Extracto
Introducción
La miosina-9 (MYH9) pertenece a la superfamilia de proteínas miosina motor de unión a la actina . Recientemente, MYH9 ha sido pensado para ser asociado con la migración de células de cáncer, invasión y metástasis. Los objetivos de este estudio fueron examinar la expresión inmunohistoquímica MYH9 en el cáncer no microcítico de pulmón de células resecado quirúrgicamente (NSCLC), y evaluar sus correlaciones con los parámetros clínico y el pronóstico de los pacientes.
Métodos
MYH9 expresión se estudió mediante inmunohistoquímica en 266 NSCLC resecado consecutivos, y se evaluaron sus asociaciones con parámetros clínico. El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier y Cox modelos de riesgos proporcionales fueron utilizados para estimar el efecto de la expresión MYH9 en la supervivencia.
Resultados
MYH9 expresión se detectó en 102 de 266 (38,3%) NSCLC. MYH9 expresión se correlacionó significativamente con la histología de adenocarcinoma (
P = 0,014
), la diferenciación más pobre ((
P = 0,033
), la invasión vascular intratumoral e invasión linfática ((
P
= 0,013 y P = 0,045, respectivamente), y un peor pronóstico ((
P = 0,032
) Además, el análisis de variables múltiples reveló que la expresión MYH9 predijo de forma independiente una peor supervivencia (HR, 2,15;. IC del 95%, 1,17-3,92; (
P
= 0,01)
Conclusión
El presente estudio reveló que MYH9 se expresa en un subconjunto de NSCLC con una naturaleza más malignos, y su. expresión es un indicador de la probabilidad de supervivencia más pobre
Visto:. Katono K, Sato Y, Jiang SX, Kobayashi M, R Nagashio, Ryuge S, et al (2015) Significado pronóstico de expresión MYH9 en resecado no. . de células no pequeñas de cáncer de pulmón PLoS ONE 10 (3): e0121460 doi:. 10.1371 /journal.pone.0121460
Editor Académico: John Souglakos, hospital general Universitario de Heraklion y Laboratorio de Biología de células Tumorales, Escuela de Medicina de la Universidad de Creta, Grecia
Recibido: 29 Agosto, 2014; Aceptado: February 1, 2015; Publicado: 31 Marzo 2015
Derechos de Autor © 2015 Katono et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel
financiación:.. los autores no recibieron ninguna financiación específica para este trabajo
Conflicto de intereses:. los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
cáncer de pulmón primario es la causa principal de muerte por cáncer en todo el mundo, con el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) que representa casi el 80% de las muertes [1]. El pronóstico de los pacientes con CPNM se correlaciona principalmente con metástasis tumoral. El proceso de la metástasis tumoral consiste en pasos complejos: que la participación de la migración de células del tumor seguida de desprendimiento desde el tumor primario, invasión en los tejidos circundantes, intravasación a los vasos sanguíneos o linfáticos, la difusión en el sistema de hemolinfa, y extravasación a sitios secundarios [2]. La comprensión de las proteínas relacionadas con la migración tumoral, la invasión y la metástasis puede ser útil como nuevos marcadores de pronóstico o dianas terapéuticas en NSCLC. Una estrecha correlación entre la metástasis y la quimiorresistencia se observa con frecuencia en pacientes humanos con cáncer, se informó de algunas moléculas que están relacionados con la metástasis y la quimiorresistencia [3,4,5]. Por lo tanto, nos centramos proteínas a partir de sub-líneas resistentes al cisplatino para detectar un nuevo marcador que indica un comportamiento clínico agresivo en el CPNM.
