Extracto
Los efectos pro-cancerígenos de la prostaglandina E2 (PGE
2) en la mucosa colónica no sólo están regulados por las tasas entre la ciclooxigenasa-2 (COX-2) y la biosíntesis de 15 hidroxiprostaglandina deshidrogenasa (15 PGDH) -dependiente de degradación sino también los niveles de estado estacionario de PGE
2 en microambiente extracelular, mantenida por transportadores específicos de prostaglandina clave, la proteína de resistencia a múltiples fármacos (MRP4) (portador de flujo de salida) y la prostaglandina transportador (PGT) (portador afluencia). Para entender la contribución de la variabilidad genética en los genes que codifican para la COX-2/15-PGDH /MRP4 /proteínas PGT en la Convención de desarrollo, se realizó un estudio de casos y controles de base hospitalaria que involucra 246 pacientes con CRC y 480 controles sin cáncer. Un total de 51 tagSNPs se caracterizaron utilizando la plataforma Sequenom través de la amplificación multiplex seguida de la separación del producto por espectrometría de masas o la discriminación alélica usando PCR en tiempo real. Siete tagSNPs estaban implicados en el desarrollo de CRC: el rs689466 en
de la COX-2
gen, el rs1346271 y rs1426945 en 15 PGDH, el rs6439448 y rs7616492 en el PGT y rs1751051 y rs1751031 en MRP4 codificación de los genes. Tras un análisis estratificado se observó una interacción entre genes y medio ambiente medible entre los hábitos de fumar y rs689466, con individuos nunca fumadores portadores de rs689466 genotipo GG homocigotos tienen un casi 6 veces mayor susceptibilidad para la aparición de CRC (IC del 95%: 1,49 a 22,42,
P = 0,011
). Por otra parte, el análisis de reducción de dimensionalidad multifactorial (MDR) identificó un factor de cuatro best-gen gen modelo interactivo en general, incluyendo los polimorfismos rs1426945, rs6439448, rs1751051 y rs1751031. Este modelo tenía la consistencia más alta de validación cruzada (10/10,
P Hotel & lt; 0,0001) y una precisión de 0,6957 y se asoció además con un 5 veces mayor riesgo para el desarrollo de CRC (IC del 95%: 3,89 -7,02,
P Hotel & lt; 0,0001). En conclusión, los genes de baja penetrancia específicos en el pro-cancerígenos PGE
2 vía parecen modular la susceptibilidad genética para el desarrollo de CCR. Una comprensión más clara sobre la CRC etiología mediante la identificación de biomarcadores de carcinogénesis colorrectal podría permitir una mejor definición de los modelos de riesgo que tienen más probabilidades de beneficiarse de estrategias preventivas dirigidas a reducir la carga CRC
Visto:. Pereira C, S Queirós , Galaghar A, H Sousa, Pimentel-P Nunes, Brandão C, et al. (2014) Variabilidad genética en genes clave en la prostaglandina E
2 vías de entrada (
de la COX-2, HPGD, ABCC4
y
SLCO2A1
) y su implicación en el desarrollo del cáncer colorrectal. PLoS ONE 9 (4): e92000. doi: 10.1371 /journal.pone.0092000
Editor: Kjetil Tasken, Universidad de Oslo, Noruega
Recibido: 25 Noviembre 2013; Aceptado: 15 Febrero 2014; Publicado: April 2, 2014
Derechos de Autor © 2014 Pereira et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio el apoyo de una beca de investigación del Instituto Portugués de Oncología de Oporto. Por otra parte, CP es un beneficiario de una beca de doctorado (SFRH /BD /64805/2009) del FCT-Fundacão para a Ciência e Tecnologia, co-financiado por el Fondo Social Europeo (FSE) en el Programa Operación Potencial Humano (POPH) desde Estratégico Nacional Marco de referencia (MENR). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Los autores han leído la política de la revista y tienen los siguientes conflictos: RM es un PLoS Un miembro del Consejo Editorial. Esto no altera la adhesión de los autores a PLoS ONE políticas y criterios editoriales.
