Extracto
Antecedentes
Como una parte imprescindible de la vía PI3K /Akt /mTOR , mamíferos objetivo de rapamicina (mTOR) se ha demostrado que aumentar en las células de cáncer gástrico y tumores. Nuestra investigación exploró la relación entre el polimorfismo de nucleótido único rs2295080 (SNP) en
mTOR
región promotora y el riesgo de cáncer gástrico (CG).
Métodos
setecientos cincuenta -tres (753) de los pacientes con adenocarcinoma gástrico y 854 sujetos sanos fueron reclutados en el estudio de asociación de cáncer y 60 tejidos se utilizaron para probar la expresión de
mTOR
. regresión logística incondicional fue seleccionada para evaluar la asociación entre el rs2295080 T & gt; G polimorfismo y el riesgo de CG. A continuación, examinó la funcionalidad de esta variante genética promotor mediante el ensayo de luciferasa y la EMSA.
Resultados
Los individuos con el alelo G tenía un 23% menos de riesgo de CG, en comparación con aquellos que llevan el alelo T (ajustado OR = 0,77, IC del 95% = 0,65 a 0,92). Este efecto protector del alelo G se destacó en el mejor grupo masculino. Mientras tanto, los pacientes que llevan GC TG /genotipo GG también muestran una disminución del nivel de ARNm de
mTOR gratis (
P
= 0,004). En ensayo de luciferasa, T alelo tendió a aumentar la actividad transcripcional de
mTOR
con un aproximado de 0,5 veces sobre G alelo. Además, los ensayos de EMSA explicaron que diferentes alelos de rs2295080 muestran diferentes afinidades a algún factor transcripcional.
Conclusión
El
mTOR
rs2295080 polimorfismo promotor se asoció significativamente con el riesgo de CG. Este SNP, lo que influyó de manera efectiva la expresión de
mTOR
, puede ser un nuevo biomarcador de diagnóstico precoz del cáncer gástrico y un indicador adecuado de la utilización de inhibidor de mTOR para el tratamiento de GC
Visto:. Xu M, Tao G, Kang M, Gao Y, Zhu H, Gong W, et al. (2013) Un polimorfismo (rs2295080) en
mTOR
región promotora y su asociación con el cáncer gástrico en una población china. PLoS ONE 8 (3): e60080. doi: 10.1371 /journal.pone.0060080
Editor: Paolo Peterlongo, IFOM, Fondazione Istituto di Oncologia FIRC Molecolare, Italia |
Recibido: November 26, 2012; Aceptado: February 21, 2013; Publicado: 29 Marzo 2013
Derechos de Autor © 2013 Xu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado en parte por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81230068, 30972444, 81001274 y 81102089), el Programa llave de la Fundación de Ciencias Naturales de la provincia de Jiangsu (BK2010080), Fundación de Ciencias Naturales de la provincia de Jiangsu (BK2011773 y BK2012842), el Programa clave de Investigación básica de Jiangsu Provincial del Departamento de Educación (11KJB330002 y 12KJA330002), el Proyecto de Qing-Lan de Jiangsu Provincial del Departamento de Educación, y la prioridad Académico Programa de Desarrollo de las instituciones de educación superior de Jiangsu (Salud Pública y Medicina Preventiva). También nos gustaría dar las gracias a Luo Y (Cruz Roja Nanjing Centro de Sangre) por su ayuda con los experimentos funcionales. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado no tener ningún conflicto de interés en
Introducción
el cáncer gástrico (CG) es el cáncer más frecuente en todo el mundo entre los hombres con 640,556 y 349,042 mujeres con nuevos casos y 738,069 muertes relacionados en 2008 [1]. En el examen de la eficacia terapéutica, la resección quirúrgica puede ser un tratamiento curativo primario para la etapa más temprana de los pacientes GC [2]. Por desgracia, la mayoría de los pacientes con cáncer gástrico se detectan en etapa avanzada, período durante el cual el tumor no resecable son más. Por otra parte, la recaída después de la cirugía es otro acontecimiento terrible para una tasa de supervivencia a los 5 años. Teniendo en cuenta los pacientes con cáncer gástrico avanzado o recurrente, no hay duda de que el descubrimiento de biomarcadores y su solicitud acompañada con el diagnóstico tradicional podría ser una indicación valiosa y una extensa ayuda en la formulación de la estrategia de prevención y tratamiento
.
