Extracto
Las alteraciones del ADN mitocondrial (ADNmt) se han asociado con el riesgo de varios cánceres humanos; sin embargo, la relación entre el número de copias de ADNmt en los leucocitos de sangre periférica (PBL) y el riesgo de cáncer de próstata (CaP) no se ha investigado. En un estudio de casos y controles de 196 pacientes con CaP y 196 controles sanos emparejados por edad en una población china Han, la asociación entre el ADN mitocondrial de copia se evaluó el número de PBL y el riesgo de CaP. El número de copias de ADNmt relativa se midió utilizando cuantitativa en tiempo real PCR; muestras de tres casos y dos controles no podrían ensayarse, dejando 193 casos y 194 controles para el análisis. pacientes con CaP tenían significativamente más altos ADNmt número de copias que en los controles (medianas 0,91 y 0,82, respectivamente;
P Hotel & lt; 0,001). Una dicotomía en el valor de la mediana del número de copias de ADNmt en los controles, número de copias de ADN mitocondrial se asoció significativamente con un mayor riesgo de CaP (odds ratio ajustada = 1,85, 95% intervalo de confianza: 1,21 a 2,83). Se observó una relación dosis-respuesta significativa entre el número de copias de ADN mitocondrial y el riesgo de CaP en el análisis cuartil (
P
tendencia = 0,011). El análisis clínico-patológico mostró que los altos ADNmt número de copias en pacientes con CaP se asociaron significativamente con la puntuación de Gleason alta y el estadio tumoral avanzado, pero no en suero nivel de antígeno prostático específico (
P = 0,002
, 0,012 y 0,544, respectivamente). Estos hallazgos del presente estudio indican que el aumento de número de copias de ADNmt en los PBL se asoció significativamente con un mayor riesgo de CaP y puede ser un reflejo de la carga tumoral
Visto:. Zhou W, Zhu M, Gui M, Huang L, Long Z, Wang L, et al. (2014) Número de sangre periférica de ADN mitocondrial de copia se asocia con el cáncer de próstata riesgos y la carga tumoral. PLoS ONE 9 (10): e109470. doi: 10.1371 /journal.pone.0109470
Editor: Craig N. Robson, Instituto del Norte para la Investigación del Cáncer, Reino Unido
Recibido: 23 Junio, 2014; Aceptado: August 22, 2014; Publicado: 3 Octubre 2014
Derechos de Autor © 2014 Zhou et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos están disponibles en Dryad: doi:. 10.5061 /dryad.88896
Financiación: Esta investigación fue apoyada por los Fondos de Investigación Fundamental para las Universidades Centrales de la Universidad Central del Sur (72150050368). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
ADN mitocondrial humano (ADNmt) es un cromosoma 16.569 pares de bases que es bicatenario y circular en la naturaleza. Es la madre se hereda y codifica para subunidades polipeptídicas 13 de núcleo que componen los complejos respiratorios cadena, dos rRNAs, y un conjunto de 22 tRNAs, que son necesarios para la síntesis proteica mitocondrial [1]. En comparación con el ADN nuclear, el ADNmt carece de ambos intrones y las histonas protectoras y también ha disminuido la capacidad de reparación del ADN. Estas características lo hacen especialmente susceptibles a las especies reactivas de oxígeno (ROS) y otros tipos de daños que pudieran conducir a la secuencia de mutaciones o alteraciones del número de copias [2], [3]. Tales alteraciones de ADNmt podrían afectar posteriormente la expresión de genes mitocondriales, así como una amplia gama de funciones mitocondriales tales como la producción de energía, la transducción de señales, la regulación del ciclo celular, la diferenciación celular, apoptosis, y el crecimiento [4]. Por lo tanto, los cambios anormales en el ADNmt podrían potencialmente resultar en deficiencias en la fosforilación oxidativa, mejoras en la producción de ROS durante el metabolismo aeróbico, o incluso dan lugar a un estado maligno.
