Extracto
Antecedentes
Mientras que la infección por VPH es la principal causa de cáncer de cuello uterino, la susceptibilidad genética a la infección por el VPH no se entiende bien. factor de necrosis tumoral alfa (TNF-alfa), que participan en la defensa contra la infección por VPH, juega un papel importante en la progresión del cáncer de cuello uterino y de regresión. El objetivo de este estudio fue investigar la relación entre el polimorfismo rs1800629 de TNF-alfa y el riesgo de infección por VPH o el cáncer de cuello uterino.
Métodos
Tres grupos han participado en este estudio de las mujeres chinas. El grupo 1 constaba de 285 pacientes positivos cervicales de alto riesgo del VPH con cáncer, Grupo 2, los pacientes positivos de VPH de alto riesgo 225 sin cáncer de cuello de útero, y el grupo 3, las mujeres negativas VPH 318 sin cáncer de cuello uterino. Las muestras de sangre se obtuvieron de todos los pacientes y genotipo por PCR-RLFP. Cincuenta muestras seleccionadas al azar fueron secuenciados más
Resultados
Las distribuciones alélicas y genotípicas del polimorfismo rs1800629 TNF-alfa no fueron significativamente diferentes entre cada uno de los grupos (p & gt; 0,05).. No hay una relación significativa entre el polimorfismo rs1800629 y la infección por VPH de alto riesgo (OR = 0,649; IC del 95%: 0,253 a 1,670, P = 0,371), el cáncer cervical (OR = 0,993; IC del 95%: 0,376 a 2,618, P = 0,988) o cáncer cervical con la infección por VPH (OR = 0,663; IC del 95%: 0,250 a 1,758, P = 0,409).
Conclusiones
Hemos demostrado que no existe una asociación entre el polimorfismo rs1800629 y TNF la infección por VPH, o cáncer cervical con la infección por VPH
Visto:. Wang N, Yin D, Zhang S, Wei H, Wang S, Zhang y, et al. (2012) TNF-alfa rs1800629 polimorfismo no está asociado con la infección por VPH o cáncer de cuello uterino en la población china. PLoS ONE 7 (9): e45246. doi: 10.1371 /journal.pone.0045246
Editor: Cordula M. Stover, Universidad de Leicester, Reino Unido
Recibido: 20 Junio, 2012; Aceptado: August 17, 2012; Publicado: 13 Septiembre 2012
Copyright: © Wang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencia natural de China (Nº 30973191), Programa de Ciencia y Tecnología de la provincia de Liaoning (No.2008225004), Proyecto Especial pico médica Construcción de la provincia de Liaoning (No.2010696), Programa de Ciencia y Tecnología de la ciudad de Shenyang (No.F11-262-9-15) e Investigador libre Proyecto del hospital Shengjing (No.200806). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer cervical sigue siendo el segundo cáncer más común entre las mujeres en todo el mundo [1]. La infección por un virus del papiloma humano (VPH oncogénicos) es un factor de riesgo para desarrollar cáncer de cuello uterino [2]. Las respuestas inmunes a la infección por VPH en el epitelio cervical juegan un papel importante en la patogénesis del cáncer cervical.
Varias citoquinas que modulan la respuesta inmunológica han sido implicados en el desarrollo del cáncer [3]. factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), secretada principalmente por macrófagos activados, es una citoquina pleiotrópica extraordinariamente con un papel central en la homeostasis inmune, la inflamación, y la defensa del huésped [4], [5]. TNF-α está implicada en la defensa contra la infección por VPH, la modulación de la replicación viral [6].