Blanco mamario de la rapamicina (mTOR) se compone de 2.549 aminoácidos dispuestos en el dominio altamente conservado [3]. Estructuralmente, mTOR contiene un dominio de unión a rapamicina en su parte central y un dominio de quinasa en el C-terminal [4]. Como un componente clave de la vía PI3K /Akt /mTOR, mTOR es estrechamente relevante para los procesos celulares de capital, tales como el crecimiento celular, la proliferación, el metabolismo, la migración, la angiogénesis y la apoptosis [5] - [7]. Hasta ahora,
mTOR
productos están afectados en dos complejos distintos (es decir, mTORC1 y mTORC2) con una sensibilidad diferente [8], [9]. mTORC1 es un complejo rapamicina-sensible que incluye mTOR más proteína de unión a FK506-12 kDa (FKBP12), LST8 mamíferos (mLST8), y la proteína reguladora asociada de mTOR (Raptor). Por el contrario, consiste mTORC2 con sin1, mLST8, y compañero de rapamicina y minúsculas de mTOR (Rictor) [10] - [12]. La desregulación de
mTOR
aparece a menudo en varios tipos de cánceres durante la carcinogénesis y el deterioro. Sin embargo, las razones de este fenómeno aberrante aún se está harto de los debates.
Una serie de estudios han investigado el papel de los polimorfismos de nucleótido único (SNPs) de
mTOR
gen en la etiología del cáncer de varios órganos, incluido el cáncer de esófago [13], cáncer de pulmón [14], cáncer de vejiga [15], cáncer de colon, cáncer rectal [16], y la leucemia linfoblástica aguda [17]. La mayoría de estos SNPs localice en los exones o intrones con efectos funcionales desconocidos. Recientemente, un número creciente de estudios se han centrado en los asientos SNPs en el gen de región promotora, que se demostró para influir en la capacidad de unión con algunos factores de transcripción (TFS) y el impacto de la siguiente transcripción de genes. En este estudio, la hipótesis de que
mTOR
rs2295080 T & gt; G polimorfismo dentro de la región promotora podría influir en la susceptibilidad a cáncer gástrico. Para probar esta hipótesis, genotipo la frecuencia de
mTOR
rs2295080 para poner a prueba su importancia en el riesgo de CG en nuestro estudio en curso, basado en el hospital de casos y controles en una población china. En consecuencia, se han detectado los
mTOR
niveles de ARNm con diferentes genotipos en los tejidos de los pacientes con cáncer gástrico. Por otra parte, hemos caracterizado aún más la funcionalidad de esta variante genética en el
mTOR
promotor de la transcripción por el ensayo de luciferasa y la EMSA.
Materiales y Métodos
Sujetos de estudio
Este estudio incluyó a 753 pacientes con diagnóstico histológico de adenocarcinoma gástrico y 854 controles sin cáncer. Todos los pacientes fueron reclutados de la Base de Investigación Clínica del Cáncer de la Universidad de Medicina de Nanjing entre marzo de 2006 y enero de 2010. Y toda la información demográfica y clínica, incluyendo la edad, el sexo, el tamaño del tumor, localización tumoral, tipo histológico, la profundidad de la invasión, metástasis en los ganglios linfáticos, metástasis a distancia, y el estadio TNM, se obtuvieron utilizando un cuestionario corto y registros médicos clínicos.
los controles de la misma frecuencia, a estos casos por edad (± 5 años) y sexo fueron recogidos en el mismo período y regiones de relación genética relacionada con la enfermedad gástrica y tumores del sistema digestivo. Cada participante firmó un consentimiento informado por escrito y donó 5 ml de sangre venosa para la extracción de ADN genómico. El protocolo de investigación fue aprobado por la junta de revisión institucional de la Universidad de Medicina de Nanjing.
