Extracto
Introducción
El pronóstico de los pacientes con cáncer de laringe operativa es muy variable y por lo tanto están garantizados biomarcadores pronósticos potentes. El receptor del factor de crecimiento similar a la insulina (IGFR) vía de señalización juega un papel crítico en la carcinogénesis y la progresión de la laringe.
Pacientes y métodos
Se identificaron todos los pacientes con estadio TNM localizado el cáncer de laringe I-III conseguido con la cirugía potencialmente curativa entre 1985 y 2008. inmunohistoquímica de la expresión de IGF1 R-alfa, beta y IGF1R-IGF2R se evaluó mediante la puntuación inmunorreactiva (IRS) y los niveles de mRNA de los efectores importantes de la vía RFIG (IHC) fueron evaluados, incluyendo IGF1R, proteína de unión a IGF-3 (IGFBP3), supresor de la señalización 2 (Socs2) de citoquinas y miembros de la MAP-quinasa (MAP2K1, MAPK9) y quinasa (PIK3CA, PIK3R1) familias-3-fosfatidil inositol. Se aplicaron modelos de regresión de Cox-evaluar el valor predictivo de los biomarcadores en la supervivencia libre de enfermedad (DFS) y supervivencia global (OS).
Resultados
Entre los 289 pacientes elegibles, el 95,2% se encontraban al corriente o ex fumadores, el 75,4% eran adictos al alcohol, el 15,6% tenían enfermedad con ganglios positivos y el 32,2% había recibido irradiación postoperatoria. Después de una mediana de seguimiento de 74,5 meses, la mediana de SSE fue de 94,5 meses y la mediana de SG fue de 106,3 meses. El uso de la mediana IRS como el de corte de pre-definido, los pacientes cuyos tumores habían aumentado citoplasma IGF1R-alfa o expresión en la membrana experimentado DFS marginalmente más cortos y OS significativamente más cortos en comparación con aquellos cuyos tumores tenían baja expresión de IGF1R-alfa (91,1 vs 106,2 meses, p = 0,0538 y 100,3 vs 118,6 meses, p = 0,0157, respectivamente). El aumento de los niveles de mRNA de MAPK9 se asociaron con DFS prolongada (p = 0,0655) y OS (p = 0,0344). En el análisis multivariante, la sobreexpresión IGF1R-alfa se asoció con un aumento del 46,6% en la probabilidad de recaída (p = 0,0374). Los predictores independientes de la mala OS incluyeron enfermedad con ganglios positivos (HR = 2,569, p & lt; 0,0001)., subglótica /localización transglóticos (HR = 1,756, p = 0,0438) y de IGF1 R-alfa sobreexpresión de la proteína (HR = 1,475, p = 0,0504)
Conclusión
IGF1 R-alfa sobreexpresión de la proteína pueden servir como un predictor independiente de recaídas y la supervivencia en el cáncer de laringe operable. se justifica la evaluación prospectiva de la utilidad pronóstica de IGF1 R-alfa
Visto:. Mountzios G, I Kostopoulos, Kotoula V, Sfakianaki I, Fountzilas E, Markou K, et al. (2013) La insulina factor de crecimiento similar 1 Receptor (IGF1R) Expresión y la supervivencia en operable escamosas-Cell cáncer de la laringe. PLoS ONE 8 (1): e54048. doi: 10.1371 /journal.pone.0054048
Editor: Rodrigo Alejandro Panepucci, Hemocentro de Ribeirao Preto, HC-FMRP-USP, Brasil |
Recibido: 30 Julio, 2012; Aceptado: 5 de diciembre de 2012; Publicado: 24 Enero 2013
Derechos de Autor © 2013 Mountzios et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue parcialmente financiado por el Cooperative Oncology Group Helénica (beca de investigación HE R_5G). La fuente de financiación no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de laringe representa la forma más común de carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (CECC) en poblaciones con alta prevalencia del hábito de fumar. Representa alrededor de 160.000 nuevos casos por año y el 2,5% de todos los tumores en los hombres, el cáncer de laringe sigue siendo una importante carga de la enfermedad en todo el mundo [1]. A pesar de los recientes avances en el manejo multidisciplinario de las primeras etapas de la enfermedad, incluyendo protocolos de extirpación o la laringe-quirúrgicos de preservación de ejecución quimiorradioterapia, una proporción sustancial de pacientes con enfermedad localizado o localmente avanzado con el tiempo recaída y morir [2]. Incluso para los pacientes que se someten al proceso de mutilación de la laringectomía total, el pronóstico es muy variable y unpredictible, haciendo que la necesidad de identificar marcadores pronósticos potentes una prioridad médica. una estimación precisa y reproducible de pronóstico en pacientes con cáncer de laringe temprana permitiría un tratamiento agresivo de las personas con alto riesgo de recaída y se evitaría el sobretratamiento potencialmente peligrosa en el grupo con un resultado favorable presunta.
