Extracto
La predicción de pronóstico del cáncer de próstata es biomarcadores predictivos y difíciles de recurrencia siendo difícil de alcanzar. A pesar de que el antígeno prostático específico (PSA) tiene una alta sensibilidad (90%) a un nivel de PSA de 4,0 ng /ml, su baja especificidad conduce a muchos resultados positivos falsos y un considerable exceso de tratamiento de los pacientes y su rendimiento en las gamas inferiores es pobre. Dada la heterogeneidad histopatológico y molecular del cáncer de próstata, proponemos que un panel de marcadores será una herramienta mejor que un solo marcador. Hemos probado un panel de marcadores compuestos de la FLIP proteína anti-apoptótica y sus reguladores de la transcripción Sp1 y Sp3 utilizando tejidos de la próstata a partir de 64 pacientes con recurrentes y no recurrentes de cáncer sometidos a prostatectomía radical como tratamiento primario para el cáncer de próstata y se siguieron con niveles de PSA durante al menos 5 años. La tinción inmunohistoquímica para Sp1, Sp3, y FLIP se realizó en estos tejidos y obtuvo basa en la proporción y la intensidad de la tinción. El valor predictivo de la FLIP /Sp1 /Sp3 firma para el resultado clínico (recurrencia frente a la no repetición) se exploró mediante regresión logística, y combinaciones de FLIP /Sp1 /Sp3 y la puntuación de Gleason se analizaron con un paso a paso (hacia atrás y hacia adelante) logística modelo. La discriminación de los marcadores fue identificado por análisis de sensibilidad-especificidad y el valor diagnóstico de FLIP /Sp1 /Sp3 se determinó usando el área bajo la curva (AUC) para las curvas características del operador receptor. Las AUC para FLIP, la puntuación Sp1, Sp3, y Gleason para predecir la recidiva del PSA y no fracaso fueron 0,71, 0,66, 0,68, y 0,76, respectivamente. Sin embargo, esto se incrementó a 0,93 cuando se combinan. Por lo tanto, la "firma biomarcador" de FLIP /Sp1 /Sp3 combinado con puntuación de Gleason predijo recurrencia de la enfermedad y los pacientes estratificados que son susceptibles de beneficiarse de un tratamiento más agresivo
Visto:. Bedolla RG, Gong J, Prihoda TJ, Yeh TI, Thompson IM, Ghosh R, et al. (2012) Valor Predictivo de SP1 /Firma /FLIP SP3 para el cáncer de próstata La recurrencia. PLoS ONE 7 (9): e44917. doi: 10.1371 /journal.pone.0044917
Editor: Chad Creighton, Baylor College of Medicine, Estados Unidos de América
Recibido: 24 de mayo de 2012; Aceptado: 9 Agosto de 2012; Publicado: 13 Septiembre, 2012
Este es un artículo de acceso abierto, libre de todos los derechos de autor, y puede ser reproducido libremente, distribuir, transmitir, modificar, construir, o de otra forma utilizado por cualquier persona para cualquier propósito legal. El trabajo está disponible bajo la advocación de dominio público Creative Commons CC0
Financiación:. Este trabajo fue apoyado en parte por los fondos de subvención Clinical Science Translational Premio (CTSA) (UL1RR025767); Instituto Nacional del Cáncer R01 CA 135451 y Premio 1 I01 BX 000766-01 (APK) Asuntos de Veteranos en el mérito; R01 CA 149516 (RG); y EDRN (UO1 054.174; TI). Los autores reconocen el apoyo proporcionado por la terapia del cáncer y el Centro de Investigación de la Universidad de Texas Health Science Center en San Antonio a través del Instituto Nacional del Cáncer de subvención apoyo#2P30 CA 054174-17 (APK, IMT, y RG). