Extracto
Hemos informado (
PLoS Uno de 6 (12): e28670, 2011) que la activación de c-Met señalización en modelos celulares y xenoinjertos LNCaP metástasis óseas RANKL con sobreexpresión aumentó expresión de RANK, RANKL, c-Met, y fosforilados c-Met, y aguas abajo de señalización mediada. Se confirmó la importancia de la red de señalización mediada por RANK en los tejidos de castración resistentes clínica de cáncer de próstata humano (PC). En este informe, se utilizó una técnica de marcado de puntos cuánticos multiespectral para etiquetar seis RANK y c-Met mediadores vía de señalización convergentes al mismo tiempo en formalina parafina fijo (FFPE) muestras de tejido incluidas, cuantificar la intensidad de cada expresión a nivel subcelular, y investigado su potencial utilidad como predictores de la supervivencia de los pacientes en los hombres caucásicos-americanos, afro-americanos y chinos. Hemos encontrado que RANKL y neuropilina-1 (NRP-1) la expresión predice la supervivencia de la raza blanca-americanos con PC. Una puntuación de Gleason ≥8 combinada con la expresión de p-c-Met nuclear predice la supervivencia en pacientes con CP afroamericanas. Neuropilina-1, P-NF-kB p65 y VEGF son predictores de la supervivencia global de los hombres chinos con PC. Estos resultados apoyan colectivamente diferencias interraciales en las redes de señalización celular que pueden predecir la supervivencia de los pacientes con CP
Visto:. Hu P, Chung LWK, Berel D, Frierson HF, H Yang, Liu C, et al. (2013) convergente Rank- y c-Met-señalización mediada Componentes predecir la supervivencia de pacientes con cáncer de próstata: un estudio comparativo interracial. PLoS ONE 8 (9): e73081. doi: 10.1371 /journal.pone.0073081
Editor: Natasha Kyprianou, Universidad de Kentucky College of Medicine, Estados Unidos de América
Recibido: 3 Julio, 2013; Aceptado: July 16, 2013; Publicado: 16 Septiembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Hu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado en parte por NIH2 P01CA 98912, NIH1 R01 CA122602 y el Premio Desafío PCF y la Cátedra de Investigación del cáncer BOG dotado de LWKC. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
Después de la puesta en práctica de la detección del antígeno prostático específico (PSA), el cáncer de próstata (PC) el diagnóstico se hizo mucho más común. Dado que uno de cada 8-10 hombres diagnosticados con PC muere de esta enfermedad, es importante desarrollar predictores eficaces para seleccionar aquellos que necesitan ser tratados y evitar el tratamiento innecesario [1], [2]. Durante las últimas décadas, muchos biomarcadores predictivos, ya sea asociados con los tejidos o en los líquidos biológicos, se han utilizado para diferenciar indolente de las formas agresivas de PC. Estos marcadores se clasifican en términos generales como supresores de tumor, oncogenes, factores de transcripción, y los reguladores del metabolismo celular, y fenotipos tales como la proliferación celular, la apoptosis, la invasión, la migración y la metástasis [2], [3]. Se combinaron los modelos de cultivo celular con relación linaje,
es decir
, que comparten el mismo fondo genético pero difieren en su agresividad, con modelos animales que muestran variabilidad en su invasividad intrínseca y el potencial metastásico de desarrollar vías de señalización celular pertinentes estrechamente imitando los fenotipos y el comportamiento de PC clínica humana. Se realizó un estudio comparativo utilizando tejidos de PC clínicos asociados con la supervivencia del paciente conocida para poner a prueba la hipótesis de que la expresión de ciertos biomarcadores de la red de señalización celular que se encuentran en modelos animales de conducción células PC para desarrollar ósea letal y metástasis de tejido blando podría utilizarse como biomarcadores para predecir la la progresión y la supervivencia de los pacientes con CP. Para buscar una mejor comprensión de las posibles diferencias interraciales de las redes de señalización celular, hemos probado la hipótesis de que diferentes Rank- y c-Met-mediada componentes de señalización celular descendente pueden predecir la supervivencia de pacientes con cáncer de próstata con diferentes orígenes raciales.
