Extracto
Antecedentes
Tumor-infiltración de células T están asociados con la supervivencia en el cáncer de ovario epitelial (EOC), pero su estado funcional no es muy conocida, sobre todo en relación con las diferentes categorías de riesgo y subtipos histológicos de EOC.
Metodología /Principales conclusiones
microarrays de tejidos que contienen alto grado seroso, endometrioide, mucinoso y tumores de células claras se analizaron por inmunohistoquímica la presencia de linfocitos, células dendríticas, neutrófilos, macrófagos, MHC de clase I y II, y varios marcadores de activación y la inflamación. En los tumores serosos de alto grado de pacientes con reducción óptima, se observaron asociaciones positivas entre las células intraepiteliales que expresan CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD25, TIA-1, granzima B, FoxP3, CD20, y CD68, así como la expresión de MHC de clase I y II por las células tumorales. la supervivencia específica de la enfermedad se asoció positivamente con los marcadores CD8, CD3, FoxP3, TIA-1, CD20, MHC de clase I y clase II. En otros subtipos histológicos, infiltrados inmunes fueron menos frecuentes, y los únicos marcadores asociados con la supervivencia fueron del MHC de clase II (asociación positiva en los casos endometrioide) y la mieloperoxidasa (asociación negativa en los casos de células claras).
Conclusiones /Importancia
respuestas inmunes del huésped a EOC variación según el subtipo histológico y el grado de enfermedad residual. TIA-1, CD20 y FoxP3 emergen como nuevos factores pronósticos positivos en alto grado seroso EOC de pacientes con reducción óptima
Visto:. Milne K, M Köbel, Kalloger SE, Barnes RO, Gao D, Gilks CB, et al. (2009) El análisis sistemático de Inmunes infiltrados en alto grado del cáncer de ovario seroso-CD20 revela, FoxP3 y AIT-1 como factores positivos pronósticos. PLoS ONE 4 (7): e6412. doi: 10.1371 /journal.pone.0006412
Editor: Derya Unutmaz, Facultad de Medicina de la Universidad de Nueva York, Estados Unidos de América
Recibido: 19 de mayo de 2009; Aceptado: 26 de Junio del 2009; Publicado: July 29, 2009
Derechos de Autor © 2009 Milne et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. El estudio fue financiado por becas de la Fundación Columbia británica del cáncer, la Fundación del hospital general de Vancouver, y el Departamento de Defensa (OC000018). Ninguno de los patrocinadores tenía ningún papel en el diseño y realización del estudio, en la recopilación, análisis e interpretación de los datos, o en la preparación, revisión o aprobación del manuscrito
Conflicto de intereses.: los autores han declarado que no existen intereses en competencia.
Introducción
el cáncer de ovario es el cáncer ginecológico más mortal, que afecta a más de 190.000 mujeres en todo el mundo cada año (Agencia Internacional para la Investigación sobre el cáncer). retraso en el diagnóstico y la presencia de enfermedad, suponen ampliamente difundido por la alta mortalidad asociada con la enfermedad. Además, mientras que un gran porcentaje de los pacientes que inicialmente responden bien a la cirugía citorreductora y quimioterapia estándar, la enfermedad generalmente se repite dentro de 2-5 años como células tumorales residuales desarrollan resistencia a la quimioterapia [1], [2]. Aunque el pronóstico es a menudo pobre, se han descrito numerosos indicadores pronósticos favorables, incluyendo la primera etapa, de bajo grado y la citorreducción quirúrgica óptima [3], [4].