Extracción de ADN y genotipado SNP
ADN genómico fue extraído de muestras de sangre como se ha descrito anteriormente [18]. La genotipificación se completa con TaqMan SNP genotipado de ensayo utilizando ABI 7900HT-PCR en tiempo real (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.) y el Sistema de Detección de Secuencia versión 2.4 (SDS 2.4). Las secuencias de cebadores y sondas estaban disponibles bajo petición, y los controles fueron contenidos para cada placa para asegurar la precisión de la determinación del genotipo. El ensayo de genotipificación se realizó por dos personas independientemente de una manera ciega. Más de 10% de las muestras fueron seleccionados al azar para la confirmación, y los resultados fueron 100% concordantes. Los cebadores y sondas se enumeran en la Tabla S1.
Cultivo celular y construcción de promotor reportero plásmidos
Una línea celular epitelial de la mucosa gástrica normal (GES-1) y tres líneas celulares de cáncer gástrico diferentes (BGC -823, MGC-803, y SGC-7901) se adoptaron en este estudio. Todas las células se cultivaron en Modificado medio de cultivo /alta glucosa Égale medio de Dulbecco con 10% de FBS, HEPES 10 mM, 2 mM L-glutamina, 1 mM piruvato sódico, 100 U /ml de penicilina, y 100 mg /ml de estreptomicina a 37 ° C en una atmósfera humidificada que contiene 95% de aire y 5% de CO
2. La mayoría de los reactivos se obtuvieron de GIBCO (Burlington, Ontario, Canadá)
En plásmidos informadores de luciferasa, el humano
mTOR
secuencias promotoras con diferentes alelos para rs2295080 T & gt;. G polimorfismo se sintetizaron y construido en el vector pGL3-basic (Promega, Madison, WI, EE.UU.) por Generay Company (Shanghai, china). Todos los plásmidos se confirmaron por secuenciación de ADN. Cebadores que participan en la prueba se enumeran en la Tabla S2.
transfección transitoria y de ensayo de luciferasa
GES-1, las células SGC-7901 BGC-823, MGC-803, y se transfectaron mediante Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) con 0,8 g de cada uno vector construido, ya sea con alelo T o G con alelo. Al mismo tiempo, 10 ng pRL-SV40 por pocillo también se transfectó como un control interno para corregir la eficiencia de transfección. Antes de que, las células se sembraron en placas de 24 pocillos durante la noche para asegurar 90% -95% de confluencia en el momento de la transfección. Veinticuatro horas después de la transfección, la actividad luciferasa se midió por el Sistema Dual-Luciferase reportero de ensayo (Promega, Madison, WI, EE.UU.) y se expresó como la relación de luciferasa de luciérnaga a luciferasa de Renilla actividades. Todas las células se hicieron por triplicado, con las mismas condiciones
La movilidad electroforética cambio de ensayo (EMSA)
El sentido secuencias de la sonda fueron los siguientes: Sonda T rs2295080, 5'-AGGGTTCCCATCCCTGAGGAC-3 ';. rs2295080 sonda G, 5'-AGGGTTCCCAGCCCTGAGGAC-3 '. proteínas nucleares se extrajeron con NE-PERTM nucleares y citoplasmáticas de extracción Reactivos (Pierce, Roca-ford, IL, EE.UU.). Las sondas de ADN se prepararon con la biotina extremo 3 'de DNA Labeling Kit (Pierce, Roca-ford, IL, EE.UU.). ensayo de cambio de movilidad electroforética (EMSA) se realizó con un kit LightShift quimioluminiscente EMSA (Pierce, Roca-ford, IL, EE.UU.). Las reacciones de unión se realizaron como sigue: los extractos nucleares (8 g de proteína) y el tampón 1 × unión con 2,5% de glicerol, mM MgCl 5
2, 50 ng /poli l (dI-dC), 0,05% NP-40, y 20 fmol rs2295080 sondas G T /rs2295080 marcados con biotina se incubaron en hielo durante 30 min en un volumen de 20 l. Para los estudios de competición, extractos nucleares fueron incubadas con oligonucleótidos sin marcar durante 30 minutos antes de la adición del oligonucleótido marcado.
