Extracto
Objetivos
se observa la expresión alterada de epitelial o estromal caveolina-1 (Cav-1) en varios tipos de cánceres humanos. Sin embargo, sigue siendo desconocida la importancia clínica de Cav-1 de expresión en el cáncer gástrico (CG). El presente estudio tiene como objetivo explorar el significado clínico-patológico y el valor pronóstico de las células tumorales y cáncer asociado fibroblastos (CAF) Cav-1 en GC.
Métodos y Resultados
Puntos cuánticos se realizó inmunofluorescencia histoquímica para examinar la expresión de Cav-1 en 20 casos de gastritis sin metaplasia intestinal (MI), 20 casos de gastritis con IM y 286 casos de CG. epitelial tasas positivas de Cav-1 en la gastritis y sin IM, gastritis con IM y GC mostró una tendencia a la baja (
P = 0,012
). Baja expresión de Cav-1 en los CAF, pero no en las células tumorales fue un predictor independiente de mal pronóstico en pacientes con cáncer gástrico (
P = 0,034
y 0,005, respectivamente, en la supervivencia libre de enfermedad y la supervivencia global). CAV-1 nivel en las células tumorales y los CAF no mostró correlación significativa con las características clínico-patológicos clásicos.
Conclusiones
La pérdida de epitelio CAV-1 puede promover la progresión maligna y baja CAF CAV-1 nivel Herald peor resultado del paciente GC, lo que sugiere CAF Cav-1 puede ser una diana terapéutica candidato y un marcador pronóstico útil de GC
Visto:. Zhao X, y Él, Gao J, L Fan, Li Z, Yang G, et al. (2013) caveolina-1 nivel de expresión en cáncer asociado fibroblastos predice el resultado en el cáncer gástrico. PLoS ONE 8 (3): e59102. doi: 10.1371 /journal.pone.0059102
Editor: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Estados Unidos de América
Recibido: 6 de diciembre de 2012; Aceptado 11 de febrero de 2013; Publicado: 19 Marzo 2013
Derechos de Autor © 2013 Zhao et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el Proyecto Nacional de Pregrado Innovación de China (. NO 111 048 670) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (. NO 30900652). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito "
Conflicto de intereses:. Guilin Fanpu Biotecnología Co., Ltd dio soporte tecnológico para la construcción TMA. No hay patentes, productos en desarrollo o los productos comercializados para declarar. Esto no altera la adhesión de los autores a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales.
Introducción
Al igual que los tejidos normales, los tumores se componen de dos compartimentos discretos pero interactivos, y el parénquima el estroma. En los tumores, las células tumorales en sí son parénquima, mientras que el estroma incluye una mezcla de elementos de la matriz extracelular (ECM) y células no malignas, como el cáncer asociado fibroblastos (CAF), células endoteliales vasculares y células inmunes e inflamatorias [1], [2], [3]. En los últimos años, las profundas influencias de estroma tumoral en el crecimiento y la metástasis en diversos tipos de tumores han sido ampliamente dilucidado [2], [3]. Las células tumorales pueden desencadenar la deposición de un estroma reactivo que contiene CAF activados, células inmunes e inflamatorias, elementos de ECM que pueden favorecer la invasión y metástasis de cánceres [2], [3]. Además, aunque las funciones definidas de proteínas en la diafonía molecular entre el tumor y las células del estroma no están claros, expresión alterada de las proteínas del estroma se han manifestado como nuevos biomarcadores en varios tipos de cánceres humanos, incluyendo de mama [4], [5], [6] , [7], de próstata [8], nasofaringe [9] y el cáncer de células basales [10]
La familia de genes caveolina tiene tres miembros:.
CAV1
,
CAV2
y
CAV3
, que codifica las proteínas de la caveolina-1 (Cav-1), la caveolina-2 y la caveolina-3, respectivamente [11].