En el presente estudio, nos centramos en la miosina-9 (MYH9), que se incrementó en resistentes al cisplatino sub-líneas. La superfamilia miosina está representado por quince clases. La miosina-II, la miosina de dos cabezas convencional que forma filamentos bipolares, es directamente involucrados en la regulación de la citocinesis, la motilidad celular y la morfología celular en las células no musculares. Vertebrados expresan al menos dos isoformas de la miosina II de cadena pesada no musculares, se refiere como la miosina-IIA y miosina-IIB. La primera se compone de dos miosina IIA cadenas pesadas no musculares (NMMHC-IIA), denominada miosina-9 (MYH9), dos cadenas de regulación de luz (RLC), y dos cadenas ligeras esenciales. La actividad de la miosina-IIA se rige principalmente por la fosforilación de la RLC y MYH9 [6]. Debido MYH9 contribuye a la polaridad celular, la adhesión, la división y la migración [7,8], varios estudios han indicado que MYH9 juega un papel clave en la migración de células de cáncer, invasión y metástasis [9,10]. En células MCF-7 de cáncer de mama humano, MCF-7/6 células que tienen una capacidad invasiva muestran una mayor expresión de MYH9 que las células /Z MCF-A, que son no invasiva. La invasividad de las células MCF-7/6 se reduce ya sea por desmontables de MYH9 o tratamiento con blebbistatin, que inhibe la función de MYH9, lo que indica la implicación de MYH9 en la migración y la invasión de las células cancerosas. La sobreexpresión de MYH9 está relacionada con un mal pronóstico en esofágico [11], de la vejiga [12], y el cáncer gástrico [13]. Maeda et al. informado de que pacientes en estadio I con adenocarcinoma de pulmón que carecen de la expresión de cualquiera de MYH9 o vimentina tener un resultado favorable sin quimioterapia adyuvante postoperatoria [14]. Sin embargo, las relaciones entre la expresión MYH9 y las características clinicopatológicas y pronóstico de los pacientes necesitan ser estudiados más en un gran número de casos de NSCLC en las diversas etapas de la enfermedad, así como en el carcinoma de pulmón de células escamosas. El presente estudio examinó la expresión MYH9 en NSCLC resecado incluyendo los carcinomas de células escamosas de estadio patológico I-III, y se analizó la correlación con los parámetros clínico de los pacientes y su significado pronóstico.
Materiales y Métodos
Ética declaraciones
el estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Facultad de Medicina (B13-53) Universidad de Kitasato y siguió a la Declaración de Helsinki de protocolo. Todos los pacientes fueron abordados en base a las directrices éticas aprobadas, de acuerdo en participar en este estudio, y podría denegar la entrada y dejar de participar en cualquier momento. Todos los participantes demostraron su consentimiento por escrito. Los animales en este estudio fueron manejados de acuerdo con las Directrices para la Experimentación Animal de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad de Kitasato, y todos los animales protocolo experimental fue aprobado por el Comité sobre la ética de los Experimentos con Animales de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad de Kitasato (14- 16).
Las líneas celulares
El LCN1, derivado de CNECG, se estableció en nuestro laboratorio [15]. El LC-2 /ad y A549, ambas derivadas de un adenocarcinoma de pulmón, se compraron de la de bio Center RIKEN (Ibaraki, Japón) y cáncer de Banco de Recursos de Investigación Japonés (Tokyo, Japón), respectivamente. Estas células fueron cultivadas en medio RPMI-1640 (Sigma, Steinheim, Alemania) suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS; BioWest, Miami, FL, EE.UU.), 100 unidades /ml de penicilina, y 100 mg /ml de estreptomicina ( GIBCO, Auckland, Nueva Zelanda). Después de la recolección y lavado dos veces con solución salina tamponada con fosfato sin iones divalentes (PBS), las células sub-confluentes se almacenaron a -80 ° C para el análisis proteómico y se fijaron en 10% de formalina y embebidos en parafina para inmunohistoquímica. LCN1 células fueron también Amex-fijos [16] para la detección inmunohistoquímica. Las células SP2 /O-Ag14 derivados de un mieloma de ratón se adquirieron de la de bio Center RIKEN, y se cultivaron en medio RPMI-1640 suplementado con 1 × 8-azaguanina (50 × Hybri-Max, SIGMA), 10% de SFB, 100 unidades /ml de penicilina y 100 mg /ml de estreptomicina (Gibco).
resistentes al cisplatino sub-líneas
sublíneas resistentes al cisplatino (cis-LCN1, LC-2 /ad-cis, y A549-cis) se establecieron mediante el cultivo de las células durante 6 meses con cisplatino (Randa inj., Nippon Kayaku Co., Ltd., Tokio, Japón), a partir de una concentración de 25 y elevándose gradualmente a 3200 ng /ml. Resistentes al cisplatino sub-líneas se cultivaron de forma estable a una concentración de 3200 ng /ml de cisplatino durante más de 12 meses en nuestro laboratorio [17].