Varios estudios recientes han analizado la influencia de la inmunidad del huésped sobre la enfermedad pronóstico. células T CD3 + infiltrantes tumorales están fuertemente asociados con un pronóstico favorable, especialmente cuando se localizan las células CD3 + en el epitelio tumoral [5] - [9]. Estos resultados se han ampliado para el subconjunto de células T CD8 +, en particular [10] - [17], lo que sugiere que los linfocitos T citotóxicos (CTL) desempeñan un papel importante en la respuesta inmune antitumoral. En consecuencia, otros factores asociados con respuestas de CTL también están asociados positivamente con la supervivencia, incluyendo el interferón-γ (IFN-γ) [18], [19], el IFN-γ receptor [20], factor regulador de interferón (IRF) -1 [ ,,,0],21], IL-18 [22], TNF-α [23], MHC de clase I [24] - [26], y MHC de clase I del procesamiento de antígenos maquinaria [17]
a diferencia de T CD8 +. células, varios estudios han indicado que las células CD25 + FoxP3 + T infiltrantes de tumor (denominados células T reguladoras o como células T reguladoras) se asocian con una menor supervivencia [10], [27] - [29]. Tregs tienen la capacidad de suprimir la proliferación, producción de citoquinas, y la actividad citolítica de las células CD4 + y células T CD8 + por mecanismos que implican el contacto célula a célula y la liberación de citoquinas tales como el TGF-β [30], [31]. Tregs también pueden inducir un fenotipo inmunosupresor en otros tipos de células tales como macrófagos [32]. Aunque las células T reguladoras se han asociado con un mal pronóstico en muchos tipos de cáncer, recientemente se han reportado varias excepciones. Leffers et. Alabama. encontró que FoxP3 + se infiltra en la EOC etapa avanzada se asociaron con aumento de la supervivencia [14]. Resultados similares han sido reportados en el cáncer colorrectal [33] y el linfoma [34] - [36]. Por otra parte, en modelos murinos, células FoxP3 + pueden desempeñar un papel positivo en antitumoral y la inmunidad antiviral [37], [38]. El papel exacto de las células T reguladoras en los resultados del cáncer merece más consideración dado que varios grupos están tratando de mejorar la inmunidad tumoral por el agotamiento de FoxP3 + células T reguladoras de pacientes con cáncer [39] - [44], incluidos los pacientes EOC [45]
Además de las células T reguladoras, según los informes, otros tipos de células juegan un papel inmunosupresor en EOC. Por ejemplo, las células dendríticas plasmacitoides contribuyen a la inmunosupresión, promoviendo el desarrollo o la contratación de la interleucina-10 productoras de CD4 + y CD8 + células T reguladoras [46], [47]. células dendríticas mieloides (PMD) pueda alterar la inmunidad de células T mediante la expresión de B7-H1, un ligando para el receptor inhibidor PD-1 que se encuentra en las células T [48]. Los monocitos y macrófagos en el microambiente EOC pueden ser polarizados hacia un denominado fenotipo M2, que se caracteriza por la expresión de IL-10 receptores scavenger, TGF-b y y se cree que promueve la progresión del tumor [49], [50], [51]. Bajo la influencia de la IL-6 y IL-10, los macrófagos en EOC también pueden expresar B7-H4, que inhibe la proliferación de células T [52]. Los macrófagos también producen CCL22, que promueve el reclutamiento Treg con el medio ambiente del tumor [32]. Por último, la expresión del mediador inflamatorio COX-2 en el epitelio del tumor ha sido asociado con una reducción de la infiltración de linfocitos y mal pronóstico en EOC [13], [53].
Con el advenimiento de micromatriz de tejido tumoral tecnología (TMA) , un gran número de estudios retrospectivos han investigado la relación entre las células inmunes infiltrantes de tumor y el pronóstico en EOC y otros tipos de cáncer. Sin embargo, la mayoría de los estudios se centran en uno o unos pocos marcadores, de tal manera que las asociaciones entre los diferentes factores inmunológicos pueden pasarse por alto. Además la mayoría de los estudios no tienen en cuenta los diferentes subtipos histológicos de EOC, que ahora son reconocidos a comportarse como enfermedades distintas [54]. Como resultado, hay inconsistencias y cuestiones sin resolver en la literatura acerca de la importancia pronóstica de diferentes infiltrados de células inmunes. Para hacer frente a esto, se analizaron varias grandes series de tumores EOC, incluyendo de alto grado seroso, endometrioide, de células claras y subtipos mucinosos, por la presencia de varios infiltrados de células inmunes y los marcadores inflamatorios. Nuestros resultados revelan que los tumores serosos de alto grado tienen un perfil inmunológico distinto que está fuertemente asociado con la supervivencia del paciente.
Resultados
intraepitelial células T y marcadores funcionales asociadas en alto grado seroso EOC
inicialmente se investigó la relación entre los infiltrados inmunes y la supervivencia en una cohorte de 199 pacientes EOC serosos de alto grado. Elegimos a centrarse primero en los casos serosos de alto grado, como los otros subtipos histológicos muestran propiedades biológicas y clínicas distintas que son potencialmente de confusión [54], [55]. Esta cohorte inicial se restringió a los pacientes que habían sido sometidos a citorreducción óptima (es decir, sin evidencia de enfermedad residual macroscópica). Características de los pacientes se muestran en la Tabla 1.
