Extracto
Las diferencias en el resultado y la recuperación entre los pacientes sometidos a postoperatoria asistida por laparoscopia frente a la cirugía abierta para el cáncer colorrectal (CRC) de la resección han sido ampliamente documentado, aunque no específicamente para los tumores derecho unilateral. Se investigaron las respuestas inmunológicas a los diferentes enfoques quirúrgicos, mediante la comparación de los datos obtenidos postoperatorias simultáneamente en los niveles sistémicos, locales y celulares. Un total de 25 pacientes y controles del lado derecho de CRC se logró, la evaluación -en la inmediata followup- los parámetros perioperatorios convencionales y un gran panel de citoquinas en plasma, fluidos peritoneales y lipopolisacárido (LPS) estimulada por las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) cultivos de tejidos. Una mejor recuperación general para los pacientes operados con la laparoscopia en comparación con un procedimiento convencional, como se indica por el análisis de pre- típica y los parámetros de post-quirúrgicas, se observó. La evaluación sincrónica de 12 citocinas mostró que los niveles plasmáticos preoperatorios de las citocinas proinflamatorias IL-6, IL-8, IL-1ß, TNF fueron significativamente inferiores en los donantes sanos frente a pacientes con CRC y que tales diferencias aumentan progresivamente con el estadio del tumor. Después de la cirugía, los IL-6 e IL-8 aumentos fueron significativamente mayores en comparación con abierto abordaje laparoscópico sólo en CRC en las primeras etapas. Todo el panel de posquirúrgica de los niveles de citoquinas fueron significativamente más altos en los fluidos peritoneales en comparación con plasma correspondiente, pero sin diferencias significativas en función de tipo de cirugía o etapa de la enfermedad. A continuación, se observó que, previa comparación con el correspondiente post-cirugía derivados estimulada por LPS cultivos de PBMC, produce altos niveles de sobrenadante de todo el panel de citoquinas. En particular, la IL-6
in vitro
producción fue significativamente mayor en PBMC derivados de los pacientes sometidos a una intervención laparoscópica y abierta, pero -de nuevo- sólo en CRC en etapas tempranas de la enfermedad. Nuestros resultados muestran que tanto la laparoscopia en comparación con la resección abierta la derecha se asocia con un compromission más corta de la homeostasis inmunológica, sobre todo en las primeras etapas de pacientes de CRC-derecha
Visto:. Ferri M, Rossi Del Monte S, G Salerno , Bocchetti T, Angeletti S, Malisan F, et al. (2013) Recuperación de la homeostasis inmunológica se correlaciona positivamente con dos estadios tempranos de la derecha del cáncer colorrectal y cirugía laparoscópica. PLoS ONE 8 (9): e74455. doi: 10.1371 /journal.pone.0074455
Editor: Kjetil Tasken, Universidad de Oslo, Noruega
Recibido: Abril 26, 2013; Aceptado: August 1, 2013; Publicado: 9 de septiembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Ferri et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue parcialmente apoyado por becas de la Minstero dell'Instruzione, dell'Università e della Ricerca y desde Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (IG 10272), Italia. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito. Sin financiación externa adicional fue recibida para este estudio
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
El cáncer colorrectal (CCR) es la tercera. más causa común de mortalidad relacionada con el cáncer en todo el mundo, cuyo tratamiento estándar sigue siendo la cirugía [1], [2]. La incidencia de la derecha en comparación con los cánceres de colon del lado izquierdo se han incrementado durante las últimas tres décadas, por lo que en la actualidad los tumores del lado derecho representan aproximadamente el 50% de todos los cánceres de colon [3], [4]. Además, algunos autores detectaron una modestia mejor pronóstico en el lado izquierdo en comparación con los tumores derecho unilateral, aunque este argumento sigue siendo materia de debate [4] - [6]
colectomía laparoscópica segmentaria es un bien establecido quirúrgica. técnica que, en comparación con la colectomía abierta tradicional, se caracteriza por una menor morbilidad, menor dolor postoperatorio, una rápida recuperación postoperatoria y una estancia corta en el hospital, a pesar de que ambos métodos están asociados con la misma cirugía radical [7], [8]. Sin embargo, a pesar de los beneficios a corto plazo de la laparoscopia en comparación con la cirugía abierta convencional son bien reconocidos en el manejo de diferentes enfermedades colorrectales, este sigue siendo un tema controvertido para los tumores derecho unilateral [9], [10].
