Extracto
Antecedentes
SPARC es una proteína matricellular involucrados en la remodelación tisular, la migración celular y la angiogénesis, mientras que las funciones de la caja forkhead P3 proteínas (FOXP3) como un factor de transcripción implicados en la regulación de las células inmunes . Tanto SPARC y FOXP3 pueden desempeñar un papel anti-tumorigénico en la progresión del cáncer. El objetivo fue determinar si SPARC, FOXP3, CD8 y CD45RO niveles de expresión están asociados con el cáncer colorrectal (CCR) etapa, evolución de la enfermedad y la supervivencia específica del cáncer a largo plazo (CSS) en la etapa II y III CRC.
métodos y las conclusiones
expresión de SPARC se evaluó inicialmente en 120 emparejado I-IV CRC normal y fase. Posteriormente, aproximadamente 1000 muestras de pacientes emparejados de fase II o III CRC en microarrays de tejidos se tiñeron para SPARC, FOXP3, CD8 o CD45RO. peligros de modelado proporcional evaluó la correlación entre estos marcadores y datos clínico-patológicos, incluyendo el resultado de la enfermedad y la supervivencia específica del cáncer (CSS). Tanto SPARC y expresión FOXP3 fueron significativamente mayores en CRC de colon normal (p & lt; 0,0001). La expresión de alto SPARC correlacionado con buena evolución de la enfermedad (≥ 60 mess sin recurrencia de la enfermedad, p = 0,0039) y mejor CSS a largo plazo en la etapa II CRC (& lt; 0,0001). En el estadio III CRC, la expresión de alto SPARC correlaciona con una mejor CSS a largo plazo (p & lt; 0,0001) y el uso de la quimioterapia adyuvante menos (p = 0,01). Alta FOXP3 correlacionado con un buen resultado de la enfermedad, mejor CSS a largo plazo y menos uso de la quimioterapia adyuvante en la etapa II (p & lt; 0,0037, & lt; 0,0001 y p = 0,04, respectivamente), pero no en la etapa III CRC. Alta CD8 y expresión CD45RO correlacionan con una mejor evolución de la enfermedad en estadio II CRC, y mejor CSS, pero las diferencias no fueron tan marcadas como para SPARC y FOXP3.
Conclusiones
Estos datos sugieren que la alta SPARC y FOXP3 se asocian con un mejor resultado de la enfermedad en estadio II CRC y pueden ser indicadores pronósticos de CSS. La evaluación posterior de si estos marcadores predicen los pacientes con alto riesgo de recurrencia a la fase II CRC y los estudios funcionales de estos efectos están en marcha
Visto: Chew A, P Salama, Robbshaw A, B Klopčič, Zeps N, C Platell , et al. (2011) SPARC, FOXP3, CD8 y CD45 correlación con la recurrencia de la enfermedad y la supervivencia a largo plazo libre de enfermedad en el cáncer colorrectal. PLoS ONE 6 (7): e22047. doi: 10.1371 /journal.pone.0022047
Editor: Xin Yuan Guan, la Universidad de Hong Kong, China
Recibido: 10 Enero, 2011; Aceptado: 15 de Junio de 2011; Publicado: July 26, 2011
Derechos de Autor © 2011 Chew et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. La investigación se llevó a cabo con el apoyo de la Fundación de Investigación médica del hospital Fremantle y el Consejo de Investigación Nacional de Salud (NHMRC#458755). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer colorrectal (CCR) es altamente prevalente en la población occidental y una de las principales causas de morbilidad y mortalidad por cáncer en todo el mundo [1], [2]. Excluyendo el cáncer de piel no melanoma, el CRC es el cáncer más común en Australia y la segunda causa más común de muerte por enfermedad maligna [3], [4]. El Comité Conjunto sobre el Cáncer (AJCC) ha desarrollado un sistema de clasificación usado comúnmente para determinar el pronóstico del paciente. Hay, sin embargo, se superponen en las tasas de supervivencia a 5 años entre las etapas II y III CRC [5], [6]. Cánceres en etapa III han demostrado la extensión linfática mientras cánceres en etapa II tienen tumores localizados en la mucosa intestinal. Algunos de los tumores en estadio II, sin embargo, también pueden tener micrometástasis que no se detectan. En vista de esto, la consideración de las características biológicas del tumor, a través de la identificación de biomarcadores que predicen la extensión de la enfermedad, puede proporcionar un medio más preciso de la correlación de la etapa del cáncer con el resultado de la enfermedad, y permitir la aplicación de los tratamientos más adecuados para los pacientes individuales.