Los tumores en esta cohorte inicial había sido previamente evaluados por inmunohistoquímica (IHC) para una variedad de marcadores de linfocitos, incluyendo CD3, CD4, CD8, CD20 y granzima B [12]. linfocitos intraepiteliales (es decir, linfocitos dentro del componente epitelial del tumor) se anotó como presente (es decir, uno o más linfocitos intraepiteliales presente en al menos uno de los dos núcleos de 0,6 mm) o ausente. Nos volvieron a analizar esta centrados exclusivamente en los casos serosos de alto grado de datos. Se encontró que el 83,2% (163/196) de los tumores serosos de alto grado evaluables fueron positivos para células T CD3 + intraepiteliales, mientras que se encontraron células intraepiteliales CD4 + y CD8 + en 53,4% (103/193) y 84,0% (163/194) de tumores evaluables, respectivamente (Fig 1A & amp;. B y los datos no presentados). CD4 + y CD8 + infiltrados celulares mostraron una asociación positiva fuerte (p & lt; 0,0001). La Tabla 2 muestra las asociaciones estadísticas para estos y todos los demás marcadores estudiados en esta cohorte inicial.
(A) CD4, (B) CD8, (C) CD45RO, (D) OX40, (E) CD25, (F ) TIA-1, (G) granzima B, y (H) FoxP3. Objetivo 40X.
Mientras que los marcadores anteriores indican qué subconjuntos de linfocitos están presentes en los tumores, que no revelan su estado de activación. Para abordar esta cuestión, se analizaron los tumores para la expresión de CD45RO, OX40 y CD25, que se expresan por las células T activadas [56], [57]. Utilizando los mismos criterios de puntuación que el anterior, el 70,6% (132/187) de los tumores fueron positivos para intraepitelial células CD45RO +, y el 49,7% (96/193) fueron positivos para células CD25 + intraepitelial (figura 1C & amp;. E). Por el contrario, sólo el 7,0% (11/158) de los tumores fueron positivos para las células intraepiteliales OX40 + (Fig. 1D). En las comparaciones por pares, CD45RO, CD25 y OX40 se asociaron positivamente todo (Tabla 2). Por otra parte, CD45RO y CD25 se asociaron con la presencia de CD3 +, CD4 + y CD8 +. OX40 mostró una tendencia similar, pero esto no alcanzó significación estadística, probablemente debido al bajo número de casos positivos.
Para investigar el estado de diferenciación de las células T infiltrantes de tumor, se analizaron los tejidos de las células que expresan intraepitelial TIA -1 y granzima B, que son marcadores de células CD8 + T citotóxicas y células NK [58] - [60]. La mayoría de los tumores (66,5%, 127/191) fueron positivos para intraepitelial TIA-1 + células (Fig. 1F), y aproximadamente la mitad de los tumores (45,6%, 88/193) fueron positivos para intraepitelial granzima B + células (Fig. 1G). Hubo una asociación altamente significativa entre las células TIA-1 + y granzima B + (P & lt; 0,0001). Por otra parte, en las comparaciones por pares, TIA-1 + y células granzima B + se asocian con cada uno de los marcadores de activación de CD45RO, CD25 y OX40. Finalmente, TIA-1 en las células + y granzima B + eran cada uno asociado a la presencia de CD3 +, CD4 + y CD8 + (Tabla 2). Para examinar si TIA-1 y granzima B expresión podría ser debido a la presencia de células NK o NKT, se examinaron los tumores para el NK marcadores de células CD56 y CD57. Para ambos marcadores, había ya sea pocos o ningún infiltrado en absoluto en el epitelio de tumor (datos no presentados), lo que indica que el TIA-1 + y granzima B + infiltrados eran células T más probables.
Finalmente, los tumores eran analizadas para la presencia de células que expresan intraepitelial FoxP3, que en los seres humanos es un marcador de células T reguladoras y células T activadas [61], [62]. Alrededor de la mitad de los tumores (52,9%, 100/189) fueron positivos para FoxP3 + intraepiteliales de células (Fig. 1H). Hubo una fuerte asociación entre FoxP3 + y células CD25 + (p & lt; 0,0001), y FoxP3 + y células CD25 + fueron cada fuertemente asociada con las células CD4 + (p & lt; 0,0001 para ambos marcadores). Por lo tanto, en consonancia con los informes anteriores [10], [14], [27], [28], una proporción significativa de los tumores contenían infiltrados intraepiteliales con marcadores característicos de células T reguladoras (CD4 +, CD25 +, y FoxP3 +).
