Extracto
Antecedentes
El cáncer de pulmón es la principal causa de muerte entre los tumores malignos en todo el mundo. La comprensión de su biología, por tanto, de importancia fundamental es mejorar el pronóstico del paciente. En contraste con los tejidos no neoplásicas, células de cáncer de utilizar la glucosa principalmente para la producción de módulos celulares básicos '(es decir, nucleótidos, aminoácidos, ácidos grasos). En el cáncer, enzima málico (ME) y ATP-citrato liasa (ACLY) son enzimas clave que relacionan la síntesis de ácidos grasos y la glucólisis aeróbica y por lo tanto puede ser de importancia biológica y pronóstico en el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC).
material y Métodos
ME y expresión ACLY se analizó en 258 NSCLC en correlación con los parámetros clínico-patológicas incluyendo la supervivencia del paciente.
resultados
Sin embargo, la expresión global de ambos enzimas correlacionados positivamente, ACLY se asoció con el estadio tumoral local, mientras que ME correlacionada con la aparición de metástasis en los ganglios linfáticos del mediastino. Los pacientes jóvenes que sobreexpresan ACLY y /o ME tuvieron una supervivencia global significativamente mayor. Esto resultó ser un factor pronóstico independiente. Esto contrasta pacientes con CPNM mayores, en los que la sobreexpresión de ACLY y /o ME parece predecir lo contrario.
Conclusión
En el NSCLC, ME y ACLY muestran diferentes expresiones de enzimas relacionadas con la diseminación local y del mediastino . Lo más importante, hemos detectado un impacto pronóstico inversa de ACLY y /o ME sobreexpresión en pacientes jóvenes y ancianos. Por lo tanto, se puede esperar, que el tratamiento del NSCLC en especial, si la orientación vías metabólicas, requiere diferentes estrategias en diferentes grupos de edad
Visto:. Csanadi A, C Kayser, Donauer M, Gumpp V, Aumann K, J Rawluk , et al. (2015) Valor pronóstico de la enzima málico y la ATP-citrato liasa en células no pequeñas de cáncer de pulmón de los jóvenes y los ancianos. PLoS ONE 10 (5): e0126357. doi: 10.1371 /journal.pone.0126357
Editor Académico: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Hospital, HONG KONG
Recibido: 26 Diciembre, 2014; Aceptado: April 1, 2015; Publicado: 11 de mayo de 2015
Derechos de Autor © 2015 Csanadi et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están disponibles en el apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:. los autores reconocen el apoyo de este estudio realizado por el Deutsche Forschungsgemeinschaft SFB850. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de pulmón es la causa principal de muerte por tumores malignos relacionados con el mundo [1]. A pesar de los enormes avances en los tratamientos médicos, el pronóstico de los pacientes con cáncer de pulmón sigue siendo pobre con una tasa de supervivencia a 5 años oscila entre el 7,9% y el 16,5% [1, 2].
Al mostrar que los pacientes se benefician de diferentes regímenes de quimioterapia dependiente el subtipo histológico, Scagliottti abolió el dogma para tratar el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) como un grupo [3] oncológicamente homogénea. Por lo tanto, los principales subgrupos de NSCLC, adenocarcinoma (LAC), carcinoma de células escamosas (SCC) y carcinoma de células grandes (LCC) no sólo muestran diferentes patrones histológicos, pero presentan características biológicas y moleculares específicos, también. Una mejor comprensión de estas características distintivas ayudará a dirigir terapias personalizadas. En este contexto, los cambios metabólicos asociados con la transformación celular maligna son de importancia fundamental.
Durante décadas, se sabe que los tumores malignos producen lactato excesiva incluso en presencia de oxígeno suficiente (efecto Warburg) [4]. Sin embargo, los mecanismos detrás de este fenómeno no se comprenden totalmente. Las células malignas funcionan con autonomía metabólica, y la glucosa, sus metabolitos, así como la glutamina no son sólo las fuentes de energía. También sirven como unidades de construcción básicos a través de la generación de moléculas clave que se necesitan para el crecimiento tumoral celular y por lo tanto maligna [5, 6].
