Extracto
Antecedentes
La evidencia falta de coincidencia sugiere un efecto de confusión de la falta de coincidencia estado de la reparación (MMR) en la respuesta inmune en el cáncer colorrectal. La identificación de las células inmune innata y adaptativa, que puede complementar el efecto pronóstico establecida de CD8 en pacientes MMR-dominio cánceres colorrectales, que representan el 85% de todos los casos, no se ha realizado.
Metodología /Principales conclusiones
el cáncer colorrectal a partir de una prueba (n = 1.197) y la validación externa de cohortes (n = 209) de los cánceres colorrectales MMR-dominio se montaron en microarrays de tejidos de perforación simples y múltiples. cuantificación inmunohistoquímica (puntuación 0-3) se realizó para CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD68, CD163, FoxP3, GranzymeB, iNOS, la triptasa de los mastocitos, MUM1, PD1 y células reactivas TIA-1-tumor infiltrante (TIL). Se llevaron a cabo experimentos de co-expresión en muestras de cáncer colorrectal frescos utilizando marcadores específicos de población celular. En el grupo de prueba, un mayor número de CD3 + (p & lt; 0,001), CD4 + (p = 0,029), CD8 + (p & lt; 0,001), CD45RO + (p = 0,048), FoxP3 + (p & lt; 0,001), GranzymeB + (p & lt; 0,001), iNOS + (p = 0,035), MUM1 + (p = 0,014), PD1 + (p = 0,034) y AIT-1 + TIL (p & lt; 0,001) estaban vinculados a un resultado favorable. Ajustar por edad, sexo, estadio TNM y tratamiento postoperatorio, mayor CD8 + (p & lt; 0,001; HR (IC del 95%): 0,66 (0,64-0,68)) y AIT-1 + (p & lt; 0,001; HR (IC del 95% ): 0,56 (0,5-0,6)) fueron factores pronósticos independientes. Por otra parte, entre los pacientes con infiltrados CD8 +, TIA-1 más 355 (35,6%) pacientes estratificados en subgrupos pronósticos (P & lt; 0,001; Recursos Humanos (IC del 95%): CI 0,89 (95%: 0,8-0,9)). Los resultados se confirmaron en la cohorte de validación (p = 0,006). TIA-1 + células eran en su mayoría CD8 + (57%), pero también se tiñeron para TCRγδ (22%), CD66b (13%) y sólo rara vez para CD4 +, macrófagos y células NK marcadores.
Conclusiones
TIA-1 añade información pronóstica para el estadio TNM y la terapia adyuvante en pacientes con cáncer colorrectal MMR-dominio. El efecto pronóstico de las células CD8 + TIL se complica por la presencia de TIA-1 +, que se traduce en una mejor estratificación del riesgo de aproximadamente el 35% de todos los pacientes con cáncer colorrectal MMR-dominio
Visto:. Zlobec I, Karamitopoulou E, Terracciano L, Piscuoglio S, Iezzi G, Muraro MG, et al. (2010) TIA-1 ARN citotóxicos asociados a gránulos de unión de proteínas mejora el rendimiento pronóstico de CD8 en reparación de apareamientos erróneos-Competente del cáncer colorrectal. PLoS ONE 5 (12): e14282. doi: 10.1371 /journal.pone.0014282
Editor: Alfons Navarro, Universidad de Barcelona, España |
Recibido: 3 Junio, 2010; Aceptado: 16 de noviembre de 2010; Publicado: December 10, 2010
Derechos de Autor © 2010 Zlobec et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Los autores fueron financiados por el Instituto de Patología, hospital de la Universidad de Basilea, Investigación cuenta del grupo. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
El pronóstico de los pacientes con cáncer colorrectal se puede ver como una interacción entre factores a tumores y relacionados con el huésped [1]. La evidencia experimental en los últimos 20 años proporciona soporte para el concepto de immunosurveilllance en el cáncer, lo que implica tanto la respuesta inmune innata y adaptativa [2]. En el cáncer colorrectal, los linfocitos infiltrantes de tumor CD3, CD4, CD8, CD20, granzima B, y FoxP3 + (TIL) se han identificado como posibles indicadores del resultado, mientras que la identificación de linfocitos T citotóxicos, células cebadas y células dendríticas como elicitores de la lucha contra el tumor ha subrayado respuestas nuevas vías para inmunoterapias potenciales [3], [4], [5].