CAV1
se localiza en el cromosoma 7 (7q31.1 locus) y contiene tres exones (35, 165 y 324 pb) y dos intrones (1,5 y 32 kb) [11]. Cav-1 constituye el principal componente estructural de caveolae, que son en forma de matraz invaginaciones vesiculares de membrana plasmática [12], [13]. Varios receptores y moléculas de señalización se localizan en el caveolae y están reguladas negativamente por Cav-1 a través de su dominio andamio. Además, Cav-1 interactúa directamente con la bicapa de colesterol y esfingolípidos dentro de caveolina, por lo tanto, influir en la homeostasis de los lípidos y el transporte [12], [13]. En los cánceres, es cada vez más claro que Cav-1 está implicada en la regulación de varios procesos asociados con el cáncer, que van desde la transformación celular, crecimiento tumoral, invasión y metástasis, para resistencia a múltiples fármacos y la angiogénesis [14]. CAV-1 muestra un papel compartimento dependiente de tumores. En el compartimento epitelial, Cav-1 impactos tanto positiva como negativamente en el desarrollo de tumores. En estroma tumoral, especialmente las CAF, baja expresión de la proteína de Cav-1 predice resultado adverso en el cáncer de mama y de próstata [4], [5], [6], [8], [12], [15]. Sin embargo, los valores clínicos de Cav-1 en GC no quedan del todo claras. Basado en las investigaciones anteriores, que hipótesis de que las funciones de Cav-1 en el epitelio y el estroma pueden ser diferentes, los roles de epitelial Cav-1 es incierta, pero baja expresión de Cav-1 en CAF puede promueve la progresión GC y se correlaciona con el resultado adverso de los pacientes GC .
Para aclarar la relación entre la progresión o la supresión de Cav-1 y GC, hemos analizado específicamente tanto del estroma y la expresión de las células epiteliales de Cav-1 en las secciones de tejidos, a través de los puntos cuánticos avanzada (puntos cuánticos) inmunofluorescencia basado histoquímica (QD-IHC) que se habían desarrollado en nuestros estudios anteriores y que han sido ampliamente acreditada y utilizada en laboratorios [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22 ]. Fluorescentes puntos cuánticos de nanocristales semiconductores son una nueva clase de fluoróforos inorgánicos multifuncionales que tienen muchas propiedades que se benefician, como estrechos picos banda de emisión, longitud de onda de su fluorescencia depende en gran medida de sus tamaños y de diferentes colores QD puede ser excitado simultáneamente por una sola fuente de luz con espectral mínimo superposición [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]. Estas propiedades hacen que los puntos cuánticos de gran utilidad para la imagen molecular multiplexado por inmunofluorescencia [21], [23]. El avanzado múltiples objetivos tecnología de etiquetado de los puntos cuánticos-IHC permitió un análisis preciso de Cav-1 de expresión en los CAF, mediante la detección simultánea de alfa-actina de músculo liso (α-SMA), que es un marcador de la CAF y proteínas de Cav-1.
Materiales y Métodos
los pacientes y el seguimiento
Debido a que el tiempo era limitado y algunos pacientes estaban fuera del hospital, por lo que es difícil obtener el consentimiento por escrito. Llamamos a cada paciente, explicamos nuestro estudio se utilizó únicamente para los intercambios académicos, y no era perjudicial para su salud, y que no se incluyan su información privada. Cuando llamamos, un notario público estaba presente, y que recibió el mensaje corto de teléfono móvil que requerimos pacientes que consientan el estudio de enviar a nosotros. Si el paciente tiene muertos, nos dieron el consentimiento de su representante legal. Por último, se obtuvo el consentimiento verbal por parte de todos los 300 pacientes. Un total de 340 tejidos fijados con formalina, incluidos en parafina se obtuvieron de los pacientes diagnosticados en el período entre julio de 2005 Febrero de 2012, incluyendo 300 GC 20, gastritis y sin tejidos metaplasia intestinal (MI) y el 20 de gastritis con los tejidos de mensajería instantánea. La gastritis sin IM y con muestras de mensajería instantánea se derivaron de los tejidos paracancerous adenocarcinoma. sección Serial confirmó no tejido tumoral se encontró en estas muestras. Las muestras se obtuvieron de los archivos del Departamento de Patología, Hospital Zhongnan de la Universidad de Wuhan (Hubei, China, P. R.). el diagnóstico y el grado de diferenciación histológica se determinaron de acuerdo con los criterios de la Organización Mundial de la Salud (OMS) para GC. Todas las muestras de GC fueron clasificados en base a la clasificación TNM de la UICC (2009). Dos patólogos certificados por la junta (GF Yang Fan y LF) volvieron a confirmar las características histopatológicas de estas muestras. 326 muestras fueron conservadas con éxito para su posterior análisis; Mientras tanto, 14 muestras de GC se perdieron de la diapositiva durante la inmunotinción. factores clinicopatológicas de los pacientes GC se enumeran en la Tabla 1. Para 247 pacientes GC había tejido suficiente para el análisis de las células tumorales y el cáncer asociado fibroblástica Cav-1 inmunotinción. Todos estos 300 pacientes fueron tratados con resección radical o cirugía citorreductora de GC, antes de la administración de la quimioterapia o la radioterapia. Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética de Investigación Médica del Instituto Facultad de Ciencias Médicas Básicas de la Universidad de Wuhan.