Generación de anticuerpos monoclonales
lisado celular
LCN1-cis se preparó con PBS (-) usando un homogeneizador ultrasónico (UH-50; SMT Company, Tokio, Japón). ratones BALB /c hembra de cinco semanas de edad se inmunizaron intraperitonealmente con 50 mg peso húmedo de lisado celular LCN1-cis en 500 ml de PBS (-) 3 veces con un intervalo de dos semanas. El título de anticuerpos se ensayó por IHC usando 100 veces sueros diluidos de los ratones inmunizados como el primer anticuerpo en las células LCN1-cis-Amex fijos. Tres días antes de la fusión celular, era intraperitoneal impulsado por la misma cantidad de lisado LCN1-cis al animal con el título más alto. preparación de hibridomas y la detección de IHC con células LCN1-cis-Amex fijos fueron descritos anteriormente [18,19].
Determinación del isotipo de anticuerpo
Un anticuerpo, designado como KU-Lu-6, que mostraron tinción membranosa en las células LCN1-cis, pero no en sus células LCN1 padre, fue capturada y más estudiado. Para determinar el isotipo del anticuerpo KU-Lu-6 establecido, se utilizó el Isostrip
Kit TM anticuerpo monoclonal de ratón Isotyping (Roche Diagnostics, Mannheim, Alemania), de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
inmunoprecipitación
el método utilizado para la inmunoprecipitación de la proteína L agarosa Pierce (Thermo Scientific, Rockford, IL, EE.UU.) en este estudio fue de acuerdo a las instrucciones del fabricante. En resumen, las células LC-2 /ad-cis se lavaron con PBS (-) y tratados con el ensayo de radio-inmunoprecipitación tampón (RIPA) que contiene completa-mini libre de EDTA (Roche Diagnostics) en hielo durante 30 min. Después de centrifugación a 15.000 rpm durante 30 min a 4 ° C, se recogió el sobrenadante. Para conjugar el anticuerpo primario, 200 l de anticuerpo primario (KU-Lu-6 hibridoma sobrenadante) y 50 l de proteína perlas de L agarosa en suspensión en tampón RIPA se incubaron con rotación a temperatura ambiente durante 30 min. Después de la centrifugación, el conjugado anticuerpo-agarosa y 500 g de proteína celular total a partir del sobrenadante LC-2 /ad-cis se incubaron con rotación a temperatura ambiente durante 30 min. Los inmunoprecipitados se recogieron por centrifugación a 15.000 rpm durante 5 min a 4 ° C. Después de lavar tres veces con tampón RIPA, el sobrenadante fue cuidadosamente eliminado y los pellets se resuspendieron en 20 l de 1 x tampón de Laemmili. Entonces, todas las muestras se hirvieron y se separaron por SDS-PAGE en gel de poliacrilamida con 10%. Después de SDS-PAGE, los geles se Zn-tiñó con el kit Gel Negativo manchas MS (Wako Pure Chemical, Tokyo, Japón), de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Identificación de proteína de antígeno
La mancha de proteína se escindió del gel de SDS-PAGE y picada a 1 mm
3, se destiñó con solución decolorante (Wako Pure Chemical), se deshidrató con 100% (v /v) ACN, y se secó en condiciones de vacío. digestión tríptica se llevó a cabo con un volumen mínimo de solución de digestión que contiene 10 ng /l de tripsina (tripsina oro, espectrometría de masas Grade, Promega Madison, WI, EE.UU.) y NH4HCO3 25 mM durante 24 horas a 37 ° C. Después de la incubación, se digirió se recogieron fragmentos de proteínas eluidas en solución, y los geles se lavaron una vez en 5% (v /v) de ácido trifluoroacético /50% (v /v) ACN y se recogen en el mismo tubo.