MHC de clase I y II en alto grado seroso EOC
Se analizaron las células tumorales para la expresión de MHC de clase I y II utilizando una escala de cuatro puntos (negativo, focal [& lt; 10%], desigual [10- 50%] o difusa [& gt; 50%]). Todos los tumores evaluables (185/185) expresan MHC de clase I en algún grado (es decir, focal, irregular o difusa), lo que indica que podría en teoría presentar antígeno a las células T CD8 +. Para el análisis estadístico, sólo la categoría más alta (difusas, & gt; 50%) se consideró positivo (figura 2A & amp;. B). El uso de este umbral, el 85,4% (158/185) de los tumores fueron positivos para el MHC de clase I. MHC de clase I se asoció positivamente con los tres subconjuntos de células T (CD3, CD4, CD8), y los marcadores de activación CD25 y CD45RO, y el marcadores de diferenciación TIA-1, granzima B y FoxP3 (Tabla 2).
objetivo 40X.
Una gran mayoría de los tumores (86,5%, 166/192) expresa MHC de clase II en algún grado (es decir, focal, irregular o difusa), lo que indica que podrían teóricamente antígeno presente a las células T CD4 +. Al igual que con MHC de clase I, sólo la categoría más alta (difusa, & gt; 50%) se consideró positiva para los análisis estadísticos (Fig 2 C & amp;. D). El uso de este umbral, el 41,1% (79/192) de los tumores fueron positivos para el MHC de clase II. MHC de clase II está fuertemente asociada con MHC de clase I (p & lt; 0,0001). En consecuencia, MHC de clase II se asoció positivamente con los tres subconjuntos de células T (CD3, CD4, y CD8), los marcadores de activación CD25 y CD45RO, y los marcadores de diferenciación TIA-1, granzima B y FoxP3 (Tabla 2). Similar a los resultados de MHC de clase I, la expresión de MHC de clase II en el epitelio tumoral se asocia positivamente con diversos marcadores de células T, incluyendo CD3, CD4, CD8, CD45RO, TIA-1, granzima B, CD25 y FoxP3 (Tabla 2) .
células B intraepitelial de alto grado en serosa EOC
los tejidos se tiñeron con un anticuerpo para CD20, que se expresa en las células B de la memoria ingenuo etapas de diferenciación [63]. Intraepitelial CD20 + células se encontraron en 41,9% (83/198) de los tumores evaluables (Fig. 3A). + CD20 infiltrados fueron más frecuentes en los tres subgrupos de células T (CD3, CD4, y CD8); la activación marcadores CD45RO y CD25; la diferenciación marcadores TIA-1, granzima B y FoxP3; y ambos MHC de clase I y II (Tabla 2).
Objetivo 40X.
células dendríticas intraepiteliales, granulocitos y macrófagos en alto grado seroso EOC
Los tumores se analizaron para la presencia de células dendríticas inmaduras y maduras por la tinción de CD1a y CD208, respectivamente. Una minoría de los tumores (13,4%, 23/172) contenía CD1a + intraepiteliales de células (Fig. 3B). No asociación significativa con ninguno de los marcadores intraepitelial de linfocitos (CD3, CD8 o CD20), marcadores de activación (CD45RO o CD25), marcadores de diferenciación (TIA-1, granzima B o FoxP3) o MHC de clase I o II (Tabla 2) se observó , posiblemente debido al bajo número de células CD1a +. En contraste con CD1a, ninguno de los tumores anotó positivo para intraepitelial células CD208 +. análisis paralelo de tejido de las amígdalas reveló la presencia de muchas células CD208 +, validando así el procedimiento de IHC.
