Extracto
Antecedentes
Las células madre del cáncer representan una población de células tumorales inmaduras que se encuentran en la mayoría de tumores sólidos. Sus características peculiares que hacen que los modelos ideales para el estudio de resistencia a los medicamentos y la sensibilidad. En este estudio, se investigó si las células madre del cáncer de aislamiento y en el ensayo de sensibilidad in vitro son factibles en un entorno clínico.
Se aislaron
Métodos
Las células madre del cáncer de derrames o tejido de cáncer fresca de 23 pacientes que evolucionó luego de fracaso de la terapia estándar. condiciones de cultivo específicas seleccionadas para las células tumorales inmaduras que expresan marcadores de troncalidad. Estas células fueron expuestas in vitro a los agentes quimioterapéuticos y específicas.
Resultados
Las células madre del cáncer se extrajeron de las metástasis hepáticas en 6 casos (25%), los nódulos pulmonares en 2 (8%), metástasis en los ganglios linfáticos en 3 (12,5%) y derrame pleural /peritoneal /pericárdico en 13 (54%). Las células madre del cáncer se aislaron con éxito en 15 pacientes (63%), incluyendo 14 con cáncer de pulmón (93,3%). Un ensayo de sensibilidad se realizó con éxito en 7 pacientes (30,4%), con una mediana de 15 fármacos /combinaciones probadas (rango 5-28) y un tiempo medio requerido para los resultados de 51 días (rango 37-95).
Conclusión
el enfoque utilizado para el ensayo STELLA permitió el aislamiento de células madre del cáncer en una proporción constante de los pacientes. El bajo porcentaje de casos que terminan el procedimiento completo y el largo tiempo medio para la obtención de los resultados pone de relieve la necesidad de un procedimiento más eficiente.
Prueba de registro
ClinalTrials.gov NCT01483001
cita: D'Arcangelo M, Todaro H, J Salvini, Benfante A, Colorito ML, D'Incecco A, et al. (2015) las células madre del cáncer de la sensibilidad del ensayo (STELLA) en pacientes con avanzado de pulmón y cáncer colorrectal: un estudio de viabilidad. PLoS ONE 10 (5): e0125037. doi: 10.1371 /journal.pone.0125037
Editor Académico: Xiaoan Liu, el Primer Hospital Afiliado a la Universidad de Medicina de Nanjing, CHINA
Recibido: 6 Agosto, 2014; Aceptado: March 10, 2015; Publicado: May 8, 2015
Derechos de Autor © 2015 D'Arcangelo et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del apoyo a sus archivos de información de papel y
Financiación:. Este estudio fue parcialmente apoyado por la Asociación italiana para la Investigación del cáncer (AIRC 5x1000) para MatildeTodaro, Giorgio Stassi y Federico Cappuzzo, por la Fundación Ricerca Traslazionale (ForRT) a Federico Cappuzzo y por el Istituto Toscano Tumori a Federico Cappuzzo y Armida D'Incecco. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no hay intereses en competencia existe
Introducción
el cáncer es la segunda causa de muerte después de las enfermedades cardiovasculares en todo el mundo y de pulmón, de mama y los tumores colorrectales son los tres jugadores principales. De mama (CM) y el cáncer de pulmón (CP) son la principal causa de muerte por cáncer en mujeres y hombres, respectivamente, mientras que el cáncer colorrectal (CCR) representa aproximadamente el 10% del total de la incidencia del cáncer y la mortalidad [1]. La resección quirúrgica y terapia adyuvante puede curar tumores primarios etapa temprana. Por otra parte, la enfermedad metastásica es principalmente incurable debido a su naturaleza sistémica y la resistencia a agentes terapéuticos. De hecho, más del 90% de las muertes relacionadas con el cáncer puede atribuirse a la recurrencia /recaída y no a las lesiones primarias [2,3]. En las dos últimas décadas, el resultado del tratamiento ha mejorado notablemente gracias a una mejor comprensión de la biología del cáncer, la introducción de novedosas específicas agentes quimioterapéuticos /y, lo más importante, la selección de los pacientes en función de biomarcadores o ensayos basados en tumorales. Sin embargo, incluso este enfoque novedoso demostró ser inadecuado para curar pacientes con enfermedad metastásica [4-7]. Esta realidad clínica pone de relieve la necesidad de evaluar nuevos enfoques para el tratamiento de pacientes con cáncer y para desarrollar nuevas herramientas clínicas para la selección de la mejor opción de tratamiento para el paciente individual.