Como enzimas del metabolismo de la glucosa representan un punto final común aguas abajo por diversas mutaciones del conductor del tumor, que pudieron ser dianas prometedoras para nuevos agentes quimioterapéuticos, también [7]. Entre estas enzimas, ATP-citrato liasa (ACLY) y la enzima málico (ME) son dos jugadores clave: ME sirve como fuente de equivalentes reductores en las células malignas altamente cataplerotic. ACLY construye una derivación fisiológica entre el metabolismo de la glucosa y la síntesis de ácidos grasos [6].
Por lo tanto, analizamos los patrones de expresión de estas dos enzimas para dilucidar su asociación con las características clínico-patológicas y su impacto sobre la supervivencia biológica del paciente en el CPNM . Nuestros resultados muestran claramente que los cambios metabólicos funcionales en el CPNM son complejos, se diferencian en subtipos histológicos y predecir diferentes resultados en función de la edad del paciente.
Materiales y Métodos
Declaración de Ética
La estudio ha sido aprobado por el Centro Médico Universitario de Friburgo (Universidad del comité de ética del Centro Médico de Friburgo, EK 10/12). los datos relacionados con el paciente ha sido seudónimos y los resultados obtenidos por este estudio no influir en el tratamiento del paciente. El material archivado se había utilizado al menos tres años después del diagnóstico inicial. Al firmar el contrato de tratamiento con el Centro Médico Universitario de Friburgo, cada paciente de acuerdo en que su /su tejido (s) pseudonimizado puede ser sospechoso de ensayos de investigación retrospectivos no interferir o influir en las opciones de tratamiento actuales. El comité de ética de la Universidad del Centro Médico de Friburgo así aprobada que ningún estudio específico consentimiento individual de cada paciente tuvo que ser obtenido.
Cohorte
258 pacientes que sufren de NSCLC se incluyeron en este estudio. Los pacientes sometidos a tratamiento quirúrgico entre 1990 y 2007 (Departamento de Cirugía Torácica, Centro Médico Universitario de Friburgo; S1 conjunto de datos) y no habían recibido terapia neoadyuvante. Fijación, recaudación y la inclusión en parafina se realizaron de acuerdo con protocolos de rutina. Todos los casos de cáncer se han reclasificado de acuerdo con la actual clasificación de la OMS [8], puesta en escena se volvió a evaluar en concordancia con la última clasificación de la UICC [9]. Tejido arrays múltiples (TMA) se construyeron con un diámetro de núcleo de 2 mm. De todas las muestras se tomaron tres TMA-núcleos de diferentes sitios para evitar el sesgo de la heterogeneidad intratumoral. Un TMA de 36 correspondientes tejidos pulmonares no neoplásicas ofrecerá por el sistema de control. (S1 Tabla: Resumen de los datos clínico-patológica)
La inmunohistoquímica y la puntuación
recuperación de antígeno inducida por calor se llevó a cabo a un pH de 9.0 para ACLY ya pH 6,0 para mí.. tiempo de incubación del anticuerpo primario fue de 30 minutos (ACLY: 1: 400, Tecnologías de Señalización Celular 4331S, ME: dilución 1: 2000, clon 3H5, Abnova Biozol). La visualización se realizó mediante la fosfatasa alcalina con cromógeno Fast Red de tipo (DAKO VERDADERO K5005) y peroxidasa de rábano picante con cromógeno diaminobencidina basada (Dako EnVision FLEX) para mí y ACLY, respectivamente. contratinción nuclear se realizó con hematoxilina (haemalaun ácida de Mayer, Waldeck, nº de catálogo. 1A-552). La plataforma de tinción automática DAKO fue utilizado para los procedimientos de tinción.
Para ambas tinciones de inmunohistoquímica, ACLY y ME, se validaron protocolos para la tinción específica por omisión de los anticuerpos primarios. Estos procedimientos de validación no mostraron reacciones inespecíficas cromógeno.