Hemos informado anteriormente de que la progresión de PC letal para los huesos y metástasis de tejidos blandos está determinada por la propiedad osteomimetic de células PC [4], [5]. Se encontró que los factores solubles, tales como β2-microglobulina (β2-M) y activador del receptor del ligando NF-kappa B (RANKL) pueden conducir PC y otras células de cáncer humano a someterse a la transición epitelio-mesenquimal transición (EMT) y confieren fenotipos agresivos, incluyendo la invasión local y metástasis a distancia [6] - [12]. Entre las vías de señalización celular se ha estudiado la activación de la señalización de RANKL-RANK fue de particular interés debido a esta vía de señalización se activa en ambos modelos animales y especímenes de PC clínicos [8], [12], y la orientación RANKL con un anticuerpo anti-RANKL , denosumab, ha sido muy eficaz en el bloqueo de las lesiones óseas líticas asociadas con los hombres tratados con terapia de privación de andrógenos [13]. la señalización de RANKL-RANK también se encontró que estaba involucrado en la expansión del nicho de células madre durante el desarrollo de los órganos sensibles a las hormonas [14], [15]. Hemos observado tanto en modelos celulares y animales LNCaP y ARCAP que un "círculo vicioso" de la señalización de RANKL-RANK es responsable de conferir la capacidad de estas células para crecer y producir metástasis en tejidos óseos y blandos en ratones, a través de la inducción de la EMT, locales invasión y metástasis a distancia [5], [8], [12]. Inactivando genéticamente RANK o receptor c-Met, que completamente derogada la capacidad de estas células cancerosas a la metástasis en el hueso y los tejidos blandos [16]. Hemos encontrado que a través de RANKL-RANK de señalización un número de factores de transcripción y genes diana estaban regulados en coordinación, lo que resulta en una alteración de los procesos celulares fundamentales de las células cancerosas. En particular, se encontró que la señalización de RANKL-RANK promueve la expresión de RANKL, RANK, y c-Met mediante un aumento de la expresión de factores de transcripción c-Myc /Max [16]. En concierto con la activación de la señalización de RANKL-RANK, también se detectó aumento de expresión de VEGF en respuesta a elevados factores de transcripción HIF-1α [6]. VEGF es un factor crítico pro-angiogénico que induce la proliferación y migración de células endoteliales dentro de la vasculatura del tumor [17]. La expresión aberrante de VEGF y sus receptores se asocia con un mal pronóstico se manifiesta por aumento de la vascularización tumoral, la quimiorresistencia, invasión local del tumor y las metástasis a distancia [18]. Elevada HIF-1α se une a los elementos de la hipoxia-respuesta (HREs) y activa promotor VEGF [19]. Neuropilina-1 (NRP-1), un co-receptor VEGF, se identificó originalmente como un receptor para la semaforina 3, mediando orientación neuronal y el crecimiento axonal [20], que se une específicamente VEGF165, pero no VEGF121 en la superficie celular de endotelial y tumor las células [20], [21]. NRP-1 carece de un dominio quinasa típica, y principalmente funciona como un co-receptor para formar complejos de ligando específico. upregulation aberrante de NRP-1 se ha observado en alto grado de Gleason y PC metastásico y otros tumores sólidos [22], [23]. Nuestro laboratorio informó que VEGF regulado un anti-apoptótica de Mcl-1 de genes a través de la fosforilación dependiente de NRP1 de c-Met en células PC y amplió la función de esta proteína en la red de señalización celular [6].