ahora es generalmente aceptado que el grado de trauma quirúrgico influye en la respuesta inflamatoria aguda [11], que a su vez puede ser responsable no sólo de posibles complicaciones (como infecciones y adherencias abdominales a largo plazo) [12], sino también para la formación de la metástasis tumoral [9], [13], [14]. Aunque sólo unos pocos y discutibles datos sobre la recuperación postoperatoria de la homeostasis inmune en pacientes con CRC se han publicado, en la actualidad se acepta comúnmente que la restauración anterior de la competencia inmunológica puede influir en la recurrencia de la enfermedad y el pronóstico [9], [13], [15], [dieciséis]. Por otra parte, en el pasado reciente, hay indicios convincentes de que la respuesta inmunológica al cáncer y alteraciones del sistema inmune celular podría verse afectado significativamente por la cirugía [17].
En la actualidad se reconoce que -más allá de la C- la proteína C reactiva (CRP), que es probablemente el principal marcador de suero para el recuento de células inflamación-de glóbulos blancos (WBC) y células polimorfonucleares (PMN) representa un buen apoyo para la evaluación postoperatoria inmunológica de los pacientes con cáncer [18], [19]. Sin embargo, incluso más que las variaciones en el número de células, parece muy importante verificar posibles alteraciones en sus funciones, tales como la actividad secretora [20]. En particular, un análisis más exhaustivo de los procesos inflamatorios después de la lesión actualmente puede ser proporcionado por la evaluación de citoquinas.
Por lo tanto, con el objetivo de investigar las respuestas inmunológicas a diferentes enfoques quirúrgicos en pacientes sometidos a resección de colon derecho para el cáncer, se realizó -por primera vez- una comparación entre los datos a corto plazo sobre la liberación de citoquinas obtiene simultáneamente en los niveles sistémicos, locales y celulares. Con el fin de organizar una evaluación completa de los perfiles postoperatorias que se muestran en esos pacientes, se determinó la concentración de citoquinas tanto en el plasma y en los fluidos peritoneales recogidos en diferentes momentos después de la colocación postoperatoria convencional de un sistema de drenaje, ya que la respuesta peritoneal local puede ser considerado un determinante importante de la recuperación post-quirúrgica [21]. Sin embargo, como se informó anteriormente [22], un índice más convincente del estado inflamatorio junto a la cirugía podría ser representado por el análisis de las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) capacidad de secretar citoquinas
in vitro
, en presencia de un lipopolisacárido (LPS) mediada por la estimulación.
un nuevo método que utiliza hileras de biochips múltiplex para la detección simultánea de un gran panel de múltiples citocinas en cada muestra solo recientemente ha atraído un interés considerable [23]. En este documento se llevó a cabo la evaluación sincrónica de 12 citoquinas diferentes, incluyendo las proteínas inflamatorias, tales como factor de necrosis tumoral-α (TNF-α), IL-1 (α y β), IL-2, IL-4, IL-6, IL- 10 e interferón-gamma (IFN-γ), quimiocinas (IL-8, y MCP-1: MCP-1) y factores de crecimiento (factor de crecimiento endotelial vascular: VEGF y el factor de crecimiento epidérmico: EGF). Todos los datos fueron finalmente evaluados en comparación con las características clinicobiological y los parámetros perioperatorios convencionales recogidos en el seguimiento inmediato.
En conjunto, nuestros resultados muestran por lo tanto que la laparoscopia compararon para abrir la resección derecha se asocia con una compromission más corta de la inmunológica homeostasis, pero sobre todo en las primeras etapas de pacientes de CRC-derecha.
Materiales y Métodos
estudio de diseño em
el diseño del estudio fue aprobado por el comité de ética de la universidad y todos los inscritos los pacientes dieron su consentimiento informado (Prot. CE 843/2012). Los participantes prestan su consentimiento informado por escrito para participar en este estudio.
