Extracto
Las plaquetas circulantes son fuentes abundantes de la angiogénesis moléculas de la vasculatura del tumor que afecta el crecimiento del tumor y la metástasis. La relación entre el cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) y los niveles intra-plaquetas de VEGF, TSP-1 y la red de la actividad angiogénica de plaquetas (PNAA) no está claro. El objetivo de este estudio fue comprender mejor el papel de estos factores en la progresión del cáncer de NSCLC y para evaluar su importancia clínica. Plaquetas VEGF y TSP-1 y PNAA se midieron antes de la cirugía en 68 pacientes con NSCLC mediante ELISA o ensayo de formación de tubo capilar. VEGF, distribuciones de TSP-1 y PNAA en pacientes con cáncer y voluntarios sanos se compararon mediante la prueba de Mann-Whitney
T
prueba. El método de Kaplan-Meier, el análisis de regresión univariante y multivariante se utilizó para analizar la correlación entre estos factores y características clínico-patológicas, la supervivencia global y la supervivencia libre de enfermedad. La media intra-plaquetas nivel de TSP-1 fue ligeramente mayor en los pacientes que en sujetos sanos (p = 0,092). Intra-plaquetas TSP-1 los niveles fueron significativamente mayores en los pacientes con afectación mayor que T2 o estadio III, en comparación con otros pacientes. El nivel medio del VEGF intra-plaquetas fue de 40,8 pg /10
6 en los pacientes en comparación con los 21,9 ng /10
6 en sujetos sanos (p = 0,041). Valor medio de PNAA en los pacientes fue significativamente mayor que en los controles sanos (p & lt; 0,001). Los pacientes con alta PNAA son más propensos a exhibir características patológicas clínicas agresivas. PNAA mayor que la mediana se asocia con un mal pronóstico. La elevada PNAA tienen una mejor correlación con la densidad microvascular tumoral (MVD) de VEGF derivado de las plaquetas. Las áreas bajo la curva de funcionamiento del receptor (AUROC) de PNAA fueron mayores que la de VEGF derivado de plaquetas en diferentes grupos. Un análisis multivariante mostró que PNAA son factores pronósticos independientes. Estos resultados indicaron que PNAA puede ser un indicador clínicamente útil para la evaluación diagnóstica y pronóstica en pacientes con CPNM
Visto:. L Yao, Dong H, Luo Y, Du J, Hu W (2014) Neto de plaquetas angiogénico Actividad ( PNAA) correlaciona con la progresión y pronóstico de células no pequeñas de cáncer de pulmón. PLoS ONE 9 (4): e96206. doi: 10.1371 /journal.pone.0096206
Editor: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesú, Italia |
Recibido: 20 de enero de 2014; Aceptado: 3 Abril de 2014; Publicado: 30 de abril 2014
Derechos de Autor © 2014 Yao et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por la Comisión de Educación de la provincia de Anhui China (Grant KJ2011A163), Fundación de Ciencias Naturales de la provincia de Anhui China (Grant 11040606M208), y la Fundación de Ciencias Naturales de China (Grant 30672437). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de pulmón es una de las neoplasias más comunes en todo el mundo, con una frecuencia cada vez mayor, especialmente en china. Esta considerado como la primera causa de muerte por cáncer entre los hombres en China [1], [2]. A pesar de los avances en la quimioterapia, el pronóstico para los pacientes con cáncer de pulmón sigue siendo pobre, con una supervivencia relativa a 5 años inferior al 14% en los hombres y menos de 18% en las mujeres en la mayoría de los países [3]. Por lo tanto, la capacidad de predecir el pronóstico individual sería crítico para guiar el tratamiento quirúrgico y la quimioterapia. La angiogénesis, o la formación de vasos newblood, un paso esencial en el crecimiento tumoral y la metástasis, está regulada por un equilibrio entre los factores pro-angiogénicos como el VEGF y bFGF, y factores anti-angiogénicos tales como endostatina y TSP-1. Las plaquetas durante mucho tiempo han sido conocidos por ser mediadores primarios de la trombosis y la hemostasis. Recientemente, se ha demostrado que poseen muchos promotores de la angiogénesis e inhibidores de la angiogénesis, siendo