El seguimiento comenzó en la fecha de la cirugía y terminó en agosto de 2012. Entre los 286 restantes GC tejidos de pacientes, 257 inscritos en nuestra cohorte de seguimiento, 116 pacientes que llegaron con éxito a un niño de cinco años de seguimiento o murieron a causa de GC se incluyeron en el análisis de supervivencia. Los pacientes, que no alcanzarán los cinco años de seguimiento y murieron de otras enfermedades o debido a acontecimientos inesperados, fueron excluidos del estudio de supervivencia. La mediana de seguimiento de los 116 pacientes fue de 62 (rango: 1-85) meses. La supervivencia global se definió como el intervalo de la fecha de la cirugía a la muerte. supervivencia libre de la enfermedad se define como el intervalo de la fecha de la cirugía a la recurrencia. El diagnóstico de la recurrencia se basó en los siguientes criterios: la recurrencia local encontrada por biopsia endoscópica o con relaparotomy; metástasis en el examen radiológico, ultrasonidos o citológico.
Tissue Microarray construcción
Dos conjuntos de microarrays de tejidos (TMA) se construyeron. Cada conjunto contenía 5 TMA que fueron montados con 340 especímenes. Las áreas tumorales más representativos se definieron en hematoxilina y eosina secciones manchadas y marcadas en la diapositiva. La forma en que construimos el TMA y el instrumento sistema de microarrays fueron los mismos con nuestro estudio anterior [24], [25]. Como previamente estudios no informaron la heterogeneidad intratumoral de Cav-1 de expresión en GC y nuestro experimento de viabilidad indicaron que un conductor por tumor en TMA y grandes secciones mostró una buena consistencia [26], [27], [28], por lo tanto, en las pruebas experimento, un núcleo se tomaron muestras en cada caso. En pocas palabras, un núcleo con un diámetro de 1,5 mm fue tomada de cada muestra y se insertó en "receptor" bloques de parafina vacíos; estos bloques se cortaron en secciones (4 m de espesor) y se utilizaron para el análisis de los puntos cuánticos-IHC. Se detectó basados en puntos cuánticos
inmunofluorescencia histoquímica
Cav-1 inmunoreactividad en un conjunto de TMA. Los anticuerpos, QDs conjugados sondas estreptavidina (QD-SA) con la longitud de onda de emisión de 605 nm y reactivos relacionados para la detección de Cav-1 fueron los mismos que antes [16] con los siguientes procedimientos principales: deparaffinizing → recuperación de antígeno → bloqueo → anticuerpo primario durante Cav -1 (Cell Signaling Technology, Beverly, MA) → → lavar y bloquear con biotina IgG → lavar y bloquear → 605 nm-QD-SA → → lavado de montaje y observación. Se detectó la señal obtenida a partir de las células de etiquetado mediante el uso de Olympus BX51 microscopio de fluorescencia (CCD DP72). La señal de los puntos cuánticos era objetivo específico, rojo, y fotoestable. Autofluorescencia del tejido de fondo era verde. Desde Cav-1 se localiza normalmente en las células endoteliales de los vasos sanguíneos [27], [29] que examinaron en todas las TMA, que se puede servir como control positivo y la calidad interna de los puntos cuánticos-IHC. TBS en lugar de Cav-1 anticuerpo primario sirvió como control negativo.