En los últimos años, una pequeña subpoblación de indiferenciado las células de cáncer con características similares a madre fue identificado dentro de los tumores y nombrado células madre del cáncer (CSC) o células iniciadoras de tumores. Parecen responsable de la iniciación del cáncer, el sustento, la progresión y la resistencia a los fármacos antineoplásicos [8]. Según esta hipótesis, CSC proceden de la transformación de las células madre normales. De hecho, debido a su longevidad, las células madre se acumulan mutaciones múltiples que son necesarios para la carcinogénesis. En apoyo de esta hipótesis, las células madre normales y la cuota de CSC varias propiedades importantes, incluyendo:
(a)
auto-renovación,
(b)
diferenciación,
(c)
activa expresión de la telomerasa,
(d)
activación de las vías anti-apoptóticos,
(e)
aumentó la actividad de transporte de membrana y
(f)
capacidad de migrar y metástasis [9] . Por otra parte, los cánceres suelen mostrar una amplia fenotípica, la heterogeneidad molecular y funcional que puede ser fácilmente explicada por la teoría CSC [10-12]. Se han propuesto dos modelos para dilucidar las características variedad de células cancerosas dentro de un tumor: 1) el modelo de evolución clonal, y 2) el modelo de CSC. Mientras que el primero postulados que todas las células dentro de un cáncer tienen el potencial de dar lugar a nuevos tumores, éste sugiere que sólo las células de cáncer con características similares a madre pueden sostener la iniciación y progresión del tumor [13-16]. La evidencia experimental en una variedad de tumores apoya firmemente la hipótesis de CSC. La importancia de la CSC en la iniciación del tumor se ha establecido firmemente en la leucemia y recientemente se informó en una variedad de tumores sólidos como los de mama, colon, cerebro, próstata, ovario, cáncer de pulmón y melanoma [17-24]. Nuestro grupo ha identificado y caracterizado previamente una subpoblación CD133
+ células tumorales dotado de auto-renovación y diferenciación de capacidad multi-linaje al igual que las células madre normales [25]. Esta pequeña subpoblación de CSC conserva la capacidad tumorigénico al ser implantadas en ratones inmunodeficientes [25,26]. Los xenoinjertos resultantes son histológicamente y molecularmente similar al tumor parental del que se derivan [27]. Esta propiedad hace intrigante CSC un buen modelo para el estudio de la biología y la sensibilidad de los tumores de los pacientes individuales a los agentes antineoplásicos.
CSC niveles de visualización de alta expresión de casete de unión a ATP (ABC) los transportistas, los factores anti-apoptóticos , y una capacidad de reparación del ADN activo que los hacen especialmente resistentes a los fármacos y toxinas [28-30]. Además, la reducir el volumen tumoral aparente obtenida con la quimioterapia contribuye a la piscina enriquecimiento CSC, lo que aumenta el riesgo de desarrollar fenotipos más resistentes [31]. Esta evidencia sugiere que el colectivo de la ineficacia común de las terapias convencionales en la población de células madre podría explicar en parte la resistencia del cáncer a los tratamientos disponibles. Por consiguiente, conociendo el espectro de sensibilidad de la subpoblación CSC del tumor individual y orientación selectiva de esta subpoblación podría proporcionar una mejora significativa de los resultados del tratamiento.
Teniendo en cuenta la actual falta de agentes específicos dirigidos a la CSC y la informó anteriormente observaciones, se realizó un estudio prospectivo no randomizado (ensayo STELLA, ClinicalTrials.gov: NCT01483001) para evaluar si el aislamiento y prueba de CSC contra un amplio espectro de agentes antineoplásicos es factible en el ámbito clínico. Por otra parte, el estudio trató de determinar si este enfoque podría potencialmente identificar fármacos con
in vitro
actividad en contra de la CSC derivado del paciente individual, proporcionando así nuevas opciones terapéuticas personalizadas. El estudio mostró que las pruebas de quimiosensibilidad CSC es factible en el ámbito clínico, aunque un más eficiente
se necesita método in vitro
.
Métodos
Elegibilidad, reclutamiento y seguimiento
El protocolo para este ensayo y el apoyo TENDENCIA lista de verificación están disponibles como información de apoyo; véase el Protocolo S1 y S1 TENDENCIA Lista de verificación.