una de las mayores fuentes individuales de factores angiogénicos in vivo [4]. La expresión de VEGF se ha encontrado para ser alto en diversos tumores malignos, y los niveles de VEGF en suero se correlaciona con estadio de la enfermedad y el pronóstico en el cáncer de mama, cáncer colorrectal y cáncer de próstata [5], [6]. Se ha informado de que la alta inmunorreactividad VEGF en los tejidos tumorales se asocia con el pronóstico en pacientes con CPNM [7], [8]. Trombospondina-1 (TSP-1) fue el primer inhibidor endógeno de la angiogénesis para ser identificado [9], [10]. Esta glicoproteína de 450 kDa es producido y secretado por varios tipos de células tumorales y las células que residen en el estroma del tumor. La expresión de TSP-1 en los tumores humanos es modulada por oncogenes y factores microambientales, y en varios tipos de tumores humanos TSP-1 está presente tanto en el estroma y células tumorales [11]. Por otra parte, los niveles elevados circulantes de TSP-1 se han asociado con progresión de la enfermedad y etapas clínicas avanzadas de la enfermedad [12], [13]. Aunque VEGF en suero y TSP-1 son los factores pro y antiangiogénicos más estudiados, respectivamente, y muy elevado en las enfermedades relacionadas con la angiogénesis, los estudios con respecto a VEGF derivado de plaquetas y TSP-1 son escasas en los pacientes con cáncer de pulmón. Estudios recientes demostraron que, además de la liberación de compuestos pre-existentes, las plaquetas pueden sintetizar otras nuevas tras la estimulación debido a una gran cantidad de ARN mensajero [14]. Este hecho indica que las plaquetas pueden desempeñar un papel hasta ahora desconocido en la regulación de las respuestas vasculares. Aquí, hemos investigado el VEGF y TSP-1, sino también la actividad neta de plaquetas angiogénico (PNAA) en las plaquetas de los pacientes con cáncer de pulmón en comparación con los controles sanos. Para evaluar el PNAA, probamos el efecto in vitro de lisados de plaquetas de pacientes con cáncer de pulmón en la formación de las células endoteliales de cordón umbilical humano (HUVEC) estructuras de tipo capilar.
Materiales y Métodos
célula de aislamiento y la cultura
células endoteliales de cordón umbilical humano (HUVEC) se obtuvieron a partir de cordones umbilicales proporcionados por el Departamento de Obstetricia local. escrito el consentimiento informado se obtuvo de los donantes, y el estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Universidad Médica de Anhui. El aislamiento y el cultivo se realizaron como se describe anteriormente [15]. Las células fueron cultivadas en medio RPMI suplementado con FBS (10%), L-glutamina (2 mM), estreptomicina (100 mg /ml) y penicilina (100 U /ml) a 37 ° C en una atmósfera humidificada 5% de CO
2 incubadora.
tubo capilar ensayo de formación de
el ensayo de formación de tubo se llevó a cabo de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Chemicon International, Hampshire, Reino Unido) con ligeras modificaciones. Las células endoteliales (1 × 10
4) se sembraron en placas recubiertas con Matrigel reducido del factor de crecimiento (Becton Dickinson Biosciences, Bedford, MA, EE.UU.) y se expone a lisados de plaquetas durante 18 h. la formación de túbulos fue examinada bajo un microscopio de luz invertida y el número de puntos de ramificación en cuatro campos que no se solapan se midió. Las fotografías de todos los pozos fueron tomadas usando un microscopio de luz invertida. Los experimentos se realizaron por triplicado, y la variación fue menor de 10%. Para evaluar la reproducibilidad de ensayo, la formación del tubo capilar (CTF) de HUVEC se repitió 3 veces en presencia de 9 plaquetas de pacientes seleccionados (3 con actividad estimulante, 3 con actividad estimuladora en el intervalo de plaquetas de donantes sanos, y 3 con actividad inhibidora) . En todas las repeticiones, las plaquetas seleccionados mantuvieron su actividad original. Para inhibir la actividad de las plaquetas seleccionados, fueron preimcubated con 5μg /ml de anticuerpo monoclonal VEGF (Sigma) o de anticuerpo /ml TSP 200 mg (Sigma).