Entre mayo de 2008 y abril de 2011, todos los pacientes con diagnóstico de cáncer de colon a la derecha en la Unidad de Cirugía del Hospital de San Andrés fueron evaluados y 25 de ellos se realizó de forma consecutiva para este estudio, basado en los siguientes criterios.
los criterios de elegibilidad pacientes afectados por el adenocarcinoma primario de colon, programada para la resección electiva por la colectomía derecha, inscrito antes de cualquier terapia neoadyuvante y sometidos a la colocación de un postquirúrgica bajo vacío sistema de drenaje para la recogida de fluidos peritoneales
los criterios de exclusión fueron:. una historia preexistente de la cirugía abdominal o el cáncer y las enfermedades inflamatorias, el inicio de complicaciones intra y post-quirúrgicas, la Admnistration de sangre intra y postoperatoria transfusiones interfieren con la respuesta inmune, la detección pre o intraoperatorio de carcinomatosis peritoneal, cirugía de emergencia o complicaciones abdominales. El grupo de estudio consistió en 25 pacientes (12 hombres y 13 mujeres con edades comprendidas entre 59 y 83 años) que fueron administrados después de la cirugía (10 sometidos a mínimamente invasiva y 15 a procedimientos abiertos convencionales) siguiendo el mismo protocolo: (a) las muestras de sangre en serie eran recogido antes de la operación, a los 6, 24, 48 y 72 h (horas) después de la operación; (B) posquirúrgica colección fluidos peritoneales se realizó a las 24 y 48 horas; (C) las células mononucleares se obtuvieron a partir de sangre periférica (PBMC) antes y 24 horas después de la cirugía y se cultivaron durante 48 horas adicionales: a continuación, se recogieron los sobrenadantes para cada cultivo. Hemos logrado dos grupos de control diferentes. En el primero participaron 10 voluntarios sanos (5 hombres y 5 mujeres con edades comprendidas entre 47 a 70 años), cuyo tomaron muestras de sangre para la dosis simultáneas y en serie de citoquinas y de cultivos de PBMC (como el anterior). Un grupo de control adicional consistía en 2 pacientes que se sometieron a una colectomía suplementarios justo al lado de la cirugía abierta para las enfermedades colorrectales no neoplásicas y fueron luego procesados aplicando exactamente los mismos procedimientos que se utilizan para los pacientes de cáncer, incluyendo el plasma, fluidos colección peritoneal y cultivos de PBMC.
Los siguientes parámetros se registraron en todos los pacientes: edad, sexo, índice de masa corporal (IMC), la Sociedad Americana de Anestesiología (ASA) de puntuación, la longitud de la incisión, la pérdida de sangre estimada, tiempo de funcionamiento, el tiempo para la ingesta oral reanudación, las cantidades de analgésicos utilizados para el control del dolor, el tiempo hasta la primera evacuación intestinal, el tiempo hasta la deambulación, la estancia hospitalaria. Las características clínico-patológicas de los pacientes se obtuvieron de los informes patológicos después de la cirugía. Los tumores se clasifican como propuso el 6
ª edición de la clasificación TNM de los tumores malignos de la Unión Internacional Contra el Cáncer (UICC). Los pacientes fueron estratificados en dos grupos de acuerdo a la etapa del tumor: 13 "primeros" pacientes en las fases I-II de la enfermedad y 12 pacientes "avanzados" para los estadios III-IV de la enfermedad
Cirugía
Todos los pacientes fueron sometidos a colectomía derecha y fueron asignados a dos posibles vías de abordaje: (a) una técnica laparoscópica mínimamente invasiva o (b) una cirugía abierta convencional. Todas las resecciones se realizaron de acuerdo con los principios oncológicos aceptadas con el mismo grado de resección para ambos grupos, incluyendo alta ligadura de los vasos, el aclaramiento ganglionar y el margen intestinal adecuada. Para las resecciones laparoscópicas, se creó neumoperitoneo y se utilizó el enfoque intracorporal a través de 4 puertos abdominales (1-1,2 cm de diámetro) para las maniobras quirúrgicas. El intestino se exteriorizó a través de una pequeña incisión periumbilical (5-7 cm de longitud) para la resección y anastomosis. La colectomía abierta se realiza a través de una incisión en la línea media (16-20 cm de longitud) utilizando técnicas quirúrgicas convencionales. En todos los pacientes restauración de la continuidad intestinal se llevó a cabo con una anastomosis íleo-transversal con grapas y un sistema de drenaje bajo vacío se colocó para la recolección de fluidos peritoneales.