Los niveles de expresión de
mTOR
ARNm.
El ARN total de 60 gástrica cáncer de los tejidos, incluidos en 753 casos, con diferentes genotipos fueron extraídos utilizando el reactivo Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.). El mRNA se midió por cuantitativa en tiempo real PCR (ABI 7300) después de la transcripción inversa. GAPDH se usó como un control cuantitativo interna para cada muestra. Los cebadores utilizados para la amplificación fueron mTOR F: 5'-TTGCTTGAGGTGCTACTG-3 'y R: 5'-CTGACTTGACTTGGATTCTG-3'; los cebadores para GAPDH eran F: 5'-AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC-3 'y R: 5'-GGGGTCATTGATGGCAACAATA-3'. Cuantificación relativa de
mTOR
mRNA se calculó utilizando el método 2-ΔΔCt. Plegables cambios se normalizaron con respecto a GAPDH, y cada ensayo se realizó por triplicado.
Análisis estadístico.
Hardy-Weinberg (HWE) fue evaluada por la bondad de chi-cuadrado de prueba de ajuste para comparar las frecuencias genotípicas observadas con la esperada entre los controles. Las asociaciones entre los genotipos y el riesgo de cáncer gástrico se estimaron mediante el cálculo de la odds ratio (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC) a partir de análisis de regresión logística con ajuste por edad y sexo. Dos caras χ
2 pruebas de significación estadística se realizaron utilizando el software SAS (versión 9.1.3; SAS Institute, Inc., Cary, NC, EE.UU.) y
P Hotel & lt; 0,05 se consideró estadística importancia.
resultados
características de los sujetos del estudio
las características seleccionadas de estos casos y controles se resumen en la Tabla 1. los casos y controles emparejados parecían estar adecuadamente la edad (
P = 0,424
) y el sexo (
P = 0,406
). Entre los 753 casos, 295 sitios de tumor incluyen el cáncer de cardias (39,2%) y 458 cáncer no cardias (60,8%). Los pacientes con tipo difuso (437, 58,0%) mostraron una proporción ligeramente más alta que la de tipo intestinal (316, 42,0%). Sobre la base de la clasificación TNM del Comité Americano Conjunto sobre el Cáncer (AJCC Cancer Staging Manual, 6
ª edición) [19], 17,3%, 17,3%, 50,6% y 14,8% de los pacientes tenían T1, T2, T3, y T4, respectivamente. Por su parte, el 60,6% de los pacientes presenta metástasis en ganglios linfáticos positivos y el 13,0% existía metástasis a distancia. De acuerdo con estas características clínicas, todos los pacientes fueron finalmente identificados con la etapa I, II, III, y IV con el 26,8%, 21,9%, 35,3% y 16,0%, respectivamente.
Los efectos globales de el polimorfismo rs2295080 en el riesgo de CG
el genotipo distribuciones de frecuencias de los alelos y de rs2295080 se presentan en la Tabla 2. las frecuencias genotípicas en los controles estaban de acuerdo con el modelo HWE (
P = 0,569
). Como se muestra en la Tabla 2, las frecuencias genotípicas de rs2295080 fueron 64,0%, 32,7% y 3,3% para los genotipos TT, TG, y GG entre los casos y 58,2%, 35,7% y 6,1% entre los controles, respectivamente. La diferencia entre los casos y controles fue estadísticamente significativa (
P = 0,008
). Además, la frecuencia del alelo G fue significativamente menor entre los casos que en los controles (19,7% frente a 23,9%,
P
= 0,003). Además, la frecuencia del genotipo TG /GG combinado fue menor entre los casos que en los controles (36,0% frente a 41,8%,
P = 0,016
). Al tomar como referencia genotipo TT, se encontró que los genotipos variantes (TG y GG) se asociaron con una disminución del riesgo de GC de una manera dosis-respuesta en comparación con el genotipo TT (OR ajustada = 0,83; IC del 95% = 0,67-1,02 de TG, y 0,49, 0,30-0,80 para GG;
P
tendencia = 0,003). Del mismo modo, también se observó que los genotipos TG /GG combinados asociados con una susceptibilidad estadística y significativamente inferior a la GC en comparación con el genotipo TT (0,78, 0,64-0,96). Tomados en conjunto, estos datos sugieren que el
mTOR
rs2295080 alelo G puede ser un alelo protector putativo.