Basados en puntos cuánticos
Doble inmunofluorescencia etiquetado
Se utilizó un conjunto de TMA de Cav-1 /α-SMA colocalización, detectada por los puntos cuánticos basado en la tecnología de doble etiquetado de inmunofluorescencia de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.). Todos los pasos de dilución (anticuerpos y QDs) se realizaron en TBS que contenía albúmina de suero bovino al 2% (BSA, Sigma, St. Louis, MO, EE.UU.). La recuperación del antígeno se llevó a cabo en ácido cítrico (10 mM, pH 6,0) a 95 ° C durante 10 min, seguido de enfriamiento durante 30 min. TMA se incubaron primero en tampón de BSA al 2% a 37 ° C durante 30 min, y luego a 4 ° C durante la noche en conejo anti-Cav-1 anticuerpo policlonal y el anticuerpo monoclonal anti-α-SMA ratón (dilución 1:300, Abcam, Cambridge, MA) con el fin de enlaces de anticuerpos. Entonces TMA se lavaron tres veces con TBS-T (0,5% de Tween en TBS) durante 5 min cada vez, y se incubó en cabra biotinilado anti-IgG de ratón (dilución 1:400, Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) a 37 ° C por 30 min. Para los puntos cuánticos de la conjugación, el anticuerpo de unión a TMAs fueron incubadas en tampón de BSA al 2% a 37 ° C durante 10 min, se incubaron en los puntos cuánticos (525 nm) conjugado con estreptavidina (1:200, Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.) y puntos cuánticos (605 nm) conjugado con IgG de cabra anti-conejo (1:100, Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.) durante 50 minutos, se enjuagaron tres veces con TBS-T durante 5 min cada uno. Finalmente, TMAs fueron sellados con 90% de glicerina (Sigma). La señal de inmunofluorescencia se observó por microscopía de sistemas de imágenes multiespectrales de Caliper (Caliper Life Sciences). Debido a que la señal de inmunofluorescencia de un solo etiquetado y el doble etiquetado se quebró por la CCD DP72 y sistemas de imágenes multiespectrales microscopía respectivamente, calibramos resultados de los dos instrumentos para asegurar la comparabilidad de estos experimentos. señal positiva de α-SMA era verde, y Cav-1 era de color rojo. Cav-1 en las células endoteliales de los vasos sanguíneos [27], [29], la expresión de α-SMA en los vasos sanguíneos y el tejido positivo conocido son considerados como los controles positivos. TBS en lugar de dos anticuerpos primarios sirvieron como controles negativos, mostrando sólo la señal de autofluorescencia.
Scoring de los resultados de inmunofluorescencia
Los resultados fueron evaluados por dos patólogos (GF Yang Fan y LF) de forma simultánea en la misma se exhibe , que son independientes y que desconocía los rasgos clínicos del estudio. Las puntuaciones de los dos patólogos se compararon las puntuaciones y cualquier discrepantes fueron reevaluados por la reevaluación de la muestra de tejido teñidas por los dos patólogos para lograr una puntuación de consenso. La metodología para asegurar la Cav-1 en la tinción de las células tumorales y los CAF eran los mismos. Las puntuaciones se determinaron mediante la combinación de la proporción de células teñidas positivamente como la intensidad de la tinción. Las secciones fueron escaneados inicialmente a baja potencia. A continuación, se contaron las células de los cinco campos representativos de cada muestra a gran aumento (200 ×) para las células tumorales o CAF teñidos con Cav-1. El área de positivo (AP) se clasifican las células como sigue: 0 (sin área positiva o área positiva & lt; 5%), 1 (área positiva 5-25%), 2 (área positiva 26 a 50%), 3 ( área positiva 51 a 75%) y 4 (área positiva & gt; 75%). CAV-1 intensidad de la tinción (IS) por el valor numérico es resultado de las puntuaciones: 0 (negativo: no hay señal positiva), 1 (débil: la luz o señal de color rojo oscuro) y 2 (fuerte: la señal de color rojo brillante). Los niveles de expresión de Cav-1 se calcularon sobre la base de la puntuación total como la siguiente ecuación:. Distribución de la intensidad (ID) = AP × ES
Se determinó el valor de corte para alta y baja expresión del receptor de funcionamiento característico ( ROC) análisis de la curva con el respecto a la supervivencia global. De acuerdo con la sensibilidad y especificidad óptimas de la curva ROC por el estado general de la supervivencia, 1.5 se definió como el punto de corte óptimo para Cav-1 puntuación de inmunofluorescencia en los CAF (una puntuación Identificación ≥1.5 definido alta expresión y la puntuación ID & lt; 1,5 indica una baja expresión) , 3.5 se definió como el punto de corte óptimo para Cav-1 puntuación de inmunofluorescencia en las células tumorales (una puntuación Identificación ≥3.5 definido alta expresión y la puntuación ID & lt; 3,5 indica una baja expresión).