La insulina y similar a la insulina receptor del factor de crecimiento (IGFR) - mediada vías moleculares han surgido recientemente como importantes efectores de la transformación neoplásica en diversos tumores malignos del tracto aerodigestivo, incluyendo el cáncer de pulmón no de células pequeñas [3], [4], el cáncer [5], [6 tiroides ], cáncer de esófago [7] y SCCHN [8]. La vía de IGFR comprende dos ligandos (IGF1 y IGF2), sus proteínas de unión (los más abundantes son IGFBP-3) y dos receptores (IGF1R y IGF2R), [2]. A diferencia de la insulina, que actúa como una hormona típica, IGF1 y IGF2 tienen credenciales tanto como hormonas con propiedades autocrinos y como factores de crecimiento de tejido circulante; IGF1R tiene la capacidad de transducción de señales a través de tirosina quinasa intracelular relacionado con RAS /RAF /mitogen proteína quinasa activada (MAPK) y la quinasa (PI3K) vías -Akt-3 fosfatidil-inositol [9]. Precursor de escisión polipéptido conduce a la presencia de dos isoformas de IGF1R: isoforma alfa (IGF1R-alfa), que se expresa preferentemente en muchos tipos de cáncer y es capaz de unirse a la insulina, IGF1 y IGF2, y isoforma-beta (IGF1R-beta), que se une exclusivamente a la insulina [10]. IGF2R, por otra parte, se une sólo a IGF2, es estructuralmente distinta en el sentido de que carece de un dominio de tirosina quinasa intracelular, y por lo tanto se le priva de la capacidad de transducir señales mitogénicas, actuando principalmente como un "buffer 'para bioactividad IGF2 [ ,,,0],10]. El supresor de la familia de las citocinas de señalización (SOC) de las proteínas son inhibidores de las vías de señalización a través de un bucle de retroalimentación negativa que implican principalmente la inhibición de la actividad quinasa Janus-[11], [12]. Datos más recientes, sin embargo, sugieren que las proteínas SOCS y especialmente Socs2 también pueden modular IGF1R señalización mediada [13], [14]. Es importante destacar que los estudios preclínicos y de la traducción muestran que los componentes de la vía de IGFR mediada están implicados en el riesgo de SCCHN [15], angiogénesis [16], la farmacogenética [17], [18], la quimiosensibilidad [19], la inmunoterapia [20] y la radiación respuesta [21].
en un reciente trabajo seminal en el campo [22] un predictor de recurrencia de múltiples genes en el cáncer laríngeo temprano fue desarrollado y validado. En ese estudio, un grupo de genes que codifican para miembros de la vía RFIG surgió como una herramienta de pronóstico potente capaz de discriminar pacientes con mal y favorable pronóstico (p & lt; 0,0001 en el conjunto de entrenamiento y p = 0,0001 en el primer conjunto de validación) [22 ]. Estos resultados generan la hipótesis de que la expresión de proteínas y niveles de mRNA de los efectores más importantes de la vía de IGFR pueden estar asociados con el resultado clínico en pacientes con cáncer de laringe temprano y por lo tanto pueden servir como marcadores biológicos como predictivos de recaída y la supervivencia en este entorno. Para probar esta hipótesis, se analizó de forma retrospectiva la transcripción del gen tumoral de los elementos importantes de la vía IGFR y se evaluó la expresión de proteínas de las mismas moléculas en las células tumorales de pacientes con cáncer de laringe resecado quirúrgicamente.
Características y métodos Pacientes
cohorte de pacientes
El estudio se realizó de forma retrospectiva en una cohorte de pacientes con cáncer de laringe etapa localizada I-III (clasificación TNM 6ª, disponible en: http://www.uicc.org/node/7735) lograron entre mayo de 1985 y junio de 2008 en el Departamento de ORL "AHEPA" hospital de Tesalónica, Grecia, con resección potencialmente curativa con o sin irradiación de haz externo. El presente estudio fue aprobado por el Comité de Bioética de la Universidad Aristóteles de Tesalónica, Escuela de Medicina. La omisión del consentimiento se obtuvo de esta comisión para todos los pacientes incluidos en el estudio antes de 2003. Todos los pacientes incluidos en el estudio después de 2003 siempre que su consentimiento informado por escrito para la provisión de material biológico para futuros estudios de investigación. El estudio cumplió con las recomendaciones observación de marcadores tumorales estudios de pronóstico utilizando material biológico (disponible en http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2361579).