Introducción
El cáncer colorrectal (CCR) es el tumor maligno más común en las regiones desarrolladas, lo que representa más del 13% de todos casos diagnosticados (728.550 casos) y 11% de todas las muertes relacionadas con el cáncer en 2008 (320.279 muertes) [1]. La carga de la CRC está aumentando como un reflejo del crecimiento de la población y el envejecimiento, como también, una mayor adopción de cáncer asociados estilo de vida "occidentalizada" [2]. Por lo tanto, la aplicación de las directrices de cribado de CCR basados en la población que se centran en la detección y eliminación de las lesiones precancerosas es muy recomendable para una disminución en las tasas de incidencia de éxito de CRC [3]. Por desgracia, las tasas de cumplimiento están lejos de lo deseable y considerablemente más bajos que los reportados para otras estrategias de prevención recomendados [4], lo que compromete la eficacia de estos enfoques en la prevención del CCR. Este razonamiento podría proporcionar no sólo para el cribado selectivo, sino también la búsqueda de estrategias alternativas y /o complementarias, a saber, el uso de quimioprevención para reducir significativamente este problema del cáncer.
Un grupo de compuestos con gran cantidad de datos apoyando su papel preventivo en la aparición del cáncer incluyen los fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), han demostrado reducir el riesgo relativo de desarrollar CCR en un 40-50%, principalmente por la orientación de la enzima ciclooxigenasa-2 (COX-2) [5] - [7].
COX-2 es un gen de respuesta inmediata-temprana, previamente demostrado ser hasta reguladas en el 40-50% de los adenomas colorrectales y el 85% de CRC, lo que lleva a la acumulación extracelular microambiente de las prostaglandinas (PGs) [ ,,,0],8]. COX-2-deriva PGE
2, el principal PG producido en los tumores colorrectales, desempeña una importante contribución a las características del cáncer, mediante la estimulación de la proliferación celular, la invasión y la migración, la mejora de la angiogénesis, evadir la apoptosis y la modulación de la respuesta inmune antitumoral [ ,,,0],9]. COX-2 tiene un antagonista fisiológico en 15-hidroxiprostaglandina deshidrogenasa (15-PGDH) que cataboliza PGE
2 a un compuesto ceto inactivos [10]. 15-PGDH es altamente expresado en la mucosa normal y uno de los genes más abajo-regulada en tumores colorrectales, siendo un potente
in vivo
supresor de la neoplasia de colon disminuyendo el catabolismo de PGE
2 [11] , [12]. Además, los niveles mínimos de 15 Pgdh están asociados con la resistencia a la COX-2 inhibidor selectivo celecoxib efectos quimiopreventivos en el desarrollo de tumores colorrectal, lo que refuerza el impacto de la pérdida de expresión de 15 PGDH en la carcinogénesis colorrectal [13]. No obstante, los efectos biológicos de la COX-2 /PGE
2 vía no sólo están regulados por las tasas entre la COX-2 biosíntesis y degradación de 15 PGDH dependiente sino también los niveles de estado estacionario de PGE
2 en microambiente extracelular, regulado por transportadores específicos de prostaglandina clave [14], [15]. La proteína asociada a la resistencia a múltiples fármacos 4 (MRP4) es responsable de la exportación de PGE
2 en el medio extracelular, donde se activará una plétora de vías a través de la unión a receptores par de la proteína G específicos [14]. Por otra parte, la captación activa de nuevo en el citoplasma, donde PGE
2 se inactiva por 15-HPGD, se lleva a cabo por la prostaglandina-transportador (PGT) [15]. De hecho, Holla y colegas [16] informó de que los niveles de PGT y de ARNm de MRP4 están regulados inversamente en el CCR humano, con la expresión PGT se downregulated y MRP4 sobreexpresa en tejidos de CRC y líneas celulares que conduce a mayores niveles de PGE
2 extracelularmente upregulating tanto los efectos de la COX-2 /PGE
2 vía.
hace una década, la liberación del primer borrador del genoma humano permite un conocimiento más profundo sobre la arquitectura y función del genoma humano, destacando la relevancia de común variaciones genéticas en la génesis de la enfermedad. En el CCR, la historia familiar es un factor etiológico bien establecida, derramando algunas pistas relativas a la implicación de los genes de baja penetrancia en su oncogénesis [17].