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de próstata (PCA) es la segunda causa principal de muerte por cáncer en los hombres y se espera que cause 28.170 muertes en los Estados Unidos en 2012 [1]. PCA generalmente afecta a los hombres mayores de 65 años de edad, pero sigue siendo indolente y asintomática en la mayoría de los casos. La heterogeneidad histopatológico y molecular de la enfermedad hace que la predicción del pronóstico desafiante. Aunque PSA es el marcador sérico más ampliamente utilizado para el cáncer de próstata, no tiene punto de corte aceptada con alta sensibilidad y especificidad y a menudo conduce a resultados falsos positivos [2] - [4]. Además, actualmente no hay marcadores moleculares que se pueden utilizar para predecir de forma fiable que las lesiones premalignas se repetirán o desarrollar en PCA invasiva [2] - [6]. Un biomarcador válido debe tener las siguientes características: (i) la precisión (no debe predecir resultados falsamente positivos o negativos); (Ii) selectividad (capacidad de diagnosticar la enfermedad durante la progresión de la enfermedad); y (iii) especificidad (la capacidad para distinguir canceroso de fenotipo no canceroso). Aunque PSA cumple la mayoría de estos criterios y es ampliamente utilizado, que está limitado por sus bajos valores de especificidad y selectividad [2] - [6]. Debido a la creciente evidencia de exceso de tratamiento del cáncer de próstata, es importante identificar y validar nuevos marcadores de pronóstico que predicen el cáncer de próstata clínicamente significativa [6] - [10]. Tales marcadores permitirán el tratamiento selectivo de los pacientes con tumores agresivos, evitando tratamientos innecesarios y sus efectos secundarios en los pacientes con enfermedad indolente.
Las investigaciones realizadas durante la última década ha identificado una serie de marcadores biológicos que están asociados con enfermedad de grado de Gleason alta [7] - [13]. Estudios previos de nuestro laboratorio encontraron una correlación entre la expresión de la proteína FLICE inhibidora (FLIP) y el grado tumoral en el cáncer de próstata humano [13]. Específicamente, encontramos que los tumores de Gleason alto grado muestran un aumento de la tinción FLIP comparación con los tumores de bajo grado de Gleason (p = 0,04) [13]. En experimentos para comprender el papel de la regulación FLIP durante la carcinogénesis de próstata, se identificaron factores de transcripción Sp1 y Sp3 como importantes reguladores de la actividad transcripcional FLIP en las células de cáncer de próstata [13]. Además, demostró que Sp1 trans-activa el promotor FLIP mientras Sp3 inhibe Sp1 mediada trans-activación, implicando así un papel para estos factores durante la carcinogénesis de próstata. Sin embargo, no se sabe si alguno de estos marcadores podrían alcanzar la sensibilidad y la especificidad necesaria para distinguir agresiva de la enfermedad indolente. A continuación, se evaluó si la "firma biomarcador" de FLIP, Sp1 y Sp3 podemos predecir el desarrollo de la recurrencia del cáncer de próstata mediante la evaluación inmunohistoquímica de muestras de tejido obtenidas de pacientes sometidos a prostatectomía como tratamiento primario para el cáncer de próstata y fueron observados durante al menos 5 años con niveles de PSA. Se demuestra que la combinación de puntuación de la FLIP, Sp1, Sp3, y Gleason es un excelente predictor de recurrencia bioquímica. El área bajo la curva característica operador receptor para FLIP, Sp1, Sp3 y la hora de predecir el fracaso de PSA fue de 0,71, 0,66, y 0,68, respectivamente; Sin embargo, cuando estos tres marcadores se combinaron con puntuación de Gleason la AUC aumentó a 0,93. Este nivel de predicción para el fracaso de PSA sugiere que este panel de biomarcadores podría ser un importante predictor de recurrencia bioquímica.