El cáncer de próstata (CaP) es la segunda más frecuentemente diagnosticado el cáncer y la sexta causa principal de muerte por cáncer en los hombres, con un estimado de 914.000 nuevos casos y 258.000 muertes que se producen cada año en todo el mundo [5]. Históricamente la incidencia de CaP ha sido significativamente menor en Asia que en los hombres de raza blanca; Sin embargo, en China, como los estilos de vida son cada vez más occidentalizada, la tasa de incidencia de CaP se ha incrementado significativamente en los últimos años. Hasta ahora, el antígeno específico de la próstata en suero (PSA) es el mejor marcador tumoral prostático específico disponible. Sin embargo, hay un debate en curso polémica sobre el uso de la prueba de PSA en suero de PCa [6]. Una tasa estimada de sobrediagnóstico de hasta el 50% ha sido reportado, y los efectos secundarios adversos relacionados con tratamientos innecesarios que el beneficio general de los medios de detección de PSA claro [7]. Por lo tanto, es necesaria la identificación de marcadores moleculares adicionales para mejorar la detección y el diagnóstico de CaP.
estudios retrospectivos y prospectivos múltiples han investigado la asociación del número de copias de ADN mitocondrial constitutiva en leucocitos de sangre periférica (PBL) con el riesgo de tipos de cáncer [8] - [21]. Hasta ahora, la relación entre el número de copias de ADNmt en PBLs y no se ha establecido el riesgo CaP. En los siguientes experimentos, se utilizó un estudio de casos y controles retrospectivo de los chinos Han de evaluar la asociación del número de copias de ADN mitocondrial en los PBL con el riesgo de CaP. También se examinó si ADNmt número de copias en correlación con las características clínico-patológicas de los pacientes con CaP.
Materiales y Métodos
datos
Población de estudio y epidemiológicos
Un total de 196 pacientes con diagnóstico histológico de primaria adenocarcinoma de próstata fueron reclutados consecutivamente entre enero 1 de 2006 y el 1 de septiembre de 2012 en el hospital y Hunan Provincial de Tumores del hospital Tercer Xiangya, ambos de los cuales están afiliados a la Universidad central del Sur (Changsha, china). Estos pacientes representaban el 84% de todos los casos nuevos diagnosticados en los dos hospitales durante el período de estudio. Ninguno de los casos había recibido ningún tratamiento previo relacionado con el CaP, tenía un historial de cualquier otro tipo de cáncer, o severas comorbilidades médicas que incluyen la enfermedad cardiaca, infarto cerebral activa, o una infección grave en los últimos tres meses. Todos los pacientes fueron sometidos a evaluación previa al tratamiento, incluyendo la gammagrafía ósea, radiografía de tórax, y ya sea una tomografía computarizada (TC) o resonancia magnética (IRM) del abdomen y la pelvis para evaluar el estado del tumor. etapa de CaP se clasificó de acuerdo a la séptima Comité Conjunto sobre el Cáncer del sistema (AJCC).
Como controles, 196 emparejados por edad (± 2 años) sujetos sanos de la provincia de Hunan durante el mismo período de tiempo como el caso de inscripción se inscribieron desde el Centro de Gestión de la Salud del hospital Tercer Xiangya. Control de los sujetos tenía un nivel de PSA de menos de 4 ng /ml, tenía un tacto rectal normal y no tenía ni una historia previa de cáncer ni ninguna de las comorbilidades médicas antes mencionadas. Aproximadamente el 82% de las personas invitadas a participar como sujetos de control aceptaron participar en el estudio.
Todos los participantes de casos y controles eran chinos Han. Todos fueron entrevistados por entrevistadores entrenados para recopilar información, incluyendo la edad, índice de masa corporal (IMC), historia de tabaquismo, hábitos dietéticos, y la historia familiar de cáncer y su historia médica. Un fumador no se define como una persona que nunca ha fumado o que fumaban & lt; 100 cigarrillos durante su vida útil. Un individuo que fumaban & gt; 100 cigarrillos se definió como un fumador nunca. ingesta de grasas en la dieta diaria se clasificó en tres categorías en función de los niveles de ingesta dietética de referencia de China [22]. El porcentaje de la ingesta energética diaria de grasa de la energía total & lt; 20%, 20-30% y & gt; 30% se definieron como la ingesta de grasas en la dieta diaria baja, moderada y alta, respectivamente. A la mañana siguiente después de la entrevista, se recogieron muestras de 10 ml de sangre en ayunas.
Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética de Investigación de la Universidad Central del Sur (Changsha, China). escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes. Las principales características de nuestra cohorte del estudio se resumen en la Tabla 1. No se pudo analizar muestras de tres casos y dos controles, dejando 193 casos y 194 controles para nuestro análisis.
número de copias de ADN mitocondrial evaluación por cuantitativa en tiempo real PCR
ADN genómico de alta calidad se extrae de la sangre periférica de los participantes utilizando el QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) y de acuerdo con el protocolo del fabricante. El número de copias de ADNmt relativa se midió por cuantitativa en tiempo real PCR (qPCR) como se describe anteriormente [23], [24]. En pocas palabras, dos pares de cebadores se diseñaron y se usaron para la cuantificación del número de copias de ADNmt. La primera pareja de cebadores se utilizó para la amplificación de la
ND1
gen en el ADNmt. Las secuencias de los cebadores fueron las siguientes: cebador directo (ND1-F), 5'-CCCTAAAACCCGCCACATCT-3 '; cebador inverso (ND1-R), 5'-GAGCGATGGTGAGAGCTAAGGT-3 '. El segundo par de cebadores se utilizó para la amplificación de la globulina humana gen nuclear (
HGB
). Las secuencias de los cebadores fueron las siguientes: cebador directo (HGB-1), 5'-GTGCACCTGACTCCTGAGGAGA-3 '; cebador inverso (HGB-2), 5'-CCTTGATACCAACCTGCCCAG-3 '. La mezcla de reacción PCR (10 l) para la amplificación del ADNmt consistía en 2 × SYBR Green Mastermix (COWIN Biotech, Beijing, China), 200 nmol /l ND1-F (o HGB-1) cebador, 200 nmol /l ND1-R (o HGB-2) de imprimación, y 5 ng de ADN genómico. Ciclos térmicos condiciones fueron 95 ° C durante 10 min seguido de 40 ciclos a 95 ° C durante 15 s, y ya sea 60 ° C (por
ND1
amplificación) o 56 ° C (por
HGB
amplificación) para 1 min. Cada muestra se realizó por triplicado en una placa de 96 pocillos con un ABI PRISM 7000 Sistema de Detección de Secuencia (Applied Biosystems, EE.UU.).
Los procedimientos para qPCR
ND1
y
HGB
se realizaron en placas de 96 pocillos por separado con las mismas muestras en las mismas posiciones así para evitar posibles efectos de posición. Durante cada ejecución, se incluyeron un control negativo (agua), un control positivo (ADN calibrador), y una curva estándar. El ADN calibrador era una muestra de ADN genómico de un sujeto control sano que se utilizó para comparar los resultados de diferentes ensayos independientes. Cada placa contenía muestras seleccionadas al azar, lo que garantiza la igualdad de representación de todos los casos y controles. El personal de laboratorio fueron ciegos a la caja o controlar el estado. Se utilizó ADN agrupado como ADN de referencia de 30 participantes que habían sido seleccionados al azar de los controles en este estudio (200 ng de ADN genómico para cada muestra). Para la curva estándar, la muestra de ADN de referencia se diluyó en serie con una dilución gradual de dos veces para generar una curva estándar de cinco puntos. Esto permitió a entre 40 y 2,5 ng de DNA en cada reacción. El
R
2 de correlación para cada curva estándar fue ≥0.99, con una desviación estándar aceptable (SD), fijado en 0,25 para los valores de Ct. De lo contrario, se repitió la muestra. La relación de la ADNmt número de copias con el único gen se determinó (
HGB
) el número de copias para cada muestra usando las curvas de calibración. Esta relación era proporcional al número de copias de ADNmt en cada muestra. La relación de cada muestra se normalizó para la muestra de ADN calibrador para estandarizar entre las diferentes carreras. Por último, con el fin de evaluar cualquier variación intra-ensayo, se ensayaron 10 muestras de ADN de la sangre de sujetos control sanos a tres veces en el mismo día. a continuación, se repitió el ensayo con las mismas muestras de ADN de la sangre en tres días diferentes para evaluar la variación inter-ensayo. Promedio de coeficientes intra-ensayo e inter-ensayo de variación fueron de 3,6% (rango, 1,1% -9,1%) y 3,9% (rango, 0,8% -7,3%), respectivamente. Estos resultados sugieren tanto de alta intra-ensayo y la fiabilidad inter-ensayo.