Los pacientes fueron evaluados clínicamente en visitas mensuales durante el primer año después de la cirugía y cada dos meses a partir de entonces y puesta en escena con radiografía de tórax, cuello del útero, pecho y tomografía computarizada abdominal superior escanea cada seis meses durante los dos primeros años después de la cirugía y posteriormente cada año o antes si está clínicamente indicado. Otros procedimientos de diagnóstico o estadificación se realizaron en indicaciones clínicas o síntomas de alerta. Evaluación del efecto del tratamiento se realizó de acuerdo con los criterios RECIST para tumores sólidos (www.eortc.be/recist/documents/RECISTGuidelines.pdf~~number=plural).
La evaluación histológica
Un hematoxilina-eosina patólogo experimentado revisado (H & amp; e) portaobjetos teñidos de bloques de tejido para la adecuación de los materiales y el cálculo del porcentaje de células tumorales en cada caso. Doscientos ochenta y nueve bloques de parafina de tejido fijados con formol fueron evaluados histológicamente en cuanto a tipo de tumor y 285 de ellos con suficiente tejido tumoral fueron marcados para la disección manual. Este último se realizó en secciones de forma rutinaria desparafinados con el fin de aumentar el contenido de células tumorales en las plantillas moleculares extraídos, que contenían & gt; 50% células tumorales en 64.2% de los casos y 30 a 50% en las restantes. El diagrama de flujo del estudio, incluyendo los números de las muestras correspondientes se presentan en la Figura 1 (diagrama OBSERVACIÓN).
La extracción de RNA y la metodología de RT-qPCR
Un total de 230 que contiene el tumor bloques de parafina estaban disponibles para las investigaciones moleculares (Figura 1). Macrodissection se realizó en los casos con & lt; 50% las células tumorales con el fin de aumentar el contenido de células tumorales en muestras moleculares. Tras la desparafinación y durante la noche de lisis fragmento de tejido con proteinasa K a 56 ° C, se extrajo el ARN con TRIzol® LS Reactivo y transcripción inversa con cebadores aleatorios (cat. No 48190-011) y la Superscript® III transcriptasa inversa (todos los reactivos de Invitrogen /Life Technologies, Paisley, Reino Unido), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Al medidas de UV, 0,5-3 ug ARN total fueron transcritas inversa, los ADNc se normalizaron a 25 ng de molde /ul y se mantiene a -20 ° C hasta su uso. la expresión del ARNm se evaluó en relación con sondas de hidrólisis qPCR y mediante el uso de un solo tubo preparado de antemano TaqMan Gene ensayos de expresión (Applied Biosystems /Life Technologies) en un sistema de ABI7900HT en condiciones predeterminadas para los siguientes objetivos (entre paréntesis: ensayo de Identificación; GenBank referencia, la ubicación de amplificación ; tamaño): IGF1R (Hs00609566_m1; NM_000875.3; exones 10-11; 64 pb), IGFBP3 (Hs00426289_m1; NM_000598.4, NM_001013398.1; exones 4-5; 84 pb), MAP2K1 (Hs00983247_g1; NM_002755.3; exones 10-11; 68 pb), MAPK9 (Hs00177102_m1; NM_001135044.1, NM_002752.4, NM_139068.2, NM_139069.2, NM_139070.2; exones 2-3; 102 pb), PIK3CA (Hs00180679_m1; M_006218.2; exones 6-7; 104 pb), PIK3R1 (Hs00933163_m1; NM_001242466.1, NM_181504.3, NM_181523.2, NM_181524.1; exones 8-9, 9-10, 15-16; 82 pb), y, Socs2 ( Hs00919620_m1; NM_003877.3; exones 2-3; 91 pb). Las muestras se ensayaron en 10 reacciones ul (50 ng de plantilla /reacción) con Master Mix TaqMan® PCR Universal y se llevaron a cabo por duplicado en placas de 384 pocillos. Un RNA de referencia disponible comercialmente (TaqMan® de control de ARN total, cat. No 4.307.281, Applied Biosystems /Life Technologies) se utilizó como control positivo en cada serie. Como control endógeno y para la normalización de Cq (ciclo de cuantificación, que es