Materiales y Métodos
Pacientes y tejidos
Hemos utilizado tejidos desde el repositorio de tejido GU en la Universidad de Texas Health Science Center en San Antonio, TX para el que se obtuvo la aprobación consentimiento informado por escrito de la Junta de Revisión Institucional (número de Protocolo de HSC 20050234H banco de tejidos derecho y base de datos para las enfermedades urológicas) de la Universidad de Texas Health Science Center en San Antonio, TX. Estos pacientes fueron sometidos a prostatectomía radical como tratamiento primario para el cáncer de próstata en el Hospital Universitario y el Sistema de Cuidado de la Salud de los Veteranos del Sur de Texas, Hospital de la Administración de Veteranos Audie Murphy en San Antonio, Texas. En el estudio actual, los tejidos utilizados fueron de 64 pacientes no identificados (aprobado por la junta de revisión institucional de la Universidad de Texas Health Science Center en San Antonio). El rango de edad de 51-76 años, edad media de 63 años (Tabla 1). Los casos fueron clasificados como recurrente si el PSA era detectable y aumentó a 0,2 ng /ml o más, según lo confirmado por una segunda prueba de PSA. Los pacientes sin recurrencia tenían niveles indetectables de PSA o un PSA & lt; 0,2 ng /ml durante al menos un período de seguimiento de 60 meses después de la prostatectomía. De los 64 sujetos, 30 tenían cáncer recurrente (47%) y 34 eran sin recurrencia (53%). puntuaciones de Gleason fueron significativamente diferentes entre los dos grupos (p = 0,0001): 82,35% de los casos no recurrentes (PSA no falla) tenían bajo grado de Gleason [5 a 7 (3 + 4)], mientras que 76.66% de la PSA casos de recurrencia (fracaso del APE) tenían alto grado de Gleason [7 (4 + 3) a 9].
La puntuación total para esta muestra fue de 0, 6, y 0 para FLIP, Sp1, y SP3, respectivamente. B. H & amp; E y tinción IHC de la FLIP, SP1 y SP3 en una muestra representativa de un paciente con PCA recurrente [(Gleason 9 (4 + 5)] en condiciones de baja magnificación (izquierda) y gran aumento (derecha) La puntuación total. para esta muestra fue de 7, 8, y 6 para la FLIP, Sp1, y SP3, respectivamente.
Los anticuerpos e inmunohistoquímica
anticuerpos policlonales de conejo específicos para FLIP, Sp1, y SP3 eran de Santa Cruz de Biotecnología (Santa Cruz, CA). la inmunohistoquímica (IHC) se llevó a cabo en las instalaciones de núcleo patología del Departamento de la Universidad de patología de Texas Health Science Center en San Antonio. la tinción se realizó utilizando métodos IHC estándar, incluyendo el uso de la adecuada controles negativos. polímero HRP de conejo y el cromógeno DAB fue utilizado como el SV y hematoxilina (Dako North America Inc. Carpentaria, CA) se utilizó para la tinción de contraste.
el área bajo la curva ROC calculados para FLIP (0,71), sp1 (0,66), Sp3 (0,68), y Gleason (0,76) muestran diversos grados de discriminación como predictores de recurrencia. Un área bajo la curva ROC de 0,8 a 1,0 se considera que es muy buena a excelente discriminación, mientras que 0,5 indica que no hay discriminación.
Unidad de Evaluación semicuantitativa de tinción de tejidos
Las secciones de tejido que contiene 30 -40% de tumor fueron elegidos para la evaluación patológica. Un patólogo (I-TY) evaluó a ciegas tinción del tejido de la próstata. intensidad de la tinción y la proporción de células tumorales tinción positiva se determinaron de forma independiente. En pocas palabras, la proporción de células tumorales positivas se obtuvo como sigue: 0, no hay células teñidas; 1, ≤1%; 2, 1-10%; 3, 10-33%; 4, 33-66%; 5, 66-100% de tinción positiva. La puntuación de intensidad (IS) representa la intensidad media de la tinción de las células tumorales: 0, sin manchas; 1, débil; 2, moderado; 3, la tinción fuerte. La puntuación de la proporción y la puntuación de intensidad se añadieron para obtener la puntuación total (TS) con un rango de 0 a 8.
El área bajo la curva ROC calculados para combinación de FLIP, Sp1, Sp3, la puntuación de Gleason, y sus interacciones da un valor de 0,93 indica una excelente discriminación entre casos no recurrentes y recurrentes.
