Extracto
VEGF-C se considera como uno de los factores más eficaces en la regulación de la LI. El objetivo de este estudio fue de entender mejor el papel de VEGF-C en la progresión del cáncer de ovario y para evaluar su importancia diagnóstica y pronóstica. Un total de 109 pacientes con cáncer de ovario, 76 pacientes con enfermedades benignas de ovario, y 50 controles sanos fueron reclutados en este estudio. Los niveles séricos de VEGF-C se determinaron por el método de ELISA. Los resultados mostraron que los niveles séricos de VEGF-C fueron significativamente mayores en los pacientes con cáncer de ovario que las personas con enfermedades ováricos benignos y controles sanos (
P
& lt; 0,01). Los niveles séricos de VEGF-C se correlacionó con el estadio de la FIGO, metástasis en los ganglios linfáticos, resección del tumor y la supervivencia de los pacientes (
P Hotel & lt; 0,05). Las áreas de las curvas de funcionamiento del receptor de VEGF-C eran más altos que los de CA125 en diferentes grupos de cribado. Análisis utilizando el método de Kaplan-Meier se indica que los pacientes con alta VEGF-C tuvieron significativamente más corto tiempo de supervivencia global que los que tienen baja VEGF-C (
P Hotel & lt; 0,0001). En un análisis multivariado, junto con parámetros de pronóstico clínicos, suero VEGF-C fue identificado como una variable de pronóstico independiente adverso para la supervivencia global. Estos resultados indicaron que el suero VEGF-C puede ser un indicador clínicamente útil para la evaluación de diagnóstico y pronóstico en pacientes con cáncer de ovario
Visto:. Cheng D, Liang B, Li Y (2013) Serum Vascular Endotelial Growth Factor (VEGF -C) como marcador diagnóstico y pronóstico en pacientes con cáncer de ovario. PLoS ONE 8 (2): e55309. doi: 10.1371 /journal.pone.0055309
Editor: Goli Samimi, Kinghorn Centro del Cáncer, Instituto Garvan de Investigación Médica, Australia |
Recibido: Octubre 15, 2012; Aceptado 20 de diciembre de 2012; Publicado: 1 Febrero 2013
Derechos de Autor © 2013 Cheng et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por una beca de la naturaleza Fondo de Ciencias de Liaoning (201102257). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
carcinoma de ovario es uno de los cánceres más comunes en las mujeres y la principal causa de muerte de todos los tumores ginecológicos. A pesar de los recientes avances, el pronóstico para una mujer diagnosticada con cáncer de ovario en estadio avanzado ha cambiado poco en los últimos treinta años, con una supervivencia a los cinco años de sólo el 30% [1], [2]. La naturaleza relativamente asintomática de cáncer en etapa temprana de ovario, la rápida progresión de la enfermedad quimioresistente, y la alta tasa de recurrencia de cáncer de ovario se han ganado la reputación de ser un "asesino silencioso" [3]. la invasión tumoral y la metástasis son los pasos críticos en la determinación del fenotipo agresivo de los cánceres humanos y las causas principales de muertes por cáncer. Aunque el cáncer de ovario puede extenderse en una variedad de maneras, diseminación a los ganglios linfáticos regionales a través de los vasos linfáticos aferentes es un paso importante en la metástasis del cáncer de ovario y un factor pronóstico importante [4].
El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) familia de genes, que codifica cinco factores de crecimiento polipeptídicos, VEGF-A, -B, -C, -D, y la placenta como factor de crecimiento (PlGF), es particularmente importante debido a sus propiedades angiogénicas y lymphangiogenic que promueven el crecimiento y la metástasis de las neoplasias . VEGF-C se considera como el factor más eficiente en la regulación de la linfangiogénesis [5], y también se ha demostrado para mejorar directamente la invasividad de las células de cáncer de ovario in vitro [6]. Hasta la fecha, la alta expresión de VEGF-C se encuentra en el cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer gástrico, cáncer de colon, y cáncer de pulmón, y se asocia con la linfangiogénesis, metástasis de ganglios linfáticos, y el pronóstico [5], [7] - [10 ].
en la progresión del cáncer de ovario, factores predictivos se pueden utilizar para comprender mejor la respuesta a una terapia en particular, y los factores pronósticos pueden ser útiles en la toma de decisiones relativas a los pacientes que deben recibir terapia adyuvante. Sin embargo, el valor diagnóstico y pronóstico de suero de VEGF-C en el cáncer de ovario es desconocida. El objetivo de este estudio fue comprender mejor el papel de VEGF-C en la progresión y metástasis de cáncer de ovario, y evaluar su importancia pronóstica.