sinónimo de CT [] ciclo umbral) los valores, un ensayo de orientación GUSB ARNm (beta-glucuronidasa [# 4333767F]) se utilizó. GUSB se prefiere sobre los controles endógenos que normalmente se aplica debido a que (a) no hay pseudogenes han sido reportados hasta el momento para este gen, y (b) que se ha identificado como uno entre los objetivos de mRNA mejor conservados de tejidos FFPE [23]. Cuantificación relativa (RQ) se evaluó en un modo lineal como (40 - DCT) [24], con lo que DCT = (objetivo promedio de CT) - (promedio de CT GUSB). Se evaluó la estabilidad ensayo de PCR entre las carreras con el ARN de referencia (inter-run deltaRQs: IGF1R 0,78; 0,72; IGFBP3 MAP2K1 0,39; 0,92; MAPK9 PIK3CA 0,62; 0,59 PIK3R1; Socs2 0,92). Los criterios de exclusión para el análisis de muestras RQ fueron GUSB CT valores superiores a 36 por cada duplicado; y, deltaRQ valores superiores a 0,85 por par duplicado. Con los criterios anteriores, resultados informativos se obtuvieron en 191 (83%) de 230 muestras de RNA FFPE. Sin embargo, el número de muestras informativos osciló entre 175 (75%) para IGF1R a 138 (59%) para Socs2 lo que sólo 118 (51%) muestras informativos para todos los objetivos. Por lo tanto, la agrupación de los valores de RQ para la evaluación de los correspondientes perfiles de expresión génica no puede ser evaluada.
TMA construcción, inmunohistoquímica y el sistema de puntuación
TMA construcción se llevó a cabo como se describe anteriormente [25] . En resumen, serie 3 mm de espesor secciones forman los bloques originales o los bloques de TMA, se montaron en portaobjetos de microscopio de adhesión, se cortaron en el Laboratorio de Oncología Molecular de la Fundación Helénica de Investigación del Cáncer de la Universidad Aristóteles de Tesalónica Escuela de Medicina. Se realizó el marcaje inmunohistoquímico (IHC), utilizando autostainers Bond Max ™ (Leica Microsystems, Wezlar, Alemania) y i6000 (Biogenex, San Ramon, CA). Las secciones se tiñeron con anti-IGF1R-alfa (clon 24 a 31, Lab Vision, Fremont, CA, a una dilución de 1:50 durante 1 h), anti- IGF1R-beta (C-20, sc-713, anticuerpo policlonal, generado contra un mapeo de péptidos en el extremo C-terminal de la molécula de IGF-IA, Santa Cruz, Santa Cruz, CA, a una dilución 1:250 de 1 h) y el IGF-2R (C-15, sc-14410, anticuerpo policlonal de cabra, Santa Cruz, a una dilución 1:250 para 1 h). El complejo antígeno-anticuerpo se visualizó utilizando diaminobencidina (DAB) como cromógeno. Las diapositivas se counterstained con hematoxilina de Mayer, se lava en agua fresca, deshidratada, y montado. Como controles externos, se utilizó núcleos (12 en total para cada TMA) de diversos tejidos no neoplásicas y neoplásicas, incluyendo placenda, endometrio, riñón, amígdala, glándula mamaria, ganglio linfático, cáncer de próstata y carcinoma de células escamosas de la cabeza y cuello. Como controles internos, se utilizó el epitelio de las glándulas mucosas vecina y la normal, hiperplásico y el epitelio columnar displásicos.
Para la evaluación de IGF1R-alfa, IGF-1R-beta y IGF2R Se utilizó un enfoque semicuantitativo basado en intensidad de la tinción (SI) y el porcentaje de células positivas (PP), para crear la puntuación inmunorreactiva (IRS) como sigue: IRS = SIxPP, para cada muestra, como se describe anteriormente [26], [27]. La intensidad se puntuó de la siguiente manera: 0 = sin tinción, 1 = positivo débil, 2 = moderadamente positiva, y 3 = fuertemente positiva. La puntuación de el patrón de tinción se basa en el porcentaje de células tumorales positivas: 0 = 0 a 5%, 1 = 6-25%, 2 = 26 a 50%, 3 = 51 a 100%). El IRS puntuación por lo tanto fuera de 0 a 9. La localización de la tinción para cada proteína también se indicó ya sea como membranosa citoplasmática o citoplasmática /o membranosa.