racial y étnica diferencias en PC han sido ampliamente informado [24], [25]. Si bien los datos publicados limitados sugieren posibles diferencias en la expresión génica selectiva entre agresiva frente a la PC indolente, datos que describen las comparaciones interraciales de la expresión de genes entre las glándulas de la próstata a partir de los afroamericanos y caucásicos-americanos son escasos. Kwabi-Addo et al [26] informó de diferencias en la metilación del promotor específico de genes, como GSTPi, AR, RAR beta 2, SPARC, TIMP3, y NKX2-5 en el que se comprobó era superior metilación en los afroamericanos que en caucásicos americanos. Utilizando un enfoque tinción inmunohistoquímica para perfilar muestras de PC obtenidos de caucásicos-americanos, afroamericanos, chinos y japoneses, encontramos notables diferencias entre estos grupos interraciales con respecto a sus perfiles de tinción de los supresores de tumores, factores angiogénicos y neuroendocrino [27], [ ,,,0],28]. En el presente estudio, nos centramos nuestra atención en la comparación de la señalización de RANKL-RANK y sus efectores entre caucásicos-americanos, afroamericanos, y los chinos, debido a la importancia de esta vía de señalización en conferir hueso PC y metástasis de tejidos blandos [5], [6], [8], [12]. Se analizaron los niveles de expresión de genes en un solo nivel celular en muestras clínicas obtenidas de estos grupos interraciales mediante un etiquetado punto cuántico multiplexado establecida técnica (mQDL) secuencialmente etiqueta de cada uno de los seis señalización intermedias, capturar varias imágenes, unmix y cuantificar las señales a nivel subcelular y someter los datos a una serie de análisis estadísticos logística para determinar su importancia predecir ya sea solo o en combinación con las puntuaciones de Gleason clínicos. Los resultados de este estudio demostraron que los diferentes efectores del RANKL-RANK vía de señalización puede predecir la supervivencia global de PC en grupos interraciales con PC.
Materiales y Métodos
Las muestras de tejido
esta investigación no implicaba ninguna participantes humanos. Todas las muestras de tejido utilizadas en este estudio fueron archivados embebidos en parafina los tejidos de cáncer (FFPE) de próstata fijados con formalina. El uso de especímenes en la investigación fue aprobado por la junta de revisión de la institución del Centro Médico Cedars-Sinai (IRB#Pro21228). Un total de 54 muestras de cáncer de próstata primario FFPE extirpados quirúrgicamente se obtuvieron de los pacientes del Departamento de Patología de la Universidad de Virginia, Charlottesville, Virginia, y el Departamento de Patología de la Universidad de Jilin, Changchun, China, con la muerte por cáncer causado documentada o información de supervivencia. De las 54 muestras, 20 eran de cada Caucásico-y los afroamericanos y 14 de los hombres chinos. El número de pacientes, los eventos y la supervivencia media (rangos) en meses son: Cáucaso-estadounidenses-20, 16 y 74.6 (rango 1-190); Los afroamericanos-20, 18 y 46.3 (rango 2-181); China-14, 13 31,9 (rango 1-107). Los procedimientos quirúrgicos de los que se obtuvieron las muestras de tejido fueron: Cáucaso-estadounidenses: 15 casos de resección transuretral de la próstata (RTUP), 4 casos de prostatectomía radical (PR) y 1 caso de la biopsia con aguja (NBx); Los afroamericanos: 18 casos por RTU y 2 casos de RP; Chino: 1 caso de la RTUP, 6 casos de prostatectomía suprapúbica y 7 casos de biopsia con aguja. Se hicieron esfuerzos para garantizar la coherencia de Gleason; en el cuadro histopatológico de las muestras procedentes de los EE.UU. y China fueron anotados por los patólogos Dr. LS Zhao y el Dr. Hua Yang de la Universidad de Jilin durante sus visitas a UTMDACC en Houston, Texas y la Universidad de Virginia, respectivamente, y confirmado por el Dr. Henry F. Frierson, un patólogo genitourinario de la Universidad de Virginia
reactivos de inmunoensayo
los anticuerpos primarios (ABS) y sus fuentes fueron:. Abs monoclonales de ratón contra HIF-1α (NB100-105) y RANKL (12A668) de Novus Productos Biológicos (St. Charles, MO); policlonal de conejo Abs a p-NFkB p65 o p-p65 (Ser 536), VEGF (A-20), y neuropilina 1 o NRP-1 (H286) de Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA); y policlonal de conejo Ab a p-c-Met (pYpYpY1230 /1234/1235) a partir de Invitrogen (Carlsbad, CA). Abs secundarios utilizados en el estudio se prepararon en un cóctel de Abs biotinilado a ratón, conejo, y IgG de cabra de Vector Laboratories Inc. (Burlingame, CA). Tamponada con fosfato salino (PBS) y puntos cuánticos conjugados con estreptavidina (QD) a 565-, 585-, 605-, 625-, 655- y 705 nm longitud de onda como 1 mM solución madre fueron de Invitrogen.