La fragmentos de péptidos obtenidos fueron analizados utilizando Autoflex III asociados a matriz láser de desorción /ionización de tiempo de vuelo /tiempo de vuelo espectrometría de masas (MALDI-TOF /TOF MS; Bruker Daltonik GmbH, Bremen, Alemania). Un plato desechable, manchado matriz de ácido α-ciano-4-hidroxicinámico para muestras, y el PAC Péptido Calibstandard para la calibración (96 Prespotted AnchorChip conjunto de Proteómica, Bruker Daltonik GmbH) se utilizaron. Se midieron las huellas dactilares péptido masa (PMF), y luego unos picos obtenidos a partir de PMF se midieron más de sus espectros de masas en tándem como masas de padres. MASCOT (http://www.matrixscience.com) con la base de datos de 3,85 IPI Humano (89,952 secuencias; 36,291,020 residuos), se utilizó para determinar las proteínas de datos PMF y de masas en tándem
Debido a que la KU-Lu-. 6 anticuerpo no funciona para inmunotransferencia, la prueba de absorción de anticuerpos para la confirmación del antígeno usando proteína de antígeno sintético purificado se utilizó.
Un clon de expresión MYH9 se construyó a partir del clon CU013414 y pINSOL20 vector de destino con el sistema de puerta de enlace ( Life Technologies, EE.UU.). La síntesis de proteínas se realizó mediante el método en nuestro informe anterior [20]. La cuantificación de proteína se calculó como la densidad de la banda de tinción CBB en SDS-PAGE como la proteína estándar BSA.
A cien l cada uno de los sobrenadantes no diluidos de hibridoma se pre-absorbieron con 0,12, 0,24, y 0,48 g de proteínas MYH9 sintéticos, respectivamente. A continuación, se incubaron a temperatura ambiente durante 2 horas y a 4 ° C durante la noche. Después de ser centrifugada a 20.000 g durante 10 min, se recogió cada sobrenadante y se utiliza como los primeros anticuerpos.
IHC con anticuerpos absorbidos fue descrito en 2.8.
Pacientes y tejidos especímenes
Un total de 266 pacientes con CPNM consecutivos sometidos a resección completa entre enero de 2002 diciembre de 2005 a hospital de la Universidad de Kitasato fueron incluidos en este estudio de cohorte retrospectivo. Los que recibieron la quimioterapia y /o radioterapia preoperatoria fueron excluidos. El diez por ciento de los tejidos fijados en formalina y embebidos en parafina fueron procesados en secciones de 3 micras de espesor y se tiñeron con hematoxilina y eosina. El diagnóstico histológico se basa en los criterios de la Asociación Mundial de la Salud /Organización Internacional para el Estudio de la clasificación del cáncer de pulmón de pulmón y tumores pleurales [21]. A cada paciente se volvió a evaluar de acuerdo con la 7ª edición de la clasificación TNM [22]. Los parámetros clínicos y patológicos revisaron retrospectivamente incluyen la edad a la resección quirúrgica, sexo, hábito de fumar, el tipo histológico, la diferenciación del tumor, patológico TNM (p-TNM) y la etapa, el estado ganglionar, la invasión vascular intratumoral, invasión linfática intratumoral, invasión de la pleura, que recibe la quimioterapia adyuvante, el estatus de viabilidad, y el tiempo de supervivencia después de la cirugía. El estado de la viabilidad se determinó en función de si o no relacionado con NSCLC se produjo la muerte, y se definió el tiempo de supervivencia como la duración de la fecha de la cirugía a la fecha de la muerte o al final del seguimiento. Los casos de muerte por otras causas o perdidos durante el seguimiento fueron tratados como casos censurados.
