Extracto
Aplicaciones
El cisplatino quimiorradioterapia concomitante con base (CRT) es el tratamiento estándar para el cáncer de cuello uterino localmente avanzado (CC). El glutatión S-transferasa (GST), una enzima antioxidante fase II es inducida por el estrés oxidativo generado por las drogas y oxidantes reactivos. Se realizó el presente estudio para evaluar la asociación de
GSTM1
,
T1 Opiniones y
P1
polimorfismos con el resultado del tratamiento en pacientes CRT cc.
métodos
Un total de 227 pacientes con cáncer de cuello uterino etapas IIB-IIIB tratados con el mismo régimen de quimioterapia se inscribieron y genotipo para
GSTM1
,
T1 Opiniones y
P1
polimorfismos del gen de la reacción en cadena de la polimerasa múltiple (mPCR) y PCR-longitud de los fragmentos de restricción polimórficos (RFLP-PCR). La supervivencia global se evaluó utilizando la función de supervivencia de Kaplan-Meier y Cox de riesgos proporcionales. Todos los datos fueron analizados con el programa SPSS (versión 21.0).
Resultados
El análisis estratificado mostró que
GSTM1 nulo
(M1-) genotipo se asoció con una supervivencia significativamente mayor entre los pacientes con estadio IIB cáncer de cuello uterino (log-rank
P
= 0,004) que los casos con estadio IIIA /IIIB. La muerte y recurrencia fueron significativamente mayores en los pacientes con
GSTM1
presente genotipo (M1 +) (
P = 0,037
y
P = 0,003
respectivamente) y los que tienen M1- mostraron una reducción peligro de muerte con una razón de riesgo ajustada 'HR' de (IC del 95%, 0,269-0,802,
P
= 0,006) 0,47. Las mujeres con genotipo M1-, así como en combinación con
GSTT1 nulo
(T1),
GSTP1 gratis (AG + GG) y
GSTT1 nulo
/
GSTP1 gratis (AG + GG) mostró una mejor supervivencia y también redujo el riesgo de muerte (HR = 0,31,
P = 0,016
; HR = 0,45,
P = 0,013
; HR = 0,31;
P
= 0,02, respectivamente).
Conclusiones
a lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer estudio para correlacionar la asociación de
GSTM1
,
T1 Opiniones y
polimorfismos de genes P1
con el resultado del tratamiento de los pacientes tratados CRT CC. Nuestros resultados sugieren que los individuos con
GSTM1
genotipo nulo y en combinación con
GSTT1 nulo y
GSTP1 gratis (AG + GG) tenían una ventaja de supervivencia. Este tipo de estudios genéticos pueden proporcionar información pronóstica en pacientes tratados con TRC CC
Visto:. Abbas M, Kushwaha VS, Srivastava K, M Banerjee (2015) glutatión S-transferasa polimorfismos genéticos e Tratamiento de resultados en pacientes con cáncer de cuello uterino bajo concomitante quimiorradiación. PLoS ONE 10 (11): e0142501. doi: 10.1371 /journal.pone.0142501
Editor: Ken Mills, la Universidad Queen de Belfast, Reino Unido
Recibido: 24 Abril, 2015; Aceptado: 22 Octubre 2015; Publicado: 16 de noviembre 2015
Derechos de Autor © 2015 Abbas et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el Consejo de Ciencia y Tecnología, Uttar Pradesh, India; Centro de Excelencia (Educación Superior) Uttar Pradesh, Lucknow, India; Consejo Indio de Investigación Médica, Nueva Delhi, India; y el Departamento de Ciencia y Tecnología, Nueva Delhi, India
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
El cisplatino basado quimiorradioterapia concomitante (CRT. ) es el tratamiento estándar que se utiliza para los pacientes con cáncer de cuello uterino localmente avanzado. Es conocido para mejorar la supervivencia y reducir la tasa de recurrencia [1-2]. Sin embargo, primaria o adquirida chemoradioresistance son graves problemas clínicos que contribuyen a la recurrencia de la enfermedad, la progresión y la mortalidad [3-4]. recaídas locales y distantes se producen debido a la supervivencia de algunas células cancerosas que conducen al fracaso del tratamiento. Por lo tanto, se requieren nuevas y más eficaces enfoques para abordar esta cuestión. Los mecanismos que subyacen a las respuestas heterogéneas a tratamiento entre los pacientes son multifactoriales e incluyen la variabilidad en la constitución genética. Hay una creciente evidencia de que los genes implicados en el metabolismo, la reparación del ADN y la vía de señalización intracelular pueden influir en la variabilidad individual de la respuesta al tratamiento y la toxicidad [5-6]. Hay una constante búsqueda de nuevos factores pronósticos y predictivos con el fin de individualizar los regímenes de tratamiento.