etiquetado multiplexado QD (mQDL)
Hemos desarrollado un protocolo mQDL utilizando puntos cuánticos recubiertas con estreptavidina conjugada con biotina secundaria Ab [6]. El protocolo de etiquetado experimental involucrado conjugar el Ab primario a un Ab secundario biotinilado, que a su vez reacciona con QD estreptavidina conjugada a una longitud de onda especificada. Este procedimiento se repitió para el etiquetado Abs primaria múltiple contra diferentes antígenos de biomarcadores después de la optimización. Las imágenes marcadas con QD se examinaron y se capturaron bajo una cámara multiespectral Nuance y la segmentación celular y cuantificación fueron realizadas por software inForm (Perkin Elmer; Waltham, MA). El cubo de la imagen multiespectral QD fue sin mezclar aún más a sus imágenes componentes con distintas longitudes de onda pico QD. Después de la eliminación de la autofluorescencia, las proteínas individuales QD-etiquetados se pueden detectar
Las secuencias de inmunorreacción y las diluciones de Ab primario y su vinculación con estreptavidina conjugada con QD fueron:. 1) anti-HIF-1α Ab (1: 40) y estreptavidina-QD565 (1:100); 2) anti-p-NFkB p65 Ab (1:100) y estreptavidina-QD585 (1:100); 3) anti-VEGF Ab (1:40) y estreptavidina-QD605 (1:100); 4) anti-neuropilina 1 Ab (1:200) y estreptavidina-QD625 (1:100); 5) anti-p-c-Met Ab (1:120) y estreptavidina-QD655 (1:100); 6) anti-RANKL Ab (1:100) y estreptavidina-QD705 (1:100). Todo el Abs primario se incubaron a 4
° C, durante la noche y de estreptavidina-QD se hizo reaccionar a 37 ° C, 1 hora. Después de 4 lavados con PBS-Triton (0,4%), las muestras fueron teñidas con DAPI y se montaron. Para el control negativo, Abs primarios fueron reemplazados con isotipo y control de especies Abs-emparejados y se aplicó a las secciones de tejido adyacentes inmediatas de 5 pares de muestras de tejido de los casos estudiados. mQDL se realizó en paralelo con la corredera de tejido marcado con el Abs primaria prueba. La intensidad media basado en células a partir de los controles negativos se restó del etiquetado Ab prueba. Analiza
captura de imágenes y la intensidad de expresión de biomarcadores cuantificación
imagen espectral
multiplexada que incluye la adquisición de imágenes y deconvolución utilizando el software Nuance 3.0 y la cuantificación de la señal utilizando el software 1.3 inForm se realizaron como se describe en nuestro informe anterior [6].
Descripción de los datos y los análisis estadísticos
Descripción de datos.
se ha definido el resultado primario como la supervivencia global. Las variables medidas fueron la puntuación de Gleason, la raza (caucásica-americanos, afroamericanos, y los chinos), y la intensidad de expresión de biomarcador basado en células en el citoplasma, C; núcleo, N; y el citoplasma más núcleo, C + N de HIF-1α, p-p65, VEGF, NRP-1, p-c-Met y RANKL. mediciones de biomarcadores para cada paciente fueron en promedio de 4-5 imágenes capturadas de cada uno de los sitios de tejido tumoral en la diapositiva. Un promedio de 27 imágenes /diapositivas tejido fue tomada (un rango de 4-114 imágenes) que se degradan a: caucásicos-americanos, 5-114 imágenes; Afroamericanos, 5-57 imágenes; Chino, 4-46 imágenes. El tamaño total de la muestra de este estudio es de 54 pacientes (caucásico-americano, N = 20; afroamericana, N = 20; chino, N = 14). Los números promediados de células analizadas con un mínimo de desviación máxima y estándar (SD) son: caucásicos-americanos, 17.207 (1,363-50,488, SD = 14.702); Los afroamericanos, 12.541 (2,062-24,612; SD = 6,899); , 3.290 (794-14,770, SD = 3,531)
Análisis estadístico chino..
El método de Kaplan y Meier se utilizó para estimar la supervivencia global y la prueba de rango logarítmico para comparar los grupos. Multivariable de regresión de riesgos proporcionales mediante la selección hacia delante variable se utiliza para evaluar qué biomarcadores son predictivos de la supervivencia global en presencia de covariables. de riesgos proporcionales de suposición se evaluó gráficamente y analíticamente, y residuos martingala se utiliza para asegurar que los modelos son apropiados. nivel de significación crítica se establece en el 5%.