Todos los pacientes recibieron por vía i.v. la morfina durante 24 horas después de la operación y la administración i.v. Los fármacos no esteroides anti-inflamatorios (AINE) a petición. Los pacientes se les permitió tomar líquido cuando su ruidos intestinales son audibles, y fueron progresaron a una dieta sólida según la tolerancia. La movilización y la retirada de la sonda se fomentó tan pronto como el paciente era capaz físicamente. Los pacientes fueron dados de alta cuando está completamente ambulatorio y tolerante de una dieta sólida.
Sangre, peritoneales y las células muestras
Se recogieron cuatro mililitros de sangre venosa heparinizada muestras, incluidos los pacientes y controles, antes y 6, 24, 48 y 72 horas después de la cirugía (T0-6-24-48-72). Después de la centrifugación, las muestras se almacenaron a -80 ° C hasta su análisis para determinar la concentración de citoquinas, la proteína C-reactiva (CRP, marcador de fase aguda) los recuentos de leucocitos totales, linfocitos y granulocitos polimorfonucleares.
24 y 48 hrs después de la cirugía, se recogieron los líquidos peritoneales y luego se midieron las concentraciones de citoquinas tal como se describe a continuación. Alrededor de diez mililitros de 24 horas, también se recogieron muestras de sangre para aislar las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) mediante centrifugación en gradiente de densidad sobre Ficoll-Paque ™ PLUS (Amersham Biosciences /GE Healthcare), ya sea a partir de 25 pacientes con CRC o a partir de 10 donantes sanos utilizados como controles. Las células fueron cultivadas por triplicado a la densidad de 1 × 10
6 células /ml en 24 pocillos /placa (Becton Dickinson, Oxnard, CA) en medio RPMI-1640 suplementado con 10% de suero bovino fetal (FCS) y antibióticos y estimulados con lipopolisacáridos 1.0 g /ml (LPS) (todos los reactivos de Sigma Chemicals Co., St. Louis, MD). Después de 48 horas adicionales de cultivo, se obtuvieron los sobrenadantes celulares y se recogieron para determinar la concentración de citoquinas
.
Los perfiles inflamatorios perioperatorias de los todos los pacientes se investigaron a continuación, en diferentes momentos evaluación de 12 niveles de citoquinas en el plasma, los fluidos peritoneales y celular sobrenadantes de cultivo recogidos como se describe anteriormente
Determinación de los niveles de citoquinas
Para la evaluación simultánea de los siguientes 12 citocinas: IL-1a., IL-1, IL-2, IL-4, IL- 6, IL-8 y IL-10; factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF); factor de crecimiento epidérmico (EGF); factor de necrosis tumoral-α (TNF-α); interferón-γ (IFN-γ) y los monocitos chemoattractant proteína-1 (MCP-1), una matriz de biochip múltiplex en equipos de pruebas (Randox Labs. Ltd. Crumlin, Reino Unido) se utilizó como se informó anteriormente [23]. Los ensayos se realizaron en plasma, fluidos peritoneales y sobrenadantes de cultivos de PBMC, siguiendo las instrucciones del fabricante. la concentración actual del analito en la muestra se calcula automáticamente utilizando curvas de calibrado obtenidas de forma rutinaria (Evidencia Software versión 1.4).
Análisis estadístico
Los resultados se expresan como media ± desviación estándar (SD), significan ± error estándar (SEM) o mediana y rango intercuartil
La significación estadística se definió a
p Hotel & lt;.. 0,05
La normalidad de la distribución de datos se comprobó con prueba de Shapiro-Wilk, y los datos no distribuidos normalmente se transformaron logarítmicamente antes del análisis. La comparación entre y dentro de los grupos se realizaron mediante pruebas Unpaired Mann-Whitney o de Wilcoxon y vinculado o-Pratt prueba, respectivamente. El coeficiente de correlación de Pearson o Spearman se utilizó para evaluar las relaciones entre las variables. Para las variables categóricas se utilizó Chi-cuadrado o el test de Fisher. El análisis estadístico se realizó mediante el Graph Pad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc, San Diego, CA, EE.UU.), y SigmaPlot V.1 1 (Copyright © 2008 Systat Software, Inc.).