tumor infiltrante linfocitos T que expresan CD8 y CD45RO han demostrado que se correlaciona con mejores resultados de CRC [7], [8], [9], [10]. La presencia de una alta densidad de CD8
+ células T también se asocia con la ausencia de la invasión tumoral, un estadio de la enfermedad antes y mejora de la supervivencia de los pacientes [11], [12]. Alta CD45RO
+ densidades de células T en las metástasis de ganglios linfáticos y los tumores de CRC también se asocian con menos invasión tumoral, estadio de la enfermedad inferior y una mejor supervivencia de los pacientes [9], [12]. Dos posibles biomarcadores adicionales de interés en la patogénesis y el pronóstico de CRC se secretan proteína ácida y rica en cisteína (SPARC) y caja forkhead P3 (FOXP3), ya que son también tanto altamente expresado en enfermedades malignas y se ha demostrado que se correlacionan significativamente con la enfermedad resultado.
SPARC es una glicoproteína matricellular que está implicada en la remodelación tisular, la reparación de heridas, la migración celular y la angiogénesis [13], [14], [15], [16]. Se expresa en numerosos tejidos, especialmente en tejidos dañados, donde es necesario matriz (ECM) remodelación extracelular en respuesta a lesiones [17]. La expresión de alto SPARC se ha asociado con el crecimiento del tumor mejorada, metástasis y mal pronóstico de la enfermedad en diversos tumores malignos incluyendo melanoma, cáncer de mama y esofágicas [6], [18], [19]. SPARC también se ha implicado en el desarrollo de pólipos del colon y la progresión tumoral CRC a través de la regulación de la ciclooxigenasa-2 (COX-2) [20] y el factor de crecimiento transformante beta-1 (TGF-1) [21]. Estos están involucrados en la regulación, y la descomposición, de la MEC que rodea las células tumorales. En los cánceres de ovario, sin embargo, los niveles de expresión alta de SPARC se asocian con un buen pronóstico [22]. Esta correlación es el resultado de la capacidad de SPARC para regular a la baja el reclutamiento de macrófagos al sitio del tumor y la producción y la actividad de la interleucina (IL) -6, prostanoides y metaloproteinasas de la matriz para disminuir la inflamación asociada [23].
FOXP3 es también un marcador biológico de interés y es el factor de transcripción clave que controla células T reguladoras (Treg) el desarrollo y la función. Tregs suprimen la activación del sistema inmune, lo que se mantiene la homeostasis del sistema inmune y la tolerancia a los antígenos propios. Al hacerlo, sin embargo, estas células pueden suprimir la respuesta inmunológica antitumoral mediante la reducción de la actividad de células T citotóxicas por contacto directo de célula a célula, o por medio de la liberación de citoquinas [24]. Una relación directa entre la presencia de células T reguladoras y la progresión del cáncer de ovario se ha demostrado, en donde el tumor FOXP3 + células T reguladoras suprime la inmunidad específica del tumor y contribuyó a la reducción de la supervivencia [25]. En el cáncer de mama, un aumento en la población Treg, tanto en la sangre y el tejido periférico tumor, también se informó y un estudio reciente ha demostrado una correlación entre la infiltración intratumoral de FOXP3 + células T reguladoras en el cáncer de mama y el riesgo de recidiva tardía [26]. Teniendo en cuenta la contribución central de FOXP3 a la función de Treg, la expresión de FOXP3 por las células tumorales puede representar un nuevo mecanismo por el cual los cánceres suprimen el sistema inmune para escapar de la destrucción
.
En este estudio se investigó SPARC y FOXP3 en la etapa II y el tejido y III CRC comparar su valor pronóstico en contra de los conocidos marcadores de pronóstico CRC CD8 y CD45RO que son expresados por los linfocitos T infiltrantes de tumores. Estos se han demostrado que se correlaciona con un mejor resultado de la enfermedad CRC [7], [8], [9], [10]. La presencia de una alta densidad de
células T CD8 + se asocia con la ausencia de invasión tumoral, un estadio de la enfermedad antes y mejoró la supervivencia de los pacientes [11], [12].