Expresión
La enzima se considera positivo, si se detectó tinción citoplasmática específica. Para ACLY, también se evaluó la positividad nuclear específica. puntuación inmunohistoquímica seguido protocolos descritos anteriormente [10, 11] y se evaluó de modo similar al aceptados internacionalmente de puntuación de los marcadores predictivos [12, 13]. intensidad de la tinción se evaluó semi-cuantitativamente usando un sistema de puntuación 4-cansado (Fig 1). El porcentaje de células tumorales positivas se determinó teniendo en cuenta todas las células tumorales positivas en relación con su número absoluto. Los porcentajes fueron redondeados al decimal. Nuclear y expresiones citoplasmáticos de ACLY se evaluaron por separado
(A) -. (D) específico ACLY-expresión era detectable en el núcleo, o en el citoplasma. (UN); tejido tumoral sin puntuación de tinción intensidad ACLY específica = 0; (B) débil frente al citoplasma de la puntuación específica ACLY tinción de intensidad = 1; (C) moderada puntuación ACLY tinción nuclear de intensidad = 2 y la puntuación ACLY tinción citoplasmática intensidad moderada = 2; (D) fuerte citoplasmática puntuación ACLY tinción de intensidad = 3, la tinción nuclear moderada, además, está presente; (E) - (H) específica la expresión citoplasmática de ME, (E) tejido tumoral sin puntuación ME tinción citoplasmática específica intensidad = 0 (F); débil frente al citoplasma de la puntuación específica ME tinción de intensidad = 1 (G); moderada puntuación ME tinción citoplasmática intensidad = 2 (H) y con una fuerte puntuación ME tinción citoplasmática intensidad específica = 3 (E). (Ampliación; 20x) guía empresas
Estadísticas
Para todos los análisis estadísticos los valores medios de los tres núcleos de TMA de cada caso se utilizaron. Las diferencias en la expresión de la enzima se evaluaron mediante pruebas no paramétricas.
El análisis de supervivencia incluye curvas de Kaplan-Meier y log-rank pruebas. Para los análisis multivariados, se utilizaron modelos de regresión de Cox-. Todos los análisis estadísticos se realizaron con el paquete de software SPSS 21.0. El nivel de significación se fijó en 5% (es decir,
p Hotel & lt; 0,05). El nivel de significación global se ha ajustado para múltiples pruebas utilizando el método de Benjamini-Hochberg [14] (Tabla S2).
Resultados
ACLY y me están regulados positivamente en el CPNM
ACLY expresión en el tejido tumoral se detectó en ambos, citoplasma y núcleo (figura 1), mientras que mí era detectable sólo en el citoplasma (figura 1). expresión de la enzima inmunohistoquímica fue significativamente mayor en las células tumorales (ACLY nucl .: 19,92 +/- 21,57; ACLY cytopl .: 22,23 +/- 21,57; ME: 52,49 +/- 37,86) que en el tejido pulmonar correspondiente no neoplásico (ACLY nucl. : 16.57 +/- 16.75; ACLY cytpl .: 11,43 +/- 20,97; ME: 9,53 +/- 10.50;
p Hotel & lt; 0,001)
ME pero no ACLY se expresa diferencialmente en subtipos histológicos de NSCLC
a medida que la diferenciación entre ALC y SCC de pulmón es de importancia terapéutica, se analizaron los patrones de expresión en relación con estos dos subtipos histológicos de NSCLC. ME expresión fue mayor en comparación con SCC ALC (
p Hotel & lt; 0,001). ACLY no mostró una correlación significativa con el subtipo histológico. Por otra parte, una expresión significativamente superior sólo de ME se encuentra en los fumadores en comparación con los no fumadores (
p = 0,012
).