El papel de TNF-α en el cáncer no se entiende bien. la expresión de TNF desregulado dentro del microambiente del tumor parece favorecer la invasión de tejidos de células malignas, la migración, y en última instancia la formación metástasis [7]. También hay evidencia, sin embargo, que el TNF-α puede promover el desarrollo y propagación del cáncer [8], [9]. El papel de TNF-α en la promoción de tumores es apoyado por el modelo de ratón TNF-α-deficiente, en el que TNF-α
- /- ratones son resistentes al desarrollo de tumores de piel benignos y malignos. modulación de TNF puede contribuir a la regulación de la inflamación celular, y el posterior desarrollo de la enfermedad maligna [10]. Desde el desarrollo maligno de cáncer de cuello uterino es inducida por la infección viral persistente, nos centramos en el gen TNF, que puede estar implicado en la susceptibilidad a la infección por el VPH y el desarrollo de cáncer de cuello uterino.
TNF-α es regulada a nivel transcripcional [11] y los polimorfismos rs1800629 dentro de la región promotora de TNF-α se han asociado con el nivel de TNF-α [12]. La asociación de polimorfismo rs1800629 y el cáncer cervical ha sido ampliamente estudiada, pero los resultados son contradictorios [13], [14], [15], [16]. El presente estudio se realizó para investigar la distribución del polimorfismo rs1800629 y su relación con la infección por el VPH y el cáncer cervical.
Materiales y Métodos
Estudio sujetos
de 2008 a 2010, todos los pacientes tratados en el Departamento de Obstetricia y Ginecología, hospital de la Universidad médica Shengjing de china se evaluaron para la entrada en este estudio. Los pacientes se dividieron en 3 grupos. El grupo 1 constaba de 285 pacientes con diagnóstico de cáncer cervical y la infección por VPH de alto riesgo (incluyendo el VPH 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 y 68). Grupo 2 consistió en 225 pacientes diagnosticados con la infección de HPV de alto riesgo, pero sin ningún citológica cervical anormal o cambio patológico. Grupo 3 estaba compuesto de 318 mujeres chinas sano que se presenta para el cribado de rutina saludable en nuestra chequeo Center. Grupo 3 pacientes no tenían antecedentes de infección por VPH, enfermedad neoplásica cervical, o evidencia de patología cervical. Los pacientes en el grupo 3 tenían una citología cervical normal en al menos dos exámenes anuales consecutivos. Las mujeres con antecedentes de enfermedad maligna fueron excluidos del Grupo 3. Todos los pacientes eran chinos. consentimiento informado por escrito y 5 ml de sangre periférica se obtuvieron de cada participante. El protocolo de estudio fue aprobado por el Comité de Ética del hospital de Shengjing. Se detectó el VPH como se describe anteriormente [17].
El genotipado del polimorfismo rs1800629
ADN genómico fue extraído de leucocitos de sangre periférica (Kit Tiangen sangre genoma). La genotipificación se determina por reacción en cadena de polimerasa-polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción análisis (PCR-RFLP), que se basa en el método de Cabrera et al. [18]. Los productos de PCR de 50 muestras de pacientes aleatorios fueron más secuenciaron para confirmar los resultados de genotipado por PCR-RFLP.
El análisis estadístico
La asociación entre el
TNF
-α rs1800629 polimorfismo y el VPH infecciones y el cáncer de cuello uterino se estimó utilizando un análisis odds ratio (OR) y su IC del 95% calculado por regresión logística multivariante. Todas las RUP se ajustaron por edad y tabaquismo. análisis del equilibrio de Hardy-Weinberg se realizó con la prueba de Chi-cuadrado. Se utilizó la prueba de Chi-cuadrado para comparar las variables. Un valor de p de 0,05 se usó como el criterio de significación estadística. Todos los análisis se realizaron utilizando el software SPSS (versión 13.0; SPSS, Inc., Chicago, IL).
Resultados
Las características clínicas básicas de los tres grupos se resumen en la Tabla 1. La distribución de la edad y el tabaquismo no fue significativamente diferente entre los 3 grupos (p = 0,224 y 0,108, respectivamente). Los pacientes en el grupo de cáncer de cuello uterino (Grupo 1) eran todos positivos de VPH. El cáncer cervical se organizó de acuerdo con la Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia y clasificación de 49,8, 37,9, 9,8 y 2,1% de los pacientes tenían el estadio 0, I, II y III enfermedades, respectivamente. Sólo 1 paciente tenía cáncer de cuello uterino en estadio IV. Tal como se define, los pacientes del grupo 2 fueron todos positivos de VPH y no tuvieron resultados anormales del cuello uterino.
