometría.
La inhibición de la proliferación celular por OC RECQL1 silenciamiento
Por inmunotransferencia, se encontraron todas las líneas celulares de diez OC para expresar una mayor cantidad de proteína helicasa RECQL1 que las células normales. Basándose en estos resultados, se investigó el efecto de silenciamiento RECQL1 sobre el crecimiento de diversas líneas de células de OC por un análisis del curso del tiempo. Las células OC 10 líneas y las 2 líneas de células normales fueron transfectadas ya sea con RECQL1-siRNA o con NS-siRNA (triángulo) durante 120 horas. Como se muestra en la Figura 3B, RECQL1-siRNA (círculo sólido) inhibió significativamente la proliferación de una amplia gama de líneas celulares de OC de acuerdo con la reducción de RECQL1 mRNA (que se muestra como histogramas), mientras que no tuvo efecto sobre el crecimiento de los dos líneas de células normales (datos no mostrados en este documento) [10]. La viabilidad celular, que se muestra como el crecimiento relativo en comparación con la de las células no tratadas, disminuyó con el tiempo tras el tratamiento siRNA. Durante el transcurso de tiempo desde 24 hasta 120 horas, las expresiones de ARNm RECQL1 se redujeron diferencialmente dependiendo de la línea celular. Curiosamente, el nivel de mRNA RECQL1 aumentó hacia el final del tiempo de platos para algunas de las líneas celulares, aunque este aumento no fue más allá de 40% de la expresión original.
En lo que respecta al mecanismo subyacente a la reducción de la viabilidad celular, se investigó la función de ciclo celular de varias células tratadas OC RECQL1-siRNA. Las células tratadas con ARNsi (después de la transfección 72 horas) se aislaron a partir del cultivo y se sometieron al análisis del ciclo celular. Como se muestra en la Figura 3C, las poblaciones de células de todas las células OC tratados con RECQL1-siRNA contenían una fracción distinta de células subG1 de células muertas, y una acumulación de células en el G1 difusa /S y G2 fases /M, que muestra un mitótico característica la muerte celular que se produce durante el ciclo celular (paneles inferiores). En algunas células tratadas OC-RECQL1-siRNA, el aumento de las poblaciones de G1 y /M fases, células G2 indicativo de una detención del ciclo celular debido a daños en el sistema de punto de control de ADN. Por el contrario, no hay tales características anormales son vistos con las células OC afines tratados con el siRNA no silenciar utilizado para los experimentos de control (paneles superiores). Por lo tanto, la inhibición del crecimiento aparente de las células cancerosas (visto en la figura 3B) no se debe a la retraso del crecimiento celular, pero se debe a la muerte de células viables de OC y la reducción del número de células causadas por la muerte celular mitótica.
discusión
en tanto serosa y endometrioide adenocarcinoma, la terapia de combinación con carboplatino y paclitaxel es una estrategia eficaz y da lugar a un resultado terapéutico excelente, incluso si el cáncer se encuentra en una fase avanzada. Por el contrario, no existe un régimen curativo contra los AO resistente al platino, tales como adenocarcinoma de células claras y adenocarcinoma mucinoso, o anticonceptivos orales recurrentes de un tipo refractario. adenocarcinoma de células claras y muestran adenocarcinoma mucinoso comportamiento indolente cuando están confinados en el ovario y, a menudo son diagnosticados en una etapa temprana, lo que le confiere un mejor pronóstico para el paciente. Sin embargo, una vez que la enfermedad se extiende en el espacio extra-ovárico, sus tasas de curación son mucho más bajos que el de adenocarcinoma seroso y adenocarcinoma endometrioide [13,14]. agentes de platino como un régimen terapéutico estándar incluyen carboplatino, que se dirige la síntesis de ADN en fase S e induce la apoptosis. Paclitaxel, en comparación, interfiere con la síntesis de la tubulina para contribuir a la detención del ciclo celular. Por esta razón, estos agentes quimioterapéuticos función más eficazmente en tumores activos, proliferativas, mientras que, tumores LI bajos-Ki-67, tales como adenocarcinoma de células claras y adenocarcinoma mucinoso de crecimiento lento, no responden bien, y el tratamiento con estas terapias puede resultar en hiposensibilidad
hasta la fecha, varios ensayos para identificar quimioterapéutico alternativo o agentes moleculares dirigidas se han hecho en contra de los anticonceptivos orales resistente al platino.; Sin embargo, no se ha alcanzado un consenso general sobre el tratamiento más óptimo de primera línea [15-20]. Por otra parte, los estudios muestran que un número considerable de pacientes con recurrencia de los carcinomas que eran originalmente sensible al platino, tales como adenocarcinoma seroso y el adenocarcinoma endometrioide, terminan con carcinomas resistente al platino.