En el cáncer colorrectal, el equilibrio entre en host y los factores relacionados con el tumor se ejemplifica por desajuste de reparación (MMR) deficientes casos esporádicos, que representa aproximadamente el 15% de todos los tumores y se caracteriza por la maquinaria MMR defectuoso [6]. Los pacientes con estos cánceres MMR-deficientes se describen como teniendo de células T abundante CD8 + citotóxicos infiltrarse en [7] y, a menudo están ligados a las características más "favorables" relacionados con el tumor, a saber, la presencia de una configuración de frontera tumor empujar, la presencia de un distintivo banda de la inflamación peritumoral linfocítica y poco tumoral en ciernes, este último un sello histomorphological de transición epitelio mesénquima [8]. Esta constelación fenotípica, por "inclinar la balanza" a favor de una defensa fuerte puede ser en parte responsable de que el pronóstico general más favorable de los pacientes con MMR deficiente en comparación con los tumores triple vírica con dominio [9]. Curiosamente, a pesar del efecto de confusión conocidos del estado de MMR en las respuestas inmunológicas en el cáncer colorrectal, el análisis exhaustivo de los tipos de células implicadas en la respuesta inmune y la inflamación aún no se han realizado de forma sistemática para los cánceres MMR-dominio, que abarca 85% de todos los casos de cáncer colorrectal.
Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue determinar el beneficio pronóstico adicional, sobre el rendimiento de las células CD8 solo, de 12 biomarcadores inmunológicos basado en los tejidos en pacientes con cáncer colorrectal MMR-dominio. Estos marcadores de proteínas que incluyen CD3, CD4, CD45RO, CD68, CD163, FoxP3, GranzymeB, iNOS, triptasa de los mastocitos, MUM1p, PD1 y AIT-1 fueron seleccionados específicamente para cubrir la gama más amplia de posibles tipos de células que participan en la innata y la respuesta inmune adaptativa . Esto se logró mediante un grupo de prueba inicial de 1197 pacientes y una cohorte de validación externa de 209 pacientes, respectivamente, con los datos clínico-patológicos y de seguimiento completos.
Métodos
Ética Declaración
consentimiento por escrito se ha dado de los pacientes para su información que se almacena en la base de datos del hospital y se utiliza para la investigación. El uso de tejido fue aprobado por los correspondientes Comités de Ética del Hospital Universitario de Basilea y la Universidad de Atenas. muestras clínicas recién extirpadas incluidos en este estudio se obtuvieron de consentir los pacientes sometidos a tratamiento quirúrgico en el Hospital de la Universidad de Basilea.
Grupo de pruebas
Pacientes y muestras de las características.
1.420 pre-primaria los pacientes no tratados, no seleccionados operativamente esporádicos de cáncer colorrectal tratados en el hospital Universitario de Basilea entre los años 1987 y 1996 se incluyeron en este estudio. Hematoxilina y eosina (H & amp; E) manchadas diapositivas fueron examinadas por un patólogo experimentado gastrointestinal (L.T.) y los datos clínicos fueron recuperados de los registros de pacientes, donde esté disponible. El resultado clínico de interés fue el tiempo de supervivencia específica del cáncer. Se construyó una micromatriz de tejido de estos 1420 pacientes. De cada paciente, a una cuadra tumor representativo se perforó utilizando un cilindro de tejido de 0,6 mm de diámetro. El tejido se pone en un bloque de parafina receptor (3 × 2,5 cm) utilizando un arrayer tejido semi-automatizado de fabricación casera. 57 tejidos de la mucosa colorrectal normal, se incluyeron como control.
Métodos de ensayo.