Alrededor de la mitad de los tumores (54,7%, 87/159) contenían células intraepiteliales que expresan el marcador CD68 de los macrófagos (Fig. 3D) . CD68 se asoció positivamente con marcadores de varios de linfocitos (CD3, CD8 y CD20), marcadores de activación (CD25 y CD45RO), marcadores de diferenciación (TIA-1, granzima B y FoxP3) y MHC de clase I (Tabla 2). Para evaluar la presencia de granulocitos, el TMA se tiñó para la mieloperoxidasa. Veinte y cuatro por ciento (37/154) de los tumores contenían células que expresan mieloperoxidasa (Fig. 3C), sin embargo, estos no mostraron asociaciones significativas con otros marcadores, con la excepción de CD4 (p = 0,034).
los COX -2 enzima se ha asociado con la supervivencia inferior en EOC cuando se expresa en el componente epitelial del tumor [53]. Por lo tanto, los tumores se puntuaron para la expresión de COX-2 en el componente epitelial usando una escala de cuatro puntos (negativo, equívoca [0-1%], desigual [1-50%] o difusa [& gt; 50%]) (Fig . 2E & amp; F). Dos tercios de los tumores (66,5%, 111/167) fueron positivos para la COX-2 (es decir, parches o difusa tinción). En contraste con los informes de ovario, cervical, y otros tipos de cáncer, [13], [64], [65], la expresión de COX-2 no se asoció significativamente con cualquiera de los infiltrados inmunitarios estudiados (Tabla 2).
las asociaciones entre los infiltrados inmunes y supervivencia de los pacientes en alto grado seroso EOC
análisis
de Kaplan-Meier se realizó para evaluar la asociación entre varios infiltrados inmunes y la supervivencia específica de la enfermedad (DSS). De acuerdo con informes anteriores [5] - [7], [10] - [17], las células CD3 + y CD8 + intraepiteliales se asociaron con un aumento de DSS (p = 0,0009 y 0,0008, respectivamente) (Fig 4A & amp; B.). intraepitelial células CD4 + mostraron una tendencia hacia el aumento de DSS, pero esto no fue estadísticamente significativa (Fig. 4C). El NK marcadores de células CD56 y CD57 no mostraron asociación con el DSS (datos no mostrados).
Las curvas de Kaplan-Meier que muestra la supervivencia específica de la enfermedad para los pacientes calificaron como positivo o negativo para (A) CD3, (B) CD8 , (C) CD4, (D) FoxP3, (e) CD20, (F) CD68, (G) TIA-1, (H) granzima B, (I) MHC de clase I y (J) de MHC de clase II. Los datos se obtuvieron a partir de pacientes con citorreducción óptima con EOC seroso de alto grado.
Curiosamente, las células CD20 + intraepiteliales se asociaron con mayor DSS (p = 0,0033) (Fig. 4E). Además, la combinación de CD8 + y CD20 + infiltrados se asoció con un aumento significativo DSS sobre tumores que contenían CD8 + infiltrados pero no CD20 + infiltrados (mediana de 4432 días frente a 2279 días, p = 0,0115) (datos no mostrados).
en contraste con marcadores de linfocitos, la dendríticas CD1a marcador de células no mostró asociación con el DSS, posiblemente debido al bajo número de tumores que contienen células CD1a +. Del mismo modo, los marcadores CD68, la COX-2 y mieloperoxidasa no mostraron asociación con el DSS (Fig. 4F y los datos no presentados).
Dada la asociación entre las células T CD8 + y DSS, se evaluaron otras características canónicas de CTL activos respuestas. DSS se asoció positivamente con intraepitelial células TIA-1 + (p = 0,0003), así como la expresión de MHC de clase I y II por las células tumorales (p = 0,0014 y 0,0026, respectivamente) (Fig 4G, I, & Amp;. J). Los tumores que contenían tanto CD8 + y TIA-1 + infiltrados se asociaron con mayor DSS comparación con los tumores CD8 + TIA-1-negativos (p = 0,0025). Varios otros marcadores de células T, incluyendo granzima B, CD45RO y CD25, mostraron tendencias hacia un aumento del DSS pero no alcanzaron significación estadística (Fig. 4H y los datos no se muestra). OX-40 no mostró ninguna tendencia aparente o asociación con el DSS, posiblemente debido al bajo número de casos positivos (datos no mostrados).
En aparente contraste con los informes de que las células T reguladoras están asociadas con un mal pronóstico, la presencia de intraepitelial células FoxP3 + se asoció con un aumento de DSS (p = 0,010) (Fig. 4D). Por otra parte, los tumores que eran triplemente positivo para intraepitelial CD4 +, FoxP3 + y células CD25 + mostraron una tendencia hacia el aumento de la supervivencia, aunque esto no alcanzó significación estadística (p = 0,059). Del mismo modo, los tumores positivos para ambas células CD8 + y FoxP3 + intraepiteliales mostraron una tendencia hacia el aumento de DSS comparación con los tumores que fueron positivos para las células CD8 + pero negativo para células FoxP3 +; Sin embargo, esta tendencia no alcanzó significación estadística (p = 0,052). Por lo tanto, por múltiples análisis, las células + FoxP3 infiltrantes de tumor mostraron una tendencia o asociación estadísticamente significativa con un aumento de DSS.