pre- y post-quirúrgicos Características de los pacientes
25 pacientes con CCR del lado derecho -uniformly estratificadas en el 13 inicial (I-II) y 12 en estadio avanzado (III-IV) de disease- se inscribieron para laparoscópica o abierta intervención convencional, que define dos grupos diferentes comparables con respecto a la numerosidad, la edad, el sexo, la puntuación ASA y el IMC (tabla 1).
con el fin de comparar los parámetros perioperatorios de la laparoscopia convencional frente procedimientos abiertos, longitud de la incisión, la duración de la intervención y la pérdida de sangre, así como de partida del primer movimiento intestinal y la dieta sólida, la necesidad de analgésicos, tiempo para la deambulación y la estancia hospitalaria se recogieron (tabla 2). En conjunto, muestran una mejor recuperación general para los pacientes operados con la laparoscopia, como se indica por una diferencia significativa entre los dos enfoques quirúrgicos en longitud de la incisión (
p
& lt; 0,0001), (
p
= 0,0008), el tiempo de dieta sólida (
p = 0,005
), tiempo hasta la deambulación (
p
= 0,003) y la estancia hospitalaria (
p = 0,0002
), incluso aunque el tiempo operatorio fue más largo (
p = 0,0008
).
pre y postoperatorias de los números del CMB y PMN fueron evaluados en los diferentes grupos y controles. En las primeras 72 horas después de la cirugía en comparación con el análisis preoperatoria, así como a los donantes sanos, un aumento significativo en el número de células se observó (pico entre 6 y 24 horas), que tendían a normalizar, independientemente de uno u otro tipo de cirugía o etapa de la enfermedad . Del mismo modo, los niveles plasmáticos de CRP muestran aumentos progresivos, a partir de 6 horas y alcanzando un máximo de 48 horas después de la intervención. Sin embargo, este análisis muestra diferencias significativas con respecto a los diferentes enfoques quirúrgicos, pero no a los subgrupos etapa tumores basadas. En particular, los niveles de PCR después de 24 horas fueron significativamente mayores (
p Hotel & lt; 0,01) en los pacientes sometidos a abrir en comparación con la cirugía laparoscópica, que estas diferencias -aunque siempre detectable- no resultaron estadísticamente significativas en las otras ocasiones ( 6, 48 y 72 horas).
niveles prequirúrgica de citoquinas proinflamatorias se correlacionan directamente a la etapa de la enfermedad
para una mejor comparación de los dos enfoques quirúrgicos diferentes, que se miden simultáneamente los niveles plasmáticos de 12 citoquinas de la sangre derivado de pacientes con CRC antes y después de la resección.
prequirúrgica (T0) niveles de IL-6, IL-8, IL-1β, TNF (líneas de base) fueron significativamente (
p
& lt;. 0.05) menor en donantes sanos frente a pacientes con CRC y estas diferencias aumentan progresivamente con el estadio del tumor (Fig 1), mientras que en las otras citoquinas que no se observaron diferencias significativas (datos no mostrados). En particular, a excepción de TNFa, las citoquinas todos los citados muestran un aumento significativo en los niveles de referencia cuando se compararon temprana (I-II) a avanzado (III-IV) etapas de la enfermedad (
p Hotel & lt; 0,05) (Fig. 1).
niveles de citocinas se midieron a partir de plasma del grupo de control (Ctrl) o 25 pacientes con CRC antes de la cirugía (total), que incluye 13 principios (I-II) y 12 en estadio avanzado (III-IV ) de la enfermedad. Los valores se expresan como media ± SEM y las estadísticas se realizaron utilizando la prueba t de Student para datos independientes. Los valores de p se asumen como estadísticamente significativa a
p Hotel & lt; 0,05 (*);
p Hotel & lt; 0,01 (**);
p Hotel & lt; 0,001 (***). ns = no significativo.