Todos los casos discordantes se resolvieron dentro de las reuniones de consenso. Con el fin de evitar resultados falsos positivos derivados de múltiples cálculos de corte, se utilizó el valor de la mediana de la IRS como la pre-definido de corte para cada marcador, como se sugirió anteriormente [25]. Una muestra de tumor se considera "alta expresión" si el IRS era superior o igual a la mediana y "bajo la expresión" en caso contrario.
Consideraciones estadísticas
En cuanto a la expresión de IGF1R IHC y la IGF2R la mediana del IRS se pre-define como el candidato de corte para evaluar el papel pronóstico de IGFR en la supervivencia libre de enfermedad (DFS) y supervivencia global (OS). En cuanto a los biomarcadores cuya expresión se midió en el ARNm nivelar su distribución fue examinado por cortes naturales. En caso de no identificación de un punto de corte natural, el primer, segundo y tercer cuartil se examinaron mediante análisis de regresión de Cox univariante como posibles umbrales. Si una línea de corte mostró significado pronóstico se utiliza para dicotomizar las muestras en los tumores que expresan altos y bajos. candidatos cortes adicionales se exploraron con el uso de receptor curvas características de operación (ROC) utilizando el tipo de 3-años DFS observó como resultado binario validado con análisis de arranque. En el caso de que ninguna de corte se identificó la mediana se utilizó. En el análisis multivariante significación se determinó al nivel del 15% y en univariado al 5% (dos caras).
DFS se midió desde el momento del diagnóstico hasta que sea confirmada progresión de la enfermedad, la muerte o el último contacto y sistema operativo desde diagnóstico hasta la muerte por cualquier causa o la fecha del último contacto. distribuciones de tiempo transcurrido hasta el evento se estimaron mediante curvas de Kaplan-Meier. Las asociaciones entre los marcadores biológicos y con características básicas paciente y del tumor se analizaron mediante la prueba exacta de Fisher para las variables categóricas y la de Mann-Whitney o la prueba de Kruskall-Wallis en su caso para las variables continuas. Para la expresión de ARNm continua las correlaciones se calcularon utilizando la prueba de correlación de Pearson. El análisis estadístico cumplió con las recomendaciones de informes para marcadores tumorales estudios de pronóstico [28].
Resultados
características clinicopatológicas y el resultado
Doscientos ochenta y nueve pacientes, en su mayoría varones (95,8%), los fumadores actuales o ex (95,2%) y los que abusan del alcohol (75,4%), con una edad media de 63 años al momento del diagnóstico, se incluyeron en el presente análisis. Como se muestra en la Tabla 1, el trabajo de diagnóstico llevó al diagnóstico de carcinoma de células escamosas de la laringe supraglótica predominante (46,7%) o la glotis (43,3% de los casos), principalmente en estadios T3-4 (77,8% de los casos) y más a menudo nodo -negativos en el examen clínico /radiológico (84,1%). El tratamiento inicial consistió en la resección quirúrgica del tumor por medio de la laringectomía total (84,1%) o por procedimientos conservadores más (15,9%). Una disección del cuello se realizó en el 29,1% de los casos, mientras que postoperatoria radioterapia de haz externo se administró en el 32,2%.
En una mediana de seguimiento de 74,5 meses, 135 (46,7%) pacientes habían recaído y 117 (40,5%) habían muerto. La mediana y 5 años DFS 94,5 meses (IC del 95%: 80.9-108 meses) y 60,8%, respectivamente, mientras que la mediana y la SG a 5 años fueron de 106,3 meses (IC del 95%: 89.3-123.3 meses) y el 66,1% , respectivamente. Como era de esperar, la mediana de SG fue significativamente menor en los pacientes con enfermedad positiva de los ganglios linfáticos, en comparación con aquellos con ganglios linfáticos negativos (28,7 vs 106,5 meses, p & lt; 0,001), los pacientes mayores de 63 años de edad al momento del diagnóstico en comparación con los más jóvenes queridos (87,3 vs 139,1 meses, p = 0,006) y para los pacientes cuyos tumores tenían un subglótica o ubicación transglóticos en comparación con aquellos cuyos tumores estaban localizados supraglottically (82,8 vs 117,5 meses, p = 0,01). En comparación con los pacientes que se habían sometido inicialmente laringectomía total, los pacientes que se habían sometido a una cirugía más conservadora experimentaron estadísticamente significativamente más corto mediana DFS (55,9 vs 106,2 meses, p = 0,011), pero no OS (124,8 vs 106,3 meses, p = 0,671), probablemente debido para el efecto de la laringectomía salvamento.