Materiales y Métodos
Los pacientes
el estudio incluyó a 109 pacientes con cáncer de ovario consecutivos (edad: 61,5 ± 10,2 años), la que se recogieron antes de la cirugía del Departamento de Ginecología, N ° 202, entre julio de 1999 y el sep, 2001. características clínicas de los pacientes eran dada en la Tabla 1. Todos los pacientes fueron clasificadas quirúrgicamente, de acuerdo con la Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia (FIGO criterios). Los pacientes que se sometieron a la quimioterapia y la radioterapia preoperatoria fueron excluidos. Además, las muestras de 76 pacientes de la misma edad (edad: 54,1 ± 13,5 años) se analizaron con lesiones benignas. De las lesiones benignas, 23 se clasificaron como cistoadenomas mucinosos, 7 teratomas ováricos benignos, 11 quistes ováricos, como dermoides 3 tumorales como esclerosante, 8 cistadenomas como serosos, 16 como el fibroma, y 8 como quiste del cuerpo lúteo. Un total de 50 controles sanos (edad: 58,6 ± 12,3 años) no tenía antecedentes de patología ovárica u otra enfermedad sistémica. Los pacientes con cáncer de ovario fueron controlados por la supervivencia de una duración media de 49 meses (rango: 1-108 meses). La información de seguimiento estaba disponible para 106 pacientes con cáncer de ovario.
escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes, y el estudio fue aprobado por el Comité Médico de la Universidad de China Ética [2009] No.48.
Recogida de muestras
las muestras de suero de todos los pacientes se recogieron prequirúrgicamente, antes del inicio de la terapia, y se almacena a -80 ° C hasta su evaluación de los niveles de VEGF-C. Serum VEGF-C se determinó con la técnica de inmunoensayo enzimático sándwich (Quantikine, R & amp; D systems, China). En primer lugar, las muestras de suero se descongelaron a 4 ° C y luego 5 veces diluyeron con suero animal. Un total de 100 pl tamponada base de proteína y 50 l muestra de suero se añadieron a los pocillos de una placa de microtitulación revestida con anticuerpo monoclonal de ratón anti-VEGF-C, y se incubaron durante 2 horas a temperatura ambiente en un agitador de microplacas orbital horizontal. El proceso se repitió 3 veces y se lavó 4 veces. En segundo lugar, se añadieron 200 l de VEGF-C conjugado a cada pocillo, y se incubó durante 2 horas a temperatura ambiente en el agitador. En tercer lugar, se añadió 200μL de solución de sustrato a cada pocillo, y se incuba durante 30 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. Por último, el desarrollo del color se determinó en 30 minutos a 450 nm usando un lector de placa de microtitulación después de la adición de 50 l de solución de parada. nivel de CA125 en suero se midió mediante kits de electroquimioluminiscencia de acuerdo con las instrucciones del fabricante y usando sus reactivos y equipos (Roche Diagnostics, Pekín, China). Todos los ensayos se realizaron por duplicado.
Análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron utilizando SPSS15.0 (SPSS, Chicago, IL). Las distribuciones de los valores de VEGF-C en suero eran asimétricas; Por lo tanto, se aplicaron análisis no paramétricos. El no paramétrico de Mann-Whitney rango suma de prueba de la U y Kruskal-Wallis (
x
2) prueba se utilizaron para la comparación de las variables en grupos. Las asociaciones entre el VEGF-C y variables clínico (histología, estadio tumoral, el grado del tumor, el tamaño del tumor residual, la metástasis en los ganglios linfáticos, la supervivencia de los pacientes, y resectablity de los tumores) se evaluaron mediante la prueba de chi-cuadrado. La sensibilidad y la especificidad de VEGF-C se determinaron mediante curvas características operativas del receptor (ROC), y las áreas bajo la curva se calcularon [11]. El tiempo de supervivencia se mide a partir de la fecha de diagnóstico de la fecha de muerte por cáncer de ovario o de la fecha de la última visita de seguimiento. El uso de la mediana del nivel de VEGF-C como una línea de corte, impacto pronóstico de VEGF-C se evaluó por el método de Kaplan-Meier y la prueba de log-rank. Además, se evaluó el impacto de la concentración sérica de VEGF-C en la supervivencia global del paciente, y calculado por los dos modelos de regresión de riesgos proporcionales de Cox univariante y multivariante. Un
P valor Red de. & Lt; 0,05 fue considerado significativo
Resultados
Los niveles de VEGF-C y CA125 en el suero de pacientes con cáncer de ovario y enfermedades benignas de ovario, así como en controles sanos fueron presentados en la Tabla 2. los niveles séricos de VEGF-C y CA125 fueron significativamente mayores en los pacientes con cáncer de ovario que las de enfermedades ováricos benignos y controles sanos (
P
& lt; 0,01) . No hubo diferencias entre las enfermedades benignas de ovario y controles sanos para los niveles séricos de VEGF-C y CA125 (
P Restaurant & gt; 0,05).
La Tabla 3 presenta los niveles de VEGF C y CA125 en el suero de pacientes con cáncer de ovario en relación con las variables clínicas-patológico. Los niveles séricos de VEGF-C reveló una correlación significativa con el estadio de la FIGO, y fueron los más altos en el subgrupo IV (
P = 0,040
). En los pacientes con metástasis en los ganglios linfáticos, los niveles séricos de VEGF-C se incrementaron en comparación con los pacientes sin metástasis en los ganglios linfáticos (
P = 0,010)
. Por otra parte, los niveles séricos de VEGF-C aumentan en los pacientes que murieron de cáncer durante el período de observación (
P = 0.017)
. observación similar para VEGF-C se realizó en pacientes con cáncer de ovario con tumores no resecables en comparación con aquellos con los resecables (
P = 0,013)
.
Como se muestra en la Figura 1 (a) , área bajo la curva de funcionamiento del receptor (AUROC) análisis de la evaluación de suero VEGF-C como una herramienta de diagnóstico para la discriminación del cáncer ovárico de enfermedades ováricos benignos y controles sanos fue de 0,826 (IC del 95%, 0,773 a 0,879) en comparación con CI 0,760 (95%, 0,697 -0,822) para CA125. Además, la Figura 1 (b) muestra que AUROC de VEGF-C para la diferenciación de cáncer de ovario de los controles de salud era 0,862 (IC del 95%, 0,794-0,931), que fue mayor que 0,853 (IC del 95%, 0,773-0,933) de CA125. Figura 1 (c) presentó que el AUROC aproximado para el cáncer de ovario en comparación con enfermedades ováricos benignos fue 0,802 (IC del 95%, 0,736-0,868) y 0,681 (IC del 95%, desde 0,604 hasta 0,758) para el VEGF-C y CA125, respectivamente. AUROC de VEGF-C fue mayor que el CA125 en diferentes grupos de cribado.
(a-b) análisis ROC incluyó a pacientes con enfermedades benignas de ovario y controles sanos como grupo negativo y pacientes con cáncer de ovario como un grupo positivo. (C-d) de los pacientes con cáncer de ovario
vs
controles sanos; (E-f) de los pacientes con cáncer de ovario
vs
enfermedades benignas de ovario. AUROC:. Área bajo la curva receiver operating
Análisis utilizando el método de Kaplan-Meier mostró que los pacientes con alto nivel de VEGF-C (≥10200 pg /ml) tuvieron una supervivencia global significativamente más cortos que los de baja nivel de VEGF-C (& lt; 10.200 pg /ml), como se muestra en la Figura 2 (
P
& lt; 0,0001). La curva indica que el alto nivel de VEGF-C se asoció significativamente con un mayor riesgo de muerte. Para evaluar los factores que afectan a la supervivencia global, los cinco factores clínicos y nivel de VEGF-C que figuran en la Tabla 4 se incluyeron en el análisis. El análisis univariante reveló que el estadio del tumor (III y IV) (
P Hotel & lt; 0,0001), metástasis de ganglios linfáticos (
P Hotel & lt; 0,001), y altos niveles de VEGF-C (
P
= 0,001) se asociaron significativamente con la supervivencia de pacientes con cáncer de ovario. De éstos, el estadio tumoral (III y IV) (
P
= 0,006), la metástasis de los ganglios linfáticos (
P = 0,021
), y altos niveles de VEGF-C (
P
= 0,01) permanecieron significativas en el análisis multivariante. Entre los factores estudiados, el nivel de VEGF-C era un predictor independiente de mala supervivencia del paciente.