Curiosamente, los pacientes de control adicionales -Sacar niveles gastrointestinales neoplásicas no pathologies- espectáculo de citoquinas similares a voluntarios sanos (datos no mostrados). Por otra parte, las líneas de base los niveles de citoquinas fueron comparables en ambos grupos de resección laparoscópica y abierta (datos no mostrados).
niveles de IL-6 e IL-8 posquirúrgica de plasma son más bajos después de laparoscopia en comparación con la cirugía abierta Sólo Early Stages Pacientes
Cuando comparamos los niveles plasmáticos postoperatorias de todo el panel de citoquinas, no se observó una diferencia significativa en laparoscópica frente a los pacientes de resección abiertas sólo para IL-6 y IL-8 (Fig. 2). Sorprendentemente, a pesar de que nuestros datos muestran una cinética distintos para cada uno de citoquinas, se observó que los aumentos en abierta versus conservadora para los dos IL-6 e IL-8 pueden ser claramente observados sólo en etapas tempranas del CRC, mientras que -en avanzada tumors- la elección de la cirugía no influyó aún más los niveles de citoquinas postoperatorias. En particular, la detección posquirúrgica IL-6 muestra aumentos significativos después de 24 y 48 horas en pacientes sometidos a la técnica invasiva convencional en comparación con la laparoscopia, si bien el pico de la producción de citoquinas se alcanzó a las 6 horas en ambos grupos (Fig. 2). Los incrementos significativos de IL-6 en T24 T48 correo asistieron principalmente en las primeras etapas, mientras que en la etapa avanzada de la enfermedad no se observaron diferencias sustanciales entre los grupos laparoscópico y cirugía abierta. Además, de manera similar a IL-6, incluso IL-8 niveles posquirúrgicas eran generalmente más alta en abierto en comparación con la cirugía laparoscópica, pero esta diferencia resultó significativo a las 48 horas sólo y, de nuevo, en especial para las primeras etapas de la enfermedad (Fig. 2) . En particular, se detectó una disminución progresiva de la IL-8 hasta 48 horas después de la laparoscopia, pero no después de la intervención invasiva (Fig. 2).
Pre- (T0) y postoperatoria (T6-48) IL-6 y IL -8 niveles se midieron los niveles en plasma de 25 pacientes con CRC antes de la cirugía (estadio I-IV), incluyendo 13 temprano (estadio I-II) y 12 en estadio avanzado (estadio III-IV) de la enfermedad. Los valores se expresan como media ± SEM y las estadísticas se realizaron utilizando la prueba t de Student para datos independientes. Los valores de p se asumen como estadísticamente significativa a
p
. & lt; 0,05 (*) guía empresas
Para las otras dos citocinas que fueron significativamente diferentes en la detección preoperatoria de línea de base, (IL-1β y TNFa), no se han detectado cambios significativos desde conservadora frente a la técnica quirúrgica convencional (datos no mostrados). Los niveles de los otros ocho citoquinas, cuyos valores prequirúrgica en CRC y los pacientes no neoplásicas no fueron significativamente diferentes en comparación con donantes sanos, se incrementaron después de la resección del tumor, pero independientemente de la clase de la cirugía o la etapa de la enfermedad (datos no mostrados). Curiosamente, IL-6 aumenta directamente correlacionados con los niveles de PCR, ya sea 24 horas (r
2 = 0,51 con
p = 0.0086
) o 48 horas (r
2 = 0,49 con
p
= 0,012) después de la cirugía, mientras que para las citoquinas plasmáticas restantes no se observaron relaciones con PCR (datos no mostrados).
los niveles de citocinas de pacientes con CRC en los fluidos peritoneales recogidos a las 24 y 48 horas después de la cirugía fueron también mesurado. Un aumento significativo de la concentración de citoquinas en comparación con el plasma correspondiente, que van desde aumento de 400 veces para el aumento de 2 veces-6 IL para MCP-1 (datos no mostrados) fue observado. Sin embargo nunca se detectó ninguna diferencia significativa en todo el panel de citoquinas -en función del tiempo (T24 y T48) y tipo de cirugía o etapa de disease- (datos no mostrados).