Los objetivos de este estudio servían para determinar si los niveles de SPARC y expresión de FOXP3 se asocian con la etapa CRC, evolución de la enfermedad y la supervivencia específica del cáncer a largo plazo en la etapa II y III CRC y compara el valor pronóstico de estos dos marcadores en contra de los parámetros conocidos de CRC pronósticos CD8 y CD45RO .
Materiales y Métodos
Ética declaración
la aprobación ética para este estudio se obtuvo del Comité Ético de investigación humana de la zona Servicios de Salud Metropolitano Sur y desde el Sir Charles Gairdner Comité de Ética de Investigación humana del hospital. Todos los pacientes con toma de tejido para los microarrays de tejidos firmaron un formulario de consentimiento antes de la extirpación quirúrgica del cáncer intestinal para permitir esta investigación a realizar.
Detalles del paciente
La información demográfica se recogieron retrospectivamente sobre todo pacientes de los registros de patología, e información sobre la supervivencia específica de la enfermedad se obtuvo del Registro de cáncer de Australia occidental. Todos los pacientes tuvieron un seguimiento mínimo de 60 meses o hasta la muerte. Información sobre el uso de la quimioterapia adyuvante con regímenes basados en leucovorina fluorouracilo /después de la cirugía se obtuvo de los registros médicos del hospital. Se consideró que los pacientes que han tenido una buena evolución de la enfermedad, si no hubo recurrencia de la enfermedad dentro de los 60 meses del diagnóstico, mientras que los pacientes que tuvieron recurrencia de la enfermedad dentro de los 60 meses del diagnóstico, o habían muerto a causa de su enfermedad, se considera que han tenido una enfermedad resultados pobres .
SPARC evaluación inicial ¿
niveles de SPARC se evaluaron inicialmente en secciones histológicas de AJCC estadio I al IV CRC tejido para determinar si existía una asociación con el CRC y en la que se expresó células SPARC. Esto incluyó muestras (n = 120) recogidos de una cohorte de pacientes diagnosticados con CRC 464 entre 1996 y 2002.
microarrays de tejidos (TMA)
La construcción de la TMA utilizado en este estudio ha sido previamente se describe [27]. El TMA consistió en aproximadamente 1000 casos cada uno de los estadios II y III, las muestras de tejido de archivos CRC a partir de pacientes que fueron diagnosticados con CRC durante el periodo comprendido entre 1990 1999 en el Hospital Sir Charles Gairdner. Cada caso consistió en dos núcleos de tejido tumoral de 1 mm de diámetro y 1 mm de diámetro de un núcleo adicional tomada de la mucosa del colon histológicamente normal.
Evaluación de la expresión de SPARC se llevó a cabo en 233 pacientes con estadio AJCC II y III etapa AJCC 125 CRC. análisis de la densidad de las células T de FOXP3, CD8 y CD45RO se derivó de una cohorte de pacientes más grande de las mismas muestras II y III de CRC que ha sido previamente descrito [28].
Four micrómetro de espesor de parafina fijado con formalina etapa AJCC archivado secciones embebidas de la TMA tenían la recuperación de antígenos de alta temperatura con EDTA 1 mM (pH 8) y 10 mM de tampón de citrato (pH 6). tinción no específica fue bloqueada. Los anticuerpos primarios anti-SPARC (1: 200; hematológicos Technologies Inc, Vermont, EE.UU.), anti-CD8 (clon C8 /144B, lista para su uso; Dako, Heverlee, Bélgica), CD45RO (clon UCHL1, listo para su uso; Dako) y anti-FOXP3 (1:100; Abcam, Cambridge, MA, EE.UU.) se utilizaron con una incubación durante la noche a 4 ° C. Después del lavado, las secciones fueron incubadas con 1:2 soluciones biotinilado enlace de anticuerpos universal y streptadvidin-HRP diluido (Universal LSAB + kit, DakoCytomation Carpinteria, CA) durante 30 minutos cada uno. Color fue desarrollado por incubación en una solución de 3,3-diaminobencidina (DAB) (sistema de sustrato cromógeno, DakoCytomation, Carpinteria, CA) y las secciones se contratiñeron con hematoxilina Mayers y coverslipped con Depex. La tinción sin anticuerpo primario se utilizó como control negativo. Se tomaron fotos con una cámara digital (Nikon DS-L1) en campo claro en un microscopio invertido (Nikon TE2000-U). microarrays de tejidos fueron escaneados utilizando el escáner de diapositivas Aperio ScanScope XT digital (Aperio Technologies, CA), ubicado en el Australian Microscopía & amp; Fondo para el microanálisis de Investigación en el Centro de Microscopía, Caracterización & amp; Análisis de la Universidad de Australia Occidental