El
de la COX-2
gen es genéticamente polimórfica y fue objeto de varios estudios de asociación genética, que implican la participación de tres polimorfismo en
de la COX-2
gen en el desarrollo de tumores colorrectal (rs20417, rs699466 y rs5275, también conocido como -765G & gt; C, -1195A & gt; G y 8473T & gt; C, respectivamente), aunque no siempre consistentemente [18]. En un estudio preliminar, se informó de un aumento de la susceptibilidad para el desarrollo de CCR en los portadores del alelo G del rs689466A & gt;. G polimorfismo en
de la COX-2
del promotor [19]
Hoeft y sus colegas [20] en primer lugar identificado dos polimorfismos de nucleótido único de marcado (tagSNPs), los rs8752 y rs2612656 en
HPGD
gen, que codifica para la proteína 15-PGDH, como el aumento de los marcadores de susceptibilidad para el desarrollo de CCR. Más recientemente, Thompson et al [21] observaron un 40% más de riesgo asociado con el SNP rs2555639 situado en 17,74 kb aguas arriba de la 5'UTR de
HPGD
gen que fue validado en el conjunto de replicación.
Con la excepción de un estudio de casos y controles de dos fases en una población española [22] ningún estudio previo preguntó el papel de las variantes genéticas comunes en MRP4 y genes de codificación PGT (
ATP-Binding Cassette subfamilia miembro C 4 gratis (
ABCC4
) y
portador de soluto anión orgánico transportador de la familia, miembro de 2A1 gratis (
SLCO2A1
), respectivamente) en el CCR génesis. Ni abordado el efecto combinado de SNPs en estos cuatro genes con papeles fundamentales en la modulación de los niveles de PGE
2 extracelularmente. Por lo tanto, en este estudio de casos y controles exploramos las asociaciones de 51 variaciones genéticas comunes en
de la COX-2 /HPGD /ABCC4 /SLCO2A1
PGE
2 genes de la vía con CCR inicio.
materiales y Métodos
tamaño de la muestra de estimación
se estimó que el tamaño de la muestra necesario para detectar una odds ratio (OR) igual o superior a 1,70 se encuentra a 200 pacientes y 400 controles (relación 02:01) para lograr una potencia estadística del 80%, con un nivel de significación del 5%, para polimorfismos con una frecuencia superior a 15%. (Epi Info versión 6, Centros para el Control de Enfermedades, Atlanta, Georgia). Teniendo en cuenta que r
2, que se utiliza para seleccionar los tagSNPs, es inversamente proporcional a la magnitud en que el tamaño de la muestra debe incrementarse en un diseño de estudio, para ar
2 de 0,8 necesitábamos aumentar nuestro tamaño de la muestra en un 25 .%
Población de estudio
Esto no emparejado estudio de casos y controles de base hospitalaria incluyó 726 participantes: 246 histológicamente confirmado CRC pacientes y 480 controles sin cáncer, de la región norte de Portugal y reclutados en el
Instituto Portugués de Oncología do Porto gratis (OPI-Porto).
escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes reclutados antes de su inclusión en el estudio, de acuerdo con la Declaración de Helsinki. Este proyecto de investigación fue aprobado por el Comité de Ética de la IPO-Porto (ref. 0084/08) y
Comissão Nacional de Protecção de Datos gratis (ref. 6619/2011), que es la autoridad portuguesa de protección de datos.
grupo de control.
en este grupo, los individuos entre 50 y 75 años de edad, sin ninguna evidencia clínica de CRC u otra enfermedad maligna oncológica fueron reclutados al azar de servicio de la donación de sangre en la IPO-Porto entre julio de 2005 y febrero de 2008.
CRC pacientes grupo.
Los pacientes con diagnóstico histológico de CRC recientemente diagnosticados entre enero de 2002 y septiembre de 2007 se inscribieron en este estudio. Estos pacientes fueron seleccionados de una base de datos colonoscopia del Departamento de Gastroenterología, con edades entre 50 a 75 años, sin antecedentes de enfermedad inflamatoria intestinal o síndromes hereditarios y que estaban programados para un seguimiento consultar a
Serviço de Gastrenterologia
o
Unidade de
digestivos en Porto OPI entre marzo y mayo de 2008.
Doscientos cuarenta y siete pacientes con CRC se incluyeron 387 fuera de la espera de ser reclutados. Durante el reclutamiento o después por los pacientes entrevista telefónica se les pidió recordar sus hábitos de estilo de vida (comportamiento de fumar, índice de masa corporal, etc) en el año anterior del diagnóstico del CCR. Los registros médicos fueron revisados para extraer las variables clínico (fase, el grado del tumor, la presencia de lesiones sincrónicas y metacrónicas) y para excluir el sesgo de clasificación errónea.