IHC Expresión de IGFR y correlación con los resultados
resultados de la tinción IHC se obtuvieron de 285 (98,6%) de muestras de tumores para todos los tres marcadores (IGF1R-alfa , IGF1R-beta y IGF2R). El patrón de inmunotinción para IGF1R-alfa era predominantemente citoplásmica y /o membranosa y fue de moderada a fuerte (IRS≥3) en 56.1% de los casos (Figura 2A). Por el contrario, IGF1R-beta inmunotinción fue principalmente citoplasmática (Figura 2B). y estuvo ausente (IRS = 0) en el 81,7% de los casos, a pesar de la existencia de controles internos positivos (macrófagos y estroma). inmunotinción IGF2R fue predominantemente citoplasmática y fue de moderada a fuerte (IRS≥2) en 53.6% de los casos, (Figura 2C). Es de destacar que se observó una significativa co-expresión entre citoplásmica IGF1R-alfa y IGF1R-alfa inmunotinción membranosa (r = 0,28, p & lt; 0,0001), pero no entre IGF1R-alfa y IGF1R-beta (r = -0,02, p = 0,779) , ni entre IGF1R-alfa y IGF2R (r = 0,09, p = 0,133). Estos resultados nos insta a seguir explorando el IGF1 R-alfa IHC expresión membranosa /citoplásmica en relación con las variables clinicopatológicas.
A. IGF1R-alfa fuerte tinción membranosa en 100% de las células cancerosas (IRS = 9); B. IGF1R-beta fuerte tinción citoplásmica en el 80% de las células cancerosas (IRS = 9); C. IGF2R fuerte citoplásmica y tinción membranosa en 80% de las células cancerosas (IRS = 9). Todas las imágenes: aumento x 40.
Tal como se presenta en la Tabla 2, la alta expresión de IGF1 R-alfa (IRS≥3) se asoció significativamente con las características de la enfermedad avanzada, incluyendo el estadio TNM III o IV al momento del diagnóstico (p = 0,011) y la laringectomía total como el procedimiento quirúrgico inicial (p = 0,018). Por el contrario, IGF1R-beta y la expresión IGF2R IHC no se asoció con ninguna de las variables clinicopatológicas estudiadas (datos no mostrados). En el análisis univariado, los pacientes cuyos tumores sobreexpresan citoplasma /membrana de IGF1 R-alfa experimentaron marginalmente más corto mediana DFS en comparación con aquellos cuyos tumores no lo hizo (91,1 vs 106,2 meses, p = 0,0538), y estadísticamente significativamente menor mediana de SG (100,3 vs 118,6 meses, p = 0,0157), (Figura 3). Ninguno de los otros marcadores IHC mostró ninguna asociación con los resultados de supervivencia, ni la combinación de IGF1 R-alfa expresión IHC con cualquier otro marcador de rendimiento más información sobre la evolución del paciente.
expresión del ARNm y la correlación con el resultado
disponibilidad de muestras de tumor para la evaluación de la expresión de ARNm para cada uno de los biomarcadores se proporciona en la Figura 1. con el fin de evaluar la expresión de ARNm de los genes relacionados con la vía-IGFR y para detectar su distribución para corte naturales -offs, histogramas de frecuencias de los valores de RQ para cada biomarcador se representaron gráficamente y se construyeron los diagramas de caja correspondientes (Figura S1). operador receptor característico análisis (ROC) usando los 3 años DFS como el análisis de indicadores y el cuartil de las distribuciones identificadas como puntos de corte de la mediana de IGF1R, IGFBP3, MAP2K1, MAPK9, PI3KR1 y Socs2 y la 61
percentil para PIK3CA. Si la asociación de los marcadores fueron evaluados en una forma continua, la expresión de IGF1R ARNm se asoció significativamente con la expresión de mRNA IGFBP3 (r = 0,22, p = 0,0032), MAP2K1 (r = 0,50, p & lt; 0,0001), MAPK9 (r = 0,51, p & lt ; 0,0001), PIK3CA (r = 0,34, p & lt; 0,0001), PIK3R1 (r = 0,37, p & lt; 0,0001) y Socs2 (r = 0,27, p = 0,0014), lo que indica que IGF1R mRNA es co-expresada con todos los otros efectores importantes de la vía molecular IGF. Las moléculas de aguas abajo de las dos cascadas de señalización principales activadas por activación IGFR (MAPK9 con MAP2K1 y PIK3CA con PIK3R1) también se correlacionaron significativamente con el uno al otro en términos de la expresión de ARNm. Por último, la expresión de mRNA IGFBP3 se correlacionó con MAPK9, PIK3CA y expresión Socs2 mRNA (Tabla S1).