Evaluación de la expresión de SPARC
El papel de SPARC en la patogénesis de diferentes tumores es altamente contextual. En tanto CRC, y el tejido normal de colon, SPARC se observó a ser casi exclusivamente expresado por las células estromales mesenquimales vimentina-positivas. Su expresión no se observó en las células malignas y se observó en sólo una muy pequeña cantidad de células epiteliales normales. SPARC expresión dentro de los tejidos malignos y control, por lo tanto, tenía que ser controlado por la cantidad de tejido estromal presente. secciones de tejido en serie se tomaron y se tiñeron para SPARC y el marcador de células mesenquimales específica, vimentina (anti-vimentina; 1:30; Novocastra Laboratories Ltd). Las células vimentina-positivas fueron morfológicamente identificados por un anatomopatólogo independiente como células estromales mesenquimales. SPARC áreas positivas se determinaron utilizando un algoritmo de recuento de píxeles positivos (v8.0 ImageScope, Aperio Technologies, CA), que mide la intensidad de la tinción de los píxeles positivos, fuertes-positivos y negativos
(
Figura 1
)
. expresión SPARC solamente se midió en las regiones que contienen células vimentina-positivas y la relación de SPARC a las manchas vimentina para cada núcleo TMA se utilizó para controlar por el contenido de tejido estromal dentro de cada muestra. Todos los resultados de SPARC se presentan como una proporción de SPARC para vimentina.
SPARC y tinción vimentina de un único paciente. Imágenes demuestran secciones de tejido DAB manchados de serie tanto para SPARC y (A) (C) vimentina y el ordenador analizaron las imágenes de los respectivos tinción DAB (B y C). El azul representa DAB-negativas píxeles (zonas oscuras), los píxeles de color naranja DAB-positivas y los píxeles fuertemente DAB-positivas rojas (zonas claras). la expresión de SPARC se mide de forma selectiva sólo en las regiones del tejido que también eran vimentina-positivas.
Evaluación de la expresión de FOXP3, CD8 y CD45RO
La medición de la densidad de las células T tiene ha informado anteriormente [28] y software de análisis de imagen que se utiliza (Imagescope v8.0, Aperio) para evaluar el número de FOXP, CD8 y células CD45RO positivos (células por milímetro cuadrado). núcleos individuales se examinaron y anotados para asegurar que sólo epitelio del colon normal o tejido tumoral viable se incluyen en el área de análisis.
El análisis estadístico
Los resultados se expresaron como media ± SEM. T no apareado de Student y el análisis de Kruskal-Wallis con pruebas post de Dunn se utilizaron para comparar la expresión de SPARC y la densidad de células T entre los diferentes grupos, y un valor de p & lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo. expresión de SPARC y densidades de células T fueron clasificados como
alta
o
baja en relación con el valor de la mediana como se muestra en Salama
et al
, 2008 [28]. Todos los análisis estadísticos y gráficos fueron realizados utilizando GraphPad Prism ® paquete de software 4.0 para Windows PC (GraphPad Software, San Diego, CA, EE.UU.). La estimación del producto límite de Kaplan-Meier de la supervivencia se utilizó para calcular la supervivencia específica del cáncer a largo plazo. La variable evento fue la muerte por CCR (tal como se define mediante la codificación en el certificado de defunción del paciente). Todos los tiempos de supervivencia se calcularon a partir de la fecha de diagnóstico histológico de CRC hasta que se produjo un evento o que se mantuvo vivo en 1
er marzo de 2008.
Resultados
expresión del estroma SPARC en colónica normal el tejido frente a estadio I a IV CRC
niveles de SPARC se examinaron en 120 etapas del colon y del AJCC normales emparejados I a IV CRC. SPARC expresión fue significativamente mayor en todos los tipos de cáncer en comparación con el correspondiente tejido normal de colon
(
Figura 2A
).