Pacientes y muestras
Sesenta y ocho pacientes con diagnóstico histológico o citológico CPNM confirmado en nuestro hospital entre septiembre de 2006 y julio de 2007 se incluyeron en el estudio. Los 68 pacientes consistió en 46 hombres y 22 mujeres (edad 61 ± 12,8 años [media ± DE]). El grupo control consistió de 68 donantes sanos que han participado de la Unidad de Transfusión de Sangre de la misma hospital durante el mismo período. Tanto los donantes sanos y pacientes no tenían una historia previa de enfermedad maligna. se informó de las características clínico-patológicas de los pacientes. La clasificación histológica de los tumores se basó en los criterios de la Organización Mundial de la Salud [16]. Histológicamente, los tumores fueron 37 adenocarcinoma, 28 eran carcinoma de células escamosas, y tres eran carcinoma de células grandes. La metástasis a los ganglios linfáticos fue N0 + N1 en 49 pacientes, N2 + N3 en la etapa de la enfermedad 19. postoperatoria fue del estadio I + estadio II en 38 pacientes, etapa III + IV en la fase 30. incluido en parafina, se recogieron especímenes quirúrgicos fijados en formalina para la tinción inmunohistoquímica para las células endoteliales de los microvasos intratumorales. La histopatología presente en los tejidos congelados archivados se confirmó por un patólogo para ser similar a la de los tejidos embebidos en parafina. El tiempo de supervivencia de los pacientes se calculó a partir de la fecha de la operación a la fecha de la muerte. El periodo de seguimiento duró hasta 60 meses. Las muestras de sangre periférica de pacientes con CPNM se elaboraron dentro de 1 semana antes de la cirugía o la quimioterapia. Se tomaron todas las muestras de sangre de pacientes y controles temprano en la mañana, después de un ayuno nocturno y un período de descanso de al menos 30 minutos. Las muestras se procesaron de acuerdo con métodos estándar. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes, y los protocolos de estudio han sido aprobados por el Comité de Ética de la Universidad Médica de Anhui.
Preparación de plaquetas humanas
"top azul" especímenes de anticoagulación estándar se obtuvieron de cada individuo, y se procesan de acuerdo con métodos estándar para la recogida de plaquetas dentro de 1 a 2 h de la recogida. Brevemente, una muestra de sangre (aproximadamente 4 ml) se extrajo por punción venosa en un tubo de vacío que contiene citrato 105 mM (pH 5) anticoagulante en una proporción de 1:09 (vol /vol) de tampón a la sangre. Los tubos se mezclaron suavemente y se mantuvieron en un agitador lento a temperatura ambiente (20-28 ° C) a la espera de su procesamiento. Se obtiene plasma rico en plaquetas a partir de plasma tratado con citrato por centrifugación (1000 rpm, 10 minutos) dentro de 1 hora de la recogida, el volumen de grabado y un recuento de células realizan. El plasma rico en plaquetas se centrifuga a continuación, en presencia de PGI2 (75 nM) a 2000 rpm durante 20 minutos para obtener un sedimento de plaquetas que a continuación se lava dos veces en solución salina tamponada con fosfato (PBS) y se resuspendieron suavemente en PBS para dar una concentración de 2 × 10
8 plaquetas /ml. Un ml de esta suspensión de plaquetas se mezcla con 1 ml 0,1% de Triton X-100 (Sigma) a 37 ° C durante 20 minutos. Este lisa eficazmente todas las plaquetas. Este lisado de plaquetas se almacena a -80 ° C antes del análisis por ELISA.