Ninguno de la expresión de ARNm de los biomarcadores, evaluada como variable continua, se asoció con ninguna de las variables clinicopatológicas estudió (datos no mostrado). En el análisis y el uso de los valores de corte identificados, los pacientes cuyos tumores habían expresión del ARNm de alta MAPK9 experimentado DFS marginalmente mayor mediana (91,8 vs 81,0 meses, p = 0,0665) y estadísticamente significativamente mayor mediana de OS (117,5 vs 87,3 meses, p = 0,0344 ), en comparación con los pacientes cuyos tumores tenían niveles bajos de ARNm MAPK9. Del mismo modo, los pacientes cuyos tumores tenían la expresión de ARNm de alta PIK3CA experimentado ya -aunque no significantly- DFS mediana (106,2 frente a 80,5 meses, p = 0,0723) y la mediana de SG (141,8 vs 94,5 meses, p = 0,0726), en comparación con los pacientes cuyos tumores tenían bajos niveles de ARNm PIK3CA (Tabla S2).
Correlación de la expresión de IGF1R IHC con niveles de mRNA
Se observó una tendencia no significativa para la co-expresión de IGF1R membranosa-alfa o tinción citoplasmática y IGF1R los niveles de ARNm de alfa, como evaluó con la prueba de la correlación de Spearman (r = 0,14, p = 0,0621), (Figura S2). Sin embargo, no hubo correlación de IGF1 R-alfa IHC expresión de los niveles de mRNA de cualquiera de los otros biomarcadores evaluados (datos no mostrados).
Análisis multivariado
En el análisis multivariado, los predictores independientes de DFS eran del tipo de cirugía (laringectomía vs cirugía conservadora), los ganglios linfáticos (positivo vs negativo), el sexo (masculino versus femenino), edad al momento del diagnóstico (por encima o por debajo de la mediana de 63 años), la localización del tumor (subglótica /transglóticos vs supraglótica /glotis) y de IGF1 R-alfa citoplasmática o IHC expresión membranosa (alta vs baja), (Figura 4A). predictores potentes para DSF fueron el sexo masculino, que se asoció con un aumento de más de cuatro veces en el riesgo de recaída (HR = 4,459, IC del 95% desde 1,079 hasta 18,436, p = 0,039) y la presencia de infiltrados en los ganglios linfáticos (positivos) , que se asoció con un aumento de más de dos veces en el mismo riesgo (HR = 2,313, IC 95% 1,477-3,622; p = 0,0002). Es importante destacar que los pacientes cuyos tumores sobreexpresan IGF1 R-alfa tenido un incremento del 46,6% en el riesgo de recaída, después del ajuste para todos los factores antes mencionados predictivos (HR = 1,466 IC, 95%: 1,022 a 2,102, p = 0.0374).
El modelo final para el sistema operativo incluye las mismas variables clinicopatológicas más T-etapa (T3 /T4 vs T1 /T2). Los más poderosos factores pronósticos adversos para OS se infiltraron ganglios linfáticos (HR = 2.569 IC, 95%: 1,610 a 4,100, p & lt; 0,0001), edad mayor de 63 años (HR = 1.785 IC, 95%: 1,211 a 2,630, p = 0,0034) y subglótica /ubicación transglóticos (HR = 1.756 IC, 95%: 1,016 a 3,036, p = 0,0438). Como se muestra en la Figura 4B, el aumento de citoplasmática o expresión de la proteína IGF1R-alfa membranosa, se asoció con un aumento de 47,5% absoluto en el riesgo de muerte después del ajuste para todos los demás parámetros clínico y este resultado fue marginalmente significativa (HR = CI 1.475, 95% : 1,000 a 2,178, p = 0,0504). En particular, la incorporación de la expresión de IGF1R IHC en el modelo multivariado permitió a la estratificación de los pacientes en tres grupos con distinto pronóstico en función del número de factores pronósticos adversos (1-2, 3 y 4 o más factores adversos para el favorable, intermedio y desfavorable grupo de pronóstico, respectivamente). Por ejemplo, la mediana de SG fue de 70,7 meses (IC del 95%: 35.4-100.3 meses) para los pacientes en el grupo de pronóstico desfavorable y 106,3 meses (95% CI: 84.8-130.4 meses) en el grupo de pronóstico intermedio, mientras que no se alcanzó en el grupo favorable pronóstico (Figura 5).