El estudio fue un STELLA, no aleatorizado, prospectivo y abierto, el juicio clínico para evaluar la viabilidad de la intervención de aislamiento CSC y ensayo de quimiosensibilidad en la clínica (Protocolo S1). El estudio fue aprobado por el "Comité de Revisión Ética de Investigación de Drogas" del Hospital Civil de Livorno. escrito el consentimiento informado se obtuvo de cada paciente antes de la inscripción. Los pacientes que fueron seguidos o mencionados en el Departamento de Oncología Médica del Hospital de Livorno y que cumplieron con los criterios de elegibilidad fueron reclutados en el ensayo. Los pacientes elegibles habían confirmado el diagnóstico citológico o histológico de pulmón metastásico, cáncer de mama o colorrectal; pre-tratados con terapias estándar y sin opciones terapéuticas estándares adicionales; con un grado de actividad del 100% de acuerdo con la puntuación de Karnofsky; hematológicos, hepáticos y renales funciones adecuadas. criterios de inhabilitación principales incluyen la incapacidad para obtener tejido tumoral fresco o derrame neoplásico adecuado para la extracción de CSC y comorbilidad potencialmente interferir con el estudio. Características clínicas de los pacientes, así como las características moleculares de los tumores (cuando esté disponible) fueron recogidas y registradas en una base de datos electrónica en el Departamento de Oncología Médica del Hospital Civil de Livorno. Dos pacientes se diagnosticaron inicialmente con un CRC y se incluyen en el estudio, pero una revisión patología mostraron una histología diferente (cáncer de páncreas y adenocarcinoma de intestino delgado), lo que representa una desviación del protocolo de estudio.
El objetivo principal de el estudio fue evaluar la viabilidad de un ensayo de sensibilidad en CSC en un entorno clínico, teniendo en cuenta el porcentaje de pacientes para los que fue posible realizar el ensayo y el período de tiempo para obtener los resultados de la sensibilidad. Criterios secundarios de valoración fueron la identificación de LC, las células madre de CRC y BC y la evaluación de su
in vitro
sensibilidad a los agentes anti-tumorales. Este último se expresó como índice de mortalidad, es decir, el porcentaje de células muertas después del ensayo de quimiosensibilidad.
Los pacientes fueron reclutados durante un período de dos meses de tiempo (6 de diciembre
ª, 31 2011-Enero
st, 2012), y se realizó un seguimiento hasta que la muerte o la negativa del paciente (diciembre 2011-diciembre 2013), a intervalos regulares de acuerdo con las necesidades clínicas y la opinión del clínico. Las entrevistas telefónicas se llevaron a cabo en caso de que el paciente no pudo asistir a las consultas ambulatorias.
Recogida de tejido, el aislamiento y cultivo de células de cáncer
derrame neoplásico (si está presente) o el tejido tumoral de cáncer primario o desde el lugar de la metástasis más accesible se obtuvo de todos los pacientes después de la firma del consentimiento informado en el hospital Civil de Livorno. Las muestras frescas fueron enviados durante la noche a temperatura ambiente para el Laboratorio de Fisiopatología Celular y Molecular de la Universidad de Palermo, Italia. las muestras de tumor se lavaron intensamente en solución de PBS y se incubaron durante la noche en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM, GIBCO) suplementado con penicilina (500 U /ml, Gibco), estreptomicina (500 g /ml, Gibco) y anfotericina B (1,25 g /ml , GIBCO) para evitar la contaminación microbiana. Las muestras tumorales fueron digeridos enzimáticamente con colagenasa y hialuronidasa y se agita mecánicamente durante 1 hora a 37 ° C. Alternativamente, efusiones neoplásicas fueron separados por centrifugación (1200 rpm, 10 min, 4 ° C). células recogidas se cultivaron en medio libre de suero de células madre suplementado con factor de crecimiento epidérmico (EGF, 20 ng /ml, Sigma-Aldrich) y factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF, 10 ng /ml, Sigma-Aldrich) y se sembraron en ultra-baja placa de fijación (Corning) como se ha descrito anteriormente [25]. Estas condiciones favorecen el crecimiento de las células madre como altamente tumorigénicas, mientras que la selección negativa para las células tumorales diferenciadas menos tumorigénicas, según lo demostrado previamente por Eramo et al [24]. Sobrevivir a las células tumorales inmaduras proliferan lentamente y forman esferas de células. células de Esfera derivados se ampliaron por medios mecánicos y /o la disociación enzimática y re-sembraron en medio de células madre fresca completa. Los cultivos celulares se mantuvieron a 37 ° C en un 5% de CO
2 incubadora humidificada.