Resultados
Gleason caja de parcelas por raza entre los 3 grupos de pacientes estudiados mostraron altas puntuaciones de Gleason agrupados en caucásicos-americanos, los afroamericanos y los chinos los pacientes con CP (Figura 1). La figura 2 muestra una diferencia significativa en la supervivencia global por la raza incluyendo todos los casos (N = 54, el número de eventos = 47) mediante la prueba de log-rank (
p = 0,0249
). Además, no hubo diferencias significativas en la media y las desviaciones estándar de biomarcadores para la muestra combinada y por cada carrera (Tabla 1), donde China difieren de los dos caucásicos-americanos y afroamericanos. Para identificar potenciales biomarcadores que predicen la supervivencia global de los pacientes con PC, que luego analizaron todos los datos de forma independiente para cada carrera. Los análisis continuos de los modelos de regresión de riesgos proporcionales de univariantes con puntuación de Gleason y los biomarcadores para raza blanca-Americana (Tabla 2) mostraron que RANKL y NRP-1 de expresión en el citoplasma (C) más el núcleo (N) se correlacionaron significativamente con la supervivencia global de los pacientes con PC,
p-valor = 0,0053
y 0,0029, respectivamente. También se encontraron asociaciones significativas cuando la expresión en C o N se analizó por separado. Análisis similares mostraron que NRP-1 en C, N, y C + N; p-p65 en C, C + N; y VEGF en C se correlacionó significativamente con la supervivencia global de los pacientes chinos con PC (Tabla 3). La Figura 3 muestra NRP-1, P-p65 y VEGF imágenes de expresión de proteínas de la mQDL de tejidos obtenidas de un paciente chino que sobrevivió durante 66 meses (paneles superiores) vs un paciente que sobrevivió durante 2 meses (paneles inferiores). Por el contrario, con la excepción de la puntuación de Gleason (
p
= 0,027), ninguno de los 6 biomarcadores alcanzó asociación significativa con el tiempo de supervivencia de los pacientes afroamericanos analizadas por el mismo método (Tabla 4). Correlograms (Figuras 4, 5, 6) mostró par-sabia correlaciones entre biomarcadores entre sí, y los biomarcadores con puntuaciones de Gleason entre caucásicos-americanos, afroamericanos y los pacientes chinos, respectivamente. La diagonal principal muestra los nombres de covarianza para cada comparación por pares. El centro en la interacción horizontal y vertical de cada uno de covarianza es el coeficiente de correlación de Pearson y en la parte superior derecha es el valor p asociado. Los resultados mostraron que hubo correlaciones significativas entre la mayoría de los pares de biomarcadores (en negrita), independientemente de la raza, pero sólo HIF-1α se correlaciona con la puntuación de Gleason para pacientes caucásicos-americano,
p-valor = 0,002
. La Figura 7 muestra las visualizaciones discretized adicionales sobre el efecto de los biomarcadores categorizados sobre la supervivencia global de los pacientes de raza blanca como se analizó mediante el método de Kaplan y Meier y log-rank test para comparar la expresión de proteínas de biomarcadores en el citoplasma más el núcleo categorizados en dos grupos, altos y bajos, usando la mediana como punto de corte. RANKL y NRP-1 se correlacionaron significativamente con la supervivencia global, con
p-valor = 0,025
y 0,005, respectivamente. La Figura 8 presenta imágenes sin mezclar mQDL de NRP-1 y RANKL expresión de tejidos representativos de un paciente de raza caucásica-estadounidense que sobrevivió durante 163 meses (paneles superiores)
vs.