Se ha informado de que la expresión RECQL1 se observa en el hígado, colorrectal, cáncer de pulmón, glioblastoma y cánceres de cabeza y cuello [7,21]. En este estudio, usando muestras OC resecado quirúrgicamente, se observó expresión RECQL1 nuclear en el 90% de los 4 subtipos principales de OC (seroso, endometrioide, de células claras y tipo mucinoso), con alta (++) expresión visto en 54,5% de los casos . Una comparación entre la expresión RECQL1 y Ki-67 LI indicó que RECQL1 (++) grupo se asoció con una alta Ki-67LI (p = 0,02); Por lo tanto, RECQL1 puede ser un marcador molecular proliferativa útil. Hemos informado anteriormente de que RECQL1 positividad en el carcinoma hepatocelular se correlaciona con el grado histológico y Ki-67 LI [10]. Por lo tanto, la expresión RECQL1 puede sugerir fuertemente correlacionado con la progresión tumoral y la diferenciación. En cuanto a la progresión tumoral, la expresión RECQL1 se asoció significativamente con la distribución de los estadios FIGO (p = 0,01), aunque perdió su valor cuando se ajusta por el tipo histológico. Por lo tanto, mientras que la expresión RECQL1 puede actuar como un parámetro de proliferación, pero no hemos podido demostrar asociaciones entre RECQL1 y estadio FIGO y la supervivencia global. Creemos que esto puede ser el motivo por el tamaño de la enfermedad residual se correlaciona con mayor claridad con la supervivencia en pacientes con un tumor en estadio avanzado [22].
En nuestro
in vitro
análisis, se determinó la potencial efecto anticancerígeno de RECQL1-silenciamiento en líneas celulares que son representativos de seroso, endometrioide, de células claras y adenocarcinomas mucinosos. La mayoría, si no todas, las células de cáncer examinados hasta ahora mostraron mayores niveles de expresión de proteína helicasa RECQL1 en comparación con las células normales. Teniendo en cuenta que RECQL1 se regula up-altamente en células que crecen rápidamente, incluyendo varios tipos de cáncer y células transformadas [4-6,8], de células claras y adenocarcinoma mucinoso que se sabe que relativamente lento OC crecimiento, mostraron una menor expresión RECQL1 puede ser razonable. En este tipo de células de cáncer de crecimiento lento, la cantidad de enzimas de reparación del ADN, incluyendo RECQL1 helicasa puede ser salvo, tal vez porque el tiempo suficiente proporcionada por un crecimiento lento en su lugar ayuda a cumplir con todas las tareas necesarias en la reparación del ADN.