El protocolo de estudio incluyó a
in vivo
experimentos que nunca han sido llevadas a cabo porque se utilizaron todas las células disponibles para las pruebas chemosensitivity en el esfuerzo de las pruebas como muchos fármacos como sea posible y por lo tanto la identificación de un tratamiento potencial para el paciente.
caracterización de inmunofluorescencia de esferas
células derivadas-Sphere fueron demostrado ser CSC por caracterización de inmunofluorescencia para marcadores de membrana stemness. Brevemente, esferas tumorales fueron mecánica y enzimáticamente disociadas para obtener células individuales. Las células se fijaron y permeablized Como se informó anteriormente [25]. células Cytospun se lavaron en PBS y se expusieron durante la noche a 4 ° C con los anticuerpos contra CD133 (AC133, IgG de ratón
1, Miltenyi), CD166 (IgG1 de ratón, R & amp; D Systems), OCT3 /4 (sc-5279, ratón IgG2b, Santa Cruz), ALDH-1 (IgG1 de ratón, BD Bioscience), CD90 (ratón IgG1k, BD Bioscience), o controles de isotipo. Después, las células se marcaron con anticuerpos isotiocianato de fluoresceína (FITC) conjugado de ratón (Invitrogen) y los núcleos se contratiñeron con Toto-3 yoduro. La tinción fluorescente se evaluó con un microscopio confocal.
in vitro la sensibilidad del ensayo
Después de la disociación mecánica y enzimática, las células tumorales se tiñeron con azul de tripano y se contaron con un hemocitómetro. Las células tumorales (2X10
4 por pocillo) fueron expuestos a varios fármacos antitumorales a fin de evaluar su sensibilidad a los compuestos terapéuticos. La Tabla 1 indica los fármacos o combinaciones utilizadas. Los médicos eligieron empíricamente los fármacos para poner a prueba sobre la base de los regímenes de tratamiento anteriores y la aberración molecular básica del paciente individual. El
in vitro
sensibilidad de ensayo se llevó a cabo en forma simultánea en dos placas de 96 pocillos de unión ultrabaja (Corning). Se determinó el tiempo de tratamiento basado en fármacos de vida media y continuó hasta 96 horas. Cada régimen se evaluó por triplicado. Se evaluó
La viabilidad celular con tinción con naranja de acridina /bromuro de etidio (AO /EB), como se describe anteriormente [34]. La suspensión celular se incubó en solución AO /EB en proporción de 1: 1 mezclado respectivamente y suavemente. Este procedimiento se realizó justo antes de la cuantificación con un microscopio confocal. Ocho l de suspensión de células se colocaron en un portaobjetos de microscopio y se cubrieron con un cubreobjetos de vidrio. Un microscopio confocal se utilizó para examinar la muestra y cuantificar la muerte celular [34]. Los resultados del análisis de sensibilidad se comunicaron a los médicos con el fin de seleccionar, cuando sea posible, un régimen de terapia optimizada para el paciente individual.
Análisis estadístico
Tamaño de la muestra se calculó con el software de IBM SPSS Muestra Potencia 3,0 sobre la base del porcentaje de pacientes en los que fue posible realizar el ensayo. Utilizando la prueba de proporción (dos caras de prueba), bajo el supuesto de un porcentaje del 33% (frente al procedimiento estándar de 5%), se requiere un tamaño de muestra de 18 pacientes, con una potencia de 90% y un nivel de significación de 0,05 . La estadística descriptiva (frecuencia, porcentaje, mediana y rango intercuartil) se utilizaron para analizar los datos en su caso. Los resultados de la
in vitro
procedimiento (tipo de muestras recogidas, CSC tasa de fallo de aislamiento) se analizaron teniendo en cuenta el número total de muestras. Se analizaron los demás resultados (tasa de éxito ensayo de sensibilidad, tiempo para el resultado y el número de fármacos probados) teniendo en cuenta los datos de pacientes individuales de la "intención de tratar" población.