Un paciente que sobrevivió sólo 2 meses (paneles inferiores) . Análisis similares realizados en pacientes africanos-americanos y chinos no mostraron una correlación entre RANKL y NRP-1 biomarcadores y la supervivencia global de los pacientes (datos no incluidos). Para los afroamericanos, aunque sólo las puntuaciones de Gleason fueron significativas en el modelo univariante (Tabla 4), nuclear pc-Met se convirtió en un factor importante para predecir en combinación con puntuación de Gleason (Tabla 5) en un modelo de regresión de riesgos proporcionales de variables múltiples (
p
= 0,025 y
p = 0,044
, respectivamente). La Figura 9 muestra las imágenes sin mezclar mQDL de expresión de la proteína p-c-Met en un paciente afroamericano que sobrevivieron durante 85 meses (paneles superiores) vs un paciente afroamericano que sobrevivieron durante 12 meses (paneles inferiores). Para visualizar el efecto de estas dos variables sobre la supervivencia general, la puntuación de Gleason se clasifican en dos grupos: ≥8 y & lt; 8, y nuclear pc-Met se clasifican en dos grupos, altos y bajos, utilizando la mediana como punto de corte ( La figura 10,
p = 0,0349
). Para explorar más a fondo de manera sistemática si la combinación de puntuación de Gleason y un biomarcador puede mejorar la predicción de la supervivencia global, todos los biomarcadores que fueron predictores significativos de la supervivencia global en los modelos univariantes de las Tablas 2, 3, 4 se clasificaron en dos grupos, alta y baja , el uso de la mediana como punto de corte. puntuación de Gleason se clasifican en dos grupos: ≥8 y & lt; 8 y las dos variables dicotómicas se combinaron para generar cuatro grupos: Gleason ≥8 y biomarcadores alta, Gleason ≥8 y biomarcadores bajo, Gleason & lt; 8 y biomarcadores alta, y Gleason & lt; 8 y biomarcadores baja. Se crearon tres variables ficticias, utilizando el grupo Gleason & lt; 8 y biomarcadores baja como la referencia, y multivariable de regresión de riesgos proporcionales mediante la selección hacia delante variables se utilizó para seleccionar el mejor modelo para predecir la supervivencia global. Los resultados de estos modelos multivariables se muestran en la Tabla 6. Si bien no hubo grupo categorizado /biomarcador predictivo de Gleason de la supervivencia global de caucásicos-americanos y los chinos, para los afroamericanos los resultados con los grupos categorizados de acuerdo con el modelo predictor continuo multivariable y detalles del análisis, como se muestra en la Tabla 7. el modelo final se muestra en la Tabla 8 y está representada en la figura 11 donde sólo "Gleason ≥8 /biomarcador de alta" es un predictor significativo de la supervivencia global en pacientes afroamericanos con cáncer de próstata (
p = 0,0117
).
la diagonal principal tiene el nombre de covarianza. En la intersección horizontal y vertical de cada uno de covarianza, coeficiente de correlación de Pearson (centro, en negro), y el valor p asociado (en la esquina superior derecha, en rojo) se muestran.
La diagonal principal tiene el nombre de covarianza. En la intersección horizontal y vertical de cada uno de covarianza, coeficiente de correlación de Pearson (centro, en negro), y el valor p asociado (en la esquina superior derecha, en rojo) se muestran.
La diagonal principal tiene el nombre de covarianza. En la intersección horizontal y vertical de cada uno de covarianza, coeficiente de correlación de Pearson (centro, en negro), y el valor p asociado (en la esquina superior derecha, en rojo) se muestran.
Log-rank se presenta la prueba p-valor. El eje X es el tiempo de supervivencia en meses. Eje Y es la proporción de sobrevivir.
log-rank se presenta la prueba p-valor. 'Biomarcador de alta' indica los valores de biomarcadores encima de la mediana del biomarcador (continua). 'Biomarcador Low' indica los valores de biomarcadores inferior o igual a la mediana del biomarcador (continua).
Log-rank test
se presenta p-valor
. 'Biomarcador de alta' indica los valores de biomarcadores encima de la mediana del biomarcador (continua). 'Biomarcador Low' indica los valores de biomarcadores menores o iguales a la mediana del biomarcador (continua).