Métodos estadísticos y Análisis
Asociación de la FLIP /firma biomarcador Sp1 /Sp3 con el resultado clínico (recurrencia frente a la no repetición) se evaluó utilizando varios métodos estadísticos. La media de las puntuaciones de tinción para la expresión de proteínas en los dos grupos se compararon con una prueba de suma de rangos de Wilcoxon. los valores de p & lt; 0,05 se consideró significativo. El valor predictivo de cada marcador (FLIP, Sp1 y Sp3) para el resultado clínico (recurrencia o no recurrencia) se exploró primero individualmente con la regresión logística, y luego el aditivo predijo valor de la FLIP /Sp1 /firma Sp3 y el grado en que interactuaban entre sí y con la puntuación de Gleason fue explorada con un modelo de selección hacia atrás. La discriminación de los marcadores fue identificado con análisis de sensibilidad-especificidad y el valor diagnóstico de la FLIP /Sp1 /Sp3 firma se determinó usando el área bajo la curva (AUC) para la característica operador receptor (ROC) curvas. Las variables con p & lt; 0,15 se retuvieron [14] con el fin de mejorar la precisión de la significativa (p & lt; 0,05) las variables de notificación. Para el modelo final se llevó a cabo la bondad de Hosmer-Lemeshow de prueba de ajuste. Se indican los niveles de significación y AUC para la curva ROC. El análisis se llevó a cabo usando SAS versión 9.2 (SAS Institute Inc.) y la versión STATA 9.2 (Stata Corporation).
En un punto probabilidad de corte de 0.45 tanto la sensibilidad (80%) y especificidad (85.3 %) para esta combinación de marcadores es alta, lo que indica un excelente poder de discriminación de la combinación.
resultados
En este estudio se evaluó la expresión de la FLIP proteína anti-apoptótica y su reguladores de la transcripción Sp1 y Sp3 de evaluación inmunohistoquímica de muestras de tejido obtenidas de 64 pacientes sometidos a prostatectomía radical como tratamiento primario para el cáncer de próstata. Los pacientes tenían al menos 60 meses de seguimiento con los niveles de PSA y sólo se consideraron aquellos con un PSA indetectable a los 60 meses de tener la enfermedad no recurrente. El aumento de los niveles de PSA después de la prostatectomía se utilizaron como punto final sustituto para un mal resultado. PSA no falla fue definida como niveles de PSA indetectable o & lt; 0,2 ng /ml durante al menos 5 años después de la prostatectomía y no hay otros signos de recidiva como metástasis. fracaso PSA se define como un nivel de PSA & gt; 0,2 ng /ml que aumentó durante los 5 años después de la prostatectomía [15]. Debido al tamaño limitado de la muestra sólo dos vías interacciones fueron considerados y PSA no ha sido añadido a la puntuación de Gleason. En primer lugar, se comparó la expresión de FLIP, Sp1 y Sp3 entre los dos grupos mediante inmunohistoquímica y encontramos diferencias significativas entre los grupos de fracaso del APE y la ausencia de fallos en la expresión de FLIP, SP3 y Sp1 (Wilcoxon la suma de rangos; Figura 1 y Figura 2). Como se muestra en los diagramas de caja en la Figura 1, se encontraron diferencias significativas en la puntuación de IHC media total entre los casos no recurrentes y recurrentes para Sp1 (p = 0,019), Sp3 (p = 0,011), y la FLIP (p = 0,0019) . También se incluye la puntuación de Gleason en nuestro análisis, ya que esto tendrá una influencia en el resultado. Puntuaciones de Gleason de nuestra cohorte de 64 pacientes fueron significativamente diferentes en los grupos de carácter no recurrente y recurrente (p = 0,0001; datos no presentados). Se debe mencionar que este no es necesariamente el caso ya que los estudios han demostrado que el grado de Gleason 7 por sí mismo puede no ser significativo [16]. En nuestra cohorte, el 50% de los casos de prostatectomía eran Gleason 7: (29.69% eran 3 + 4 y el 20,3% eran 4 + 3). Del 29,69% que eran 3 + 4, el 41,2% eran no-recurrente y 16.67% eran casos recurrentes. Por otra parte, de la 20,3% con el más agresivo 4 + 3 de clasificación, 8,8% eran no-recurrente y 33.33% eran recurrente. Estos datos sugieren que las diferencias en la FLIP, Sp1, Sp3 y entre los grupos bioquímicamente recurrentes y no recurrentes son significativos.