Resultados
del 6 de diciembre
º 2011 al 31 de enero
er 2012, un total de 23 pacientes fueron identificados en el Departamento de Oncología médica de Livorno y se inscribió en el estudio (figura 1). Todos los pacientes seleccionados fueron elegibles y comenzaron el procedimiento para el aislamiento de CSC. Todos los pacientes se incluyeron en los análisis siguientes. La Tabla 2 resume las características clínicas de los pacientes individuales. La mediana de edad fue de 66 años (rango intercuartil, IQR: 51-72) y la mayoría de los sujetos eran varones (n = 15, 65%) y tenía cáncer de pulmón (n = 18, 78%). Ningún paciente fue inscrito antes de Cristo. caracterización biomolecular no estaba disponible en 5 casos. Entre los pacientes con cáncer de pulmón,
se detectaron mutaciones de EGFR
en 4 casos,
ALK
translocación en 1 caso y
KRAS
mutación en otro caso. Dos de los tres pacientes con CRC albergaba un
KRAS
mutación. Los pacientes recibieron una mediana de 3 líneas de tratamiento previo (IQR: 1-3). Todos los pacientes completaron el seguimiento, a excepción de un paciente que todavía está vivo. Ningún paciente se perdió durante el seguimiento.
células madre del cáncer de aislamiento y la sensibilidad del ensayo
biopsia del tumor o procedimiento de recogida de derrame neoplásico se repitió más de una vez por paciente , excepto en un caso. No hubo complicaciones resultantes del procedimiento de recogida de tejido tumoral /derrame. Aislamiento de CSC se realizó utilizando derrame /peritoneal /pleural pericárdico en 13 casos (54%), tejido tumoral de metástasis pulmonares en 2 casos (8%), las metástasis de hígado en 6 (25%) y de ganglios linfáticos metástasis en 3 (13% ). CSC se aislaron con éxito en 15 de las muestras de tumor de 24 recogidos (63%). El material no era adecuado en 8 casos y un espécimen se deterioró durante el transporte. La tasa de fracaso fue más alta con biopsias tumorales (5 fallado casos de 11, la tasa de fracaso: 45%) que con los derrames malignos (3 fracasó casos de los 13, la tasa de fracaso: 23%). En particular, el menor rendimiento se obtuvo con metástasis en los ganglios linfáticos (2 failed casos de 3, tasa de fracaso: 67%). De acuerdo con el sitio primario del cáncer, la tasa de fracaso fue del 30% para el cáncer de pulmón y el 80% para los tumores gastrointestinales
.
células tumorales de pulmón recién aislados tenido fenotipo de tallo como confirmado por la expresión simultánea de los marcadores más comunes stemness , incluyendo CD133, CD166, OCT3 /4, ALDH-1 y CD90 (Fig 2) [32,33]. La alta expresión concomitante de estos marcadores apoya fuertemente el hecho de que las células aisladas eran CSC. La Tabla 3 muestra el patrón de expresión de los marcadores en los casos en los que se realizó un ensayo de sensibilidad. Ningún estudio de inmuno-fluorescencia se realizó en muestras gastrointestinales para un número limitado de células aisladas y
crecimiento in vitro
insuficiente.
El siguiente grupo de imágenes se refiere a la caracterización de células aisladas de la muestra de un paciente incluido en el estudio. etiquetado verde es típico de células positivas. Todos los marcadores de la troncalidad (CD133, CD166, Oct 3/4, ALDH1, CD90) son positivos en esta muestra CSC.
Entre los 15 casos en los que se aislaron con éxito CSC,
vitro
crecimiento celular en se observó en 12 y sólo en 7 casos el número de células disponibles era suficiente para realizar una prueba de quimiosensibilidad. La tasa de éxito global de todo el procedimiento fue del 30,4%. Se evaluó el
in vitro
respuesta al tratamiento en placas de 96 pocillos, por triplicado, con tinción AO /EB. La tinción AO /EB se utiliza para visualizar los cambios nucleares y la formación de cuerpos apoptóticos que son característicos de apoptosis. Mientras que AO es un colorante vital y manchas de células vivas y muertas, manchas EB únicas células que han perdido la integridad de membrana. Por lo tanto, las células viables aparecieron células uniformemente verdes y muertos incorporado EB y, en consecuencia, se tiñeron de color naranja (Fig 3). La respuesta al tratamiento, se observa en la primera placa de marcado con AO /EB, era homogénea en los tres pocillos. Las células viables de la segunda placa se mantuvieron en cultivo durante la observación y no se detectó ningún cambio morfológico o fenotípica.