Los resultados de los análisis de PCR-RFLP de 50 muestras al azar fueron confirmadas por secuenciación (Fig. S1). Las frecuencias genotípicas en todos los grupos no eran conformes con el equilibrio de Hardy-Weinberg (P = 0,0013). Las frecuencias alélicas del alelo A en los Grupos 1, 2 y 3 fueron 8,1, 10,2 y 8,3%, respectivamente. No se encontraron diferencias significativas de las frecuencias alélicas entre los grupos (P
G1-G2 = 0,271, P
G2-G3 = 0,287 y P
G1-G3 = 0,916, Tabla 2). No se observó ninguna diferencia significativa de la distribución de los genotipos entre los grupos (P
G1-G2 = 0,551, P
G2-G3 = 0,627 y P
G1-G3 = 0,980, Tabla 2). No hubo diferencias en la distribución de genotipos entre los pacientes con diferentes estadios clínicos de cáncer de cuello uterino (Grupo 1) (P = 0,575).
En aún más el análisis de regresión multivariable, no se observó una asociación significativa en la comparación de los genotipos después de ajustar por el estado de la edad, el tabaquismo y la infección por VPH. La comparación de los Grupos 2 y 3, no encontramos relación significativa entre el polimorfismo rs1800629 TNF y la infección por el VPH (AA vs GG: O IC = 0,649, 95%:. 0,253-1,670; p = 0,371 Tabla 3). La comparación de los grupos 1 y 3, se encontró que no había relación significativa entre el polimorfismo rs1800629 TNF y el cáncer de cuello de útero (AA vs GG: O IC = 0,993, 95%:. 0,376-2,618; p = 0,988 Tabla 4). La comparación de los grupos 1 y 2, no encontramos ninguna asociación significativa entre el polimorfismo rs1800629 TNF y el cáncer cervical con la infección por VPH (AA vs GG: O IC = 0,663, 95%:. 0,250-1,758; p = 0,409 Tabla 5). No se encontraron asociaciones en los genotipos combinados (AA vs GG + GA o GG vs GA + AA) con el riesgo de cáncer de cuello uterino (Tabla 3-5).
Discusión
En este estudio, se evaluaron pacientes con VPH de alto riesgo y el cáncer de cuello de útero (Grupo 1), con el VPH de alto riesgo y sin cáncer de cuello uterino (Grupo 2), y con ninguno de VPH de alto riesgo o cáncer de cuello uterino (Grupo 3) Se evaluó la relación entre los polimorfismos rs1800629 y el VPH infecciones y el cáncer de cuello uterino. No se observó una relación significativa entre los polimorfismos rs1800629 y el cáncer de cuello uterino o la infección por VPH
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A pesar de que varios estudios han indicado que los polimorfismos en la región promotora del rs1800629 pueden ser un factor que contribuye al desarrollo de cáncer de cuello uterino [14] , [15], [19], [20], [21], los resultados han sido contradictorios. No está claro por qué los estudios sobre tumores malignos idéntico producido resultados divergentes. Las diferencias entre el diseño del estudio, las poblaciones investigadas, y el método analítico utilizado, pueden haber contribuido a estas inconsistencias. Se necesitan estudios prospectivos grandes con estudios de casos y controles emparejados para aclarar mejor el papel preciso del polimorfismo rs1800629 TNF en el cáncer de cuello uterino.