Los efectos citotóxicos de la radiación y la quimioterapia son mediados principalmente a través de la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS) y sus subproductos que causan daño celular . La muerte de células tumorales por ROS es o bien por efecto citotóxico directo o las vías de apoptosis intracelulares. Por lo tanto, diversas enzimas que afectan a los niveles de ROS puedan afectar el pronóstico del paciente después del tratamiento [7-8]. El glutatión S-transferasa (GST) es una enzima metabólica fase II que juega un papel importante en la defensa celular contra numerosos productos químicos nocivos producidos tanto de forma exógena y endógena [9-10]. Protege las células del daño oxidativo catalizando la conjugación de ROS [11-12] y también desintoxica varios agentes quimioterapéuticos, tales como agentes alquilantes, compuestos de platino y adriamicina [3]. El glutatión (GSH) es uno de los principales agentes de desintoxicación que pueden ser afectados por las enzimas metabólicas que utilizan tripéptidos como sustratos. En el momento de la quimioterapia, la actividad suficiente de GST es crucial, ya que durante la reacción catalizada de enzima de conjugación con GSH, la solubilidad en agua de fármacos y otros materiales tóxicos aumenta y puede ser eliminado del cuerpo [13 a 14]. Muchos estudios han demostrado que la variación genética en estas enzimas, incluyendo
GSTP1
A313G (rs1695, Ile105Val) y deleciones de genes en su conjunto
GSTM1
y
GSTT1
tiene impacto sobre la supervivencia y toxicidades en diferentes tipos de cáncer tratados con agentes de platino y la radiación [9, 15-17].
Debido a la actividad de eliminación de radicales libres y la desintoxicación de los agentes de platino, papel de GST en la respuesta al tratamiento y la supervivencia en pacientes con cáncer de cuello uterino es plausible. En el presente estudio, hemos investigado la supervivencia y la recurrencia de la enfermedad de los pacientes en relación con
GSTM1
,
T1 Opiniones y
polimorfismos de genes P1
después del tratamiento con cisplatino basado quimiorradioterapia concomitante ( CRT).
Materiales y Métodos
Ética Declaración
pacientes con cáncer de cuello uterino que eran menores de cisplatino quimiorradioterapia concomitante con base (CRT) en el Departamento de Medicina de la Universidad de king George Radioterapia (KGMU ), Lucknow, India (entre 2009 y 2011) fueron incluidos en este estudio. Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética Institucional de KGMU y todos los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito para su participación en el estudio.
Los pacientes de selección y recogida de muestras
cinco mililitros de sangre venosa se obtuvieron a partir 244 sujetos en el inicio del régimen de tratamiento. Los pacientes eran del mismo origen étnico, estadios IIB-IIIB de acuerdo con la Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia (FIGO), sin condiciones comórbidas asociadas y expuestos a primer tratamiento transcurso de la CRT. Las características demográficas y clínicas de los pacientes se obtuvieron de los registros médicos, mientras que la estadificación clínica y diagnóstico de los pacientes se llevaron a cabo por expertos clínicos según las directrices de la FIGO.
Tratamiento y Evaluación de Respuesta
La quimioterapia y la radiación de dosis eran mismo para todos los pacientes. Ellos recibieron radioterapia de haz externo de la pelvis (para una dosis total de 50 Gy en 25 fracciones) con cisplatino concomitante semanal (40 mg /m
2) seguido de tres aplicaciones de alta tasa de dosis (HDR) de braquiterapia intracavitaria y 7 Gy /fracción a un intervalo de semanas. Los pacientes que no completaron la dosis planificada o quimiorradioterapia violaron el protocolo de tratamiento fueron excluidos del estudio. La respuesta al tratamiento se midió por RECIST criterios versión 1.0 después de un mes de tratamiento. Las mujeres fueron seguidos después del tratamiento y se comprueban por la supervivencia. El criterio principal de valoración fue la supervivencia global (SG) a partir de la fecha de diagnóstico de la fecha de muerte por cualquier causa. Las mujeres que estaban vivos al final del estudio fueron censurados.