casos por encima del punto de corte de 0,45 (línea discontinua) se prevé que se repita. La interacción de la FLIP y SP3 se muestra como líneas de color sólido en el eje X. B. Predicción de probabilidad de recurrencia cuando Gleason es de alto grado 7 (4 + 3) para los diferentes niveles de Sp1 (0, 3 y 6) y SP3 (0-6) como una función de FLIP (0-8) la interacción. Casos por encima del punto de corte de 0,45 (línea discontinua) se prevé que se repita. La interacción de la FLIP y SP3 se muestra como líneas de color sólido en el eje X.
Sobre la base de las diferencias significativas observadas entre los grupos bioquímicamente recurrentes y no recurrentes, el próximo calculó la sensibilidad y la especificidad de los datos generados [16] - [17]. regresión logística univariante de la FLIP, Sp1, Sp3, y el grado de Gleason dio lugar a las AUC para las curvas ROC de 0,71, 0,66, 0,68, y 0,76, respectivamente (Figura 3).
En vista de los resultados anteriores que exploramos el valor pronóstico de los marcadores utilizando un modelo de logística multivariable con una selección hacia atrás, que incluyó la puntuación de Gleason (alta versus baja) (p = 0,14), la FLIP (p = 0,07), y SP1 (p = 0,08) como efectos principales y la interacciones de la FLIP con SP3 (p = 0,02), Sp1 (0,11), y Gleason (p = 0,03), así como la interacción de SP3 y Gleason (p = 0,014), como efectos de segundo período. Estas interacciones fueron significativamente diferentes entre los grupos no recurrentes y recurrentes. Las variables con p & lt; 0,15 fueron retenidas por la bondad de Hosmer-Lemeshow del modelo Fit, usando el fracaso de PSA frente a no-fracaso como la variable dependiente. El modelo mostró un buen ajuste, con el valor de Chi-cuadrado de 8,8 yp = 0,4, con una AUC de la curva ROC de 0,93 (Figura 4). En el punto de corte óptimo de 0,45, la sensibilidad fue del 80% y la especificidad fue del 85,29%, lo que resulta en la clasificación correcta en el 83% de los casos (Figura 5).
La figura 6 muestra los pacientes que se prevé que repetirse sobre la base de estos biomarcadores. Tanto Gleason y PSA solo tienen sensibilidades inferiores a 80%, por tanto, este modelo es una mejora en los marcadores actualmente en uso. Nuestra trama de predicción de regresión logística muestra que una combinación de FLIP, Sp1 y Sp3 además de Gleason es pronóstico de la insuficiencia PSA y no fracaso. Cuando representamos gráficamente los resultados del modelo para la predicción de probabilidad de recurrencia en el eje Y y la interacción de la FLIP-SP3 por grado de Gleason (alta o baja) en el eje X, podemos ver claramente el impacto de la interacción entre los dos marcadores y la influencia de la grado de Gleason, y también la influencia de Sp1 en tres niveles (puntuación total de 0, 3, y 6). En la Figura 6 A & amp; B, todos los casos por encima del punto de corte de 0,45 (línea discontinua) se prevé que sea recurrente. Con cada incremento en la puntuación de tinción de SP3, junto con un aumento de la FLIP, el riesgo de recurrencia sube incluso con un bajo grado de Gleason de 5-7 (3 + 4). Sin embargo, cuando el grado de Gleason 7 es alta (4 + 3) -9 y Sp1 es alta (6), el riesgo aumenta de forma espectacular. Cuando FLIP es de 4 (rango 0-8) y el grado de Gleason es alta, tanto SP3 y Sp1 necesitan estar cerca de 0 para un caso que no recurrente, pero cuando el marcador Sp1 es 3, los casos con una puntuación de 4 FLIP son recurrente cuando SP3 es ≥1 (Figura 6 A y B). Este modelo muestra que la FLIP, los niveles de Sp1 y Sp3 en conjunción con el grado de Gleason puede ser un buen predictor del riesgo de recurrencia bioquímica después de la prostatectomía radical. La Figura 6 indica que para un valor dado de la puntuación Sp3 (independiente de la puntuación SP1), la predicción de probabilidad de recurrencia aumenta al aumentar la tinción FLIP cuando la puntuación de Gleason fue baja, lo que sugiere una interacción potencial. Por otro lado, cuando la puntuación de Gleason fue alta, aunque la predicción de probabilidad de recurrencia aumentó con tinción FLIP cuando el marcador Sp1 era 0 o 3, cuando el marcador SP1 fue de 6, no vimos esta interacción, lo que sugiere que Gleason y SP3 son suficientes para predecir la recurrencia (Tabla 2).