También fue significativamente mayor en el CCR estadios II a IV en comparación la etapa I, sin embargo, no hubo diferencias entre las etapas II a IV
(
Figura 2B
)
. Cuando los pacientes con estadio II y III CRC se dividieron en aquellos con un buen resultado (sin recurrencia de la enfermedad dentro de los 5 años del diagnóstico) y un mal resultado (recurrencia de la enfermedad dentro de los 5 años del diagnóstico o muerte por enfermedad), los pacientes con un buen pronóstico de la enfermedad tanto en la etapa II y III tenían una mayor expresión de SPARC en el tumor primario, pero estos resultados no fueron significativamente diferentes
(
Figura 2C
).
(a) Porcentaje de células teñidas positivamente en AJCC estadio I, II, III y IV CRC en comparación con el tejido normal de colon (con). expresión SPARC fue significativamente mayor en comparación con el control CRC. Hubo un número significativamente mayor de células positivas SPARC en la etapa II, III y IV CRC en comparación con la etapa I (p = 0,092, p = 0,005 y p = 0,0007 respectivamente). Los datos presentados como un gráfico de dispersión con la media ± SEM. (B) los valores de p comparando el porcentaje de células positivas SPARC en la etapa I, II, III y IV CRC. (C) Los valores de p que comparan la expresión de SPARC en la etapa II a III buena y mala evolución CRC. No se observaron diferencias en los niveles de SPARC entre buena y mala CRC estadio II o buena y mala fase III CRC. Los datos se expresan como porcentaje de células teñidas positivamente ± SEM.
expresión del estroma SPARC en la etapa II y III CRC
TMA se emplearon para medir SPARC en una cohorte de 358 en estadio II o III pacientes de CRC. SPARC expresión fue significativamente mayor en los casos de cáncer (estadio II y III combinados) en comparación con el tejido normal de colon (p & lt; 0,0001;
Figura
3A), con diferencias estadísticamente significativas detectadas en la expresión de SPARC entre los pacientes con estadio II y III enfermedad (
Figura 3B
). Cuando los pacientes se dividieron en fase II y III de la enfermedad, ya sea un bien o un mal resultado, la expresión de SPARC fue significativamente mayor en los pacientes con un buen pronóstico de la enfermedad en estadio II CRC (p = 0,0039;
Figura 3C
) sin embargo, no se observó ninguna diferencia estadística entre los grupos en la etapa III CRC (
Figura 3D
).
(a) El SPARC a la proporción de la vimentina fue significativamente mayor en el tejido CRC en comparación con colónica normal tejido. (B) No se observaron diferencias en la expresión de SPARC entre la etapa II y III CRC. (C) SPARC fue significativamente mayor en los pacientes con un buen pronóstico de la enfermedad en estadio II CRC, pero no en (D) en estadio III CRC. Cada punto representa un paciente y las barras representan el valor medio ± SEM.
FOXP3 de células T, CD8 y CD45RO expresión en CRC
El examen de la densidad de células T usando TMA de un 967 cohorte, FOXP3 fue significativamente mayor en el tejido CRC comparación con la mucosa colónica normal (p & lt; 0,002,
Figura 4A
y
Figura 5
). Por el contrario, CD8 y CD45RO los niveles de expresión fueron significativamente menores en la mucosa colónica normal (p & lt; 0,0001,
Figura 4B y C
) consistente con los hallazgos anteriormente. Al dividir las muestras en etapas II o III, FOXP3 fue significativamente mayor en fase II en comparación con la etapa III (p & lt; 0,002,
Figura 4D
). Del mismo modo, CD8 y CD45RO los niveles de expresión fueron significativamente mayores en pacientes con estadio II CRC en comparación con la etapa III (p & lt; 0,0001 para ambos,
Figura 4E y F
). Al comparar estos marcadores con enfermedad resultados, FOXP3 fue significativamente mayor en los pacientes con una buena comparación con un mal resultado en la etapa II CRC (p = 0,0037;
Figura
6A), mientras que no hay diferencias estadísticamente significativas se observaron en estadio III CRC (
Figura 6B
). Estos resultados fueron similares para CD8 y CD45RO (p = 0,0195 y 0,0054, respectivamente,
Figura 6C, D, E y F
).
(A) la expresión de FOXP3 fue significativamente mayor en el tejido en comparación CRC al tejido normal de colon, mientras que CD8 (B) y niveles (C) CD45RO expresión fueron significativamente mayores en el tejido normal de colon en comparación con tejido CRC. Al buscar en la densidad de células T y estadio de la enfermedad (D - FOXP3; E - CD8 y F - CD45RO), la expresión de los tres marcadores fueron significativamente mayores en la etapa II CRC en comparación con la etapa III CRC. Cada punto representa un paciente y las barras representan el valor medio ± SEM.