Genotipado
El ADN genómico fue extraído de muestras de sangre periférica mediante el método de precipitación salina normal con ligeras modificaciones [18-19], comprueba en 1% en gel de agarosa y se cuantifica en un BioPhotometer (Eppendorf, Alemania).
GSTM1
y
T1
genotipos nulos (M1- y T1) se detectaron mediante el uso de múltiplex reacción en cadena de la polimerasa (mPCR) usando cebadores específicos. El
GSTP1
313A & gt;. G polimorfismo se genotipo mediante PCR-polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP-PCR) usando cebadores específicos y
Alw26
enzima de restricción I [20]
análisis estadístico
la información demográfica y clínica se comparó través de genotipos usando χ
2 el análisis y la prueba exacta de Fisher. genotipo efectos sobre la supervivencia global (SG) se evaluaron mediante la función de Kaplan-Meier y Cox de riesgos proporcionales. Las diferencias en el sistema operativo a través de diferentes genotipos se compararon mediante la prueba de log-rank. Las razones de riesgo (HR) y el 95% intervalos de confianza (IC) se calcularon mediante análisis de regresión multivariante de Cox de riesgos proporcionales de modelo /Cox con ajuste por edad, estadio patológico y la histopatología. Todos los
P
valores fueron de dos caras y se consideraron estadísticamente significativas las diferencias
P Hotel & lt; 0,05. Los análisis estadísticos se realizaron mediante el programa SPSS (versión 21.0).
Resultados
Entre los 244 pacientes con cáncer de cuello uterino matriculados, 227 se incluyeron en el estudio. Diecisiete pacientes tenían violaciónes de protocolo, de los cuales tres no comenzar el tratamiento, dos no recibieron quimioterapia concomitante, uno de ellos recibió quimioterapia adicional y no lo hicieron once tratamiento completo.
Características clínicas de los pacientes
La edad media de los pacientes fue de 49,0 ± 8,68 años. El análisis histopatológico mostró 216 pacientes (95,2%) con carcinoma de células escamosas y restante 11 (4.8%) con adenocarcinoma. La distribución de carcinoma de células escamosas en tres categorías eran de 96 pocillos (44,4%), 79 moderada (36,6%) y 21 pobres (9,7%), mientras que no hay diferenciación se informó en el informe histopatológico de 20 casos (9,3%). La puesta en escena de un tumor según la FIGO fue de 117 casos (51,5%) con estadio IIB y 110 (48,5%) con estadio IIIA IIIB + (Tabla 1).
Genotipado
La distribución de
GSTM1
genotipos mostraron 64,8% de los casos con
GSTM1
presente (M1 +) y el 35,2% con
GSTM1 nulo
(M1-) mientras que la distribución de los
GSTT1
mostró 77,5% de los casos con
GSTT1
presente (T1 +) y el 22,5% con
GSTT1 nulo
(T1). La distribución de los
GSTP1
genotipos mostró 56,4% de los casos con AA, el 43,6% con AG + GG. El adenocarcinoma de cuello uterino fue significativamente mayor en los pacientes que tienen AG + genotipo GG de
GSTP1 gratis (
P
= 0,02). Sin embargo, la distribución de los
GSTM1
,
T1 Opiniones y
P1
no (
P Hotel & gt; 0,05) mostraron asociación significativa con la edad y el estadio clínico ( Tabla 1).
La supervivencia de los pacientes
La duración mediana de seguimiento para todos los pacientes fue de 34 meses (rango: 4.2-63.0 meses). Durante el período de estudio (2009-2011) 31,3% de los pacientes sucumbieron a la muerte. La mediana de supervivencia no se había alcanzado y la media de tiempo de supervivencia global fue de 49,4 meses (IC del 95% = 46,78 a 52,01). Se observó por análisis de fase-estratificada que la supervivencia global de los pacientes con estadio IIB fue significativamente mejor que en aquellos en estadio IIIA /IIIB en caso de
GSTM1 nulo
(M1-) individuos (log-rank
P
= 0,004). recurrencia de la enfermedad se registró durante 42 mujeres (18,5%). La mayoría de los pacientes con
GSTM1
genotipo nulo (M1-) estaban vivos y libres de enfermedad al final del período de estudio (
P = 0,037
y
P = 0,003
, respectivamente), mientras que ninguno de
GSTT1 Hotel & amp;
P1
genotipos exhibido respuesta similar (Tabla 1). Las múltiples pruebas para los tres genes estudiados con características clinicopatológicas mostró que el riesgo de recurrencia se redujo significativamente en
GSTM1 nulo
/
GSTT1 nulo y
GSTM1 nulo
/
GSTP1
AG + GG (
P = 0,004
y
P = 0,021
respectivamente). Ninguna de las otras combinaciones mostró ninguna asociación significativa.