Nuestros hallazgos son similares a los reportados por Stańczuk et al. [15] y Govan et al. [16], que demostró una asociación significativa entre el polimorfismo rs1800629 y el cáncer de cuello uterino. Nuestros resultados de la distribución de genotipos y el riesgo de infección por VPH son apoyados por Deshpande et al. [14], que investigó la asociación del polimorfismo rs1800629 con la infección por VPH 16. Sin embargo, sus estudios se basaron en un tamaño de muestra pequeño y no podría haber tenido suficiente poder estadístico para detectar una diferencia. A pesar de que tenemos una muestra de gran tamaño, que fueron incapaces de confirmar la posible susceptibilidad genética de este sitio SNP.
Kirkpatrick et al. [22] demostraron que la neoplasia cervical fue influenciada por el genotipo rs1800629. Dado que la neoplasia cervical tiende a retroceder o evolucionar espontáneamente [23], que podría afectar a la evaluación de riesgo de desarrollar cáncer de cuello uterino. Un seguimiento más prolongado habría mejorado esta tasa de detección.
El origen étnico en un estudio de la susceptibilidad genética poblacional es también un factor importante que influye en los resultados. La distribución de los genotipos de rs1800629 en nuestros pacientes chinos fue similar a la reportada en la India [21], Corea [24] y Costa Rica Europeo [25] poblaciones, mientras que nuestra distribución de los genotipos fue ligeramente diferente de Sudáfrica [15] y de Zimbabwe [15 ] africano y EE.UU. [13], [23] y México [14]. poblaciones caucásicas. En un meta-análisis, Liu et al. [26] observó que la asociación entre el genotipo homocigoto AA rs1800629 y el cáncer de cuello uterino fue más significativo en los asiáticos. Sin embargo, los grupos de estudios citados por Liu et al. [26] eran relativamente pequeños y con menos potencia.
Las exposiciones ambientales pueden también desempeñar un papel importante en estos resultados inconsistentes. Las variaciones geográficas en el tipo de VPH [27] pueden contribuir a los diferentes riesgos de cáncer de cuello uterino y alterar el efecto del polimorfismo rs1800629. Sin embargo, nuestros resultados no apoyan la relación entre la infección por VPH y el polimorfismo rs1800629 en la población china.
Una limitación del presente estudio fue que se trataba de una base hospitalaria, estudio de casos y controles. Los pacientes fueron seleccionados de una sola institución y por lo tanto pueden no haber sido representante de los pacientes con cáncer de cuello uterino en la población general. Control de los sujetos fueron seleccionados de un mismo hospital, también la posibilidad de introducir un sesgo de selección. Sin embargo, la distribución de frecuencias de genotipo rs1800629 en nuestros pacientes fue similar a otros informes [28] de la población china, que sugerían que no había sesgo de selección.
rs1800629 TNF-a alelo A tienden a aumentar la expresión de TNF-α [12], pero la presión evolución parece reducir la frecuencia de alta productor TNF-α, alelo a, para reducir la mortalidad inducida por un elevado nivel de TNF-α. Teniendo en cuenta nuestros resultados, postulamos que en el ambiente vaginal inmunes comprometidos microbiana compleja, TNF-α no juega un papel importante tanto en la eliminación y transformación de VPH relacionados con el VPH. Y en la progresión de múltiples factores inducidos por el cáncer, la dualidad de TNF-α determinar que no tiene una influencia decisiva en el cáncer de cuello uterino.
Conclusión
En nuestro estudio, hemos encontrado ninguna asociación entre rs1800629 TNF polimorfismo y la infección por VPH, o cáncer cervical con la infección por VPH.
Apoyo a la Información
Figura S1.
análisis de PCR-RFLP y secuenciación de TNF-alfa genotipo rs1800629. (A) los resultados del análisis de PCR-RFLP (electroforesis en gel de 3%) (B) Secuenciación resultados por ABI 3700.
doi: 10.1371 /journal.pone.0045246.s001 gratis (TIF)
Agradecimientos
agradecemos a los miembros del Departamento de Laboratorio clave de malformación congénita Ministerio de Salud por su asistencia técnica. También se agradece a Chunxue Lu por su generosa ayuda en la recogida de muestras y el trabajo clínico con pacientes con enfermedad cervical.