Recolección y Procesamiento Biológica
Las muestras de sangre se recogieron usando técnica de punción venosa estándar con tubos de EDTA que contiene. Se extrajo el ADN a partir de leucocitos de sangre periférica utilizando el Kit QIAamp DNA Blood Mini (Qiagen, Hilden, Alemania), siguiendo las instrucciones del fabricante.
Para los pacientes que no pueden proporcionar una muestra de sangre, el ADN se extrajo de formalina fijo parafina embebidos (FFPE) cuadras del Departamento de Patología en nuestro instituto. De dos a cuatro 10 micras de espesor sección se usaron en cada extracción dependiendo del tamaño del área de tejido (1,5-3 cm
2). Brevemente, las muestras de tejido de CRC de cada portaobjetos de vidrio se rasparon, utilizando una hoja de afeitar limpia, en un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. Las muestras se deparaffinised en xileno durante 10 minutos, a temperatura ambiente, seguido de centrifugación a 14.000 g-16.000 g durante 3 minutos. Los pelets de tejido se rehidrataron luego con 1 ml de etanol absoluto, seguido de centrifugación a 14.000 g-16.000 g durante 3 minutos y se descartó el sobrenadante. Esta etapa se repitió dos veces. A continuación, el tubo se mantiene abierto durante 15 minutos para evaporar cualquier etanol restante. Etapas adicionales de aislamiento de ADN se realizaron utilizando el kit de ADN genómico GRS - tisular, de acuerdo con el protocolo del fabricante (GRiSP, Oporto, Portugal)
ADN se cuantificó usando el espectrofotómetro NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific, Wilmington. , dE, EE.UU.) y se almacenó a -20 ° C hasta que el examen genotipo. La calidad del ADN se determinó midiendo la densidad óptica (OD) relación de 260/280.
Validación de DNA Genotipado extraído de muestras de FFPE
Para evaluar si el ADN aislado de secciones FFPE es fiable para retrospectiva genotipificación se compararon los genotipos de 20 ADN somáticas extraídos de FFPE muestras a la línea germinal de ADN aisladas de la sangre periférica fresca de los mismos pacientes. Los genotipos fueron muy concordantes (100%).
Los polimorfismos Selección
El uso de un enfoque tagSNP, las variantes genéticas fueron recuperados de un conjunto de SNPs comunes en la población caucásica del proyecto HapMap (CEU) . El genoma Variación Server (versión 7.00) se utilizó para recuperar tagSNPs captura de variaciones (1) con un alelo menor frecuencia igual o superior a 15%; (2) dentro de la región de codificación de los genes más 2 Kb aguas arriba y aguas abajo y (3) con un r
2 superior a 0,8. Un total de 140 fueron capturados tagSNPs: 6, 15, 31 y 88 tagSNPs en
de la COX-2
,
HPGD
,
SLCO2A1
y
ABCC4
genes, respectivamente. Hemos seleccionado más SNPs con alta probabilidad de éxito genotipado utilizando la plataforma de Sequenom, (Sequenom, San Diego, CA). En pocas palabras, tagSNPs fueron priorizados de la siguiente manera: en primer lugar, se probaron todos los tagSNPs no singletons o únicos con repercusión funcional esperado (software FuncPred). TagSNPs con puntuaciones bajas de genotipos fueron sustituidos por variantes representativas; y, finalmente, los únicos no significativas se incluyen en la gama de diseño. Un total de 55 SNPs se convirtió con éxito a la plataforma de Sequenom.
polimorfismos Por otra parte, también se incluyeron las variables asociadas previamente con el desarrollo de tumores colorrectales y tenía un alelo menor frecuencia igual o superior al 15% que no consiguió convertido a la plataforma Sequenom: rs20417, rs689466 y rs5275 en
de la COX-2
y rs2612656 y rs2555639 en
HPGD
genes
Genotipo Caracterización
TagSNP genotipado fue. realizado utilizando la tecnología MassARRAY IPLEX Gold (Sequenom, San Diego, CA) en base a la amplificación de multiplexado, seguido de la separación del producto por espectrometría de masas. Esta técnica se llevó a cabo por el-
Unidade de Genómica /Serviço de Genotipagem do Instituto Gulbenkian de Ciencia.