Análisis estadístico
Se utilizó el software SPSS 17.0 (Chicago, IL, EE.UU.) para llevar a cabo todos los análisis estadísticos. Se utilizó la prueba de Friedman para analizar la diferencia de Cav-1 puntuaciones originales entre las diferentes lesiones gástricas. Se realizó un análisis de la curva ROC para determinar el punto de alto o bajo nivel de Cav-1 de corte y evaluar el valor predictivo de Cav-1 de expresión para la supervivencia general. La prueba de χ2 o la prueba exacta de Fisher se utilizó para analizar la correlación entre los parámetros clínico-patológicos y Cav-1 de expresión. Se realizó la prueba de correlación de Spearman para analizar la asociación entre la Cav-1 en las células tumorales y los CAF. La tasa de supervivencia libre de enfermedad y la supervivencia global se calcula utilizando el método de Kaplan-Meier y se compararon mediante el log-rank test. Se realizó un análisis multivariante mediante Cox modelo de regresión de riesgos proporcionales para poner a prueba los valores de pronóstico independientes. Dos de cola
P-valores
. & Lt; 0,05 se consideró estadísticamente significativa
Resultados
Expresión de Cav-1 en diferentes lesiones gástricas
La localización y expresión de Cav-1 en la gastritis y sin IM, gastritis con IM y GC fueron evaluados por los puntos cuánticos-IHC usando el anticuerpo policlonal de Cav-1. La fuerte intensidad de rosquilla en forma de señal positiva de Cav-1 en el estroma tumoral fue el control interno de la expresión endotelial (fig. 1A). En la gastritis sin tejidos de mensajería instantánea, negativo señal Cav-1 predominantemente en las células de la mucosa de la superficie (Fig. 1A) y una señal positiva predominantemente en la base y el cuello de células de las glándulas fúndicas (Fig. 1C). En la gastritis con los tejidos de mensajería instantánea, algunos casos no mostraron distribución Cav-1 (Fig. 1E) y algunos mostraron positivo Cav-1 tinción en la célula de absorción y de las células caliciformes de las glándulas de metaplasia (Fig. 1G). Expresión de Cav-1 inmunoreactividad se observó principalmente en la membrana celular (Fig. 1 l) y el citoplasma. El estándar de la puntuación de la señal se muestra en la figura. 1I-K y ejemplos representativos de Cav-1 de expresión en GC se mostraron en la figura. 2. colocalización de Cav-1 y α-SMA proteínas se detectó mediante inmunofluorescencia doble etiquetado basados en puntos cuánticos en el GC, y se analizaron mediante sistemas de imágenes multiespectrales, para identificar con precisión Cav-1 de expresión en los CAF (Fig. 3). La distribución de la señal de Cav-1 en fibroblastos es aleatoria y no tiene relación con el estado de Cav-1 en las células tumorales.
Negativo señal de Cav-1 en la gastritis y sin tejido de mensajería instantánea, la flecha roja indica Cav positivo -1 señal en los vasos sanguíneos que se utiliza como control positivo interno. C: Positivo Cav-1 de la señal en la gastritis y sin tejido IM. E: Negativo señal de Cav-1 en la gastritis con el tejido de mensajería instantánea. G: Positivo Cav-1 de la señal en la gastritis con el tejido de mensajería instantánea. I: La flecha blanca indica señal negativa (Intensidad Puntuación = 0). J: La flecha blanca indica una señal débil (Intensidad Puntuación = 1). K: La flecha blanca indica señal fuerte (Intensidad Puntuación = 2). L: Cav-1 muestra la tinción de tipo membrana. (A, B, E, F, I, J, K: 200 × magnificación; C, D, G, H, L: 400 × magnificación; B, D, F y H son H & amp; E tinción; A y B, C y D, e y F, G y H son las secciones de serie, respectivamente) guía empresas
a:. negativo Cav-1 en las células tumorales y fibroblastos; C: Positivo Cav-1 de señales en células tumorales y fibroblastos; E: No se observó señal positiva Cav-1 en fibroblastos, pero negativo en las células tumorales; G: Positivo Cav-1 de señales en células tumorales, pero negativo en los fibroblastos. (La flecha blanca indica las células tumorales y el triángulo blanco muestra los fibroblastos, AG: 200 × magnificación; B, D, F y H son H & amp; E tinción; los paralelos dos imágenes son de serie de secciones, respectivamente)
A1: espectros de emisión de los puntos cuánticos (525 nm-verde; 605 nm-rojo) y el tejido autofluorescencia (negro); señal de la CAV-1 es de color rojo y α-SMA es de color verde. A2-A7 muestra unos CAF son Cav-1 positivo y B2-B7 muestra la mayoría de los CAF son Cav-1 positivo. A6, A7 y B6, B7: la co-localización de Cav-1 y α-SMA, el pseudo-color amarillo en A6 y B6 indica la co-localización de la señal roja y verde; A2 y B2: las imágenes originales adquiridos por el sistema de imágenes de microscopía multiespectral; A4, A5 y B4, B5: las imágenes sin mezclar. A3 y B3: H & amp; E tinción de secciones en serie. (Las flechas indican los CAF; B1 es única tinción de Cav-1, que calibra los resultados de la señal roja entre el etiquetado sencillo y doble para asegurar la comparabilidad de diferentes experimentos, A-B: 200 × ampliación) guía empresas
la Tabla 2 resume las partituras originales de Cav-1 de expresión en la gastritis y sin IM, gastritis con IM y GC. En el compartimiento epitelial, el 30% (6/20) de la gastritis y sin IM, el 55% (11/20) de la gastritis con la mensajería instantánea, el 75% (15/20) de la CG se anotó 0, mostrando Cav-1 nivel de expresión de la proteína que disminuye gradualmente . test de Friedman mostró que la diferencia de Cav-1 puntuación de tinción entre la gastritis y sin IM, gastritis con IM y GC fue estadísticamente significativa (
P = 0,012
).