Los varones eran más susceptibles al cáncer gástrico con rs2295080 polimorfismo
como está bien establecido, la edad y el sexo fueron factores importantes en la carcinogénesis de tumores, incluyendo el cáncer gástrico. Según el análisis de la estratificación con factores de edad y sexo, encontramos que la asociación significativa se observó en el grupo masculino, en lugar de en el grupo femenino (Tabla 3). En los hombres, llevando rs2295080 alelo G fue una significativa disminución de los factores de riesgo (OR = 0,72, IC del 95% = 0,56 a 0,93 para los TG /GG contra TT), en comparación con la realización alelo T. Sin embargo, no hubo diferencia estadística entre los sujetos jóvenes y viejos.
El análisis estratificado de las asociaciones entre el polimorfismo rs2295080 y las variables clínicas de cáncer gástrico
Nos lleva a cabo el análisis de la estratificación polimorfismo rs2295080 en todas las materias por las características clínicas de GC. Entre todas las variables independientes, los efectos protectores se observaron principalmente en los subgrupos de pacientes con cáncer de cardias gástrico (OR = 0,68, IC del 95% = 0,52 a 0,91), tipo intestinal (0,73, 0,56 a 0,96), la invasión de profundidad T3 (0,78, 0,60 -1.00), metástasis ganglionar linfático (0,79, 0,62-1,00), metástasis a distancia negativo (0,76, 0,62-0,94) y un estadio localizado (0,76, ,59-,98) (Tabla 4).
efecto del polimorfismo rs2295080 en la actividad transcripcional
Para hacerse una idea del efecto biológico funcional del polimorfismo rs2295080 en
mTOR
la transcripción, las células SGC-7901 GES-1, BGC823, MGC803, y eran transfectadas con plásmidos diferentes de informes, incluyendo luciferasa de tipo silvestre (alelo T) y el tipo de mutación (alelo G). Como se muestra en la Fig. 1A, se encontró que la actividad de transcripción de alelo T fue mayor que G alelo con una de aproximadamente 1,5 veces en más de cuatro líneas de células, lo que sugiere que rs2295080 G alelo trabajó como defensa para el cáncer gástrico mediante la reducción de la transcripción de
mTOR
.
(A) La actividad del promotor de diferentes alelos de
mTOR
polimorfismo rs2295080. Se describe el alelo T de aproximadamente 0,5 veces con respecto a la capacidad alelo G dentro de ensayo de luciferasa de cuatro tipos de líneas de células gástricas (GES-1, BGC-823, MGC-803 y SGC-7901). (B) las proteínas nucleares actividad de diferentes alelos de unión
mTOR
polimorfismo rs2295080. sondas biotiniladas (20 fmol) se incubaron con 8 g de extractos nucleares de células SGC-7901. En experimentos de competición, 10-, 100-, y el exceso molar de 200 veces de sondas G T /rs2295080 rs2295080 no marcados se utilizaron para demostrar la especificidad de cada reacción de unión.
Proteína Nuclear actividad de unión de variantes en rs2295080
a continuación, se realizó un experimento EMSA para analizar las consecuencias biológicas del polimorfismo rs2295050 en células SGC-7901. Una fuerte banda (complejo de proteínas) se cambió cuando los extractos nucleares se incubaron con la sonda rs2295080 T marcado con biotina, mientras que se observó la banda más débil cuando los extractos nucleares fueron incubadas con biotina marcado con sonda rs2295080 G. Las bandas pasado se inhibieron significativamente por un exceso molar de un rs2295080 T o rs2295080 G competidor no marcado de una manera dependerá de la dosis (Fig. 1B). Estos resultados indicaron que rs2295080 alelo G podría disminuir la actividad de unión de proteínas nucleares en cierta medida.