Anteriormente hemos mostró efecto antiproliferativo por RECQL1-siRNA en varias líneas celulares de cáncer [10,21]. Esto se debió a un aumento de la acumulación de daño en el ADN en las células cancerosas causadas por RECQL1 silenciamiento condujo a una detención en la fase M y la muerte celular debido a los sistemas de punto de control incompletas, que indicativa de la catástrofe mitótica [10,21]. Por otro lado, las líneas celulares normales, incluyendo TIG-3 y APRE-19, mostraron tolerancia a la catástrofe mitótica por RECQL1 silenciar [10,21]. La principal diferencia entre las células normales y células cancerosas se explicaría por la capacidad de control del ciclo celular. La mayoría de las células cancerosas son deficientes en G1 y la función de punto de control G2 y así no detener el ciclo celular en las fases G1 y G2 para permitir celular para participar en la reparación del ADN. En lugar de ello, las células proceden en el ciclo celular a la fase M, donde no se permite la reparación del ADN. Así, las células se someten, finalmente, la muerte celular a medida que entran mitosis [23-25]. Por el contrario, los sistemas de punto de control en las células normales permanece intacto, lo que resulta en la detención del ciclo celular transitoria hasta que el problema se resuelve de ADN mediante la contratación de un sistema de reparación apropiado [21]. En otras palabras, puede ser considerada como las células normales son resistentes a la RECQL1 silenciamiento, mientras que las células cancerosas defectuosas de punto de control no lo son.
En este estudio, también se mostró RECQL1-siRNA silenciamiento de la muerte celular inducida y la proliferación celular inhibida en líneas celulares de OC. Nuestros datos anteriores apoyarían esa disminución de la viabilidad celular OC también fue el resultado de la catástrofe mitótica por RECQL1-siRNA silenciamiento. Más o menos, se observó la expresión RECQL1 para todos los subtipos histológicos de OC, lo que puede sugerir un grado de actividad RECQL1-siRNA en cánceres resistentes al platino, tales como adenocarcinoma de células claras, el adenocarcinoma mucinoso y algunos de los cánceres recurrentes con el tipo resistente al platino.
se observó un efecto anti-cáncer sinérgico cuando RECQL1-siRNA se administró localmente en ratones con tumores de cabeza y cuello junto con una inyección intravenosa de un derivado de cis-platino [14]. Los resultados sugieren la participación potencial de la ADN helicasa RECQL1 en la reducción del daño del ADN inducido-cis-platino. En cuanto a la aplicación terapéutica de siRNA contra los tumores malignos, varios investigadores han informado de la eficacia de una combinación de otros agentes quimioterapéuticos tales como la gemcitabina [26], camptotecina [27] y adriamicina [28]. Los resultados de estos estudios indicaron que tal terapia combinatoria podría reducir los efectos adversos de los agentes quimioterapéuticos, mientras que el aumento de la sensibilidad de las células cancerosas. Comparativamente, muchos otros agentes quimioterapéuticos tienden a dañar el tejido no canceroso. Por ejemplo, supresión de la médula ósea, el trastorno de los nervios periféricos, cardiotoxicidad y nefrotoxicidad son a menudo inducida.
Recientemente, la expresión de genes en tejidos de cáncer heterogénea se informó a través de estudios en los especímenes tumorales biopsia renal consecutivos [29]. Incluso en la misma muestra de tumor, diferentes firmas de expresión génica fueron detectados por diferentes áreas de la muestra y primaria frente a sitios de metástasis [29]. Hasta el momento, numerosas dianas moleculares se han definido para el desarrollo de fármacos contra el cáncer. Desde el punto de vista de las mutaciones o expresiones diferenciales de genes durante el desarrollo del cáncer, es imperativo que el gen más indispensable requerido para el crecimiento del cáncer se dirige. En comparación con otras terapias dirigidas moleculares, RECQL1-siRNA sólo se refiere a la reparación del ADN, y actúa independientemente de cualquier mutación en el gen o la expresión cambio firma específica para el cáncer. Creemos que RECQL1 es uno de sólo unos objetivos de genes candidato que no afectan a las poblaciones de células normales.
En conclusión, RECQL1 debe ser considerado como un nuevo marcador de proliferación. Además, RECQL1-siRNA puede tener el potencial para ser aplicado como un nuevo método terapéutico contra OC de diversas características histológicas y clínicas, incluyendo los de un subtipo resistente al platino.