pruebas
Discusión
el aumento sugiere que el pronóstico del cáncer de próstata mejorada a través de biomarcadores expresados diferencialmente en los tejidos, células y fluidos corporales entre los pacientes con enfermedad indolente o agresivo podrían reducir los costes sanitarios y la ansiedad y el sufrimiento del paciente y mejorar la eficacia general del plan de tratamiento. Mientras que la histopatología e inmunohistoquímica han proporcionado las "normas de oro" para el diagnóstico de PC a nivel celular, no han sido evaluadas críticamente los aspectos cuantitativos y pronóstico de estas técnicas. En esta comunicación, se utilizó un enfoque de multiplexado etiquetado de puntos cuánticos basados histopatología cuantitativa en un mismo nivel celular como se informó anteriormente por nuestro grupo [6] para evaluar la expresión de componentes de la vía de señalización celular aguas abajo de un Rank- y mediada por c-Met red de señalización en las muestras de PC clínicos recogidos de grupos interraciales, que constan de caucásicos-americanos, afroamericanos y los pacientes chinos, y evaluaron si estos componentes de la vía de señalización pueden predecir la supervivencia de los pacientes con CP. La activación de Rank- y la señalización mediada por c-Met por RANKL a tumores y derivada del huésped se ha demostrado que conducir el hueso del cáncer y las metástasis de tejidos blandos en la próstata, mama, pulmón, riñón e hígado cánceres humanos. Tras la activación de estas vías de señalización, se observó un aumento en la expresión de HIF-1α, VEGF, NRP-1, RANKL, c-Met, y fosforilados c-Met en células que confieren resistencia a la castración y el desarrollo de un fenotipo metastásico en un PC humana modelo de xenoinjerto [6]. Hemos encontrado las siguientes diferencias interraciales en la activación de Rank- y redes de señalización celular aguas abajo mediadas por c Met en células PC. 1) RANKL y NRP-1 de expresión predice la supervivencia de la raza blanca-americanos con PC (Figura 7). 2) En los afroamericanos, puntuación de Gleason combinado ≥8 y la expresión de p-c-Met nuclear predice la supervivencia (Figuras 10 & amp; 11). 3) NRP-1, P-p65 NF-B y VEGF son predictores de la supervivencia global en los hombres chinos con PC (Tabla 3). 4) A pesar de las diferencias en la predicción de la supervivencia global de los pacientes con CP por diferentes componentes de la vía de señalización, todos los grupos raciales comparten los componentes de señalización corriente abajo comunes después de la activación de Rank- y la señalización mediada por c-Met. Esto se pone de manifiesto por la correlación de pares altamente significativa entre estos componentes de señalización representados por la Correlograma (Figuras 4, 5, 6) con par-sabia correlaciones en los tres grupos raciales. Aunque en la actualidad no existe una explicación científica de por qué diferentes componentes de señalización predicen la supervivencia en tres grupos raciales distintos de pacientes de PC, se especula que los elementos reguladores, incluidos los aspectos cuantitativos de los receptores, ligandos, y las interacciones entre las moléculas efectoras, controlando Clasificación general - aguas abajo de señalización mediada por c-Met y podría ser diferente entre los grupos interraciales. Estos resultados, sin embargo, en conjunto apoyan diferencias interraciales de Rank- y red de señalización celular mediada por c-Met que regula la supervivencia de los pacientes con CP.
El presente estudio es el primero en utilizar el etiquetado de puntos cuánticos multiespectral basado en células biomarcadores asociados a rutas de racionales, junto con los análisis estadísticos detallados para poner a prueba su capacidad de predicción de la supervivencia global de los pacientes con cáncer de próstata. Para reducir las posibles variables introducidas por el procesamiento de las muestras de tejido se optó por utilizar muestras del mismo hospital para cada grupo racial. A pesar del número limitado de muestras de pacientes disponibles para el estudio, la tecnología de etiquetado de punto y cuantificación cuántica multiplexada recién establecido demostró la utilidad predictiva de Rank- y c-Met mediada por la señalización convergentes vías para la predicción de la supervivencia global de los pacientes con PC. Nuestros resultados demuestran que entre los grupos interracial, diferentes conjuntos de biomarcadores podrían ser utilizados como predictores de la supervivencia. Nuestros resultados apoyan aún más las disparidades epidemiológicos bien documentados entre los pacientes de raza blanca-americano, afro-americanos y chinos con PC. Vamos a ampliar aún más el tamaño de la muestra en un estudio de validación retrospectiva y avanzar a estudios prospectivos de progresión de la enfermedad y la supervivencia del paciente, empleando células tumorales (CTC) de circulación de pacientes sometidos a tratamientos para validar nuestros resultados y descubrir otros nuevos biomarcadores para el diagnóstico de cáncer de próstata y el pronóstico para ayudar en la toma de decisiones clínicas.
Reconocimientos
agradecemos a Gary Mawyer para su edición.