Todos los polimorfismos no incluidos en el análisis tagSNPs se caracterizaron mediante la discriminación alélica (Real-Time polimerasa Chain Reaction) utilizando validados genotipificación TaqMan SNP (C___2517145_20, C___7550203_10, C___15909858_20, C___16038735_10 para el rs689466, rs5275, rs2612656 y rs2555639, respectivamente), con la excepción del polimorfismo -765G & gt; C (rs20417) que fue diseñado a medida (Applied Biosystems, Foster City, California, EE.UU.). discriminación alélica se realizó midiendo la fluorescencia del punto final mediante sistema de detección de secuencias ABI PRISM (Applied Biosystems, Foster City, California, EE.UU.).
Control de Calidad
Los genotipos fueron excluidos del análisis si cualquiera de se aplicaron los siguientes criterios: llamada tasa inferior a 0,90; tasa de concordancia inferior a 0,95 y equilibrio de Hardy-Weinberg (HWE) con
P Hotel & lt; 0,05. plantillas en blanco fueron incluidos en cada uno de 96 y 384 pocillos para asegurar resultados libres de contaminación. Dos investigadores realizaron la interpretación del genotipo de forma independiente, y cinco al diez por ciento de todas las muestras fueron seleccionadas al azar y volver a presentarse a una nueva caracterización genética para confirmar los genotipos.
Análisis estadístico
Para el análisis de la distribución genética , el equilibrio de Hardy-Weinberg fue probado por la bondad del ajuste de prueba de Pearson para comparar la observada en comparación con el genotipo de distribución esperada entre la población de control. se realizó
análisis de los datos utilizando el software de computadora IBM Statistical Package for the Social Ciencias-SPSS (IBM Corp., Armonk, Nueva York, EE.UU.) para Macintosh (versión 19.0). Se utilizó el análisis de chi-cuadrado para comparar variables categóricas, usando un nivel de 5% de significancia. Las pruebas no paramétricas se utilizaron para comparar los valores medios. odds ratio (OR) y su intervalo de confianza del 95% (IC) se calcularon como una medida de la asociación entre las variantes genéticas y el riesgo para el desarrollo de CCR. Covariables demostrado que difieren entre las poblaciones del grupo se incluyeron en el análisis de regresión logística. análisis de la interacción gen-ambiente-se llevaron a cabo mediante la estratificación de datos teniendo en cuenta el género, el hábito de fumar y el índice de masa corporal (IMC). Además, un remuestreo bootstrap se utilizó para investigar la estabilidad de las estimaciones de riesgo (1000 repeticiones). Además, se utilizó la probabilidad informe de falsos positivos (FPRP) para confirmar la noteworthiness de hallazgos significativos, de acuerdo con el estudio realizado por wacholder y colegas [23]. El umbral FPRP se fijó en 0,5 bajo una probabilidad previa asignado que van desde 0,01 hasta 0,25 para detectar un OR de 1,5
Análisis de haplotipo se realizó a un nivel de genes utilizando el software SNPStats (www http:.. //Bioinfo .iconcologia.net /SNPstats). Las frecuencias de haplotipos se estimaron mediante la aplicación del algoritmo EM codificada en los
haplo.stats
paquete. El haplotipo más frecuente se selecciona automáticamente como la categoría de referencia. Para el
HPGD
,
SLCO2A1
y
ABCC4
genes de los bloques de haplotipos se construyeron teniendo en cuenta los polimorfismos más significativos.
El código abierto de reducción de dimensionalidad multifactorial (MDR) software (versión 3.0.2) (www.epistasis.org) se utilizó para evaluar posibles interacciones gen-gen entre los SNPs con un impacto estadístico significativo en CRC susceptibilidad genética. La aptitud de un modelo MDR se estimó mediante la determinación de la exactitud de prueba y su consistencia de validación cruzada (CVC). Utilizando un método de validación cruzada de 10 veces los datos se divide en 10 grupos, en los cuales 9 fueron subconjuntos y formación crea un subconjunto era una unidad de prueba. Por lo tanto, el CVC es una medida de la cantidad de veces de 10 divisiones del conjunto de datos se extrajo el mejor modelo. La única mejor modelo tiene normalmente la precisión de la prueba máxima y CVC. La significación estadística se evaluó utilizando una prueba de permutación de 1000 veces para comparar precisiones pruebas observadas con las esperadas bajo la hipótesis nula de asociación nula. pruebas de permutación corregido para múltiples pruebas, repitiendo todo el análisis de conjuntos de datos 1000 que eran consistentes con la hipótesis nula.