El microarray de tejido se immunostained para 13 marcadores de proteínas inmunológicas y marcadores de reparación desajuste. Los protocolos para MLH1, MSH2, MSH6, CD8 y FoxP3 se han descrito en otra parte [10]. En resumen, los protocolos restantes se llevaron a cabo de la siguiente manera: CD163; NeoMarkers, MS-1103, monoclonales, 1:40, tampón de citrato pH 6, 100 ° C, 30 '; CD20; Dako, M0755, monoclonales, 1:50 tampón citrato pH 6, 100 ° C, 30 '; CD4; NeoMarkers, MS-1528, monoclonal, 1:40, tampón de citrato pH 6, 100 ° C, 60 '; CD68; Dako, M0876, monoclonales, 1:200, citrato tampón de pH 6, 100 ° C, 15 '; GranzymeB; Novocastra, NCL-L-GRAN-B, 1:10, citrato tampón de pH 6, 120 ° C, 10 ', iNOS; Abcam, ab15323, policlonal, 1:100 tampón ER1, 20 ', triptasa de los mastocitos; Dako, M7052, monoclonales, 1:2000, sin recuperación; MUM1; Dako, M7259, monoclonales, 1:50, citrato tampón de pH 6, 100 ° C, 30 '; PD1; R & amp; D Systems, AF1086, monoclonal 01:40 tampón de citrato pH 6, 120 ° C, 10 '; TIA-1; Immunotech, IM2550, monoclonales, 1:250, sin recuperación; CD3; Dako, monoclonal, tampón de citrato; 1:50; y CD45RO; Thermo Scientific UCHL-1, monoclonales, tampón citrato, 1:500. tejidos de control negativo se probaron y se les realizó el mismo protocolo con el anticuerpo primario omitido.
marcadores de proteína se obtuvieron por tres observadores (A. L., S. P., A.T.) mediante el análisis del número de células positivas por punzón microarrays de tejidos. No se utilizó el software de análisis de imágenes. Se evaluó el número total de células inmunorreactivas en el microambiente del tumor, independiente de la localización (intratumoral o estroma). El número total de células por golpe de microarrays de tejidos se les dio las puntuaciones de 0 cuando no hay células positivas estuvieron presentes, y las puntuaciones 1, 2 y 3 cuando las células positivas 1-10, 11-50 células positivas y & gt; 50 células positivas por golpe podría ser observado, respectivamente. Para PD1 y iNOS, los casos se anotó como la total ausencia o presencia de cualquier célula positivos.
Grupo de Validación
221 no seleccionados, no consecutivos con cáncer colorrectal tratados los pacientes en el Hospital Universitario Attikon, Universidad de Atenas, Grecia entre los años 2004 y 2006 se incluyeron como un grupo de validación independiente. H & amp; E diapositivas fueron revisados y los datos clínicos recuperados de los registros de pacientes (Tabla 1). El resultado clínico de interés fue el tiempo de supervivencia específica del cáncer. Se construyó una micromatriz de tejido de las resecciones cáncer colorrectal primario de estos 221 pacientes. Con el fin de excluir el sesgo debido a la posible heterogeneidad tumor, cada paciente tenía múltiples punzones de tejido y del tumor tomado de bloques fijados con formalina, incluidos en parafina utilizando un cilindro de tejido con un diámetro de 0,6 mm que se transfirieron posteriormente en bloque de parafina de un destinatario utilizando una arrayer tejido semiautomatizado casera. Cada paciente tenía un promedio de 4 golpes tumorales incluida en el área, incluyendo 2 desde el centro del tumor y 2 desde el frente invasivo. La inmunohistoquímica se realizó para el microarray de tejido de acuerdo con los protocolos descritos anteriormente para el grupo de prueba. expresión de la proteína se evaluó de acuerdo con el método de puntuación descrito anteriormente por un patólogo experimentado gastrointestinal (EK).
La citometría de flujo análisis de muestras clínicas frescas
Diez muestras clínicas recién extirpadas eran fragmentos recogidos y tumorales se picada y digeridos enzimáticamente para obtener suspensiones de células individuales. Las células se tiñeron con superficie isotiocianato de fluoresceína (FITC) marcado con anticuerpos específicos para las moléculas CD4, CD16 o CD66b (BD Pharmingen, San Diego, CA) o T-cell receptor (TCR) γδ (eBioscience, La Jolla, CA) y con anticuerpos específicos para CD56 o Vα24-Jα18 TCR (BD Pharmingen) APC-etiquetado. Después del lavado, las células se fijaron con formaldehído al 2% y, posteriormente, se permeabilizaron con saponina al 0,5% antes de la tinción intracelular con anticuerpos TIA-1 específica marcado con PE (Immunotech, Marsella, Francia).