Asociación entre
mTOR
polimorfismo rs2295080 y los niveles de expresión de
mTOR
ARNm
Sesenta y tres tejidos de cáncer gástrico con diferentes genotipos de
mTOR
rs2295080 estaban disponibles en nuestro presente estudio. Debido a la baja frecuencia de genotipo GG, hemos añadido en las muestras con genotipo TG para el análisis. Como se muestra en la Fig. 2, los niveles de expresión de
mTOR
ARNm era mucho más altos en los individuos con el genotipo TT que en aquellos con genotipo GG o TG (media ± SEM de TT en comparación con TG /GG: 12,35 ± 1,51 frente a 6,17 ± 1,32,
P
= 0,004).
TT en comparación con genotipos TG /GG,
P = 0,004
.
Discusión
el presente estudio, se demostró que el alelo G de
mTOR
rs2295080 polimorfismo promotor se asoció con un riesgo significativamente reducido de GC. Se encontró que el cambio de T a G en rs2295080 altera sustancialmente la actividad transcripcional de
mTOR
genes a través de influir en la unión de un factor transcripcional. También observamos que
mTOR
rs2295080 alelo T se asoció con mayor
mTOR
los niveles de expresión de ARNm
in vivo
.
diana de la rapamicina en mamíferos (mTOR) , también conocido como FRAP1, es uno de los miembros necesarios de la vía PI3K /Akt /mTOR y central para la señalización metabólica [20], [21]. Puede ser activado por la insulina, factores de crecimiento similares a la insulina y otros factores de crecimiento, y se inactiva durante la inanición celular. mTOR existe dos tipos diferentes de complejos, llamados mTORC1 y mTORC2, respectivamente [22]. El complejo mTORC1 fosforila su efector aguas abajo p70s6k, lo que podría inducir la degradación del sustrato del receptor de insulina y aumentar aún más la actividad de Akt insulina impulsada. El complejo mTORC2 fosforila el C-terminal de Akt en Ser473, lo que podría conducir a la totalidad de la activación de Akt [9]. Como diana terapéutica en otros tipos de cáncer [4], [8], [23] - [27], mTOR podría también surgió como un objetivo potencial para el tratamiento del cáncer gástrico, de manera espontánea. Sirolimus [28] y everolimus [29], los inhibidores de mTOR, se identificaron para dar lugar a la detención del ciclo celular G1 y inhibieron la proliferación de líneas de células gástricas. Recientemente, un nuevo potencial de
mTOR
rs2295080 polimorfismo promotor se ha descrito en varios estudios [30] - [32]. Sin embargo, se realizaron estudios funcionales insuficientes para evaluar el papel de esta variante genética en la regulación de la
mTOR
expresión. En GC, nuestros resultados proporcionan la evidencia de que rs2295080 alelo T podría aumentar la actividad de transcripción de
mTOR
hasta cierto punto en GES-1 transfectadas línea celular después de
in vitro
. Y más adelante ensayo de luciferasa en tres líneas celulares de cáncer gástrico (es decir, BGC-823, MGC-803, y SGC-7901) confirmó este efecto del polimorfismo rs2295080. Estos resultados en nuestro estudio estaban de acuerdo con los resultados en la línea celular de cáncer renal y cáncer de cuello uterino línea celular [32]. En ensayo de EMSA, rs2295080 se predijo para localizar en el sitio de unión potencial, cuyas variantes polimórficas podría influir en el reclutamiento de factores de transcripción (utilizando el programa P-MATCH, que utiliza los sitios de unión en TRANSFAC; www.gene-regulation.com). Tomados en conjunto estos resultados, es plausible que
mTOR
polimorfismo rs2295080 podría influir en el nivel de expresión de
mTOR
y la susceptibilidad individual a varios tipos de cáncer.