La asociación entre infiltrados inmunes y la supervivencia depende de la extensión de la enfermedad residual
T infiltrados de células se informa más frecuente en pacientes con citorreducción óptima frente subóptima [5], [66]. Para investigar si esto era cierto para otros marcadores de linfocitos, se analizó una cohorte adicional de casos serosas 220 de alto grado de pacientes que tienen enfermedad residual macroscópica después de cirugía citorreductora. Nos centramos en CD8 + se infiltra, así como los tres nuevos marcadores de pronóstico del análisis anterior (es decir, FoxP3, TIA-1 y CD20). En comparación con la cohorte de pacientes con reducción óptima, los pacientes con enfermedad residual macroscópica tenían una prevalencia significativamente menor de CD8 + (58.5%), FoxP3 + (20.2%), TIA-1 + (39.5%) y CD20 + (16.3%) infiltrados (p & lt; 0,0001 para todos los marcadores). En el análisis de Kaplan-Meier de estos cuatro marcadores, sólo infiltrados + CD8 tenían una asociación significativa con la supervivencia (p = 0,0044) en los pacientes con enfermedad residual macroscópica (datos no mostrados).
La asociación entre infiltrados inmunes y la supervivencia es depende de subtipo histológico
Los resultados anteriores se basan exclusivamente en los casos de EOC seroso de alto grado. Para evaluar la asociación entre los infiltrados inmunes y DSS en otros subtipos histológicos de EOC, se realizó el mismo análisis con un adicional de 288 tumores de EOC de los siguientes subtipos histológicos: mucinoso (n = 31), endometrioide (n = 125) y de células claras ( n = 132). Estas muestras de tumores adicionales eran de una cohorte de pacientes se ha descrito anteriormente con reducción óptima [12].
En general, los infiltrados inmunes fueron menos frecuentes en los otros subtipos histológicos en comparación con los casos serosos de alto grado discutidos previamente. Esto fue cierto para todos los marcadores de linfocitos estudiados (es decir, CD3, CD8, CD4, CD45RO, CD25, FoxP3, TIA-1, granzima B, y CD20) (Fig. 5). La diferencia fue más notable para los marcadores FoxP3, CD25 y CD20. Después de que los casos serosos de alto grado, la siguiente frecuencia más alta de infiltrados inmunes se observó en el subtipo endometrioide (Fig. 5).
Las barras indican el porcentaje de tumores con resultados positivos para las células que expresan intrapithelial CD3, CD8, CD4 , CD45RO, CD25, FoxP3, TIA-1, granzima B, CD20 y CD68. también se muestra la expresión de MHC de clase I y II por epitelio tumor. Los datos se obtuvieron a partir de pacientes con reducción óptima
Se examinó la asociación entre los infiltrados inmunes y DSS en el endometrioide y subtipos de células claras.; el número de casos mucinosos era demasiado pequeña para llevar a cabo el análisis estadístico robusto. Para los casos endometrioides, la única asociación significativa encontrada fue entre la expresión de MHC de clase II y el aumento de DSS (p = 0,039) (datos no mostrados). Para los casos de células claras, la única asociación significativa encontrada fue entre la presencia de infiltrados de mieloperoxidasa-positiva y la disminución de DSS (p = 0,040, datos no mostrados). Por lo tanto, la relación entre los infiltrados inmunes y la supervivencia difiere mucho entre los subtipos histológicos de EOC.
Discusión
Hemos examinado sistemáticamente la relación entre los infiltrados inmunes y la supervivencia del paciente en tres grandes series EOC. De acuerdo con Clarke et al. [12], hemos encontrado que los tumores serosos de alto grado tienen un perfil inmunológico distinto en comparación con el endometrioide, de células claras y subtipos mucinosos. Además, se encontró que los infiltrados inmunes eran generalmente más frecuente en los tumores de pacientes con citorreducción óptima. FoxP3, TIA-1 y CD20 emergieron como nuevos marcadores inmunológicos asociados con el aumento de la supervivencia del paciente. Nuestros resultados ponen de manifiesto la importancia de subtipo histológico en el Inmunobiología del COE, que puede tener importantes implicaciones para la inmunoterapia de esta familia de enfermedades.