IL-6
In vitro
por PBMC, al LPS estimulación, se incrementó significativamente después de la laparoscopia, sólo en las etapas tempranas de la enfermedad
La capacidad de las PBMC derivadas de donantes sanos, laparoscópica o pacientes de cirugía abierta para producir citoquinas se analizó adicionalmente in vitro, la medición de las citoquinas en el sobrenadante de PBMC estimulada por LPS antes y 24 horas después de la cirugía. En primer lugar, se observó más altos niveles de citoquinas en los sobrenadantes recogidos a partir de PBMC estimuladas con LPS en comparación con los cultivos de células no estimuladas derivadas de muestras de sangre, ya sea en donantes sanos o en pacientes con CRC antes y 24 horas después de la cirugía (datos no mostrados). Entonces, prequirúrgica en comparación con los cultivos de células postoperatorias derivados correspondientes produjo mayores niveles de sobrenadante de todo el panel de citoquinas (datos no mostrados). Dentro de las muestras prequirúrgicos, la producción de citoquinas fue mayor en los sobrenadantes derivados de las primeras etapas que en los derivados de la etapa avanzada de la CRC (datos no mostrados). Por otro lado, posquirúrgica PBMC, derivado de pacientes con CRC sometidos a resección laparoscópica versus abierta, producen mayores cantidades de citoquinas y el aumento de la eficiencia de la estimulación con LPS (que van desde aumento de 15 veces para la IL-6, para aumentar 2,5 veces para MCP-1 en LPS estimulada vs muestras no estimuladas). En particular, la detección de IL-6 en los sobrenadantes de PBMC cultivadas derivadas de pacientes de CRC 24 horas después de la cirugía se mostró en la Figura 3, siendo la más representativa de todo el panel de citoquinas. LPS indujo una mejora significativa en la producción de citoquinas, ya sea después laparoscópica o intervención abierta, a pesar de que la eficacia de la estimulación fue más significativa en los sobrenadantes de células PBMC derivadas de pacientes sometidos a laparoscópica vs cirugía abierta (
p
& lt; 0,01 vs
p Hotel & lt;.. 0,05) (figura 3)
IL-6 se midieron los niveles en los sobrenadantes recogidos a partir de cultivos PMBC estimuladas con LPS. Muestras procedentes de 25 pacientes con CCR (en total, la fase I-IV), incluyendo 13 temprano (estadio I-II) y 12 en estadio avanzado (estadio III-IV) de la enfermedad. Los valores se expresan como media ± SEM y las estadísticas se realizaron utilizando la prueba t de Student para datos independientes. Los valores de p se asumen como estadísticamente significativa a
p Hotel & lt; 0,05 (*);
p Hotel & lt; 0,01 (**);
p Hotel & lt; 0,001 (***). ns = no significativo.
Es de destacar que, cuando comparamos mediada por LPS efectos en cultivos posquirúrgicas derivadas de temprana versus etapa avanzada de la enfermedad, una estimulación significativa de la secreción de IL-6 se ha encontrado exclusivamente en el temprano (I-II), mientras que no se observaron diferencias sustanciales en las etapas avanzadas de la enfermedad, cuyos valores (± LPS) fueron siempre inferiores en comparación con las primeras etapas correspondientes (Fig. 3). Además, los LPS efecto estimulante fue más significativa en células derivadas de laparoscópica (
p
& lt; 0,01) en comparación con abrir (
p
& lt; 0,05) procedimiento, en los pacientes de CRC en etapas tempranas de la enfermedad (I-II), y que tales diferencias no fueron significativas cuando se comparó la laparoscopia para abrir grupo de cirugía en pacientes afectados por CCR en estadios avanzados (III-IV) (Fig. 3). Cuando comparamos control sin tratar y estimulados con LPS sobrenadantes, no se observaron diferencias significativas en los controles de la cirugía abierta y laparoscópica, mientras que un aumento significativo de LPS estimula las células derivadas de pacientes sometidos a laparoscópica versus se detectó intervención abierta (
p
& lt;.. 0,01) (Fig 3)
de manera similar a IL-6, también para IL-8, IL-1β, TNF y MCP-1, LPS inducida por un aumento significativo (
p
& lt; 0,05) en los sobrenadantes de las células cultivadas se han encontrado, pero independientemente de la clase de la cirugía y la etapa de pacientes con CRC (datos no mostrados). En las otras citoquinas restantes detectado en los sobrenadantes de cultivaron PBMC de pacientes con cáncer, la estimulación con LPS no produjo ningún aumento significativo de la producción y, además, no se han observado diferencias sustanciales comparación de los sujetos sometidos a cirugía conservadora o abierto y teniendo temprano o avanzado de la enfermedad (datos no mostrados).