Estudio de diseño em
el diseño del estudio se resume en la figura 1. en pocas palabras, después de la exclusión de los casos MMR-deficiencia de la cohorte de ensayo, análisis univariable y multivariable modelos de tiempo de supervivencia fueron evaluados para identificar los más fuertes marcadores de proteínas de pronóstico independientes y su valor combinado. El valor pronóstico independiente se evaluó posteriormente en pacientes con cáncer colorrectal MMR con dominio del Grupo de Validación.
(A) 1420 cánceres colorrectales se montaron en microarrays de tejidos y inmunoti~neron para 13 marcadores de proteínas y proteínas de reparación de genes (MMR). Se excluyeron los tumores MMR-deficientes. (B) 221 cánceres colorrectales se montaron en un microarray de tejido de múltiples punzón y inmunoti~neron los factores pronósticos independientes identificados en el grupo de prueba. MMR tumores deficientes fueron excluidos del análisis y validación de los efectos pronósticos realizados sobre los 209 pacientes restantes.
Análisis estadístico
Con el fin de evitar el sesgo de dichotomizing inmunoreactividad de proteínas, los análisis se realizado mediante el examen de las puntuaciones de 0, 1, 2 y 3 [11]. Las curvas de Kaplan-Meier se utilizaron para evaluar la influencia de la expresión de la proteína en la supervivencia global específica del cáncer. La significación se evaluó en el análisis univariado con la prueba de log-rank. modelos de riesgos proporcionales de Cox se utilizaron para probar la influencia simultánea sobre la supervivencia específica del cáncer global de expresión de la proteína junto con los factores pronósticos conocidos y la asunción de riesgos proporcionales se puso a prueba mediante la evaluación del registro (log (supervivencia)) frente a log del tiempo de supervivencia gráficos. En lugar de realizar el análisis de una fracción de grupo, todos los modelos multivariables fueron validados e IC del 95% obtienen a través de 200 réplicas bootstrap de los datos [12], [13]. Todas las pruebas fueron de dos caras. Se consideraron variables que faltan para ser perdidos al azar. Sin imputación se realizó en lugar deleción caso en cuanto se llevó a cabo cuando sea necesario. P-valores se presentan sin ajuste para múltiples correcciones [14]. Todos los análisis se realizaron con SAS V9.1 (El SAS Institute, Cary, NC, EE.UU.).
Resultados
Grupo de pruebas
supervivencia específica del cáncer análisis- univariante ( la Figura 2)
se observó el tiempo de supervivencia más favorable para los pacientes con un mayor número de CD3 + (p & lt;. 0.001), CD4 + (p = 0,029), CD8 + (p & lt; 0,001), CD45RO + (p = 0,048), FoxP3 + (p & lt; 0,001), GranzymeB + (p & lt; 0,001), iNOS + (p = 0,035), MUM + 1 (p = 0,014), PD1 + (p = 0,034) y TIA-1 + TIL (p & lt; 0,001). fotomicrografías representativas de estos marcadores de proteínas y células inmunorreactivas se muestran en la Figura 3.
Se destacan los marcadores son los que muestran una asociación significativa con el pronóstico.
A) CD3, B) CD4, C ) CD8, D) CD45RO, E) FoxP3, F) granzima B, G) de iNOS, H) MUM1, I) PD1, J) TIA-1.
supervivencia específica del cáncer análisis- multivariable .