Efecto de los genotipos GST sobre la supervivencia
La función Kaplain-Meier y log rank test para la supervivencia en los casos con
GSTM1
,
T1 Opiniones y
P1
genotipos se muestran en las figuras 1 y 2. en la curva Kaplain-Meier,
GSTM1
genotipo nulo (M1-) se asoció con una mejor supervivencia global (log-rank,
P
= 0,004). La supervivencia global en mujeres con
GSTM1 nulo
(M1-) genotipo y
GSTT1 nulo
(M1- /T1) y
GSTP1 gratis (M1- /AG + GG ) fue significativamente mejor (log-rank,
P = 0,021
y
P = 0,032
respectivamente).
diferencia en la supervivencia mediante la prueba de log-rank.
diferencia en la supervivencia mediante la prueba de log-rank.
Asociación de
GSTM1
,
T1 Opiniones y
P1
genotipos con la supervivencia global según el análisis de riesgos proporcionales de Cox modelo, ajustado por edad, estadio y la histopatología se muestra en la Tabla 2. Hubo una reducción significativa en el riesgo de muerte a 0,47 entre las mujeres con
GSTM1
genotipo nulo (M1-) cuando se compara con las mujeres que tienen
GSTM1
presente (M1 +) genotipo (IC del 95%, 0,269-0,803,
P
= 0,006). No hubo asociación significativa con
GSTT1
nulos y
GSTP1
genotipos AG + GG. Además, el efecto combinado mostró que los tres genes tienen un impacto sobre la supervivencia. Las mujeres con
GSTM1
genotipo nulo en combinación con
GSTT1 nulo
(M1- /T1) y
GSTP1 gratis (M1- /AG + GG) mostraron riesgo más reducido de relación de la muerte [de riesgo ajustado (HR) = 0,31; IC del 95%, desde 0,121 hasta 0,805,
P = 0,016
; CI 0,45, 95%, 0,243-0,846,
P = 0,013, respectivamente
]. La HR ajustada asociada con genotipo combinaciones triples GST se han mostrado en la Tabla 2. El análisis mostró una mejor supervivencia en pacientes con
GSTM1 nulo
/
GSTT1 nulo
/
GSTP1
AG + GG genotipo combinación (HR = 0,31; IC del 95%, 0,120-0,836,
P
= 0,02).
Discusión
Los factores pronósticos más importantes en pacientes con cáncer de cuello uterino tratados principalmente con quimio-radioterapia son el escenario y la histología del tumor [21]. Sin embargo, la información pronóstica proporcionada por el estadio del tumor y la histología no son a tal grado que se pueden utilizar para cumplir con los requisitos actuales para la terapia óptima. La toxicidad y costo de la terapia adicional sólo puede justificarse en el subgrupo de pacientes con alto riesgo de local, así como la recaída distante. Aunque la quimiorradiación mejora la supervivencia y el control locorregional, la tasa general de bienestar supervivencia de 5 años ~ 60% [22].
Los efectos de la quimioterapia y la radioterapia son potencialmente modificados por enzimas GST [23-24]. Se hizo un intento para identificar polimorfismos genéticos en
GST
gen que puede ser un marcador predictivo de respuesta y la supervivencia a cisplatino quimiorradioterapia concomitante con base (CRT) en pacientes con cáncer avanzado de cuello uterino. El cisplatino (CDDP), que se utiliza comúnmente en el tratamiento de cáncer de cuello uterino se desintoxica en parte por
GST
se confirmó enzyme.It que el aumento de la expresión de GST en células tumorales determina la resistencia al cisplatino y otros compuestos de platino [25-27] . La participación directa de
GSTP1
en la desintoxicación de CDDP es mediante la formación de aductos de CDDP-GSH [28-29].