tinción inmunohistoquímica de anticuerpos KU-Lu-6
Después de deparaffinizing en xileno, de 3 micras de espesor secciones o preparaciones de células se rehidrataron en una serie de etanol descendente, y luego tratados con peróxido de hidrógeno al 3% durante 10 min. Fueron antígeno recuperados por autoclave durante 10 min en tampón de citrato 0,01 M (pH 6,0) con 0,1% de Tween 20. Después de bloquear con 2% de suero porcina /solución salina normal tamponada con Tris (0,01 M Tris-HCl, pH 7,5, NaCl 150 mM) durante 10 min, se hicieron reaccionar con no diluida sobrenadante de anticuerpo KU-Lu-6 durante la noche a temperatura ambiente . Después de ser enjuagados en solución salina Tris tamponada con tres veces durante 5 minutos cada uno, que se hicieron reaccionar con ChemMate ENVISION reactivo (DAKO, Glostrup, Dinamarca) durante 30 min a temperatura ambiente. Ellos fueron visualizados posteriormente con una solución de DAB estable (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) y de contraste con hematoxilina de Mayer. Los controles negativos se prepararon mediante la sustitución de solución salina tamponada con fosfato para el anticuerpo KU-Lu-6.
Evaluación de la tinción inmunohistoquímica
inmunotinción membranosa de las células tumorales fue considerada como positiva para el KU-Lu anticuerpo -6. La intensidad de la tinción se clasifican en tres grupos: 0 = negativo; 1 = débilmente positiva; 2 = muy positivo. Las células tumorales con una puntuación de tinción de 2 fueron juzgadas como positivas. Hemos observado en todas las células tumorales de la muestra, un tumor con tinción positiva en más de 25% de sus células tumorales fue considerada como positiva. Todas las secciones immunostained fueron revisados por dos investigadores (K. K. y S.Y.) sin conocimiento de los datos clínicos. casos discordantes fueron revisados y discutidos hasta que se alcanzó un consenso.
El análisis estadístico
Las variables continuas se presentan como la mediana (rango), mientras que las variables numéricas se dan como N (%). Las relaciones entre la expresión NMIIA y clinicopathological parámetros fueron evaluados con χ de Pearson
2 o la prueba exacta de Fisher, según corresponda. La supervivencia acumulada de los pacientes se estimó mediante el método de Kaplan-Meier y la significación de las diferencias de supervivencia entre los grupos MYH9-positivos y negativos fue probada usando la prueba de log-rank. La probabilidad acumulada de supervivencia a los 5 años se estimó mediante el método de tabla de vida con la longitud del intervalo fijado en el 1 mes. El análisis multivariante se realizó empleando el modelo de riesgos proporcionales de regresión de Cox para examinar la interacción entre la expresión MYH9 y otras variables clinicopatológicas y estimar el efecto pronóstico independiente de MYH9 sobre la supervivencia mediante el ajuste de los factores de confusión. El convencional
P
-valor de 0,05 o menos se utilizó para determinar el nivel de significación. Todos los reportados
P
-valores son de doble cara. Los análisis se realizaron de forma independiente en nuestro centro de investigación clínica usando el programa SPSS versión 17.0. (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.)
Resultados
Caracterización de anticuerpos KU-Lu-6
el uso de células LCN1-cis-Amex fijos para la detección inmunohistoquímica, que finalmente se seleccionó un clon denominado KU-Lu-6, que mostró tinción membranosa de las células LCN1-cis, pero no en las células LCN1 (Fig. 1).
tinción membranosa se observó en células LCN1-cis, pero no en células LCN1. (Aumento original: A, B × 400).
Por tinción inmunohistoquímica de KU-Lu-6 anticuerpo con líneas celulares fijados con formalina, se observó tinción intensa en las líneas celulares resistentes al cisplatino, especialmente en células LC2 /ad-cis (Fig. 2A).
KU-LU-6 sobrenadante anticuerpo se pre-absorbió con ninguno (A), 0,12 ug (B), 0,24 ug (C), y 0,48 ug (D) de las proteínas MYH9 sintéticos. Cada anticuerpo absorbido se immunostained con células /ad-cis LC2 fijados en formalina. La capacidad de tinción de anticuerpo KU-Lu-6 se redujo gradualmente en función de la concentración de proteína MYH9.