Discusión
En este estudio, se muestra por primera vez el análisis simultáneo de 12 citoquinas desde sistémica (sangre), (fluidos peritoneales) locales y celular (sobrenadantes de cultivos celulares) muestras derivadas de pacientes con cáncer de colon derecho sometidas a diferentes vías de abordaje para la resección del tumor. 25 pacientes afectados por el cáncer del colon derecho, primera etapa 13 del cojinete y 12 en estadio avanzado de la enfermedad, destinados a la laparoscopia invasiva o intervención abierta convencional, se investigaron mínimamente en el pre corto plazo y postoperatorio para la producción de citoquinas. De hecho, a pesar de una conexión causal entre el cáncer de colon y la inflamación ha sido bien establecida [24], las posibles implicaciones de las respuestas a corto plazo de citoquinas, en pacientes sometidos a diferentes procedimientos quirúrgicos para la correcta resección de cáncer colorrectal todavía no están aclarados. Nuestros resultados muestran que la recuperación de la homeostasis inmune de pacientes con CRC sometido a colectomía no sólo podría estar relacionado con el tipo de cirugía [25], sino también a la etapa de la enfermedad tumoral.
El análisis de fase aguda convencional Los marcadores muestran -como esperados [2], [20], [25], [26] - un aumento significativo en el número postoperatoria CMB y PMN, dentro de las 72 horas después de la cirugía, lo que tiende progresivamente a normalizar, pero independientemente de uno u otro tipo de cirugía o etapa de la enfermedad. Por el contrario, los incrementos de PCR, a partir de 6 horas y alcanzando un máximo de 48 horas después de la intervención y siendo más elevada en abierto versus cirugía laparoscópica, aparecieron diferencias significativas con respecto al tipo de intervención (como se esperaba cfr. [2], [27] - [29]), pero no a los subgrupos etapa tumores basadas. A pesar de que estos marcadores se consideran un índice convincente de la respuesta inflamatoria aguda al trauma quirúrgico, se necesitan más investigaciones para establecer el papel de las diferentes vías de abordaje en la determinación -no sólo la recuperación postoperatoria de functioning- inmunológico más generalmente, el resultado en los pacientes de CRC [24]. A la luz de estas observaciones, la evaluación post-quirúrgica a corto plazo del perfil de citoquinas sistémica, local y celular puede convertirse en una variable independiente en la evaluación pronóstica de los pacientes afectados de cáncer de colon derecho. De hecho, como se informó anteriormente [19], [30], [31], algunas citoquinas podría ser considerado no sólo un biomarcador de la respuesta de fase aguda, estrechamente relacionado con el grado de trauma quirúrgico, pero también son potencialmente capaces de influir a corto plazo la evolución postoperatoria [32], la restauración de la homeostasis inmune [13], la incidencia de complicaciones infecciosas y de recidivas locales [14], [33] y los resultados oncológicos a largo plazo [16].
Nuestro análisis prequirúrgica muestra que algunos niveles de citoquinas (IL-6, IL-8, IL-1ß y TNF) fueron significativamente mayores en plasma de pacientes afectados por cáncer colorrectal en comparación con donantes sanos y estas diferencias aumentan progresivamente en etapas avanzadas del tumor. Esto no es sorprendente, ya que varias investigaciones revelaron una correlación directa entre el aumento de los niveles plasmáticos de citoquinas proinflamatorias y el estadio del tumor colorrectal y la progresión, especialmente en relación con la IL-6, cuya expresión se incrementa con frecuencia en la enfermedad del cáncer y se considera un predictor de mal pronóstico [23] , [24], [34] - [41]. Nuestros datos confirman investigaciones anteriores que indican una relación entre la secreción de IL-6 (con un pico a las 6 horas después de la cirugía) y la siguiente producción de CRP (con un pico a las 48 horas después de la cirugía) [27], [42]. Aunque las opiniones crecientes apoyan el papel de la PCR como un predictor de menores tasas de supervivencia en pacientes con varios tipos de cáncer, incluyendo CRC [43], no hay resultados definitivos han sido publicados con respecto a su valor efectivo como una variable independiente en la recuperación post-quirúrgica [29]. Sin embargo, algunos informes anteriores mostraron resultados contradictorios sobre los niveles plasmáticos de citoquinas prequirúrgicos, probablemente atribuible a las diferencias en las metodologías realizadas [23].
Se ha propuesto que los niveles plasmáticos de citoquinas posquirúrgicas pueden considerarse un marcador preciso de la respuesta de fase aguda global y se utiliza para controlar el impacto de la cirugía, que es potencialmente diferente de acuerdo con los procedimientos operativos distintos [20], [44], [45].