linfocitos intraepiteliales (es decir, células que expresan CD3, CD4, CD8, CD20 o FoxP3 ) fueron más frecuentes en los casos serosos de alto grado, seguida de los casos endometrioide. Por otra parte, los linfocitos intraepiteliales fueron más prevalentes en los tumores de pacientes con reducción óptima en comparación con los pacientes con enfermedad residual macroscópica. Una serie de características biológicas de los tumores parece influir en la densidad de los infiltrados linfocíticos. (A) los infiltrados de células T están asociados positivamente con la expresión de MHC de clase I y II por las células tumorales (Tabla 2), así como MHC de clase I del procesamiento de antígenos maquinaria [15] - [17], [67], lo que sugiere que la presentación de antígenos puede ser un determinante importante de la infiltración de células T. (B) De acuerdo con esta idea, los tumores con pérdida o mutación de los genes BRCA1 o p53 tienen un aumento de la densidad de las células T infiltrantes de tumores [12], [66]. Esto sugiere que la reparación del ADN defectuoso y la consiguiente inestabilidad genómica en los tumores pueden conducir a la generación de neo-antígenos que desencadenan respuestas de las células T del huésped. (C) moléculas de señalización también juegan un papel, como la densidad de las células T infiltrantes de tumores se asocia negativamente con la expresión de VEGF, B7-H1 /PD-L1 y la endotelina receptor B por tumores [5], [11], [68 ] y positivamente asociado con la expresión de las quimiocinas CXCL9, CCL21, CCL22, CCL2 y CCL5 [5], [28], [69]. (D) Finalmente, dos grupos han informado de los perfiles de expresión de genes que se correlacionan con la presencia de células T infiltrantes de tumor en EOC [12], [70]. Estos últimos estudios confirman algunas de las asociaciones anteriores (por ejemplo, MHC de clase I y II, beta 2 microglobulina, TAP1 y 2) e identificar nuevos factores asociados con infiltrados de células T (por ejemplo, inducida por interferón IL-15, IL-32 y numerosos genes). Es de suponer que uno o más de los factores mencionados cuentas para el enriquecimiento observado la presencia de linfocitos infiltrantes de tumores serosos y en casos citorreducción óptima de alto grado.
A pesar de que la asociación entre las células T CD8 + intraepiteliales y el aumento de la supervivencia en EOC es una gran hallazgo reproducible [10] - [17], se sabe relativamente poco sobre el fenotipo funcional de estas células T CD8 +. Varias líneas de evidencia sugieren una respuesta citolítica clásica subyace resultados favorables. Por ejemplo, otros han informado de asociaciones positivas entre la supervivencia y la expresión intratumoral de γ IFN [18], [19], el IFN-γ receptor [20], así como numerosos genes que responden al interferón, tales como MHC de clase I [24] - [26], MHC de clase I de antígenos de la maquinaria de procesamiento [17], MHC de clase II [15], [16], y el IRF-1 [21]. IL-18 [22] y TNF-α [23] también parecen ser componentes importantes de la respuesta de células T, ya que ambas citocinas están asociados positivamente con la supervivencia. Examinamos dos componentes de gránulos citolíticos, granzima B y TIA-1, los cuales mostraban una asociación con infiltrados de células T CD8 +. De estos dos marcadores, sólo el TIA-1 mostró una asociación estadísticamente significativa con la supervivencia en casos serosos de alto grado (Fig. 4). células TIA-1 + también se han descrito en el cáncer de mama medular [71], [72] y melanoma [73], en el que se asocian con las características de pronóstico favorable. Por el contrario, las células de la TIA-1 + infiltrantes de tumores se asocian con una menor supervivencia en el linfoma [74] - [78]. Curiosamente, TIA-1 no es simplemente un marcador de gránulos citolíticos; es una proteína de unión de ARN implicada en la regulación post-transcripcional del ARNm [79]. Queda por determinar si la asociación entre intraepitelial TIA-1 + células y la supervivencia en EOC se debe al papel de esta proteína en función citolítica gránulo o la regulación del ARNm.