Las mediciones de VEGF y TSP-1 |
Todas las muestras se analizaron en el mismo laboratorio, dentro del mismo plazo (2 semanas). Las muestras del grupo control del cáncer y se asignaron al azar antes de la prueba para evitar el sesgo de la prueba. Las concentraciones de plaquetas se determinaron utilizando kits de ELISA cuantitativos (Quantikine Inmunoensayos; R & amp; D Systems, Wiesbaden, Alemania). Todos los ensayos tienen intra-ensayo coeficientes de variación (CV) de & lt; 5% y CV inter-ensayo de & lt; 10%. Los límites inferiores de detección para cada ensayo individual son 10 pg (VEGF) y 5 ng (TSP-1). Todos los ensayos se realizaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Todos los experimentos se realizaron al menos por duplicado en muestras apropiadamente diluidas.
densidad de los microvasos (MVD)
microvasos se tiñeron mediante el uso de anticuerpo policlonal de ratón anti-CD34 (dilución 1:20) (Novocastra, Newcastle, Reino Unido) como el anticuerpo primario, con la unión se visualizó mediante el método de biotina-peroxidasa complejo avidina. Cualquier grupo de células endoteliales rojo-tinción que fue claramente separado de los microvasos adyacentes, las células tumorales, y otros elementos de tejido conjuntivo se consideró una sola, de microvasos contables. lúmenes del buque no eran necesarias para una estructura que se define como un microvasos. Se seleccionaron tres puntos de acceso vascular, tanto por vía intratumoral y peritumoral para el recuento de microvasos CD34.
Análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron con SPSS 11.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL) de software. Los datos fueron analizadas para la normalidad y se encontró que eran una distribución normal. VEGF, distribuciones de TSP-1 y PNAA en pacientes con cáncer y voluntarios sanos se compararon mediante la prueba de Mann-Whitney
T
prueba. Las correlaciones fueron evaluados con la prueba de suma de rangos de Spearman. La sensibilidad y la especificidad de PNAA se determinaron mediante curvas características operativas del receptor (ROC), y las áreas bajo la curva se calcularon [17]. Las curvas de supervivencia se obtuvieron mediante el método de Kaplan-Meier y se utilizó el modelo de riesgos proporcionales de Cox para identificar los factores que se asociaron de forma independiente con la supervivencia. Los resultados se presentan como valores medianos con rangos intercuartiles. La significación se presume en los valores de p inferior a 0,05.
Resultados
PNAA, VEGF derivado de plaquetas y TSP-1 los niveles en pacientes con cáncer de pulmón y controles sanos
PNAA , los niveles de VEGF derivado de plaquetas y TSP-1 fueron detectables en todos los controles sanos. Sus valores medios de los PNAA, el VEGF derivado de las plaquetas y los niveles de TSP-1 fueron 65,4 ninguna. de los puntos de ramificación /10
6, 21,9 pg /10
6 y 8,5 ng /10
6, respectivamente. valor medio de PNAA y VEGF en pacientes con cáncer de pulmón eran 156.2 no. de los puntos de ramificación /10
6 (rango, 66,4 a 250,2) y 40,8 pg /10
6 (rango, 15,85 a 85,9), y significativamente mayor que los controles sanos (P & lt; 0,001 y P = 0,041, respectivamente ; Tabla 1). No hubo diferencia significativa en los niveles de TSP-1 derivados de las plaquetas entre los pacientes con cáncer de pulmón y controles sanos (P = 0,092, Tabla 1).
Relación entre el PNAA, el VEGF derivado de plaquetas o TSP- 1 los niveles y perfiles patológicos clínicos
Para evaluar la asociación de PNAA, el VEGF derivado de plaquetas o TSP-1 con la biología del tumor, se hicieron comparaciones de las características patológicas clínicas con PNAA, el VEGF derivado de plaquetas o TSP-1 . Como era de esperar, los pacientes con alta PNAA eran más propensos a exhibir características patológicas clínicas agresivas: alta PNAA se correlacionó significativamente con la diferenciación pobres del tumor (p = 0,004), el estadio patológico (P & lt; 0,001), patológica T-Factor (P & lt; 0,001) y N patológico factor (P & lt; 0,001), mientras que alta VEGF derivado de plaquetas fue significativamente correlacionado con una pobre diferenciación tumoral (P & lt; 0,001) y el estadio del tumor (P & lt; 0,001) (Tabla 2). Los niveles de TSP derivado de plaquetas fueron mayores en pacientes en estadio patológico III + IV y patológica T-factor de T2-4 que en los pacientes en estadio patológico I + II (P = 0,002) y T-factor de T1 patológica (P = 0,008) , respectivamente (Tabla 2). En este estudio, se encontró que los valores medios de los PNAA y VEGF en pacientes con cáncer de pulmón son significativamente más alta que en los controles sanos. Por el contrario, TSP-1 no era elevada en los pacientes con cáncer en comparación con las muestras de control. Los pacientes con alta PNAA eran más propensos a exhibir características patológicas clínicas agresivas.