Con el fin de identificar la proteína antígeno reconocido por el anticuerpo KU-Lu-6, se realizó con IP lisado de células /ad-cis LC-2. Los resultados de IP se muestran en la Fig. 2. Se observó que la proteína antigénica en aproximadamente 250 kDa en el carril 2 (Fig. 3). No se observó ninguna señal en el carril 3 y 4 como un control negativo (Fig. 3). Para determinar la proteína antigénico reconocido por el anticuerpo KU-Lu-6, que escindieron y se recogió el punto a partir del gel Zn-manchado, y se procedió a la digestión en gel. Después del análisis empleando una búsqueda MALDI-TOF /TOF MS y la mascota, la proteína se determinó como isoforma 1 de la miosina-9 (MYH9, la adhesión: IPI00019502), que se compone de 1.960 aminoácidos con un P.M. predicho de 226 532 Da. El isotipo de inmunoglobulina de anticuerpo KU-Lu-6 se determinó como IgM, k. Por la prueba de absorción de anticuerpos, la capacidad de tinción de anticuerpo KU-Lu-6 se redujo gradualmente en función de la concentración de proteína MYH9. La capacidad de tinción de anticuerpo KU-Lu-6 se perdió completamente con 0,48 ug de proteína MYH9 (Fig 2).
Carril 1:. Lisado LC-2 /ad-cis combinado con: marcador de peso molecular, el carril 2 anticuerpo KU-Lu-6, carril 3: LC-2 lisado /ad-cis combinado con proteína L, carril 4: KU-Lu-6 anticuerpo se combina con proteína L, carril 5: LC-2 lisado /ad-cis. Los carriles 3 y 4 son los controles negativos, y no se detectó producto inmunoprecipitado con anticuerpo específico KU-Lu-6 en el carril 2 (flecha).
se expresó expresión MYH9 en CPNM
MYH9 en la membrana y el citoplasma de algunas células tumorales. Especialmente, la intensidad de la tinción fue marcada en la membrana celular. De los 266 NSCLC resecado quirúrgicamente, incluyendo 203 adenocarcinomas, 51 carcinomas de células escamosas, 10 carcinomas de células grandes, y 2 carcinomas de células adenoescamosos, expresión MYH9 positiva en las células tumorales se observó en 102 casos (38,3%) (Fig. 4). expresión MYH9 también se observó en fibroblastos en el estroma del tumor y en las células epiteliales bronquiales normales. expresión MYH9 no se detectó en las células epiteliales alveolares normales. No se observó expresión en los controles negativos
A:. MYH9 se expresa fuertemente en la membrana de las células tumorales en el adenocarcinoma. B: MYH9 se expresa fuertemente en la membrana y el citoplasma de las células tumorales en el carcinoma de células escamosas. (Aumento original: A, B × 400) guía empresas
características clinicopatológicas de los pacientes
Las características clínico-patológicas de los pacientes se resumen en la Tabla 1. Un total de 168 hombres y 98 mujeres. fueron incluidos, con edades comprendidas entre 34 y 85 años (mediana, 64 años), de los cuales 166 (62,4%) eran fumadores. La duración total de seguimiento varió de 3 a 129 meses (mediana, 84 meses). Un total de 142 pacientes estaban vivos al final del seguimiento, 88 pacientes habían muerto de cáncer de pulmón, 19 pacientes habían muerto por otras causas, y 17 pacientes se perdieron durante el seguimiento. Las causas de las 19 muertes por cáncer no pulmonares fueron neumonía (n = 11), carcinoma colangiocelular (n = 2), la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (n = 1), sepsis (n = 1), infarto cerebral (n = 1) , infarto agudo de miocardio (n = 1), el cáncer gástrico (n = 1), y la leucemia (n = 1). Ninguno de estos 19 pacientes tenían muertes relacionadas con la cirugía. En el 17 perdieron a seguimiento pacientes, todos se perdieron durante el seguimiento debido a la interrupción de la asistencia hospitalaria y no pudieron ser contactados. Las duraciones de seguimiento de los 17 pacientes perdidos durante el seguimiento varió de 15 a 92 meses (mediana, 61 meses).