Expresión Correlación de Cav -1 entre las células tumorales y CAF
fue también analizó la correlación entre las células tumorales y CAF en Cav-1 de expresión. Como se muestra en la Tabla 3, entre los 226 casos con baja Cav-1expression en las células tumorales, 121 (53,5%) casos mostraron una baja expresión de Cav-1 en los CAF (Fig. 2A), y entre los 21 casos con alta Cav-1 de expresión en las células tumorales, 9 (42,9%) de los casos muestran una elevada expresión de Cav-1 en los CAF (Fig. 2C). Los otros 117cases mostraron estado de expresión distinta en células tumorales y CAF (Fig. 2E y G). No hay correlación significativa fue fundada entre las células tumorales y los CAF Cav-1 de expresión (r = -0.20,
P = 0,751
).
significado clínico de Cav-1 expresión en células tumorales y los CAF de GC
Las 286 muestras GC estaban disponibles para el análisis de Cav-1 inmunotinción en las células tumorales y 247 (86,4%) casos tenían tejidos suficientes para el análisis de Cav-1 inmunotinción en los CAF. La tabla 3 resume la correlación entre las células tumorales o CAF en Cav-1 de expresión y los parámetros clínico-patológicos clásicos de GC, tales como el estado de la edad, sexo, estadio T y los ganglios linfáticos en el análisis univariado. Sin embargo, no se encontró una relación significativa.
Además, se determinó el valor pronóstico de Cav-1 en las células tumorales y los CAF. El análisis de Kaplan-Meier y la prueba de log-rank mostraron que la baja expresión de Cav-1 en los CAF en lugar de en las células tumorales predice la supervivencia pobre. La supervivencia global media de los CAF bajas Cav-1 de expresión subgrupo fue de 73,0 meses (IC del 95%, 55,589 a 90,411), mientras que en el intervalo de seguimiento, el alto CAF Cav-1 de expresión subgrupo tenía una tasa de supervivencia calculado de aproximadamente 0.8 (Fig . 4A). Como se muestra en la figura. 4B, baja expresión de Cav-1 en los CAF también predijo recurrencia precoz de pacientes con cáncer gástrico. Figura 4C y D se indica que las células tumorales Cav-1 el estado no tuvo correlación significativa con la supervivencia global y la supervivencia libre de enfermedad (
P = 0,178
y 0,104, respectivamente). Por otra parte, la tasa de supervivencia a los 5 años la incidencia acumulada de pacientes cuyos tumores presentan altos CAF Cav-1 fue del 75,5% (IC del 95%, 0,642-0,868), mientras que fue del 57,4% (IC del 95%, 0,456 hasta 0,692) en los CAF bajas CAV-1 grupo (
P = 0,053
)
a y B:. El alto nivel de Cav-1 en los CAF se correlaciona significativamente con la supervivencia global y la supervivencia libre de enfermedad. C y D:. El alto nivel de Cav-1 en las células tumorales muestran una supervivencia global y la enfermedad mejor supervivencia libre de la baja, pero no es estadísticamente significativa
En el análisis univariante, el estadio TNM, T etapa, los ganglios linfáticos y los CAF nivel de Cav-1 se encontraron una relación significativa con la supervivencia libre de enfermedad de los pacientes GC (
P = 0,001
, 0,003, 0,010 y 0,029, respectivamente; Tabla 4). el estadio TNM, el estadio T y CAF nivel de Cav-1 se correlacionaron significativamente con la supervivencia global (
P = 0,012
, 0,006 y 0,013, respectivamente; Tabla 4). Para determinar si los CAF Cav-1 fue un predictor independiente de recurrencia y la supervivencia de los pacientes GC ', un análisis multivariante se realizó mediante la COX modelo de regresión de riesgos proporcionales, junto con la edad, la clasificación T, el estadio TNM y otras características del tumor. Una vez más, Cav-1 en el nivel de los CAF fue independiente y significativamente asociada con la recurrencia GC pacientes y el resultado (
P = 0,034
y 0,005, respectivamente; Tabla 4). Por el contrario, las células tumorales Cav-1 nivel no pudo pronosticar la recurrencia y la supervivencia del paciente GC en el modelo simultánea (Tabla 4).