análisis de la curva receptor-operativo (ROC) de VEGF y PNAA en la detección de cáncer de pulmón
Figura 1 mostró esa área bajo la curva receptor-operativo (curva ROC) del PNAA para diferenciar el cáncer de pulmón de los controles de salud fue 0,892 (IC del 95%, 0,874-0,961), que fue superior a 0,823 (IC del 95%, 0,786 hasta 0,941) de VEGF. (P & lt; 0,0001).
(A, B) Análisis ROC de pacientes con cáncer de pulmón y controles sanos, y controles sanos como grupo negativo y pacientes con cáncer de pulmón como un grupo positivo. PNAA tenía la mejor precisión diagnóstica predictivo (AUC = 0,893, P & lt; 0,0001). AUROC:. Área bajo la curva receptor-operativo
Las correlaciones entre el PNAA, el VEGF derivado de las plaquetas o los niveles de TSP-1 y la supervivencia global del paciente o la supervivencia libre de enfermedad
análisis de regresión
Cox univariante mostró ganglios linfáticos regionales, el estadio patológico, PNAA, y los niveles de VEGF derivados de las plaquetas que son factores significativos que afectan a la supervivencia global (Tabla 3). análisis de log-rank mostró que la elevación de PNAA mayor que la mediana se asocia a peor supervivencia libre de enfermedad y la mala supervivencia global (p = 0,012, p = 0,002;. Figura 2), mientras que el VEGF derivado de plaquetas y TSP-1 no muestra esta asociación. En el caso del análisis multivariado para la diferenciación histológica, factor T, los ganglios linfáticos regionales, el estadio patológico, PNAA, el VEGF derivado de plaquetas y TSP-1, sólo los ganglios linfáticos regionales, el estadio patológico y PNAA todavía estaban relacionados con la supervivencia global en algún grado ( Tabla 3). Por el contrario, los ganglios linfáticos regionales, el estadio patológico, PNAA fueron factores significativos que afectan a la supervivencia libre de enfermedad (Tabla 4).
supervivencia libre de enfermedad (A) y la supervivencia general (B) de bajo PNAA y los pacientes de alto PNAA . Los valores de p se determinaron mediante la prueba de log-rank.
Relación entre el PNAA o VEGF derivado de las plaquetas y el tumor en pacientes MVD
Hubo una correlación significativa entre PNAA o VEGF derivado de plaquetas y tumor MVD en los pacientes con cáncer (r = 0,78, P & lt; 0,001, r = 0,521; P & gt; 0,01;. Figura 3A, B). PNAA tienen una mejor correlación con MVD tumor que VEGF derivado de las plaquetas. Estos resultados sugieren que PNAA o VEGF derivado de plaquetas pueden promover la angiogénesis tumoral. MVD en el tejido normal y el tejido NSCLC se determinaron por CD34 tinción inmunohistoquímica
(A) buena correlación entre MVD y PNAA en 68 pacientes con CPNM (r = 0,78; P & lt; 0,001) (Figura 3C, D)... (B) La correlación significativa entre MVD tumor y los niveles de VEGF derivado de plaquetas (r = 0,521; P & lt; 0,01). (C) en el tejido MVD NSCLC y el tejido normal (D) se determinó mediante tinción inmunohistoquímica CD34. Flecha, tinción positiva de MVD.