marcadores significativos se probaron en dos modelos multivariables. En primer lugar, evaluamos el efecto pronóstico de los marcadores de ajuste para los efectos de la edad al momento del diagnóstico, el sexo, pT, pN, el grado del tumor y la invasión vascular. CD3 (n = 945; 434 muertes; p = 0,128), CD4 (n = 1026; 491 muertes; p = 0,463), CD45RO (n = 866; 401 muertes; p = 0,181), FoxP3 (n = 1091; 519 muertes ; p = 0,185), GranzymeB (n = 987; 479 muertes; p = 0,091), la iNOS (n = 1023; 493 muertes; p = 727), MUM1 (n = 1082; 516 muertes; p = 0,173), y PD1 (n = 1096; 523 muertes; p = 0,389) no mostraron un efecto sobre el tiempo de supervivencia después de ajustar por estos parámetros de pronóstico establecidos. Por el contrario, CD8 (n = 1019; 489 muertes; p & lt; 0,001) y AIT-1 (n = 1005; 481 muertes; p & lt; 0,001) mantuvieron su impacto altamente positivo y significativo sobre el resultado del paciente
. un modelo de tiempo segundo supervivencia (Tabla 2) el efecto de CD8 y TIA-1 fue de nuevo a prueba esta vez junto con la edad del paciente en el diagnóstico, el género, pT, pN, la metástasis y la terapia adyuvante. Los resultados ponen de manifiesto un efecto positivo muy significativo de los dos marcadores: (1) CD8 + (n = 292; 75 muertes; HR: 0,66 IC (95%: 0,64-0,68) y (2) TIA-1 + (n = 290; 82 muertos ; HR: (IC del 95%: 0,5-0,6) 0,56) guía empresas
Caracterización de las células TIA-1-que expresan
Dado que TIA-1 es la hipótesis como un marcador para.. las células T CD8 + activadas, se verificó la coexpresión de TIA-1 en las células T CD8 + por citometría de flujo en los linfocitos infiltrantes de tumor (TIL) de 10 muestras clínicas recién extirpadas. porcentajes del total de células TIA-1 + variaron desde 0,86 hasta 6,52 (media :. 3,7 ± 1,6) (Figura 4A) costaining con marcadores específicos para las poblaciones de células definidas confirmó que la mayor población de TIA-1 + células está representado por las células T CD8 + (57 ± 8%), seguido por las células TCRγδ (22 ± 10% ) y CD66b + neutrófilos (13 ± 12%). En contraste porcentajes despreciables de las células T CD4 +, macrófagos (identificadas como células CD16 + CD56-), células NK (identificado como CD56 + células), y las células NK /T, (que expresa VA24-Ja18 TCR), se observó (Figura 4 B, C). Se detectó TIA-1 y la expresión de una mayoría de la infiltración de células CD8 + (64 ± 22%), mientras que la fracción restante (35 ± 22%) fue TIA-1 negativo (Figura 4 C, D).
Una sola célula suspensiones obtenidas a partir de muestras de tumor recién extirpadas (n = 10) eran superficie manchada con FITC o etiquetados-APC anticuerpos específicos para los marcadores de superficie indicados y intracelularmente teñidas con anticuerpos anti-TIA-1 marcado con PE. A) Porcentajes de totales TIA-1 + células B) Los porcentajes de células CD8 +, células TCRγδ, neutrófilos (identificado como CD66b + células), las células CD4 +, macrófagos (identificadas como células CD16 + CD56-), las células NK (CD16 + CD56 +) y células NKT (Vα24-Jα18 TCR +) observado en células TIA-1 + cerradas. C) Representante punto de parcelas que ilustra la co-expresión de moléculas TIA-1 y CD8 en linfocitos separados en el total de células obtenidas a partir de una muestra clínica. D) Los porcentajes de células TIA-1 + y TIA-1- dentro de las células CD8 + cerradas.
combinaciones fenotípicas de CD8 /TIA-1.
A continuación analizaron las frecuencias fenotípicas de 1019 los cánceres colorrectales con tanto evaluables CD8 y TIA-1 tinción. Se observaron tres fenotipos principales: tumores negativos tanto para CD8 (Puntuación 0) y TIA-1 (Puntuación 0) (n = 223; 21,9%), los tumores positivos para CD8 pero negativo para TIA-1 (n = 366; 36%) y tumores positivos tanto para CD8 y TIA-1 (n = 350; 34,3%). Sólo 80 tumores fueron negativos para CD8 y positivo para TIA-1 (7,8%). Debido a estos pequeños números, el grupo de tumores negativos CD8 fue clasificado como un único subgrupo independientemente de TIA-1 de expresión.