Imágenes demuestran secciones de tejidos teñidos-DAB células positivas para CD8, células CD45RO-positivas y células FOXP3 positivos. Las imágenes fueron tomadas a 20 aumentos de exploración.
Al dividir a los pacientes en buen y mal pronóstico de la enfermedad, la expresión de FOXP3 fue significativamente mayor en los pacientes con un buen pronóstico de la enfermedad en (A) en estadio II CRC pero no en (B) en estadio III CRC. Del mismo modo, CD8 también fue significativamente mayor en los pacientes con un buen pronóstico de la enfermedad en (C) en estadio II CRC pero no en (D) en estadio III, al igual que con CD45RO en (E) en estadio II y (F) en estadio III. Cada punto representa un paciente y las barras representan el valor medio ± SE.
supervivencia específica del cáncer
Los pacientes fueron seguidos un mínimo de 60 meses o hasta la muerte. El tiempo de seguimiento medio fue de 60,6 meses para los pacientes con enfermedad en estadio II AJCC y 41,3 meses para los pacientes con enfermedad en estadio III. El SPARC media y la expresión FOXP3 en los tumores primarios de pacientes con y sin recidiva de la enfermedad en cada punto de tiempo se midieron para determinar si los niveles correlacionados con recurrencia de la enfermedad con el tiempo. Etapa II CRC pacientes sin recurrencia de la enfermedad, tenían niveles de SPARC significativamente más altos en sus tumores primarios en todo momento los puntos de hasta 60 meses, y para la mayoría de los puntos de hasta 138 meses, en comparación con aquellos pacientes que sufren una recurrencia de la enfermedad (
Figura 7A
). En el estadio III CRC, los niveles de SPARC fueron significativamente mayores en los pacientes sin recurrencia de la enfermedad 84 meses desde el diagnóstico y en adelante (
Figura 7B
). Esta asociación entre la expresión de alto SPARC y baja recurrencia de la enfermedad se vio reforzada por el análisis univariado demostrando que la diferencia entre los dos grupos (con y sin, recurrencia de la enfermedad) fue significativamente diferente tanto en fase II y III (p & lt; 0,0001;
Figura 7A y B Opiniones)
.
la media SPARC y la expresión de FOXP3 en el tumor primario se midió y se correlacionaron con la recurrencia de la enfermedad. El número de pacientes con o sin recurrencia de la enfermedad en cada momento se muestra debajo de cada gráfico. (A)
expresión de SPARC en la etapa II CRC
.
Los pacientes sin recurrencia de la enfermedad tenían niveles significativamente más altos de SPARC en todos los tiempos apuntan hasta 60 meses y para la mayoría de los puntos de hasta 138 meses en comparación con aquellos pacientes que sufrieron una recidiva de la enfermedad. La expresión general SPARC fue significativamente diferente entre los dos grupos (p & lt; 0,0001). (B)
expresión de SPARC en la etapa III CRC
.