Resultados
Descripción de la Población de estudio
Las características del estudio la población se resumen en la Tabla 1. Los casos fueron significativamente mayores que en los controles, con una edad media de 63 años (50-75) (frente a 58 años en los controles (50-69),
P Hotel & lt; 0,001). Los varones tenían una representación en ambos grupos (60,1% frente a 65,4% en los casos y controles, respectivamente,
P = 0,159
) y casi el 77% de los participantes tenían sobrepeso (
P = 0,955
). La mayoría de los participantes también nunca había fumado en una u otra categoría (37,4% de los casos y el 39,7% en los controles,
P = 0,636
).
Genotipo frecuencias y las estimaciones de riesgos
Tres SNPs y cuatro muestras fueron excluidos del análisis debido a la falta de genotipado y cuatro SNPs fueron retirados debido a que sus frecuencias se desvió de HWE (
P Hotel & lt; 0,05). Un total de 51 SNPs se incluyeron en el análisis de estimación de riesgo. Las tasas medias de llamada genotipo y de concordancia fueron 99,02% y 99,3%, respectivamente. La descripción de SNPs seleccionado se muestra en la Tabla S1.
En general siete polimorfismos genéticos en los cuatro genes estaban implicados en la carcinogénesis colorrectal, como se puede observar en la Tabla 2. La AG y GG genotipos del polimorfismo rs689466 en
de la COX-2
gen estaban sobrerrepresentados en el grupo de casos que conducen a un aumento del riesgo de CCR más notable para los homocigotos GG aunque esto no fue estadísticamente significativo en el análisis multivariado (OR = 2,01; IC del 95%: 0,93 a 4,35 ,
P = 0,076
). El SNP rs1346271 y rs1426945 en
HPGD
gen se asociaron con un 32% y un 44% menos de riesgo de CCR CI inicio (95%: 0,47 a 0,96,
P = 0,029
y el 95% CI : 0,34 a 0,93,
P = 0,026
, para la GC y AA homocigotos portadores de los polimorfismos rs1346271 y rs1426945, respectivamente). De los quince variaciones genéticas analizadas en los
SLCO2A1
genes sólo los polimorfismos rs6439448 y rs7616492 influido en la susceptibilidad para la CRC. Los individuos portadores del genotipo heterocigoto AG rs6439448 presentaron un OR de 0,68 (IC del 95%: 0,47 a 0,99,
P = 0,047
). Por otra parte, un aumento de la predisposición doble se observó para las personas con dos copias del alelo A del polimorfismo rs7616492 (IC del 95%: 1,27 a 3,32,
P
= 0,003). Centrándose en
ABCC4
gen, una mayor susceptibilidad 1,76 se observó con el genotipo AA de SNP rs1751051 y una protección era evidente para los portadores del genotipo AG polimorfismo rs1751031 de (OR = 0,68; IC del 95%: 0,47-0,97,
P = 0,032
). El análisis de arranque soportado nuestros resultados (Tabla 2). La distribución de los genotipos de todos incluido SNPs se informa en la Tabla S2.
El análisis reveló que los FPRP asociaciones significativas observadas no ajustados en la Tabla 2, conservaron su importancia (FPRP≤0.5) cuando una probabilidad a priori igual o superior a 0,10 se consideró, con la excepción del polimorfismo rs689466 (GG vs AA) que presentó un FPRP de 0.690, lo que sugiere un posible sesgo en este hallazgo positivo (datos no mostrados).
gene-medio ambiente interacción Análisis
Tras un análisis estratificado se observó que, con la excepción de rs6439448 y rs1751051 polimorfismos en
SLCO2A1
y
ABCC4
gen, respectivamente, todas las demás variantes parecen tener un sexo-dependiente comportamiento especialmente relevante en los hombres portadores de genotipo GG de
de la COX-2
rs689466 SNP (OR = 3,3; IC del 95%: 01.23 a 09.09,
P = 0,018
) y AA homocigotos para el rs1426945 polimorfismo en
HPGD
gen (OR = 0,38; IC del 95%: 0,20 a 0,74,
P
= 0,004), como se informa en la Tabla 3.