los datos presentados en este manuscrito muestran la importancia de la FLIP /Sp1 /Sp3 firma para predecir la recurrencia bioquímica en esta cohorte de pacientes. Nuestros estudios previamente publicados demostraron la importancia de los factores de transcripción Sp1 y Sp3 en la regulación transcripcional de FLIP [13]. Los datos actuales indican que estas proteínas son actores importantes en la recurrencia del cáncer de próstata. Otros experimentos de silenciamiento de genes que utilizan líneas celulares de cáncer de próstata sugieren que Sp1 fisiológicamente regular FLIP (datos no mostrados). Estos resultados sugieren que la expresión de FLIP está regulada positivamente por Sp1 en células tumorales y que la orientación Sp1 /Sp3 /FLIP podría ser una vía potencial para el manejo clínico de cáncer de próstata recurrente. Especulamos que Sp1 /Sp3 podría inhibir la actividad promotora FLIP, lo que lleva a la activación de la señalización apoptótica.
Discusión
A partir del manejo clínico de la PCA se ha visto obstaculizada por la heterogeneidad intratumoral significativa combinado con una comprensión incompleta de los eventos moleculares asociados con el desarrollo de la enfermedad y posterior recurrencia después de los tratamientos tradicionales [18] - [19]. Por lo tanto, existe una necesidad no satisfecha de nuevos métodos y /o agentes para la gestión de PCA. Dada la variación genética individual y la heterogeneidad de la enfermedad, los enfoques de tratamiento personalizado son críticos para la administración exitosa de PCA. Para desarrollar este tipo de enfoques de tratamiento individualizado, es esencial para identificar un panel de biomarcadores o una "firma de biomarcadores" que podría ser utilizado para estratificar a los pacientes según la respuesta a tratamientos específicos [20] - [21]. Aunque la prueba de PSA basada en suero se usa ampliamente, PSA tiene las siguientes limitaciones como un biomarcador detección temprana [20] - [23]: (i) los niveles elevados de PSA en suero se han observado no sólo en el cáncer de próstata, sino también en prostática benigna pacientes con hiperplasia, por lo tanto, PSA no es específico de cáncer de próstata, y (ii) PSA no es lo suficientemente sensible como se indica por la prueba del cáncer de próstata Prevención (PCPT), que demostró que 15% de los hombres con niveles de PSA de 4 ng /ml tuvo próstata el cáncer y el 15% de estos pacientes tenían enfermedad de alto grado de Gleason. Además, dos ensayos aleatorios mostraron un efecto moderado de la prueba de PSA en la mortalidad por cáncer de próstata, lo que sugiere un riesgo sustancial de biopsia negativa y sobrediagnóstico y sobretratamiento del cáncer indolente. Aunque numerosos marcadores incluyendo α-methyacylCoA-racemasa (AMCAR), sintetasa de ácidos grasos (FASN), ERG, y antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA), se han identificado en base a estudios preclínicos y demostrado que se asocia con el resultado de cáncer de próstata después del tratamiento quirúrgico mediante muestras de tejidos humanos, muy pocos de ellos tienen valor predictivo independiente de los factores tradicionales pronósticos como el grado de Gleason, estadio patológico, y los niveles de PSA pretratamiento [5] - [6]. A lo mejor de nuestro conocimiento, no existen actualmente marcadores sensibles para monitorear recurrencia de la enfermedad.