La estimulación de la formación del tubo capilar (CTF) por citoquinas derivados de plaquetas
Para evaluar la actividad angiogénica de plaquetas neto (PNAA), hemos probado in vitro efecto de lisados de plaquetas de pacientes con cáncer de pulmón y controles sanos en el CTF de HUVECs. En éste fue significativamente mayor en los pacientes que en los controles sanos. (P & lt; 0,001;. Tabla 1, la Figura 4A, B)
fotografías representativas del ensayo de formación de tubo después se muestran 18-incubación con citoquinas de plaquetas-lanzado en los grupos a (los pacientes citoquinas plaquetas-lanzado en el original) y B (controles sanos citoquinas plaquetas-lanzado en el original). La preincubación de los lisados de plaquetas con el control de IgG (C) y antiTSP-1 anticuerpo (D). El análisis estadístico (E). Las barras son medias ± SD de 4 experimentos. *
P. & Lt; 0,05
control versus tratamiento
El papel de VEGF o TSP-1 en lisados de plaquetas de los pacientes con CPNM en PNAA
La preincubación de alta-VEGF lisados de plaquetas con anticuerpos contra VEGF dio lugar a una disminución marcada (& gt; 48%) en el CTF de HUVEC, mientras que sólo una ligera inhibición (& lt; 16%) o no la inhibición de la CTF de HUVEC se observó cuando las plaquetas estimulador lisados con bajos niveles de VEGF se preincubaron con anticuerpos anti-VEGF. La preincubación de estos lisados de plaquetas inhibidores de pacientes con cáncer reveló niveles elevados de TSP-1 en ambos casos con anticuerpos contra TSP-l (200 mg /ml) dio como resultado un aumento de la CTF de HUVEC en comparación con estos lisados de plaquetas inhibitorios preincubadas con control de IgG (5μg /ml) (
P & lt; 0,05
, n = 3) (Figura 4. C, D, E). Estos hallazgos indican que intraplaquetario TSP-l contribuye al efecto general anti-angiogénico provocado por lisados de plaquetas.
Discusión
Los estudios de la angiogénesis tumoral también han demostrado que las plaquetas circulantes son fuentes abundantes de pro-angiogénicos moléculas para la vasculatura del tumor, y que las células tumorales inducen la activación y agregación plaquetaria por la liberación de factores activadores de plaquetas, lo que resulta en la liberación de alfa-gránulos y su contenido, que a su vez afecta directamente el crecimiento del tumor y la metástasis [18] - [ ,,,0],21]. los recuentos de plaquetas elevados se han asociado con un mal pronóstico en cáncer de pulmón y en el cáncer gástrico, lo que sugiere que un estado procoagulante y activación de las plaquetas pueden contribuir al desarrollo del cáncer temprano [22], [23]. Se ha informado de que VEGF en plaquetas son elevados y son predictores independientes de carcinoma colorrectal [24]. Debido a que la angiogénesis está regulado por el equilibrio entre los inhibidores y activadores, un objetivo de nuestro estudio fue evaluar la /VEGF (activador) equilibrio en plaquetas TSP-1 (inhibidor). Sin embargo, cabe recordar que la angiogénesis tumoral está regulada no sólo por el VEGF y los niveles, sino también por una serie de activadores e inhibidores identificados y no identificados que pueden influir en el equilibrio angiogénico neta [25] 1 TSP-, por lo que otro objetivo de nuestro estudio fue evaluar PNAA.
en este estudio, se determinó el nivel de VEGF plaquetaria y PNAA en lisados de plaquetas de 68 pacientes con NSCLC. Se encontró que los valores de la mediana de PNAA y VEGF en pacientes con cáncer de pulmón son significativamente más alta que en los controles sanos. Nuestro estudio mostró además que los pacientes con alta PNAA son más propensos a exhibir características patológicas clínicas agresivas y que PNAA mayor que la mediana se asocian con mal pronóstico. La elevada PNAA tienen una mejor correlación con MVD tumor que VEGF derivado de las plaquetas. Mientras que el recuento elevado de plaquetas se han observado en algunos tipos de cáncer, no se observó ninguna diferencia significativa en el recuento de plaquetas entre controles sanos y pacientes en nuestra población (datos no mostrados).