Los análisis estadísticos
Todos los cálculos estadísticos se realizaron utilizando el software SPSS 16.0 (IBM, Chicago, IL, EE.UU.). Las diferencias en la distribución de las características del huésped entre los casos y los controles fueron evaluados por Pearson χ
2 test para las variables categóricas y, Estudiante
t
prueba (la edad y el IMC) y la prueba de Mann-Whitney U (copias de ADNmt número) para las variables continuas. Se aplicó el análisis de correlación de Spearman en el estudio de la relación entre el número de copias de ADNmt y los factores clínico-patológicos de CaP. El número de copias de ADNmt también se analizó como una variable categórica usando mediana o distribución cuartil en los controles. regresión logística multivariante continuación, incondicional, ajustado por CaP factores potenciales de riesgo como la edad, índice de masa corporal, la ingesta de grasas en la dieta diaria, el tabaquismo y antecedentes familiares de la ACP se utilizó para evaluar la asociación entre el ADNmt número de copias y el riesgo de CaP mediante la estimación de los odds ratios ( OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC 95%). Prueba para la tendencia se realizó utilizando el valor del número de copias de ADNmt mediana para cada cuartil. Esta regresión se realizó utilizando la totalidad de los grupos de casos y de control, así como los subgrupos definidos por diferentes características demográficas y clinicopatológicas. Todas las pruebas estadísticas fueron de dos caras, y el nivel de significación estadística se fijó en
P
. & Lt; 0,05
Resultados
Un total de 196 pacientes con CaP y 196 controles sanos se incluyeron en este estudio. Las muestras de tres casos y dos controles no podrían ensayarse, dejando 193 casos y 194 controles para el análisis. Las características de la población de estudio se resumen en la Tabla 1. No hubo diferencias estadísticamente significativas entre los casos y controles en la edad y los antecedentes de tabaquismo. Sin embargo, los casos fueron más probabilidades que los controles tienen un mayor índice de masa corporal, una mayor ingesta de grasas en la dieta diaria, y una historia familiar de CaP (Tabla 1). número de copias de ADN mitocondrial media fue mayor entre los casos que entre los controles (0,91 y 0,82, respectivamente;
P Hotel & lt; 0,001, Figura 1).
Los diagramas de caja describen la mediana (línea continua a través de la recuadro), rango intercuartil y los valores atípicos (círculos fuera de los extremos de los bigotes) para cada grupo de estudio. El
P-valor es
partir de una comparación de la distribución del número de copias de ADNmt entre los casos y controles usando la prueba U de Mann Whitney.
Se realizó un análisis de regresión logística no condicional para evaluar la asociación entre número de copias de ADN mitocondrial y el riesgo de CaP. Cuando los individuos se dividieron en grupos de alta o baja en función del valor del número de copias de ADNmt mediana en controles sanos, se observó que los altos ADNmt número de copias se asoció con un mayor riesgo de CaP después de ajustar por edad, índice de masa corporal, la ingesta de grasas en la dieta diaria, el consumo de tabaco y antecedentes familiares de CaP (mayor mediana de
vs
inferior, odds ratio (OR) = 1,85; IC del 95%: 1,21 a 2,83; Tabla 2). El análisis de los datos por la distribución cuartil del número de copias de ADN mitocondrial en los controles reveló una asociación dosis-respuesta entre el ADNmt número de copias y el riesgo de CaP (cuartil más alto
vs
más bajo: OR = 2,52, IC del 95%: 1,35 a 4,70 ;
P
tendencia = 0,011;. Tabla 2) guía empresas
Para determinar si la asociación observada entre el número de copias del ADNmt más altos y el riesgo de CaP fue influenciado por factores demográficos o dietéticos, estratificar los datos en función de la edad (& lt; 70 o ≥70 años), índice de masa corporal (& lt; 25 o ≥ 25 kg /m2), el consumo de tabaco (nunca o nunca), y la ingesta de grasas en la dieta diaria (bajo /moderado o alto) y repitió la regresión logística. Los resultados mostraron una relación significativa sólo entre los sujetos que eran & lt; 70 años de edad, con sobrepeso (IMC ≥25 kg /m
2), que nunca habían fumado, o aquellos que tenían una ingesta de grasas en la dieta diaria baja o moderada (Tabla 3 ). Sin embargo, la regresión logística incondicional utilizando el test de Wald mostró que la relación entre el número de copias de ADN mitocondrial y el riesgo de CaP no se vio afectada significativamente por la edad (
P = 0,127
), índice de masa corporal (
P = 0,185
) , el consumo de tabaco (
P = 0,654
) o la ingesta de grasas en la dieta diaria (
P = 0,543
).