ACLY pero no ME expresión se asocia con el estadio tumoral local
El análisis inmunohistoquímico de los patrones ACLY y ME en correlación con las fases del tumor local, es decir pT, se observó que la expresión ACLY fue significativamente menor en pT-etapas avanzadas. Aunque una correlación positiva significativa global de la EM y se encontró ACLY (ACLY-ME nuclear: coeficiente de correlación = 0,179,
p Hotel & lt; 0,001; citoplasmática ACLY-ME: coeficiente de correlación = 0,155,
p
= 0,001), ME expresión no mostró una correlación con las fases del tumor locales. Se observaron resultados analógicas para la expresión ACLY en correlación con el tamaño del tumor métrica (ACLY citoplasmática: coeficiente de correlación de -0,135,
p = 0,003
; ACLY nuclear: coeficiente de correlación: -0.144,
p = 0,001
; ME: coeficiente de correlación = 0,006,
p = 0,887
). Mientras que la infiltración de la pleura visceral también contribuye a la fase local del tumor, se observó una correlación estadísticamente significativa con respecto a la invasión pleural (ACLY citoplasmática:
p = 0,186
; ACLY nuclear:
p = 0,532
; ME :
p = 0,971
)
ME pero no la expresión ACLY se asocia con eventos metastásicas mediastínicas
Para investigar la relación entre la eM y la expresión ACLY con la expansión tumoral sistémica, nos. analizaron por separado NSCLC de los pacientes positivos nodales en correlación con la localización de metástasis en los ganglios linfáticos. La presencia de metástasis en los ganglios linfáticos del mediastino se correlacionó significativamente con una mayor expresión de la EM en el tejido del tumor primario (
p = 0,041
), pero no de ACLY (citoplasmática:
p = 0,511
; nucleares:
p = 0,446
). Esta asociación fue particularmente fuerte en ALC (ME:
p = 0,030
)
La sobreexpresión de cualquiera ME, ACLY o ambas cosas es un factor pronóstico independiente
Para evitar el sesgo estadístico. , se utilizaron valores medios de ME y expresión ACLY para dicotomización. En el análisis global no se encontró correlación significativa de la EM y la sobreexpresión ACLY con la supervivencia del paciente. Resultados similares fueron obtenidos en los análisis de subgrupos de acuerdo con el hábito de fumar, el sexo, grado histológico, pT- o PN-etapas. estratificación Edad se realizó mediante el uso de la mediana de edad (65 años) el momento del diagnóstico NSCLC. No se detectó ninguna correlación significativa entre la edad y pT, pN o etapa general de la UICC. En pacientes jóvenes, la sobreexpresión ACLY nuclear resultó estar asociada con una supervivencia global favorable (
p = 0,029
), mientras que este no fue el caso en los pacientes mayores de 65 años (
p = 0,626
). ME sobreexpresión en estos dos subgrupos de edad sólo mostró una tendencia estadística en los pacientes de mayor edad (
p = 0,093
). Los pacientes jóvenes con la sobreexpresión de ME o ACLY nuclear o ambos en sus tumores, tuvieron una supervivencia significativamente más larga en general en comparación con aquellos sin la sobreexpresión de estas enzimas (
p
= 0,007; Fig 2). El análisis multivariado, que incluye la etapa de la UICC, el único factor pronóstico adicional en este grupo de pacientes, demostró que esto es un factor pronóstico independiente (
p = 0,002
, Tabla 1). Por otra parte, la sobreexpresión de una o ambas de las dos enzimas resultó en la supervivencia global más corta en pacientes de mayor edad (Fig 2,
p
= 0,058).
A) La sobreexpresión de ACLY está asociado con un mejor resultado en los pacientes jóvenes, pero no en pacientes de mayor edad. B) ME sobreexpresión muestra una tendencia estadística hacia una peor supervivencia global en pacientes de edad avanzada. C) Los pacientes jóvenes con tumores revelado ya sea ACLY y /o sobreexpresión ME tuvieron una supervivencia global significativamente mayor en comparación con aquellos sin sobreexpresión de cualquiera de enzima. Sin embargo, en pacientes mayores sobreexpresión de cualquiera ACLY y /o ME puede estar asociado con una peor supervivencia global.
Discusión
Debido a su alta incidencia y mortalidad, el cáncer de pulmón sigue siendo sigue siendo una de las principales causas de enfermedad, en todo el mundo. Por ello es de importancia fundamental para comprender mejor su biología con el fin de desarrollar nuevas opciones de tratamiento adecuadas es.
El interruptor metabólico de las células tumorales a la glucólisis aeróbica es un evento muy conocido. Por un lado, sirve para facilitar la absorción y la incorporación de nutrientes en bloques básicos de construcción celular. Por otra parte, resulta en la producción de lactato, lo que facilita la formación de metástasis y la resistencia a la terapia [15, 16]
.