AO es un colorante vital y manchas de células vivas y muertas. EB penetra en las células con la membrana citoplasmática interrumpido, la tinción de células muertas única. Por lo tanto, las células viables aparecen uniformemente verde y las células muertas se marcan en color naranja. a) La baja sensibilidad (mortalidad celular 5%). b) la sensibilidad media (células de mortalidad del 40%). c) de alta sensibilidad (mortalidad celular 80%).
A todos los pacientes cuyos tumores fueron probados con éxito
in vitro
tenían LC, incluyendo 5 adenocarcinomas de pulmón, 1 no microcítico de pulmón de células no diferenciadas cáncer y 1 pequeñas de cáncer de pulmón de células. La mediana de tiempo entre la recogida de muestras y resultados de los análisis de sensibilidad fue de 51 días (IQR: 47-54). La Tabla 1 indica los fármacos o combinaciones utilizados para la
in vitro
ensayo de sensibilidad y obtener información más detallada acerca de las pruebas individuales se pueden encontrar en la Tabla 3. La mediana del número de fármacos /combinaciones que fueron probadas fue de 15 (IQR: 5-22). El
in vitro
CSC tasa de mortalidad en varió de 0 a 80%, pero sólo en un caso, la tasa de mortalidad era & gt; 50% (Tabla 3)
tratamiento de pacientes
el estudio no contempla el tratamiento de los pacientes y sus puntos finales no incluyó si los
in vitro
resultados se correlacionan con la respuesta clínica. Sin embargo ninguna opción terapéutica válida estaba disponible para estos pacientes y, cuando sea posible, se les ofreció un tratamiento con uno de los fármacos probados. El régimen elegido fue siempre el uno con el
in vitro
tasa de mortalidad más alta en. Como no existe un valor de corte de la reconocida
in vitro
resultado la definición clínica de sensibilidad /resistencia, no puede descartarse que los regímenes de baja
in vitro
mortalidad en las respuestas clínicas pueden producir y, por lo tanto, el régimen elegido podría haber tenido una baja tasa de mortalidad. Como se muestra en la Tabla 3, entre los 7 sujetos para los cuales se disponía de un ensayo de sensibilidad, sólo el 3 recibieron un tratamiento basado en los resultados de las pruebas. La tasa de mortalidad más alta observada
in vitro
fue del 10% en 2 de estos pacientes y la enfermedad progresó poco después del inicio del tratamiento. El primer paciente era una mujer fumadora que nunca con un adenocarcinoma de pulmón metastásico con ninguna aberración conductor molecular. Ella recibió una combinación de oxaliplatino y paclitaxel, pero la enfermedad progresó después de sólo dos ciclos. El segundo paciente era un hombre ex fumador con
KRAS mutado
adenocarcinoma de pulmón. Recibió una combinación de carboplatino y pemetrexed y su enfermedad progresó poco después. Por otro lado, en un hombre joven con una metástasis
EGFR
ha mutado adenocarcinoma de pulmón
in vitro
ensayo mostró una mortalidad celular del 40% para la combinación de oxaliplatino y paclitaxel. El paciente recibió 5 ciclos de los fármacos quimioterapéuticos mencionados anteriormente, el logro de una estabilización de la enfermedad. A pesar del efecto beneficioso, teniendo en cuenta que el paciente ya había recibido 7 líneas de tratamiento, el médico decidió suspender el tratamiento durante un mayor riesgo de toxicidad. Los otros 4 pacientes en los que se realizó una prueba de sensibilidad no recibieron el tratamiento, ya que falleció antes de que los resultados estuvieron disponibles. En general, estos hallazgos anecdóticos parecen indicar que el aumento de
in vitro
sensibilidad podría traducirse en un mejor resultado clínico.
pruebas Discusión
La acumulación es compatible con la existencia de células madre cancerosas en tumores humanos. Estas células poseen la capacidad de auto-renovarse y diferenciarse en células tumorales maduros. Parecen conducir la iniciación del tumor, progresión y metástasis. Dada su alta resistencia a los medicamentos contra el cáncer, que se cree que contribuyen sustancialmente a la recaída después de la quimioterapia y representan una atractiva diana terapéutica para alcanzar potencialmente duraderas respuestas terapéuticas. Por lo tanto, el reconocimiento de los fármacos más activos en la subpoblación CSC tiene el potencial de identificar la mejor opción de tratamiento para el paciente individual o nuevas opciones de tratamiento para los pacientes que están progresando con las terapias estándar.