análisis de supervivencia cáncer-específica de las células CD8 + TIL estratificado por TIA-1.
se analizaron las diferencias de tiempo de supervivencia de los tres CD8 /TIA-1 fenotipos en 998 pacientes en los que el tiempo de supervivencia también estaba disponible. En general, se observó una diferencia significativa en el tiempo de supervivencia específica del cáncer entre los tres grupos con pacientes con mayores cantidades de células CD8 + /TIA-1 + TIL que experimentan el resultado más favorable, seguido por CD8 + /TIA-1- casos y finalmente por CD8 pacientes (p & lt; 0,0001; Figura 5). A continuación realizó un análisis multivariable incluyendo la edad factores pronósticos, el género, pT, pN etapa pm, así como tratamiento postoperatorio y se determinó el beneficio añadido de la estratificación de los pacientes con tumores con una mayor cantidad de células CD8 + TIL por TIA-1. Entre los pacientes con tumores CD8 positivas, un riesgo relativo de muerte de 0,89: se observó para aquellos con tumores simultáneos TIA-1-positivos (P & lt; 0,001; Tabla 2) (CI 95% desde 0,8 hasta 0,9). Estos resultados indican que la adición de TIA-1 en los casos de CD8-positividad mejora la estratificación del riesgo de 35,6% (n = 355) de los pacientes.
Grupo de Validación
Un externa conjunto de validación se analizó para CD8 + y TIA-1 + TIL. En este grupo de cáncer colorrectal MMR-competente, sólo 7 pacientes tenían tumores con células CD8 + /TIA-1- TIL En el análisis univariable, las diferencias de tiempo de supervivencia para los pacientes con CD8 + /TIA-1 + TIL fueron significativamente mayores en comparación con los pacientes con ausencia de células CD8 + TIL (p & lt; 0,0001). Se evaluaron las diferencias de tiempo de supervivencia entre los pacientes con diferentes CD8 /TIA-1 fenotipos en el análisis multivariable con el estadio pT, pN etapa, pM y la terapia adyuvante. Entre los pacientes con tumores CD8 positivas, TIA-1 positividad dio lugar a un riesgo relativo de 0,79 (IC del 95%: 0,7-0,9). Comparación con los pacientes con cánceres TIA-1-negativos (p = 0,006) guía
discusión
Los nuevos hallazgos de este estudio en pacientes con cáncer colorrectal MMR-1406 sugieren que dominan el primero, que un mayor número de TIA-1 + TIL representan un parámetro pronóstico favorable e independiente y en segundo lugar que, además de CD8, TIA 1 mejora la estratificación pronóstica de los pacientes en un 35%.
a pesar de que previamente se ha establecido la importancia pronóstica de abundantes CD8 + TIL [3], [5], [15], [16], [17], este estudio va un paso más allá para identificar el marcador TIA-1 como un parámetro pronóstico muy relevante en el cáncer colorrectal y en particular en los tumores con marcada citotóxicos CD8 + TIL. TIA-1 es una proteína de unión de ARN asociados a gránulos citoplasmática según los informes se expresa en las células con potencial citolítico, incluyendo 50 a 60% de CD8 + linfocitos T [18]. TIA-1 ha demostrado estar implicado en la apoptosis mediada por Fas en una variedad de tumores malignos humanos, y para sensibilizar a las células endoteliales a los estímulos pro-apoptóticas, mientras que también mejora NK la actividad citotóxica de las células [19], [20], [21]. Nuestros resultados están de acuerdo con estos hallazgos. Aquí, se muestra que el 64% de las células CD8 + TIL co-expresar TIA-1. Además, identificamos una pequeña población de CD8, pero TIA-1 + células tumorales representan a las poblaciones de células TCRγδ y neutrófilos y en menor medida las células T CD4 +, macrófagos, células NK y células NK /T infiltrantes.