Para examinar si la asociación de ADNmt número de copias con riesgo de CaP puede reflejar un papel en la progresión de la enfermedad, hemos explorado posible correlación del número de copias de ADN mitocondrial con características clínico-patológicas en pacientes con CaP. Hemos observado que los pacientes con altos ADNmt número de copias eran más propensos a tener tumores en etapas AJCC superiores (
P
= 0,002) y para tener una mayor puntuación de Gleason (
P = 0,012
; Tabla 4) . Sin embargo, el número de copias de ADNmt no mostró una asociación con el nivel de PSA (
P = 0,544
). Estos resultados fueron corroborados por el análisis de correlación de Spearman, que mostró que el número de copias de ADN mitocondrial correlacionó positivamente con la etapa AJCC (
r = 0,260
,
P Hotel & lt; 0,001) y la puntuación de Gleason (
r = 0,216
,
P
= 0,003), pero no se correlacionó con el nivel de PSA (
r = 0,012
,
P = 0,872
).
Como comprobación adicional para verificar que el número de copias de ADNmt variado con ciertas características clinicopatológicas de los pacientes con CaP, se utilizaron la regresión logística no condicional después de ajustar por posibles factores de confusión, como la edad, el nivel de PSA, estadio AJCC, y la puntuación de Gleason (Tabla 5). Los pacientes en estadio III AJCC eran más propensos a tener mayores ADNmt número de copias que aquellos en estadio II (OR = 2,93, IC del 95%: 1,01 a 8,50), al igual que los pacientes en estadio IV AJCC (OR = 3,38 IC del 95%: 1,33 -8,57,
P
tendencia = 0,009). Los pacientes con una puntuación de Gleason de 7 tendían a tener mayor número de copias de ADNmt que aquellos con puntuaciones más bajas, pero esta diferencia no fue significativa (OR = 1,80 IC del 95%: 0,83 a 3,92). Se obtuvo un resultado similar para los pacientes con puntuación de Gleason de 8-10 (IC OR = 1,61, 95%: 0,73 a 3,53,
P
tendencia = 0,063). Los pacientes con niveles de PSA entre 10-20 ng /ml mostraron número de copias de ADN mitocondrial similar a los pacientes con PSA & lt; 10 ng /ml (OR = 0,66 IC del 95%: 0.17-2.58), al igual que los pacientes con PSA ≥ 20 ng /ml ( OR = 0,55, IC del 95%:. 0,20-1,53) guía empresas
Discusión
los resultados de este estudio de casos y controles, hasta donde sabemos, son la primera investigación epidemiológica molecular de leucocitos número de copias de ADN mitocondrial y el riesgo de CaP. Nuestro estudio sugiere que el número de copias de ADN mitocondrial se asocia con un mayor riesgo de CaP. Además, el número de copias de ADN mitocondrial se correlacionó positivamente con el estadio tumoral AJCC y posiblemente con una puntuación de Gleason, lo que sugiere un papel de la carga tumoral en la determinación de ADNmt número de copias de sangre
.