SPARC expresión fue significativamente mayor en los pacientes sin recurrencia de la enfermedad de 84 meses y más allá. SPARC también fue significativamente diferente entre los dos grupos (p & lt; 0,0001). (C)
expresión de FOXP3 en la etapa II CRC
. FOXP3 niveles más altos también se asoció significativamente con menor recurrencia de la enfermedad como con (D)
expresión de FOXP3 en la etapa III CRC
, sin embargo, las diferencias no fueron tan marcadas como en la etapa II CRC. expresión FOXP3 fue significativamente diferente entre los dos grupos, tanto en la etapa II y III (p & lt; 0,0001). Cada punto de datos representa el nivel medio de expresión de SPARC o FOXP3 en cada momento. (*) P & lt; 0,05, (**) p. & Lt; 0,01
niveles FOXP3 más altas también se asociaron con menor recurrencia de la enfermedad en estadio II CRC (
Figura 7C
), y aunque los niveles de expresión de FOXP3 en los tumores primarios fueron diferentes entre los pacientes con y sin recidiva de la enfermedad en estadio III como diversos puntos de tiempo (
Figura 7D
), estas diferencias no fueron tan marcadas como en la enfermedad en estadio II. Al igual que con SPARC, la expresión de FOXP3 global fue significativamente diferente entre los pacientes con y sin, recurrencia de la enfermedad, tanto en fase II y III. (P & lt; 0,0001:
Figura
7C y D)
la supervivencia global
al final del período de estudio, el 27% de los pacientes habían muerto a causa de la CRC y el 22% había muerto por otras causas. Para evaluar la supervivencia global del paciente, las curvas de supervivencia de Kaplan-Meier se derivaron para mostrar niveles altos y bajos de marcadores en relación con el valor de la mediana SPARC, y su asociación con la supervivencia. Los altos niveles de SPARC y FOXP3 tanto significativamente correlacionados con una mejor supervivencia a largo plazo (p & lt; 0,0001 y 0,0002, respectivamente;
Figura 8A y B Opiniones). Los altos niveles de CD8 y CD45RO también se correlacionó con una mejor supervivencia a largo plazo, pero en comparación con SPARC y FOXP3, la separación entre las curvas y los niveles de significación no eran tan grandes (
Figura 8C y D
). Se utilizó un análisis de supervivencia univariante para determinar el significado pronóstico de cada uno de los cuatro marcadores.
Tabla 1A muestra que
alta SPARC, FOXP3, CD8 y la expresión de CD45RO en el tejido CRC todos predecían de forma independiente la supervivencia. La combinación de los cuatro marcadores en un análisis multivariado (
Tabla 1B
) demostró que, si bien cada uno de estos marcadores tenían valor pronóstico significativo en su propia, que se utiliza en conjunto no mejorar la predicción de la supervivencia. La combinación de SPARC y FOXP3, o SPARC y CD8, sin embargo, predijo significativamente la supervivencia mejor que usar los cuatro marcadores en concierto, o la combinación de FOXP3, CD8 y CD45RO (
Tabla 1B
). Ninguna de estas combinaciones, sin embargo, eran mejores para predecir la supervivencia de SPARC usa solo.
curvas de supervivencia de Kaplan-Meier se derivaron para mostrar niveles altos y bajos de marcadores en relación con la supervivencia. niveles (A) de alta SPARC correlacionaron significativamente con una mejor supervivencia a largo plazo. (B) Los altos niveles de FOXP3 también se correlacionó significativamente con una mejor supervivencia a largo plazo. A pesar de los altos niveles (C) CD8 y (D) CD45RO expresión se asocia con una mejor supervivencia a largo plazo, la separación y el significado de las curvas no eran tan grandes.
Correlación de la patología CRC con la densidad de las células T y la expresión de SPARC
Las características patológicas de la CRC, los marcadores de células T y la expresión de SPARC se enumeran en
Cuadro 2
. La densidad de CD8
+, CD45RO
+ y FOXP3
+ células en el tejido tumoral inversamente correlacionada con la etapa AJCC (consistente con los datos de TMA;
Figura 4A
), mientras que hay una correlación significativa entre la expresión de SPARC y AJCC se observó (también consistentes con los datos de TMA
Figura 3B
). CD8
+ y CD45RO
+ expresión inversamente correlacionada con la invasión perineural, y directamente correlacionada con la respuesta linfocítica y la inestabilidad de microsatélites.
La quimioterapia adyuvante
colección TMA se produjo a partir de 1990 -96 y antes de la quimioterapia de 1994 no se le dio forma rutinaria para el CCR. De los pacientes en esta cohorte, el 8% de la fase II y el 44% de los pacientes en estadio III recibieron quimioterapia adyuvante. expresión de SPARC y densidades de células T se compararon entre los pacientes que tenían y no tenían, recibió la resección quimioterapia adyuvante post-quirúrgica (
Tabla 3
). La relación de SPARC para vimentina expresión fue significativamente mayor en los pacientes con estadio III CRC, que no habían recibido tratamiento adyuvante (p = 0,01), mientras que en los pacientes con estadio II CRC, FOXP3
+ densidad celular fue significativamente mayor en los pacientes que había recibido terapia adyuvante en comparación con aquellos que no tenían (p = 0,04).