Discusión
La diseminación metastásica de las células tumorales es responsable de la mayoría de los cánceres muertes. Linfangiogénesis y la angiogénesis sostenida son pasos importantes en la progresión tumoral. Al igual que en la angiogénesis, un tumor puede inducir su propia red de vasos linfáticos que conectan con los vasos linfáticos circundantes. Hasta la fecha, los resultados clínicos y patológicos indican que la metástasis de las células tumorales por los vasos linfáticos es la vía más común de difusión inicial para muchos carcinomas. Linfangiogénesis se informó a desempeñar un papel en la progresión del cáncer de ovario, tanto clínica como en modelos experimentales [12], [13].
Como miembro de la familia VEGF, VEGF-C se demostró por primera vez para inducir y promover la metástasis linfagiogénesis en estudios con animales, y también se expresa en una variedad de tejidos adultos humanos incluyendo el corazón, placenta, músculo, ovario, intestino delgado y [14], [15]. Estudios previos han demostrado que el sistema de señalización de VEGF-C /VEGFR3 es considerado como la vía más eficiente en la regulación de la linfangiogénesis. VEGF-C secretada por las células tumorales puede actuar específicamente sobre el receptor VEGFR-3 en la superficie de las células endoteliales linfáticas, activando así el sistema de señalización para la linfangiogénesis tumor. correlaciones clinicopatológicas han demostrado que existe una fuerte correlación entre el VEGF-C /VEGFR3 de señalización y la metástasis de los ganglios linfáticos en diversos cánceres humanos [16], [17]. Nakazato T,
et al
. informó de que la expresión de VEGF-C en el carcinoma de células escamosas orales desencadena linfangiogénesis, que puede resultar en un alto riesgo de cervical metástasis en ganglios linfáticos [18]. Schietroma C
et al
, demostró que el VEGF-C densidad linfático positivo se incrementa alrededor de melanoma maligno y se asocia con las células tumorales invasión de los ganglios linfáticos [19]. Estudios recientes identificados VEGF-C como factores pronósticos de mal pronóstico en adenocarcinoma gástrico [20], colangiocarcinoma [21], el cáncer de mama [22], y el cáncer de pulmón [23].
angiogénesis neoplásica y LI son esenciales para el crecimiento de tejido tumoral en ambos sitios primarios y metastásicos. Esto implica que la detección de factores angiogénicos y lymphangiogenic puede indicar la presencia de un tumor maligno en una etapa temprana. Los datos que se centran en la LI en cáncer de ovario son escasos. Sin embargo, Sinn BV,
et al
, demostró que el VEGF-C ARNm se asocia con comportamiento agresivo tumor en el cáncer de ovario [24]. Aunque, no se observó un aumento de VEGF-C ARNm, la relación entre los niveles séricos de VEGF-C y el comportamiento del tumor aún no ha sido determinada por un método cuantitativo in vivo. En nuestro estudio, se analizaron los niveles séricos de VEGF-C en un gran número de muestras de cáncer de ovario mediante el método de ELISA y se centra en diferentes subtipos, adenocarcinoma seroso papilar, adenocarcinoma mucinoso, tumor endometrioide, tumor ovárico de células claras y otros, que difieren sustancialmente de una serie de características genéticas, biológicas, patológicos y clínicos. Los resultados mostraron que los niveles de VEGF-C estaban elevados en los pacientes con cáncer de ovario en comparación con enfermedades ováricos benignos y controles sanos. Por lo tanto, con el fin de evaluar adicionalmente el valor clínico de VEGF-C, se determinó y comparó la utilidad diagnóstica de VEGF-C y CA125 en diferentes grupos de cribado. Los niveles séricos de VEGF-C distinguir pacientes con cáncer de ovario de individuos normales y /o pacientes con enfermedad de ovario benignos muy fiable. Suero de VEGF-C fue significativamente mejor predictor de cáncer de ovario que CA125 en esta población estudiada
.