El mecanismo biológico de ADNmt número de copias en los PBL y el riesgo de cáncer no se conoce por completo. Las células sanguíneas funcionan como células transportadoras y como mediadores de la respuesta inmune. Por lo tanto, sangre entra en contacto e interactúa con todos los tejidos humanos y pueden transmitir una variedad de moléculas bioactivas, incluyendo oxígeno, nutrientes y metabolitos, anticuerpos, citoquinas, y hormonas [25]. Por lo tanto, el perfil de glóbulos representa un poderoso medio para explorar la patogénesis de la enfermedad y la homeostasis fisiológica y, más en general, la complejidad de la biología de sistemas [26]. En los últimos años, varios estudios con diseños de los estudios retrospectivos y prospectivos han demostrado una fuerte asociación entre el número de copias de ADNmt constitutiva en PBL y el riesgo de varios tipos de cáncer. Más específicamente, se observó un aumento del número de copias en cáncer de mama, páncreas, colon y recto, y los cánceres de pulmón y linfoma no Hodgkin [8] - [13]. Sin embargo, otros estudios han encontrado una disminución en el número de copias de ADNmt en el pecho, hígado, estómago, esófago y cáncer renal, así como sarcoma de tejidos blandos [14] - [20]. Una relación en forma de U entre el ADNmt copia se informó el número de PBL y el riesgo de cáncer colorrectal en un estudio prospectivo, con los cuartiles más altos y más bajos tanto confiere un aumento significativo del riesgo de cáncer en comparación con el segundo cuartil [27]. Recientemente, un estudio prospectivo de cáncer renal reveló que los altos ADNmt número de copias en los PBL se asoció con un mayor riesgo futuro de carcinoma de células renales [21], que era inversa con dos estudios retrospectivos anteriores [18], [19]. Estos resultados pueden indicar que el número de copias de ADNmt se correlaciona con el riesgo de cáncer de diferentes maneras para diferentes tipos de cáncer. Lamentablemente, estos resultados también pueden reflejar diferencias en el diseño del estudio, las condiciones experimentales y las poblaciones de pacientes. Estudios adicionales deberían clarificar estos hallazgos; mientras tanto, la conclusión más seguro es que la asociación exacta entre el número de copias de ADNmt y el riesgo de cáncer debe ser determinada para cada cáncer individual.
La edad es el factor de riesgo más importante de CaP, por lo que tuvimos en cuenta en todos nuestros análisis de regresión. Se cree que con la edad, una acumulación de mutaciones somáticas en el ADNmt causa deficiencias en la fosforilación oxidativa y la cadena de transporte de electrones, que, a su vez, hacen que tanto el aumento de la producción de ROS y su posterior fuga en el citoplasma [28]. Durante el proceso de envejecimiento, el estrés oxidativo elevado se asocia con el aumento de la abundancia de las mitocondrias, así como el número de copias y la integridad de ADNmt en las células humanas [3], [29]. El estrés oxidativo y mutaciones en el ADNmt que se acumulan durante el envejecimiento se cree que conduce a mayores ADNmt número de copias como un mecanismo de compensación [3], [30]. Este proceso se puede explicar sólo una parte de la asociación que se observó entre el número de copias de ADN mitocondrial y el riesgo de CaP, ya que nos encontramos ADNmt más altos del número de copias a ser un importante factor de riesgo de CaP independiente de la edad. Así, la asociación observada en nuestro estudio también puede reflejar el estrés oxidativo independiente de la edad. De hecho, los estudios en humanos han mostrado una asociación positiva entre el número de copias de ADN mitocondrial y varios marcadores de estrés oxidativo, incluidas las sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico y 8-hidroxiguanosina [31]. Aumento del número de copias de ADNmt también se ha asociado con niveles más bajos de antioxidantes en sangre [9], [31]. Estos resultados ponen de manifiesto la necesidad de explorar cómo los factores distintos del aumento del estrés oxidativo envejecimiento y por lo tanto el riesgo de CaP.
Nuestros resultados, basados en el ADNmt número de copias en las células sanguíneas, también apoyan un estudio basado en el tejido previo que mostró la contenido medio de ADNmt se aumentó en el tejido CaP en comparación con el tejido normal de la próstata [32]. Otros dos estudios también informaron que los niveles elevados del ADNmt en el suero o plasma estaban presentes en el CaP en comparación con los sujetos control [33], [34]. Por otra parte, al comparar los ADNmt número de copias por las características clínico-patológicas, se observó que el ADNmt mayores números de copias en pacientes con CaP se correlacionan con tanto mayor estadio del tumor AJCC y la puntuación de Gleason, que son las principales indicaciones que reflejan la carga tumoral, lo que sugiere una posible relación. Esto puede ayudar a explicar por qué se encontró un aumento en la circulación de ADNmt que se correlaciona con mal pronóstico en pacientes con CaP tras prostatectomía radical [33]. Del mismo modo, según lo informado por Xia et al. [14], el contenido de ADNmt en la sangre total en pacientes con cáncer de mama en estadio I fue significativamente menor que en las etapas superiores. Aunque no hemos podido descartar la posibilidad de la participación directa del número de copias de ADNmt elevada en la transformación maligna, estas líneas de evidencia han sugerido que el ADNmt puede servir como un potencial biomarcador sustituto de la carga tumoral al reflejar un proceso oncogénico subyacente, tales como mutaciones del ADN mitocondrial y el estrés oxidativo [9].