El valor predictivo de muerte de la CAV-1 umbrales en las células tumorales y en CAF se analizó también. Como se muestra en la Figura 5, Cav-1 en el nivel de los CAF predijo la muerte con un buen rendimiento; el área bajo la curva (IC del 95%: 0,515-0,738;
P = 0,032
) 0,627. Considerando que, de Cav-1 en las células tumorales nivel no para predecir la muerte, con el área bajo la curva de 0,551 (IC del 95%: 0,438-0,664;
P = 0,393
): perfil
Los puntos de corte de. células tumorales y la CAF Cav-1 tienen una sensibilidad y especificidad óptima. CAV-1 nivel de expresión en los CAF (área bajo la curva fue de 0,627, IC del 95%: 0,515 a 0,738;
P = 0,032
); Cav-1 en las células tumorales. (Área bajo la curva fue de 0,551, IC del 95%: 0,438-0,664;
P = 0,393
) guía empresas
Discusión
Aquí , se informó de que Cav-1 inmunoreactividad se observa principalmente en la membrana celular y el citoplasma. En la gastritis sin tejidos de mensajería instantánea, la señal de Cav-1 se detecta predominantemente en la base y el cuello de células de la glándula fúndica. En la gastritis con los tejidos de mensajería instantánea, Cav-1 tinción localiza principalmente en la celda de absorción y de las células caliciformes de las glándulas de metaplasia. Este resultado se correlaciona con otro estudio que analizó Cav-1 en el tejido gástrico a través de inmunohistoquímica [27]. Cav-1 expresión disminuye gradualmente con la progresión de GC y el nivel de expresión en los CAF en lugar de en las células tumorales en cierta medida predice recurrencia y la supervivencia en pacientes GC.
Roles de proteína Cav-1 en el desarrollo de tumores son tumor dependiente y el compartimento dependiente de [12], [30]. CAV-1 gen se localiza en el locus D7S522 del cromosoma humano 7q31.1, que a menudo se elimina en algunos tipos de tumores [11]. Por otra parte, Cav-1 está implicado en el dominio de la caveolina andamios y puede inducir la inhibición de la señalización del receptor de citoquinas [14], lo que sugiere el papel supresor de tumor de Cav-1. El tumor promoción de la actividad de Cav-1 ha sido ampliamente confirmado mediante la detección cuidadosamente sus niveles de expresión y los valores clínicos en variedades de cáncer, como el carcinoma de células escamosas lengua, carcinoma de células escamosas de esófago, la vejiga de transición carcinomas de células, carcinoma nasofaríngeo y el carcinoma de células escamosas del cuello [16], [31], [32], [33], [34]. Cav-1 tiene diferentes funciones en las células tumorales y las células del estroma. Por ejemplo, en cáncer de mama y de próstata, pérdida de células del estroma Cav-1 pero no tumorales Cav-1 anuncia mal pronóstico [6], [8], [12], [14], lo que indica las funciones compartimiento dependiente de cavidad 1.
Nuestros resultados indican que Cav-1 nivel de expresión en las células epiteliales disminuyó gradualmente con la progresión maligna de GC. Resultados similares fueron reportados en otro estudio [26] la investigación de Cav-1 y la expresión de la mensajería instantánea y GC, lo que implica Cav-1 podría ser considerado como un supresor de tumores en el desarrollo de GC. Por otra parte, tanto las células tumorales y los CAF Cav-1 Estado de expresión de la proteína no se correlacionaron con los parámetros clínico-patológicos típicos, como el estadio T, el estadio TNM y la clasificación de Lauren. Fue en contraste con el otro estudio [26], que mostró que la baja expresión de las células tumorales proteína Cav-1 se correlacionó con la etapa de alta T, el estadio TNM y la metástasis de los ganglios linfáticos. La diferencia podría ser debido al método de evaluación: se evaluó la tinción multiplicando la intensidad y la proporción de células teñidas y se determinó el punto de corte que tenía sensibilidad y especificidad de la curva ROC basado en el estado de supervivencia global óptimo; mientras que en la otra investigación sólo se evaluó el porcentaje de células inmunopositivas y el umbral de positivo o negativo no se presentó. Además, el tamaño de la muestra de nuestro estudio influyó en los resultados también.