Además , un casi 6 veces mayor riesgo se observó en los nunca fumadores que portan el genotipo GG para el
de la COX-2
polimorfismo rs689466 (IC del 95%: 1,49 a 22,42,
P = 0,011 vs
OR = 0,63; IC del 95%: 0,13 a 3,08,
P = 0,56
en los no fumadores). Por el contrario, el
ABCC4
genotipo rs1751051 AA parecía conducir a una mayor susceptibilidad en los individuos que nunca habían fumado (OR = 2,32; IC del 95%: 1.5 a 5.13,
P = 0,037
). El genotipo rs7616492 homocigotos AA de
SLCO2A1
gen desempeñó papeles oponerse a la hora de considerar la interacción con el IMC (OR = 0,06; IC del 95%: 0,01 a 0,69,
P = 0,023
y OR = 2,18; IC del 95%:. 1,00 a 4,77,
P = 0,051
para los individuos con IMC & lt; 25 y el sobrepeso (BMI≥25 kg /m
2), respectivamente)
Análisis de haplotipos
cuatro haplotipos comunes fueron descritos por
de la COX-2
gen, como se puede observar en la Tabla 4. el haplotipo más frecuente, la AGT, estuvo presente en el 52% de los controles y se utiliza como hacer referencia a uno. El bloque que contiene el alelo G rs689466, GGT, se asoció con un aumento de la susceptibilidad 51% coherente con el análisis de los SNP (IC del 95%: 1.10 a 2.6,
P
= 0,010). Aunque no nos dimos cuenta de cualquier influencia de rs5275 alelo C en forma independiente el riesgo de CCR, los portadores de AGC haplotipo tenían una predisposición 1,53 veces más que para CRC (IC del 95%: 1.13 a 2.19,
P
= 0,008). El haplotipo AGAC de
HPGD
gen fue la más frecuente (30%) de los cinco bloques. Se observó un mayor riesgo para los individuos que portan los bloques, AGGC y ACGC, que contiene el rs1426945 G (OR = 1,70; IC del 95%: 1,22 a 2,37,
P = 0,002
y OR = 1,60; IC del 95%: 1,04 a 2,44,
P = 0,031
, respectivamente). Coherentemente, el genotipo AA rs1426945 contrario confirió una reducción del riesgo del 40% en el análisis de SNP. El TAGAAC haplotipo de
SLCO2A1
gen que contiene la disminución del riesgo asociado rs6439448 y rs7616492 alelo G alelo dio lugar a una protección casi el 50% de la Convención de desarrollo en comparación con los individuos portadores del bloque de referencia TCAAAC. El único haplotipo común que abarca la rs1751051 alelo A de
ABCC4
gen (AATTA) aumentó la susceptibilidad para la CRC inicio por un exceso de dos pliegues en contraste con la tatta haplotipo más frecuente. Sin bloque contenía el alelo rs1751031 G.
Análisis de Interacción gen-gen
Un análisis exhaustivo de MDR-se llevó a cabo para evaluar todas las posibles combinaciones de rs689466, rs1346271, rs1426945, rs6439448, rs7616492, rs1751051 polimorfismos rs1751031 y probadas para ser asociados con el CRC aparición en el análisis de los SNP. Como se muestra en la Tabla 5, se observó la mayor CVC (10/10) y exactitud (0.6957) en el modelo de interacción de cuatro factores, que muestra una interacción entre rs1426945
HPGD
polimorfismo, rs6439448
SLCO2A1
SNP rs1751051 y rs1751031 y polimorfismos en
ABCC4
gen. Esta interacción gen-gen se asocia con un 5 veces mayor riesgo para el desarrollo de CRC (IC del 95%: 3,89 a 7,02,
P Hotel & lt; 0,0001).
Discusión
detección temprana y el seguimiento de individuos con diagnóstico previo de adenomas colorrectales es la piedra angular de la prevención del CCR [3]. Sin embargo, las tasas de cumplimiento en los países con las directrices de cribado de CCR basados en la población implementadas están lejos de lo deseable para un exitoso impacto en la incidencia de CCR [4]. Aunque el uso regular de AINE ha sido consistentemente eficaz en la prevención primaria de los tumores colorrectal su uso se ve comprometida actualmente por la aparición de efectos secundarios gastrointestinales graves en la población de riesgo promedio [24]. Por lo tanto, el reto se posa en la identificación de biomarcadores que podrían llegar a las poblaciones de mayor riesgo para el cribado colorrectal y /o estrategias de quimioprevención.