Los SNP rs2295080, así como otro intrón rs11121704 SNP, fue reportado por primera vez por Hildebrandt
et al.
de localizar en
mTOR
potencial promotor región [13]. Como se describe en el cáncer de esófago, rs2295080 parecía ninguna asociación o función con la supervivencia después de la quimioterapia y la cirugía. Pero hasta ahora, varios estudios han identificado el efecto de este polimorfismo en
mTOR Opiniones de riesgo de cáncer [30] - [32], todos los cuales considera rs2295080 alelo T como factor de riesgo. En el presente estudio, la asociación entre el alelo T y rs2295080 riesgo de CG fue consistente con los resultados de tres estudios anteriores [30] - [32]. Además, nuestros resultados también sugieren que este polimorfismo puede ser un punto crucial biológico en el desarrollo de GC. Debido a diversas poblaciones y diferentes mecanismos entre la aparición, desarrollo y supervivencia, se especuló las diferencias etnicidad y distinciones mecanicistas podrían explicar estas discordancias.
Otro resultado novedoso viene de la asociación entre los géneros y
mTOR
polimorfismo rs2295080 en el análisis estratificado. Este polimorfismo rs2295080 reveló más fuerte significado en los hombres que en las mujeres. Además, Hartgrink
et al
. (2009) ha informado de la presencia de hombres y mujeres infectadas por el cáncer gástrico es de aproximadamente 2:01 por año [33]. Una explicación más detallada para las conexiones de estos resultados debe ser buscado, y diferentes tipos de expresión de hormonas en hombres y mujeres se convierten en la mejor consideración, de manera racional. En un estudio de cáncer de mama, Galoian
et al.
Ha dado los datos que prolinerich polipéptido-1 ejerce un efecto antiproliferativo a través de la inhibición de la actividad quinasa de mTOR en ER-negativo MDA-231, pero no existe efecto inhibitorio en T47 luminal -D celular que lleva a cabo como una línea de células ER-positivo [34]. Sin embargo, para los estudios de andrógenos, se creía que los andrógenos podría estimular la actividad de mTOR en células de cáncer de próstata PTEN-deficientes. Un estudio reciente sobre los receptores de andrógenos mejora la función de los andrógenos en hasta la regulación de la actividad mTORC2 [35]. Es probable que los andrógenos, en lugar de estrógeno, puede aumentar el
mTOR
expresión; andrógenos puede conducir a la alta incidencia de cáncer gástrico en hombres y el fuerte significado de
mTOR
rs2295080 en el grupo masculino en nuestro estudio.
Algunas limitaciones de nuestro estudio hay que señalar la siguiente manera . En primer lugar, rs2295080 no fue el único polimorfismo significativamente existente en
mTOR
, y la importancia de la combinación de SNPs fue abandonado en nuestro estudio. En segundo lugar, como factores cruciales en la carcinogénesis gástrica, las carencias de
Helicobacter pylori
información, fumando información, y beber información también fueron insuficientes en nuestro estudio, es desfavorable para nosotros para una mayor investigación de los efectos de este polimorfismo. Además, debido al tamaño pequeño de la muestra relativa en nuestro estudio, no hay resultados significativos parecían ser encontrado, en particular, los estratos (subgrupos de edad, subgrupo de mujeres, y otros subgrupos clínico-patológicas) de análisis estratificados (Tabla S3 y S4). Se esperaba que el estudio más grande con más información para verificar nuestros hallazgos.
En conclusión, nuestro estudio ilumina los
mTOR
rs2295080 localización en la región promotora de
mTOR
gen fue significativamente asociado con el riesgo de cáncer gástrico en una población china.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
Los cebadores y sondas utilizadas para el genotipado
doi:. 10.1371 /journal.pone.0060080.s001 gratis (DOC) sobre Table S2.
Los cebadores para la construcción de plásmidos
doi: 10.1371. /journal.pone.0060080.s002 gratis (DOC)
cuadro S3.
Interacción análisis de
mTOR
polimorfismo rs2295080 y la edad o el sexo de estado en el estudio de casos y controles
doi:. 10.1371 /journal.pone.0060080.s003 gratis (DOC) sobre Table S4.
Interacción análisis de
mTOR
polimorfismo rs2295080 y edad /sexo o caracteres clínicos en estudio de casos y solamente
doi:. 10.1371 /journal.pone.0060080.s004 gratis (DOC)
Reconocimientos
Nos gustaría dar las gracias a Luo Y (Nanjing Cruz Roja Centro de sangre) por su ayuda con los experimentos funcionales.