Los niveles de VEGF-C en el suero de 109 pacientes con cáncer de ovario fueron evaluados en relación con las características clínico-patológicas de tumores tales como FIGO etapa, clasificación, localización del tumor, la metástasis de ganglios linfáticos, resección del tumor y la supervivencia de los pacientes. Además, el suero de VEGF-C aumentó significativamente con la etapa FIOGO, la metástasis de los ganglios linfáticos, la supervivencia de los pacientes, y resectablility tumor. Nuestros resultados están de acuerdo con los hallazgos de Huang KJ,
et al
[25], que reveló una diferencia significativa de VEGF-C en la metástasis de los ganglios linfáticos. Como se describió anteriormente, sugiere que los niveles elevados de VEGF-C podrían reflejar el papel de esta proteína como un estimulador de la linfangiogénesis y células tumorales de metástasis en la progresión del cáncer de ovario.
Finalmente, el análisis de supervivencia de los pacientes con cáncer de ovario se evaluó en este estudio sobre la base de los niveles de VEGF-C. Un estudio previo ha ilustrado la utilidad potencial de VEGF-C como un marcador de pronóstico en pacientes con cáncer de mama [26]. En nuestro estudio, la tasa de supervivencia de los pacientes con alto nivel de VEGF-C fue significativamente menor que los pacientes con bajo nivel de VEGF-C (
P Hotel & lt; 0,0001). Es de destacar que los niveles preoperatorios de CA125 en estos pacientes no se correlacionan con un mal resultado (datos no mostrados). Además del predictor pronóstico ya establecida, como la FIGO etapa y la metástasis de los ganglios linfáticos, el suero de VEGF-C se asoció independientemente con el pronóstico en los pacientes con cáncer de ovario. De este modo, el suero de VEGF-C puede identificar a los pacientes en etapa temprana que están de muerte relacionada con la enfermedad. Esto podría influir en las decisiones de tratamiento bien.
Nuestros resultados sugieren que el VEGF-C puede estar implicado en la progresión del cáncer de ovario, y que alto nivel de VEGF-C en el suero pueden estar relacionados con la linfangiogénesis del tumor, así como la invasión de los vasos linfáticos en el cáncer de ovario. Como un marcador no invasivo, VEGF-C tiene el potencial de acelerar clínicamente el diagnóstico de cáncer de ovario y para ayudar en la detección de metástasis en los ganglios linfáticos en mujeres para las que CA125 no es útil. En general, la adición de VEGF-C de la herramienta de diagnóstico en los casos con sospecha de cáncer de ovario generalizada podría contribuir a la exactitud del diagnóstico, evitando intensiva búsqueda endoscópico para focos diseminados. También se podría utilizar para el seguimiento de los pacientes, y predecir el resultado de los pacientes
.
Nuestro hallazgo tiene varias limitaciones. En primer lugar, la validación de la importancia predictiva de VEGF-C requiere estudios a gran escala sobre las poblaciones homogéneas. Es poco probable que los subgrupos clinicopatológicas de tamaño adecuado se pudieron combinar en una sola institución. En segundo lugar, VEGF-C no es específico para el cáncer de ovario y que están implicados en la linfangiogénesis tanto a tumores y la inflamación inducida. En tercer lugar, respecto a la capacidad de VEGF-C de discriminar entre el cáncer de ovario y principios de enfermedades benignas, tipos histológicos menos frecuentes, y los casos en que el CA125 es baja, necesitamos reclutar más casos clínicos y crea un análisis de la diferencia de profundidad. Finalmente, la metodología óptima para la evaluación de suero VEGF-C aún no se ha estandarizado y los niveles "normales" son desconocidos. Se necesitan más validaciones en grandes estudios para investigar mejor las implicaciones clínicas de nivel de VEGF-C en suero y para determinar si el suero de VEGF-C puede proporcionar información más útil con respecto a la presencia de cáncer en estadio precoz de ovario, metástasis a distancia, y el valor pronóstico de cáncer de ovario .