En varios tumores malignos se ha demostrado que ACLY no sólo es elemental para de-novo síntesis de ácidos grasos [17], sino también su paso limitante [18-21]. Como una de las enzimas clave de la síntesis de novo de ácidos grasos, ACLY genera citosólica acetil-coenzima A (acetil-CoA) [22, 23] y oxaloacetato. Este último se reduce a malato por la malato deshidrogenasa. La isoforma citosólica de la enzima málica convierte malato en piruvato [24]. El piruvato que no se transportó en la mitocondria para generar oxaloacetato, se convierte más en lactato [6]. por lo tanto ACLY y ME expresión puede ser alterado en las células tumorales malignas en comparación con tejidos no neoplásicos. La comparación de pulmón no neoplásico y el tejido NSCLC, se encontró un aumento estadísticamente significativo de ambos, la expresión ACLY y ME dentro de las células neoplásicas. Esto está en concordancia con las demás conclusiones relativas a la alteración del metabolismo de hidratos de carbono en el cáncer [10, 11, 25-27]. En nuestra cohorte, ME y expresión ACLY, nuclear, así como citoplásmica, mostró una correlación positiva. El hecho de que los coeficientes de correlación son bastante pequeñas puede reflejar interrelaciones complejas entre varios enzimas metabólicas, así como una alta heterogeneidad histomorphological de NSCLC. La comparación de los patrones de expresión inmunohistoquímica de mí y ACLY más apoya esta afirmación, ya que sólo ME-expresión difiere significativamente entre ALC y SCC. Este tipo de patrones de expresión diferencial de los subtipos de NSCLC también se ha demostrado para otras enzimas relacionadas con el metabolismo alterado de cáncer celular [10, 11, 28].
Desde SCC se encuentra a menudo en los fumadores pesados y ALC están llamados típica carcinomas no fumador, significativa la expresión más alta de la EM en los tumores de pacientes con antecedentes de tabaquismo no es sorprendente. Esto puede deberse a diferentes estados de hipoxia de tumores y /o pacientes que conducen a diferentes estados metabólicos en NSCLC y más probablemente en SCC en comparación con LAC, también. La mayoría de los fumadores NSCLC asociado poseen mutaciones de p53 y, por tanto, la frecuencia de las mutaciones de p53 en SCC es mayor en comparación con LAC [29]. Recientemente, Jiang pudo verificar que ME expresión está regulada por p53. Según sus conclusiones, p53 es responsable de la regulación negativa de la expresión ME [30]. Estos resultados están en buena concordancia con los nuestros, que la EM no sólo se sobreexpresa en el CPNM en comparación con el tejido pulmonar libres de tumor, sino también, de que la EM expresión es mayor en comparación con SCC ALC y en los fumadores en comparación con los no fumadores.
llamativa para nosotros fue que ACLY y ME revelaron diferentes patrones de expresión dependen de la extensión del tumor local o del mediastino. Mientras ACLY se correlacionó negativamente con la extensión local del tumor medido por PT-etapa, así como el tamaño del tumor métrica, ME sólo mostró una correlación significativa con los eventos metastásicas mediastínicas en comparación con metástasis en los ganglios linfáticos hiliares (pN1 vs pN2 /pN3). Los cambios en el metabolismo del tumor, por lo tanto, parecen ser complejas y pueden ser diferentes no sólo en los subtipos histológicos, pero también en función de la extensión del tumor local o sistémica.
Por otra parte, en los resultados de investigaciones recientes, las funciones adicionales de ACLY lado de participación en metabolismo de la glucosa se han detectado: ACLY también es un jugador clave en la acetilación de histonas. Estos hallazgos sugieren un vínculo entre los cambios del factor de crecimiento en el metabolismo de cáncer y la expresión de genes que se realiza por ACLY [31]. En analogía con Wellen, Londono gentil publicó recientemente que ACLY al menos en parte regula metiltransferasa-1 DNA (DNMT1) [32]. por lo tanto diferentes localización de ACLY puede reflejar diferentes actividades dentro de la célula, es decir, citoplásmico ACLY es predominantemente implicado en el metabolismo de las células del cáncer, mientras que ACLY nuclear está implicada predominantemente en la regulación de la expresión de genes [31, 33]. Por esta razón, se evaluó diferentes localizaciones de ACLY, es decir, nuclear y citoplasmática, por separado. En concordancia con nuestros resultados, Migita mostró que ACLY fue significativamente más alta expresada en LAC comparación con el tejido de pulmón no neoplásico [22]. En su publicación, ACLY también fue un factor pronóstico, mientras que mostraron que los altos niveles de ACLY se asociaron con un peor resultado [22]. No hemos podido reproducir este hallazgo de Migita. Pero a diferencia de sus resultados, la sobreexpresión ACLY nuclear era de un beneficio significativo en pacientes jóvenes de nuestra cohorte. En comparación con Migita, incluimos no sólo LAC sino también SCC así como LCC y el análisis inmunohistoquímico de la expresión ACLY se evaluó no sólo para la tinción de intensidad, pero también en función de la fracción de células positivas y con respecto a la localización subcelular de ACLY. Además de estas diferencias analíticas, Migita investigó la expresión de fosforilados ACLY, mientras que nuestro anticuerpo está dirigido contra ACLY independientemente de su estado de fosforilación.