es importante notar que en líneas celulares de CaP, reducción del contenido de ADN mitocondrial conduce a la progresión del CaP, que probablemente a través de cambio de células de CaP andrógeno-dependientes de un andrógeno independiente fenotipo [35], cambios de transición epitelio-mesenquimal [36], la hipermetilación de las islas CpG de los genes supresores de tumor putativo [37], y la activación anormal de Akt2 [38], Ras [39], ERK y JNK [36]. De hecho, se encontraron bajos niveles de ADNmt en el tejido prostático que se asocia con más agresivo CaP [39]. En otros tipos de cánceres tales como hepatocelular [40], gástrico [41], de ovario cáncer [42] y de mama [36], [43], el agotamiento del contenido genoma mitocondrial se consideró también como una característica común en la progresión del cáncer. Sin embargo, en nuestro estudio de pacientes con CaP, se encontró una correlación positiva entre el número de copias de ADNmt de leucocitos y dos índices de progresión maligna (estadio AJCC y la puntuación de Gleason). Estos resultados podrían ser causadas por diferentes comportamiento biológico de las células cancerosas y PBLs. En las células cancerosas, los bajos ADNmt número de copias puede inhibir la función de la cadena respiratoria, resultando en una tolerancia más fuerte a la hipoxia y la reducción de la dependencia de la fosforilación oxidativa mitocondrial, por lo tanto conferir células tumorales ventajas de crecimiento [39], [44], [45]. En el suero, o en PBLs, sin embargo, el aumento de número de copias de ADNmt parece indicar aumento de los niveles de daño oxidativo que se ha asociado con el riesgo de cáncer [9], y puede reflejar la carga tumoral que está relacionado con el grado de malignidad [14], [33], más que la causa directa de la tumorigénesis
.
Desde mediciones repetidas de ADNmt número de copias durante el período de tratamiento en este estudio o estudios anteriores no se realizaron, la alteración de ADNmt número de copias en los PBL después del tratamiento y durante la progresión de la enfermedad siendo poco claro. Por lo tanto, los futuros estudios que utilizan medidas repetidas pueden ayudar a clarificar la relación temporal entre el número de copias de ADN mitocondrial y el desarrollo del CaP.
Nuestro estudio tiene varias limitaciones que deben tenerse en cuenta al aplicar los resultados. Al igual que con cualquier estudio de biomarcadores de casos y controles retrospectivo, nuestro estudio no nos permite determinar si los mayores ADNmt número de copias que se encuentran en pacientes con CaP son la causa o el resultado de la aparición y progresión del cáncer. Además, el tamaño de la muestra relativamente pequeña en este estudio limitado nuestra capacidad estadística para detectar interacciones entre el número de copias de ADNmt y otros factores de riesgo importantes, como los niveles de PSA. La falta de potencia estadística también puede haber llevado a nuestros resultados inciertos acerca de la asociación entre el número de copias de ADN mitocondrial y la puntuación de Gleason. Otros estudios prospectivos podrían permitir la confirmación de estos resultados iniciales con el uso de un tamaño de muestra más grande. Además, nuestro estudio se limitó a los chinos Han; la generalización a otros grupos étnicos necesita más evaluación. Por último, aunque se recogieron muestras de sangre de los casos de CaP recién diagnosticados antes del inicio de cualquier tratamiento, lo que debería reducir aún más cualquier posible impacto del tratamiento en el ADNmt número de copias, de particular importancia es si el tratamiento del CaP durante la progresión a la etapa de resistencia a los andrógenos conduce a un cambio de número de copias de ADN mitocondrial.
en conclusión, nuestros datos son los primeros en demostrar que un aumento en el número de copias del ADNmt en los PBL se asocia con un alto riesgo de CaP y, también, una alta carga tumoral en pacientes con CaP. La cuantificación del número de copias de ADNmt en PBL podría ser útil para el diagnóstico de CaP y la evaluación de la carga tumoral, y su valor potencial debe ser evaluada en series más amplias, prospectivo, multicéntrico.