Relación entre la expresión y las características clinicopatológicas MYH9
La las relaciones entre la expresión y las características clinicopatológicas MYH9 se resumen en la Tabla 2. expresión MYH9 fue detectado con mayor frecuencia en el adenocarcinoma que en carcinoma de células escamosas y otros subtipos histológicos (
P = 0,014)
. MYH9 expresión también se relacionó con la diferenciación más pobre (
P = 0,033
), la invasión vascular intratumoral (
P = 0,013
), y la invasión linfática intratumoral (
P = 0,045
) . No se encontró asociación significativa entre la expresión MYH9 y la edad, el sexo, el hábito de fumar, el estadio P-TNM, estado ganglionar, o invasión de la pleura
de Kaplan-Meier estimación de la supervivencia en MYH9-positivo y. - pacientes negativos
a todos los pacientes se incluyeron en el análisis de supervivencia. Los períodos generales de seguimiento varió de 3 a 129 meses (mediana, 84 meses), y la probabilidad acumulada de supervivencia a los 5 años fue del 70% para todos los pacientes. Debido a que aún no se había llegado a una probabilidad de supervivencia acumulada de 50%, no se determinó la mediana de supervivencia global. La probabilidad acumulada de supervivencia a los 5 años fue del 66% para el grupo MYH9-positivo y 78% para el grupo MYH9-negativo. Mientras que el tiempo medio de supervivencia no estaba disponible, la tasa de supervivencia del grupo MYH9 positivos fue significativamente más pobres grupo (
P = 0,029
) (Fig. 5A). En otros análisis, expresión MYH9 se correlacionó significativamente con una peor supervivencia en pacientes con adenocarcinoma bien (
P
= 0,007) (Fig. 5B) o carcinoma de células escamosas (
P = 0,032
) (Fig . 5C). La probabilidad de supervivencia a los 5 años fue del 69 y el 85% para MYH9-positivos y negativos-pacientes con adenocarcinoma, respectivamente, y el 43 y el 74% para MYH9-positivos y negativos pacientes con carcinoma de células escamosas, respectivamente.
(A ) para todos los pacientes; (B) para los pacientes con adenocarcinoma; (C) para los pacientes con carcinoma de células escamosas, el tratamiento de todas las demás causas de la muerte y la pérdida de seguimiento, según los casos censurados. MYH9 expresión se correlacionó significativamente con una peor supervivencia en NSCLC resecado.
Efecto de la expresión MYH9 en la supervivencia con uni y multivariable
análisis
El análisis univariable se realizó de acuerdo con el modelo de riesgo proporcional de Cox para evaluar el efecto de la expresión MYH9 y otros factores clinicopatológicos en la supervivencia. Los resultados indicaron que el tipo histológico (HR, 1,94; IC del 95%, 1.23 a 3.6;
P
= 0,004), el estadio TNM-p (HR, 4,58; IC del 95%, 2,89-7,26;
P Hotel & lt; 0,001), la quimioterapia adyuvante (HR, 2,81; IC del 95%, 1,73-4,57;
P Hotel & lt; 0,001), la diferenciación del tumor (HR, 2,45; IC del 95%, 1.53- 3,92;
P Hotel & lt; 0,001), la invasión vascular (HR, 5,67; IC del 95%, 3,25-9,90;
P Hotel & lt; 0,001), invasión linfática (HR, 4,43; 95% CI, 2,65 a 7,40;
P Hotel & lt; 0,001), invasión de la pleura (HR, 2,64; IC del 95%, 1,73-4,03;
P Hotel & lt; 0,001), y la expresión MYH9 (HR , 1,57; IC del 95%, 1,03-2,39;
P
= 0,03) fueron predictores significativos de la supervivencia específica del cáncer. Además, la expresión MYH9 y otras variables clinicopathlogical incluyendo el tipo histológico, estadio TNM-p, la quimioterapia adyuvante, la diferenciación tumoral, invasión vascular, invasión linfática y la invasión de la pleura se introdujeron en el análisis multivariante utilizando el modelo de regresión de riesgos proporcionales de Cox. Los resultados indicaron que la expresión MYH9 fue un predictor independiente de una forma significativa la supervivencia más pobre. (HR, 2,15; IC del 95%, 1,17-3,92;