infiltrados Treg han sido previamente asociado con la disminución de la supervivencia en el ovario EOC [10], [27], [28]. Sin embargo, en el presente estudio y otro informe reciente [14], infiltrados FoxP3 + se asociaron con un aumento de la supervivencia. Estos resultados aparentemente contradictorios pueden ser atribuibles a diversos factores. En primer lugar, no todos los estudios tienen en cuenta los subtipos histológicos de EOC, o la extensión de la enfermedad residual; En el presente estudio, las células FoxP3 + se asocian únicamente con la supervivencia en tumores serosos de alto grado de pacientes con reducción óptima. En segundo lugar, una variedad de anticuerpos se han utilizado para detectar FoxP3, que puede conducir a resultados discordantes [80]. Se pueden usar tercer lugar, los diferentes criterios de puntuación. Por ejemplo, la ubicación precisa intratumoral de células T reguladoras es un importante determinante del pronóstico en cáncer gástrico [81]. En cuarto lugar, los marcadores moleculares usados para definir Tregs difieren entre los estudios. Aunque FoxP3 sigue siendo considerado como el marcador más fiable de las células T reguladoras en el cáncer humano [82], [83], sino que también puede ser expresado por las células epiteliales del tumor [84] - [86] y
in vitro
células CD4 + y las células T CD8 + [87] - [95]. Por estas razones, algunos estudios incluyen CD25 como un segundo marcador de células T reguladoras [10], [28]. Sin embargo, como FoxP3, CD25 se expresa potencialmente por las células T efectoras, por lo que no está claro que la doble tinción para FoxP3 y CD25 identifica más exactamente Tregs [89], [96]. Otras características de las células T reguladoras incluyen alta expresión de GITR y CTLA-4 y baja expresión de CD127 y CD49d y [97], [98], sin embargo, estos marcadores son técnicamente difíciles de evaluar en las TMA incluido en parafina.
Estos consideraciones técnicas no obstante, hay más pruebas de que las células de tumor infiltrante FoxP3 + se asocian con un pronóstico favorable en EOC, cáncer colorrectal, cáncer de cabeza y cuello, y el linfoma [14,33, -36,99-102]. ¿Cómo podrían las células T FoxP3 promover resultados favorables? En el presente estudio, las células FoxP3 + fueron fuertemente asociados con otras células T efectoras, y resultados similares se han reportado en melanoma [103]. Por lo tanto, las células FoxP3 + pueden simplemente ser un indicador de una fuerte respuesta de células T CD8 +, que podría superar cualquier efectos inmunosupresores de FoxP3 + células. Alternativamente, subconjuntos de células T FoxP3 humanos recientemente se han demostrado tener un pro-inflamatoria, IL-17 de producción de fenotipo [104] - [106]. De hecho, las células T CD4 + pueden estar sesgadas hacia este denominado fenotipo Th17 por la exposición a TGF-β en combinación con IL-6, IL-1 o IL-23 [107] - [109]. Estos factores están presentes en el ambiente del tumor EOC [8], y, en consecuencia, se han reportado las células Th17 en EOC [110] - [112]. Por lo tanto, la asociación entre FoxP3 + células y aumento de la supervivencia potencialmente podría reflejar una respuesta anti-tumoral Th17-como subyacente. Claramente, se necesita más trabajo para determinar el grado en que las células T FoxP3 en EOC representan células T reguladoras frente Th17 u otras células T efectoras.
La observación de que CD20 intraepitelial + infiltrados están asociados con un aumento de DSS es un hallazgo novedoso en EOC . Dong et. Alabama. informaron que las células B en la ascitis se asociaron con una menor supervivencia en EOC [113], sin embargo, su estudio se centró en las células B en los derrames pleurales y peritoneales recogidos después de la quimioterapia, que por definición constituye una cohorte mal resultado. De hecho, en el presente estudio, las células B CD20 + intraepiteliales no mostraron ninguna relación con la supervivencia en pacientes con alto riesgo, enfermedad citorreducción subóptima. Las células tumorales infiltrantes B CD20 + son una característica del cáncer de mama medular y se han propuesto para mediar un pronóstico favorable [114], [115]. Además, la presencia de una firma de la transcripción de células B en el cáncer de mama con ganglios negativos se asocia con aumento de la supervivencia [116]. células B se infiltra en el cáncer de mama representan poblaciones clonal ampliado, expresar moléculas de IgG somáticamente hypermutated, y reconocer antígenos diana tales como gangliósido D3 y trasladadas a la superficie de actina [114], [115], [117] - [120]. No está claro cómo las células B infiltrantes de tumores promueven resultados favorables en el cáncer. Alabama.