Estudios previos han descrito ya el aislamiento procedimiento del CSC. El estudio STELLA es el primer estudio prospectivo que evalúa la aplicabilidad de este procedimiento en un entorno clínico con el objetivo de probar la
in vitro
sensibilidad del CSC y, potencialmente, la identificación de nuevas opciones terapéuticas para el paciente. Teniendo en cuenta que la viabilidad fue el criterio de valoración principal del estudio, fue inscrito un número limitado de personas, la gran mayoría con un diagnóstico de LC, la enfermedad más frecuente que se refiere a nuestra Institución. El estudio mostró que el procedimiento era factible en 65% de los casos, lo que lleva a un resultado quimio-sensibilidad en un tercio de los pacientes en un tiempo medio de 51 días. En general, esta experiencia preliminar nos dio información muy relevante.
En primer lugar, el sitio de recogida de muestras del tumor fue crítico para el éxito del procedimiento de aislamiento desde derrames neoplásicos fueron los más competentes para tal fin. Este es también un aspecto relevante para la práctica clínica, ya que la colección derrame es relativamente fácil y con frecuencia se requiere para el manejo de síntomas, que tiene bajo riesgo y que es generalmente bien aceptada por los pacientes. En nuestra opinión, el tipo de muestra, si se trataba de biopsia de tejido fresco o derrame neoplásico, fue el factor que impactó principalmente en el bajo porcentaje de pacientes que se benefician de la prueba. Otros factores, como el tipo de medio de cultivo, pueden haber tenido un impacto menor.
La mediana de tiempo entre la toma de muestras y de análisis de sensibilidad resultados fue de 51 días. Este es un período relativamente largo de tiempo para los pacientes de cáncer metastásico, que explica por qué menos de 50% de los sujetos para los que se disponía de la prueba de sensibilidad recibido una terapia basada en sus resultados. Si este lapso de tiempo es suficiente para alterar aún más la biología de las células tumorales y su sensibilidad a los medicamentos que no se conoce y en la actualidad no hay evidencia científica de este. Con el fin de acortar este período de tiempo, en base a la experiencia de STELLA, un estudio clínico en curso (LUCAS) está utilizando un ensayo diferente (Tecan Infinito F500 después de Titulación-Glo celular luminiscente viabilidad celular Ensayo; Promega). Este método determina el número de células viables en base a la cuantificación de una señal luminiscente que es proporcional a la cantidad de ATP; que requiere un menor número de células viables y ofrece resultados en tan sólo 7 días después de la biopsia. Esto podría ayudar a lograr resultados en un corto periodo de tiempo y probar más fármacos para los pacientes con lenta
in vitro
crecimiento de CSC. Por otra parte, ofrece resultados cuantitativos, eliminando la menor precisión del método semi-cuantitativo anterior. Este nuevo enfoque también podría mejorar el porcentaje de pacientes en los que la prueba de quimiosensibilidad puede realizarse con éxito. De hecho, en el STELLA estudiar la sensibilidad de ensayo se realizó en sólo 7 casos sobre todo para los pobres
in vitro
el crecimiento celular in.
En nuestro estudio CSC mostró una alta resistencia a los fármacos actualmente disponibles, incluyendo agentes estándar de quimioterapia y terapias dirigidas, con sólo un caso que muestra una tasa de mortalidad superior al 50%. Esto no es inesperado teniendo en cuenta la alta resistencia del CSC para comúnmente utilizado agentes antitumorales, poniendo de relieve la necesidad urgente de fármacos más eficaces dirigidas específicamente a esta población celular.
En conclusión, el método utilizado para el ensayo STELLA permitió el aislamiento de CSC una proporción constante de los pacientes. El bajo porcentaje de casos que terminan el procedimiento completo de ensayo de quimiosensibilidad y el largo tiempo medio para la obtención de los resultados completos pone de relieve la necesidad de un procedimiento más eficiente. En tal perspectiva, el estudio actualmente en curso LUCAS aclarará las posibles implicaciones clínicas de terapias dirigidas en células madre cancerosas.
Apoyo a la Información
Protocolo S1. Protocolo de estudio, carta de información para el médico general y el formulario de consentimiento informado
doi:. 10.1371 /journal.pone.0125037.s001 gratis (PDF)
S1 TENDENCIA Lista de verificación. . TENDENCIA lista
doi: 10.1371 /journal.pone.0125037.s002 gratis (PDF)