Además, en los análisis de subgrupos detallada, podríamos demostrar que la edad del paciente puede también influencia biología NSCLC. Mientras que los altos niveles de cualquiera ACLY y /o ME eran un buen factor pronóstico en pacientes menores de 65 años, se detectó una tendencia estadística a lo contrario en los pacientes de edad avanzada. Esto puede indicar diferentes cambios en el metabolismo del tumor y la función de la enzima. Varios cambios metabólicos están implicados con la edad avanzada, tales como el aumento de la hipoxia y la mayor incidencia de la diabetes mellitus tipo 2. En un gran estudio de cohorte, la diabetes mellitus tipo 2 se asoció con un mayor riesgo de desarrollar varios tipos de cáncer, incluyendo el carcinoma de pulmón [34 ]. En este contexto, ambos, ACLY y ME han demostrado ser importantes para la glucosa relacionados con la secreción de insulina [24]. Por el hecho, de que la incidencia de la diabetes tipo 2, así como la hipoxia generalizada debido al deterioro de la función pulmonar es mayor en los pacientes de edad avanzada, nuestros resultados de impacto que cambia de ACLY y ME apropiado enzimática en el CPNM se pueden soportar funcionalmente. Diversidad de NSCLC en diferentes poblaciones de edad es conocido por aberraciones genéticas y la incidencia de mutaciones del conductor [35, 36]. Por lo tanto, nuestros hallazgos, que los cambios de las enzimas metabólicas pueden ser de distinta influencia en la biología del cáncer en el CPNM, apoyan aún más que el cáncer de pulmón que surge en pacientes jóvenes puede ser biológicamente y genéticamente diferentes de las de los pacientes de mayor edad.
in vitro y estudios in vivo indican que los nuevos agentes farmacológicos que inhiben ACLY pueden dar lugar a disminución significativa en el crecimiento celular y tumor [22, 33, 37, 38]. Dado que nuestros resultados muestran que la sobreexpresión de ACLY y /o ME en pacientes mayores de 65 años de edad tienden a tener un peor pronóstico, suponen que los pacientes mayores pueden beneficiarse más de estos inhibidores ACLY.
En conclusión, los patrones de expresión de las enzimas metabólicas ACLY y ME son de diferente impacto biológico en la supervivencia en pacientes con CPNM. Mientras que en pacientes jóvenes sobreexpresión de cualquiera ACLY o ME es indicativo de una supervivencia global favorable, que tiende a tener el efecto contrario en los pacientes de edad avanzada. Con el desarrollo de nuevos fármacos inhibidores dirigidos contra ACLY, nuestros resultados apoyan nuevas opciones de tratamiento con enfoque especial en pacientes con CPNM edad.
Apoyo a la Información sobre Table S1. Resumen de datos clínico-patológicas
doi:. 10.1371 /journal.pone.0126357.s001 gratis (DOCX)
S2 tabla. Resumen de los resultados de la prueba estadística pertinentes presentados ajustado para múltiples pruebas
doi:. 10.1371 /journal.pone.0126357.s002 gratis (DOCX)
S1 conjunto de datos. conjunto completo de datos
doi:. 10.1371 /journal.pone.0126357.s003 gratis (XLS)
Reconocimientos
Agradecemos a Nicola Bittermann por su apoyo técnico y asesorar. Reconocemos el apoyo de este estudio realizado por el Deutsche Forschungsgemeinschaft SFB850 y por el banco de tumores del Comprehensive Cancer Center Freiburg (CCCF).