Discusión
la migración celular o invasión a través de la membrana basal y la diseminación a distancia a través de los sistemas linfáticos o vasculares son características inherentes de la enfermedad maligna y tener un impacto significativo sobre el resultado de la enfermedad [3]. Estos procesos migratorios requieren la regulación diferencial de adhesivo y moléculas anti-adhesivas, y se ha sugerido que SPARC puede jugar un papel clave en los procesos iniciales de la invasividad tumoral y la modulación ECM es debido a sus propiedades anti-adhesivas. células Treg también pueden contribuir a la enfermedad maligna mediante la supresión de las respuestas inmunes anti-tumorales locales dentro del microambiente del tumor [29], [30]. La presencia de un alto número de células T FOXP3-positiva se ha asociado con un mayor riesgo de recurrencia de la enfermedad y la mala supervivencia global de los pacientes con tumores sólidos [29]. estadificación de la enfermedad AJCC se basa en pruebas histológicas de infiltración y metástasis, que era, por lo tanto, la hipótesis de que la expresión de FOXP3 SPARC y pueden estar asociados con la enfermedad en estadio CRC primaria y la supervivencia específica del cáncer.
En este estudio se observó una mayor proporción de SPARC para vimentina en CRCs, independientemente del estadio de la enfermedad, que en el tejido de control, lo que sugiere un papel para SPARC en la carcinogénesis colorrectal. Etapas II, III y IV CRC todos tenían significativamente más alta expresión de SPARC de la etapa I, sin embargo, no hubo diferencias significativas observadas entre las etapas II, III o IV CRC, lo que indica que aunque la expresión de SPARC fue mayor en las etapas intermedias y avanzadas de CRC , no siempre se correlaciona con la etapa del cáncer como anteriormente se ha sugerido [6], [18], [31]. Estos estudios, realizados en carcinoma gástrico humano [6], CRC [31] de mama [18] y el cáncer de esófago [32], identificó que SPARC era un pobre marcador de pronóstico, y se asoció con tumores más agresivos y altamente metastásicas. Nuestros resultados, sin embargo, demostraron que los niveles más altos de expresión de SPARC en el CRC primaria se asoció con una buena evolución de la enfermedad y una mejor a largo plazo libre de cáncer de supervivencia & gt; 60 meses, tanto en la etapa II y III CRC, y por el contrario que SPARC menor expresión se asoció con un estadio de la enfermedad clínica más avanzada.
Nuestros resultados son consistentes con la observación de que redujo los niveles de SPARC en xenoinjertos de CRC primaria puede aumentar la resistencia del tumor a la radiación y agentes quimioterapéuticos [33]. Radiosensibilidad y la respuesta a 5-fluorouracilo e irinotecán en los xenoinjertos de ratón, sin embargo, fue capaz de ser restaurada por la re-expresión de SPARC, mientras que la sobreexpresión de SPARC en xenoinjertos de CRC mejorarse la sensibilidad del tumor a la radiación y la quimioterapia [33]. Aunque antes de la quimioterapia de 1994 no era de rutina, en nuestro estudio, que recoge muestras de 1990 a 1996, la mayoría de los pacientes con estadio III CRC y mayor expresión de SPARC no recibió quimioterapia. Esto sugiere la posibilidad de que, no sólo es SPARC capaz de sensibilizar células CRC a la quimioterapia [33], [34], pero mayor expresión SPARC puede estar asociada con otras características clínicas que piensa que el médico hace que el tumor menos agresivo y por lo tanto no requiere adyuvante terapia.
SPARC puede ser potencialmente anti-tumorigénico través de la inducción de un microambiente que es no permisiva para la progresión del tumor [35]. Chlenski
et al
, demostró que la expresión de SPARC mejorada en xenoinjertos de ratón a través de células transfectadas, resultó en una disminución en la expresión de actina de músculo liso, así como retraso del crecimiento de xenoinjerto, la inhibición de la angiogénesis y más estroma tumoral en comparación con el de tipo salvaje tipo y vectores de control 293 xenoinjertos [35]. Co-cultivo de las células transfectadas con SPARC-de tipo salvaje o xenoinjertos de control de vectores también dio lugar a un menor número de fibroblastos activados que no pudieron producir suficiente ECM para apoyar el crecimiento del tumor. Mediante la alteración de la composición de la estroma tumoral a través de la inhibición de las células vasculares, el reclutamiento de fibroblastos de acogida y la prevención de la activación de los fibroblastos, se sugirió que SPARC puede jugar un papel en "normalizar" el estroma tumoral, que conduce a un microambiente que no es de apoyo