las investigaciones sobre las implicaciones clínicas y pronósticas de la TIA-1 + linfocitos está restringido principalmente a neoplasias hematológicas con efectos favorables y desfavorables atribuidas a la sobre-expresión de esta proteína [22], [23]. Sólo un puñado de estudios han evaluado TIA-1 de expresión en los TIL en el cáncer colorrectal, en relación a la regulación de la apoptosis y un mayor número de TIA-1 + TIL en MMR-deficiencia de tumores [24], [25]. Curiosamente, en nuestros casos MMR-competente, no pudimos encontrar ninguna correlación entre un mayor número de TIA-1 + células y el tumor expresión del marcador anti-apoptótica Bcl-2, marcadores pro-apoptóticos apoptosis factor activador-1 (Apaf-1 ) y mamíferos Sterile20-como quinasa 1 (MST-1), ni con p53 o el marcador de proliferación Ki67 (datos no mostrados). Sin embargo, no sólo se informe de que un mayor número de TIA-1 + TIL está fuertemente asociado con un mejor resultado clínico, sino que representan un factor pronóstico independiente, de ensayos y de estudios de validación de cohortes. Lo más importante, nuestros resultados indican que el efecto de la TIA-1 sobre el resultado es aditivo a CD8, un resultado que tiene implicaciones para el 35% de todos los pacientes. Por lo tanto, el resultado significativamente más favorable de los pacientes con CD8 + /TIA-1 + TIL en comparación con los casos con CD8 + /TIA-1- TIL pueden ser indicativos de un inmunovigilancia más eficiente por TIL con un potencial activo y altamente citotóxico.
los resultados de este estudio también se identificaron varios otros tipos de TIL en el centro de tumores que tienen un impacto positivo sobre el pronóstico, por ejemplo FoxP3. El papel pronóstico de Tregs parece variar significativamente según el tipo de tumor que posiblemente indica funciones diferenciales de estas células de una manera dependiente de tejido [26] - [28]. En el cáncer colorrectal, la mayoría de los estudios están en línea con nuestros hallazgos indican que un alto número de FoxP3 Tregs es un factor pronóstico favorable para libre de enfermedad y la supervivencia global de tiempo [10], [29], [30]. Sin embargo, este efecto, como se destaca aquí, no parece ser independiente de CD8 +.
A pesar de que nuestro estudio puede estar limitado por la información clínica incompleta en algunos casos, aún pudimos confirmar el efecto pronóstico independiente de la TIA-1 y su efecto sobre la modificación de CD8 en 500 pacientes con TNM completa y la información de la terapia. El estado de MMR se analizó por la expresión de marcadores de proteínas MLH1, MSH2 y MSH6 y sólo los tumores con positividad en los tres marcadores se incluyeron en este análisis. Estos marcadores, así como TIA-1 y CD8 se utilizan habitualmente en la patología de diagnóstico, los dos últimos para la determinación de linaje de células T y de subtipos de linfomas apoyando así su valor como herramientas de investigación fiables así como [31], [32]. El uso de las TMA menudo plantea la preocupación de que la expresión de proteínas de tumores heterogéneos no está representada adecuadamente usando esta técnica. Sin embargo, en el trabajo de diagnóstico diaria, la ocurrencia de TIL es conocido por ser bastante homogénea y al mismo tiempo un golpe de tumor se tomaron muestras en el grupo de prueba, la inclusión adicional de una cohorte de validación con un promedio de 4 golpes tumorales por tumor en la muestra debe minimizar el sesgo de posible heterogeneidad del tumor [33]. Por otra parte, nuestro estudio los beneficios derivados del uso de prueba y validación cohortes, en representación de una, subconjunto de validación externa independiente sobre la que los marcadores de proteínas fueron evaluadas por varios patólogos independientes, lo que confirma aún más la reproducibilidad del sistema CD8 /TIA-1 puntuación y efecto en el resultado.
para resumir, TIA-1 es un biomarcador robusto inmunológica pronóstica que contribuye a la evolución clínica de los pacientes con cáncer colorrectal MMR-dominio independientemente de estadio TNM y la terapia adyuvante. El análisis combinado de CD8 /TIA-1 identifica un gran subgrupo de pacientes que se benefician de una mejor estratificación del riesgo, lo cual debe servir para adaptar el manejo clínico más individual para los pacientes con pacientes con cáncer colorrectal, mientras que proporciona una nueva vía potencial de la investigación para el desarrollo de inmunoterapia dirigida.