Discusión
en el presente estudio, el único en nuestro conocimiento de explorar el papel pronóstico de IGF1R en el cáncer laríngeo temprano, hemos demostrado que el aumento citoplasmática de IGF1 R-alfa y /o expresión membranosa, como se evaluó por inmunohistoquímica y se cuantifica con el sistema del IRS, es un factor pronóstico independiente adverso para la recurrencia y la supervivencia en pacientes con (resecado quirúrgicamente) carcinoma de células escamosas principios de la laringe. expresión de IGF1 R-alfa sigue siendo un factor pronóstico significativo tanto para SLE y la SG incluso después del ajuste para las variables clinicopatológicas bien definidos, tales como la participación de los ganglios linfáticos del cuello uterino, la edad y la localización del tumor. Estos resultados están en línea con una importante evidencia publicada recientemente en arrays de genes [22] que ponen de relieve la importancia de la vía molecular RFIG mediada en la carcinogénesis y la progresión de la laringe; Es de destacar que las modalidades actuales de tratamiento en las primeras etapas de cáncer de laringe incluyen la resección quirúrgica con o sin radioterapia adyuvante, tal como se utiliza en nuestra cohorte, haciendo así nuestros resultados oportunos y clínicamente relevante. Por otra parte, la viabilidad y la reproducibilidad de la evaluación del IRS en los laboratorios de patología independientes rinden expresión de la proteína alfa-IGF1R un biomarcador atractivo para la práctica clínica de rutina que puede servir como una herramienta de decisión para un tratamiento más agresivo en el cáncer laríngeo temprano.
La vía molecular mediada por IGFR consistentemente ha sido implicado en la transformación neoplásica y la progresión en una serie de tumores malignos humanos, incluyendo aquellos del tracto aerodigestivo y por lo tanto mucho tiempo ha atraído la atención tanto como un potencial biomarcador pronóstico [9], [10] y como un potencial objetivo para la intervención terapéutica [11], [12]. Los datos con respecto IGFR valor pronóstico en NSCLC son más bien contradictorios [3], [4], [29], aunque un estudio reciente [5] mostró que la expresión de proteínas IGF1R es mayor en histologías de células escamosas y llegó a la conclusión que la proteína de IGF1R y la expresión génica estaban no asociado a la supervivencia, mientras que
IGF1R
número de copias del gen albergaban valor pronóstico. En el cáncer de laringe, la escasez de datos no permite conclusiones seguras para ser dibujado: IGF1R y los niveles séricos IGFBP3 no fueron identificados como predictores significativos de la evolución clínica en la única gran cohorte de 540 pacientes con CECC, incluyendo 440 pacientes con cáncer de laringe, publicado hasta la fecha [9]; Este estudio, sin embargo, evaluó los niveles séricos exclusivamente de IGF1R y IGFBP3 y no tumoral niveles de expresión de ARNm o IHC, al igual que en nuestra cohorte. Curiosamente, se ha informado de IGFBP3 para actuar como un supresor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) en SCCHN la angiogénesis [16] y que se downregulated en las primeras fases de la cabeza y la carcinogénesis cuello [30]. En el carcinoma de células escamosas oral, IGFBP3 expresión de ARNm se ha correlacionado con un resultado más favorable, más el apoyo a su papel como un inactivador IGF1 [31]. En un estudio recientemente publicado [32], la combinación de IGF1R y IGFBP3 IHC sobreexpresión era pronóstico de supervivencia de los pobres en una cohorte de 131 pacientes con CECC. En nuestra cohorte, consistía exclusivamente en pacientes con cáncer de laringe, la incorporación de IGFBP3 expresión IHC no mejoró la capacidad pronóstica de IGF1R solo. Por último, el papel de IGF2R en cáncer de laringe que queda por esclarecer [33], aunque parece probable que la falta de un dominio tirosina quinasa priva al receptor de la capacidad de transducir señales proliferativas y así puede explicar la ausencia de valor pronóstico de la marcador observado en nuestra cohorte
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Un elemento importante en el diseño de nuestro estudio fue el uso de anticuerpos monoclonales dirigidos por separado las dos isoformas distintas de la proteína IGF1 R (alfa y beta).