midieron los niveles de lisados de plaquetas TSP-1 en el CPNM y se encontró una elevación no significativa en los niveles de TSP-1. Sin embargo, los niveles de derivado de plaquetas TSP-1 fueron mayores en pacientes en estadio patológico III + IV y patológica T-factor de T2-4 que en los pacientes en estadio patológico I + II y patológica T-factor de T1. Hay dos posibles explicaciones para este hallazgo. En primer lugar, los tumores agresivos pueden generar más TSP-1 que los tumores no agresivos. En segundo lugar, los niveles de TSP-1 pueden estar directamente correlacionada con el volumen bruto de la enfermedad, y los pacientes de este estudio con tumores agresivos en general tuvieron una mayor carga tumoral. Se evaluaron los lisados de plaquetas de los pacientes con cáncer y donantes sanos por su capacidad para aumentar o disminuir CTF de HUVEC como un simple y reproducible
in vitro
enfoque, la obtención de información sobre el PNAA. De hecho, no todas las muestras de plaquetas con altos niveles de CTF inducida por VEGF, probablemente debido a la presencia de moléculas antiangiogénicas. Por el contrario, no todas las plaquetas estimulantes mostraron altos niveles de VEGF, lo que indica que otros factores que están implicados VEGF. Considerando que dichas pruebas para identificar reguladores positivos y negativos de angiogemesis son engorrosos, nuestro ensayo in vitro para medir la PNAA de paciente de cáncer en HUVEC CTF proporciona una avenida sencillo a la información funcional sobre el neto entre los factores angiogénicos y anti-angiogénicos. Dicha información puede ser de valor en el pronóstico del cáncer y en el seguimiento de la respuesta del tumor a la terapia del cáncer.
Con el fin de evaluar más a fondo el valor clínico de PNAA, se determinó y comparó la utilidad diagnóstica de PNAA y derivado de las plaquetas VEGF en el cáncer y los grupos de control sanos. niveles PNAA distinguir pacientes con cáncer de pulmón de individuos normales muy fiable. PNAA fue significativamente mejor predictor de cáncer de pulmón que VEGF derivado de las plaquetas en esta población estudiada. Se evaluó el análisis de supervivencia de los pacientes de cáncer de pulmón en este estudio en base a los niveles de PNAA. En nuestro estudio, la tasa de supervivencia de los pacientes con alta PNAA fue significativamente menor que los pacientes con baja PNAA. Es de destacar que los niveles preoperatorios de VEGF derivado de las plaquetas en estos pacientes no se correlacionan con un mal resultado (datos no mostrados) .Para nuestro conocimiento, este es el primer informe sobre PNAA en el CPNM.
Existen varios mecanismos por que las diversas proteínas reguladoras de la angiogénesis podrían quedar aumento en las plaquetas de los pacientes con cáncer. En primer lugar, las plaquetas podrían adquirir directamente un factor del tumor a través de endocitosis. En segundo lugar, el tumor podría estimular la megacariocitos para regular positivamente la síntesis de una proteína reguladora de la angiogénesis. En tercer lugar, porque las plaquetas contienen mRNAs y maquinaria de traducción, las plaquetas podrían también ser estimuladas para sintetizar una proteína reguladora de la angiogénesis [24]
.
En conclusión, los resultados de este estudio mostraron que el VEGF mientras PNAA, derivado de las plaquetas y TSP- 1 los niveles fueron más altos en los pacientes con CPNM antes de la cirugía que en controles sanos, solamente tanto PNAA y plaquetas niveles de VEGF derivados mostraron una diferencia estadísticamente significativa entre los dos grupos. También mostró que PNAA mayor que la mediana se asociaron mal pronóstico. Aunque derivado de plaquetas nivel de TSP-1 no parece ser un marcador para el NSCLC, PNAA puede ser más del valor que el VEGF derivado de las plaquetas en el diagnóstico y pronóstico del cáncer de pulmón de células no pequeñas.