En este estudio se evaluó la expresión de la FLIP proteína anti-apoptótica y los factores de transcripción Sp1 y Sp3 por evaluación inmunohistoquímica de tejido muestras obtenidas de 64 pacientes sometidos a prostatectomía radical como tratamiento primario para el cáncer de próstata. Creemos que este es el primer informe de la FLIP, Sp1 y Sp3 expresión y la correlación entre estas proteínas en muestras de PCA bioquímicamente recurrentes. Aunque el aumento de expresión de SP1, SP3, o FLIP mostró diferencias significativas entre los casos de fracaso del APE y la ausencia de fallos, de forma individual no son fuertes predictores de mala evolución clínica basada en el AUC, cuando el fracaso de PSA se utiliza como un sustituto resultado: el área bajo la ROC curva para FLIP, Sp1, Sp3, y Gleason como predictor de los casos de fracaso del APE y no de fracaso fue de 0,71, 0,66, 0,68, y 0,76, respectivamente. Por otro lado, la firma biomarcador de Sp1 /Sp3 /FLIP combinado con Gleason logra una AUC de 0,93. Estos datos indican una excelente discriminación entre los casos de fracaso del APE y la ausencia de fallos y sugieren que esta firma biomarcador es un importante predictor de la probabilidad de recurrencia bioquímica. Esto es significativo ya que los procedimientos de diagnóstico actuales no pueden distinguir entre la enfermedad agresiva y clínicamente indolente, lo que resulta en más hombres que reciben tratamiento para la enfermedad de lo necesario. Nuestra firma de tres genes en combinación con el grado de Gleason era exacta el 83% del tiempo en nuestra cohorte
.
La observación de que Sp1 /Sp3 y FLIP pueden ser predictores de resultado clínico podrían reflejar su importante papel en el cáncer de próstata. Los niveles elevados de Sp1 /Sp3 /FLIP podría estar relacionado con la resistencia a la apoptosis y la progresión de la recurrencia bioquímica o la progresión de baja a cáncer de próstata de alto riesgo. FLICE inhibidora de proteína celular (c-FLIP) es una forma truncada de la caspasa-8 que se ha demostrado que desempeñan un papel crítico en el desarrollo de resistencia a agentes terapéuticos en las células cancerosas mediante la inhibición de la apoptosis mediada por receptores de muerte de señalización [24] - [ ,,,0],25]. En consecuencia, FLIP se sobreexpresa en varios tipos de cáncer y esta sobreexpresión se ha demostrado para determinar la resistencia terapéutica [26] - [35]. Además, la sobreexpresión de FLIP se ha correlacionado con mal pronóstico en el colon, la vejiga y cáncer urotelial [26] - [35]. Estudios recientes de nuestro laboratorio demostraron que las muestras de cáncer de próstata de alto grado muestran una mayor expresión de FLIP que los de los tumores de bajo grado [13]. Además, también mostró que FLIP está regulado transcripcionalmente por medio de la modulación de los factores de transcripción Sp1 y Sp3 y que la inhibición del desarrollo de tumores de próstata FLIP impedido en un modelo animal preclínico [13]. Sp1 y Sp3 pertenecen a la familia Zn-dedo de factores de transcripción que se ha demostrado para regular la expresión de genes implicados en diversos procesos celulares de la oncogénesis incluyendo la diferenciación, apoptosis, migración celular, y la progresión del ciclo celular [36] - [38]. Sp1 y Sp3 tienen características estructurales similares, incluyendo un dominio de unión de ADN altamente conservado y por lo tanto se unen al ADN con afinidad similar. Aunque Sp1 es un conocido trans-activador, funciones Sp3 tanto como un activador y como un represor en función del contexto celular. Aunque los estudios sobre Sp3 y el cáncer se carece, los niveles de Sp1 se han demostrado ser elevados en una amplia variedad de cánceres incluyendo cáncer de mama, tiroides, hepatocelular, pancreático, colorrectal, gástrico, y cáncer de pulmón [38]. Además, los niveles de proteína Sp1 anormales se han correlacionado con la etapa del cáncer y de mal pronóstico. En consecuencia, la inhibición de Sp1 o su derribo a niveles celulares normales por lo general disminuye la formación de tumores, el crecimiento y la metástasis. Es de destacar que previamente se demostró que Sp1 trans-activa FLIP en las células de cáncer de próstata, mientras que Sp3 inhibe esta trans-activación [13]. Sobre la base de estos datos que esperábamos ver una asociación inversa entre el SP1 y SP3 en estas muestras. Sin embargo, la asociación positiva observada sugiere que Sp1 y Sp3 tienen un papel funcional similar en el contexto de la microambiente tumoral aunque otros factores, tales como el tamaño pequeño de la muestra, también podrían contribuir a estas observaciones. Nuestros datos sugieren que la expresión de FLIP podría ser regulada positivamente por Sp1 en células tumorales y que la orientación Sp1 /Sp3 /FLIP podría ser una vía potencial para el manejo clínico de cáncer de próstata recurrente.