CAF son algunos de los componentes más esenciales del estroma tumoral, con importantes funciones inducir la deposición de ECM, la regulación de la diferenciación del epitelio y la respuesta inflamatoria y la interacción con la microvasculatura mediante la secreción de metaloproteinasas de la matriz y factor de crecimiento endotelial vascular [35]. Dado que la proteína Cav-1 es el componente requisito estructural de caveolae, expresión alterada de la proteína Cav-1 en CAF impactaría diversos procesos patológicos y por lo tanto promover el desarrollo de tumores. La pérdida de proteína Cav-1 en CAF promueve la activación de los CAF a través de la activación de la vía TGF-β, por lo tanto facilitar la remodelación microambiente tumoral y el desarrollo de tumores [12]. Sin embargo, otro estudio publicado en
Cell
informó funciones contrarias de los CAF proteína Cav-1 que estromales Cav-1 favorece la invasión tumoral y la metástasis a través de la regulación de arquitectura dependiente de la fuerza del microambiente [36]. Por lo tanto, el papel de los CAF Cav-1 sigue siendo incierto. Los resultados presentados aquí demuestran un predictor pronóstico independiente de la GC que implica el nivel de expresión de Cav-1 en los CAF. Baja expresión de Cav-1 en CAF pero no en células tumorales pronosticaron independientemente recurrencia temprana y pobre supervivencia de los pacientes de GC. análisis ROC indica el valor de predicción de muerte de baja Cav-1 en los CAF. Los resultados implicaron el papel inhibidor de tumores de la proteína CAF Cav-1 y fueron consistentes con el hallazgo en el cáncer de mama y de próstata, el cual aclarará que la pérdida de estroma Cav-1 anuncia mal pronóstico [8], [12], [15]. Además, en el cáncer de mama, es evidente que con el desarrollo de cáncer, el microambiente tumoral se convierte en una autofagia hipóxica y el nicho mal nutrición, la estimulación en los CAF. A continuación, la autofagia activado anormal degrada Cav-1 en los CAF. Por supuesto, si existen mecanismos similares en GC requiere más
in vitro
estudios.
Por otra parte, la pérdida de estroma Cav-1 tiene un gran valor predictivo en ER (+), PR (+), HER2 (+), y los llamados pacientes triple negativo cáncer de mama (ER (-) /PR (-) /HER2 (-)). la terapia endocrina Al mismo tiempo instituido no influye en su valor predictivo, por lo que es un nuevo universal o cáncer de mama marcador pronóstico ampliamente aplicable [37]. GC es el cuarto tipo de cáncer común y la tercera causa la muerte en el mundo [38], que aún carece de suficientes biomarcadores apropiados para la evaluación del pronóstico y el tratamiento personalizado contra el cáncer. Los pacientes con cáncer gástrico HER2 positivo se beneficiaron del tratamiento con trastuzumab, sin embargo, sólo unos pocos pacientes son HER2 positivo, por ejemplo, sólo el 19% de los pacientes con cáncer gástrico HER2 positivo mostró en nuestro estudio. Hoy en día, los pacientes GC avanzadas con HER2 negativo sigue sufriendo una baja supervivencia. De este modo identificar más objetivos que inhiben el desarrollo de GC es muy necesario. En esto, hemos demostrado los valores de uso de proteínas como biomarcadores del estroma en GC, lo que podría contribuir a la caracterización molecular de GC y en consecuencia, el tratamiento de la GC, la verificación de las funciones esenciales del estroma tumoral en el desarrollo de tumores. Por otra parte, un estudio prospectivo es muy recomendable para validar el valor pronóstico y para investigar la importancia clínica de la detección de Cav-1 en los CAF.
Una cosa interesante es que a pesar de los CAF Cav-1 de estado puede ser utilizado como un predictor , cuando se analizó la correlación entre los niveles de CAF Cav-1 y los parámetros clínico-patológicos clásicos de GC, no se encontró una asociación significativa.