En este estudio de casos y controles se evaluó la participación de 51 tagSNPs en cuatro genes (
de la COX-2 /HPGD /SLCO2A1 /ABCC4
) con papeles clave en PGE
2 vía en el desarrollo de CCR. Nuestros resultados indican que siete polimorfismos genéticos están implicados en la carcinogénesis colorrectal: el rs689466A & gt; G en
COX-2
, la rs1346271G & gt; C y rs1426945G & gt; A en
HPGD
, la rs6439448C & gt; A y rs7616492G & gt; a en
SLCO2A1
y la rs1751051T & gt; a y rs1751031A & gt; G en
ABCC4
gen
el rs689466A & gt;. G en
de la COX-2
gen tenía un efecto sinérgico en la oncogénesis CRC que aumentó con la dosis de alelos, lo que refuerza aún más su papel causal en el desarrollo del cáncer. El genotipo homocigoto GG aumentó la susceptibilidad para la CRC inicio por 2 veces y parecía tener un comportamiento dependiente hábitos sexuales y fumar, con nunca fumadores que tiene un casi 6 veces mayor predisposición genética para la CRC. Estos datos se ajustan a nuestras observaciones anteriores de un estudio previo [19]. Además, dos haplotipos que contiene ya sea el rs689466G (GGT) o los alelos rs5275C (AGC) condujeron a un aumento del 50% en el riesgo para CRC. La falta de consistencia observada entre los estudios epidemiológicos que abordan la rs689466A & gt; G SNP en diferentes orígenes étnicos o modelos de cáncer parece sugerir que no sólo estratificación de la población y los hábitos de estilo de vida podrían modular este comportamiento polimorfismo sino también su influencia podrían ser células, tejidos y acondicionamiento patológica dependiente [19], [25] - [29]. De hecho, en un estudio publicado recientemente se informó de que este polimorfismo -1195 situado en los nucleótidos de exón aguas arriba 1 aumenta
COX-2
actividad transcripcional en dos líneas celulares de cáncer de colon [30]. Esto también fue notable en las líneas celulares de hepatoma humano [31], pero antagoniza el aumento de la actividad promotora observada para el rs689466 alelo A en líneas celulares de cáncer gástrico [25]. COX-2 sobreexpresión se sugiere como una de las vías de humo inducida implicados en la carcinogénesis [32], [33]. El tabaco contiene más de 60 carcinógenos identificados y aunque algunos, como, la nicotina y el benzo [a] pireno, se mostró a desencadenar la COX-2 expresión a través de
B Opiniones adrenoceptores y ERK1 /2 vías, respectivamente, la patogénesis de la CRC relacionada con el tabaquismo sigue siendo poco estudiado [34]. Se necesitan estudios funcionales para dilucidar la naturaleza de esta interacción entre genes y medio ambiente
El rs5275T & gt;. polimorfismo C, fijado en 8473 pares de bases del exón 1 fue previamente asociado con un mayor riesgo de adenoma colorrectal y de aquí con una mayor susceptibilidad para la CRC en el contexto del haplotipo AGC (vs AGT) [18]. Esta sustitución de T a C en el 3'UTR fue probada para contribuir a la sobreexpresión de COX-2 mediante la interrupción de la miR-542-3p:. Interacción ARNm y por lo tanto la disminución de la COX-2 mRNA decadencia [35]
como ya se ha mencionado, la COX-2 tiene un papel predominante en la síntesis de la pro-cancerígenos PGE
2 lípido bioactivo y el principal objetivo molecular de los AINE. De hecho Chan y colegas [36] notaron que papel preventivo de la aspirina era exclusivamente eficaz en el subgrupo de cánceres de colon que sobreexpresan la enzima COX-2. Por lo tanto, la variabilidad genética en
de la COX-2
gen puede ayudar a predecir los individuos con mayor riesgo y se espera que estar expuestas a niveles más altos de la COX-2.
La expresión y actividad de 15-PGDH reprimido en el cáncer colorrectal y Apc
adenomas min ratón, lo que lleva a una disminución de PGE
2 catabolismo, la acumulación de tejido local de PGE
2 y la resistencia a Celecoxib quimioprevención en los tumores de colon [11], [13] .
no fuimos capaces de reproducir en nuestra población de las asociaciones reportadas en estudios anteriores [20], [21], [37].