Este es el primer informe para describir una la firma de tres genes que podrían utilizarse para evaluar si el cáncer de un paciente va a recurrir después de una terapia dada. una herramienta de este tipo tendría un impacto significativo en el manejo clínico de cáncer de próstata. Estudios anteriores indicaron que AR y pAkt tinción predice la recurrencia después de la prostatectomía [17], [39] y es posible que la combinación de estos marcadores con las del presente estudio puede mejorar aún más la predicción de la recurrencia. los estudios de seguimiento más grandes, incluyendo la validación de estos hallazgos a través de conjuntos de datos independientes, están garantizados para evaluar la utilidad de esta firma de biomarcadores. La replicación de estos resultados y la inclusión de todos los factores pronósticos conocidos en el estudio también reforzarían la validez de esta firma biomarcador, solos y en combinación. En resumen, nuestros datos indican que la firma Sp1 /Sp3 /FLIP en combinación con el grado de Gleason es predictivo de recurrencia del cáncer de próstata y que su aplicación clínica podría evitar intervenciones agresivas innecesarias, mejorando así la calidad de vida y la reducción de los gastos relacionados con la salud.
traslacional Relevance
Aunque antígeno específico de próstata (PSA) se utiliza ampliamente para la detección de cáncer de próstata, hay una necesidad de un marcador biológico (s) que predice de manera fiable la recurrencia del cáncer de próstata. Hemos identificado previamente los factores de transcripción Sp1 y Sp3 como reguladores de la FLIP proteína anti-apoptótica utilizando modelos de cultivo celular. Estudios posteriores demostraron que la inhibición del desarrollo de tumores de próstata en un modelo animal preclínico fue acompañado por la baja regulación de la FLIP y SP1. Aquí se investigó el uso potencial de estos genes como predictores de pronóstico del cáncer de próstata. Se analizaron retrospectivamente los tejidos de los pacientes con cáncer de próstata recurrente y no recurrente que habían sido sometidos a prostatectomía radical como tratamiento primario y fueron seguidos durante al menos 5 años con niveles de PSA. Las áreas bajo las curvas características de funcionamiento de los marcadores FLIP individual, la puntuación Sp1, Sp3, y Gleason para la predicción de la recidiva del PSA y no fracaso fueron 0,71, 0,66, 0,68, y 0,76, respectivamente. Esto mejoró a 0,93 cuando los marcadores se combinaron con Gleason y se consideraron sus interacciones. Sobre la base de estos análisis, se concluye que la "firma biomarcador" de FLIP /Sp1 /Sp3 puede predecir la recurrencia de la enfermedad y estratificar los pacientes susceptibles de beneficiarse de un tratamiento más agresivo. Estos resultados también proporcionan apoyo a la orientación del eje de Sp1 /Sp3 /tirón para la gestión de cáncer de próstata y justifican más estudios utilizando un tamaño de muestra mayor y conjuntos de datos clínicos adicionales.
Reconocimientos
Agradecemos Shellye R Lampkin (Departamento de Patología) y David R. Rodríguez, (Instituto de cáncer de Greehy niños) en la Universidad de Texas Health Science Center para obtener ayuda con la inmunohistoquímica y la preparación de gráficos de modelo, respectivamente. Agradecemos a Donna P Ankerst y Xiaoyu Shi, Departamento de Urología por sus comentarios de expertos sobre el manuscrito.