Extracto

zinc nucleasas de dedos (ZFN) son herramientas poderosas para la edición de los genes en las células. Aquí utilizamos ZFNs para interrogar a la función biológica de
ADPGK
, que codifica una glucocinasa dependiente de ADP (ADPGK), en líneas celulares tumorales humanas. La hipótesis que hemos comprobado es que ADPGK utiliza para fosforilar ADP glucosa en condiciones en que el ATP se hace limitante, tales como la hipoxia. Se caracterizaron dos clones ZFN knockout en cada una de dos líneas (H460) y HCT116. Los cuatro clones tenían mutaciones de cambio en todos los alelos en el sitio diana en el exón 1 de
ADPGK, España y eran ADPGK nulo por inmunotransferencia.
ADPGK
nocaut tenido poco o ningún efecto sobre la proliferación celular, pero en peligro la capacidad de las células para sobrevivir H460 silenciamiento ARNsi de la hexoquinasa-2 mediante procesos aeróbicos, con una supervivencia clonogénico caída del 21 ± 3% para la línea parental de 6,4 ± 0,8% (p = 0,002) y 4,3 ± 0,8% (p = 0,001) para los dos agujeros ciegos. Se observó un aumento de la sensibilidad similar a la muerte celular clonogénico bajo anoxia. No se han encontrado tales cambios cuando
ADPGK
fue eliminado en las células HCT116, para el que la línea parental era menos sensible que el H460 a la anoxia y para la hexoquinasa-2 silenciamiento. Mientras octavos de final de
ADPGK Hoteles en células HCT116 causaron pocos cambios en la expresión génica global, octavos de final de
ADPGK Hoteles en células H460 causaron notables sobre regulación de los ARNm que codifican las proteínas de adhesión celular. Sorprendentemente, se pudo discernir ningún efecto consistente sobre la glucólisis, medido por el consumo de glucosa o la formación de lactato bajo anoxia, o la tasa de acidificación extracelular (analizador Seahorse XF) en condiciones óxicas en una variedad de medios de comunicación. Sin embargo, las tasas de consumo de oxígeno eran generalmente más bajos en los
ADPGK
nocauts, en algunos casos marcadamente. En conjunto, los resultados demuestran que
ADPGK
pueden contribuir a la supervivencia de las células tumorales bajo condiciones de alta dependencia glicolítica, pero el fenotipo resultante de octavos de final de
ADPGK
es la línea celular dependiente y no parece estar relacionada con cebado de la glicólisis en estas líneas

Visto:. Richter S, S Morrison, Connor T, Su J, impresión CG, Ronimus RS, et al. (2013) Zinc Finger nucleasa mediada por Knockout de glucoquinasa dependiente de ADP en líneas celulares de cáncer: Efectos sobre la supervivencia celular y mitocondrial metabolismo oxidativo. PLoS ONE 8 (6): e65267. doi: 10.1371 /journal.pone.0065267

Editor: Mark Isalan, Centro de Regulación Genómica, España