P
= 0,01) (Tabla 3) guía empresas
Discusión
en el presente estudio, MYH9 se expresó en 102 de 266 (38,3%) NSCLC, y su expresión se correlacionó significativamente con una histología de adenocarcinoma, la diferenciación más pobre, y vascular intratumoral e invasión linfática. De acuerdo con los informes anteriores de esófago [11], la vejiga [12] y el cáncer gástrico [13], el presente estudio reveló que la expresión MYH9 es un factor pronóstico independiente y se asocia con un peor pronóstico de los pacientes con NSCLC resecado. Aunque Maeda et al. informaron que los pacientes con estadio I adenocarcinoma de pulmón que carecen de la expresión de cualquiera MYH9 o vimentina mostrar un resultado favorable sin quimioterapia adyuvante postoperatoria [14], el presente estudio reveló que la expresión MYH9 es un factor pronóstico independiente de supervivencia en pacientes con NSCLC resecado incluyendo el estadio patológico I-III y el carcinoma de células escamosas de pulmón.
en el presente estudio, se detectó la tinción MYH9 tanto en la membrana y el citoplasma de algunas células tumorales, aunque la intensidad de la tinción fue marcadamente más fuerte en la membrana celular. En MDA-MB-231 células de cáncer de mama difusión de fibronectina, MYH9 se observa en la difusión región laminar marginal de las células [9]. Debido MYH9 se divulga para contribuir a la polaridad celular y lamellipodia en la periferia de la célula y borde de ataque, intensidad de la tinción fuerte en la membrana celular puede reflejar la actividad MYH9 en la migración celular y la invasión del cáncer.
invasión microambiente local, tales como permeación linfovascular intratumoral, es un paso importante en la primera etapa de la metástasis tumoral. MYH9 contribuye a la migración celular que se requiere para la invasión del microambiente local.
in vitro
, varios estudios informaron que las células-agotado MYH9 mostraron migración defectuosa [10,11]. Además, la formación de lamelipodios en el borde delantero de la celda es necesario para la migración [23], y dicha formación es controlado por Rac, el complejo WAVE, y Arp2 /3complex [24]. Recientemente, Morimura et al. informó de que MYH9 también es necesario para la formación de lamellipodia mediante la unión a WAVE2 [25]. Por lo tanto, la expresión MYH9 puede estar asociada con la adquisición de capacidades de migración e invasión de células tumorales, que posteriormente da lugar a la invasión linfovascular altamente intratumoral, y un peor pronóstico en el presente estudio.
En el presente estudio, la expresión era MYH9 correlacionó significativamente con la diferenciación del tumor más pobre. Pobremente diferenciado carcinoma se caracteriza por la facilitación de la citocinesis. En la citocinesis, las células acumulan un anillo contráctil que contrae la membrana plasmática para generar dos células hijas conectadas por un puente citoplásmico. MYH9 contribuye a la contracción del anillo contráctil y juega un papel clave en la citocinesis [26,27]. Por otra parte, un estudio anterior informó de que el tratamiento con blebbistatin, un inhibidor de MYH9, conduce al fallo de la citocinesis [28]. Por lo tanto, no es sorprendente que la expresión MYH9 está asociada con la diferenciación del tumor más pobre en el presente estudio.
Conclusión
Nos han informado de que MYH9 se expresa en un subconjunto de CPNM, y su expresión es en relación con la histología de adenocarcinoma, la diferenciación más pobre, la invasión vascular intratumoral, invasión linfática intratumoral, y un peor pronóstico. MYH9 expresión es un factor pronóstico independiente de supervivencia en pacientes con NSCLC resecado, aunque su importancia pronóstica aún requiere confirmación con grandes poblaciones de pacientes.