Muchos estudios sugirieron que GST juega un papel importante en el desarrollo de la resistencia de las células tumorales al tratamiento. Especies reactivas de oxígeno (ROS) se genera durante el tratamiento de ambos regímenes
a saber
. quimioterapia y radioterapia. ROS se genera también como parte de la actividad citotóxica de los agentes quimioterapéuticos [30-31]. La radioterapia puede matar las células cancerosas, ya sea directamente a través de efectos sobre las moléculas diana o indirectamente a través de ROS. Estas ROS pueden dañar las células, proteínas y ADN u otras moléculas celulares.
Dos posibles mecanismos se han sugerido una asociación entre los genotipos GST y el resultado del tratamiento, uno que implica las diferencias en el daño carcinógeno a ADN y el otro, las diferencias en desintoxicación por agentes de tratamiento o protección de GST-mediada contra el daño oxidativo durante el tratamiento [23]. Además de GST, también se conocen polimorfismos genéticos en los genes de reparación del ADN que se asocia con los resultados del cáncer y tratamiento cervicales de CRT [32-33]. Uno de los genes de reparación del ADN importantes que influyen en la respuesta de carcinoma cervical a la quimioterapia neoadyuvante fue
XRCC1
variante del gen en el codón 399 [34]. Otra variante del gen
RAD51
G172T también mostró asociación en la supervivencia global de los pacientes con cáncer de cuello uterino tratados con TRC [2].
Muchos estudios demostraron una asociación entre polimorfismos de
GSTM1 y
T1
con el resultado del tratamiento en pacientes con cáncer de mama o leucemia infantil [7,35], pero no se encontró asociación en el cáncer colorrectal [11]. Sin efecto individual de
GSTM1
o
T1
genotipos se encontró, pero en combinación, los genotipos nulos de ambos se asocia a peor supervivencia en el cáncer de ovario [36-37]. En el presente estudio, se observó un riesgo reducido de muerte y una mejor supervivencia global entre las mujeres tratadas con el genotipo CRT nula de
GSTM1 gratis (M1-
)
, particularmente en combinación con
GSTT1
nulo (M1- /T1) y
GSTP1 gratis (M1- /AG + GG) (Tabla 2). Estos resultados se corresponden con la hipótesis de que el tratamiento sería más éxito entre los pacientes con menos o ninguna actividad de GST.
De acuerdo con Stanulla et al., El riesgo de recurrencia se redujo en los niños con
GSTM1
nula,
GSTT1 nulo y
GSTP1 genotipos GG
en la leucemia linfoblástica aguda [38]. Esto probablemente dio lugar a la reducción o ninguna actividad enzimática. El presente estudio también mostró un resultado similar
i
.
e
. una reducción significativa en la recurrencia entre las mujeres sólo con
GSTM1
genotipo nulo (M1-).
Una asociación de
GSTP1
tanto con resistencia adquirida e intrínseca al cisplatino se observó en células de cáncer de colon humano [39]. pacientes con cáncer de esófago con disminución intratumoral
GSTP1
niveles y aquellos tratados con quimioterapia basada FU /cisplatino mostraron una mejor supervivencia [40]. Sin embargo, McLeod et al., No se encontró una correlación entre el
GSTP1
polimorfismo y la respuesta a la quimioterapia basada en oxaliplatino en el cáncer colorrectal [41] -A313G. El presente estudio demostró que
GSTP1
AG + GG polimorfismo individual no mostraron ninguna asociación con la supervivencia, pero en combinación con
GSTM1
genotipo nulo (M1- /AG + GG) y ambos
GSTM1 Opiniones y cociente de riesgos instantáneos
GSTT1
genotipo nulo (M1- /T1 /AG + GG) demostraron una reducción de lo que significa una mejor supervivencia global.
Conclusión
Nuestro los resultados demostraron que
GST
genotipos se correlacionan con la evolución clínica de los pacientes tratados con TRC cáncer de cuello uterino. Los resultados de diferencias interindividuales en el diferencial de la actividad de GST enzimas que tienen tanto impacto en el resultado del tratamiento. Sin embargo, la variabilidad genética en
GST
polimorfismos entre individuos pueden ser estudiados en poblaciones de pacientes más grandes con el fin de desarrollar regímenes terapéuticos útiles.
Reconocimientos
Agradecemos al Consejo de la Ciencia y Tecnología-Uttar Pradesh (CST-UP) y el Centro de Excelencia (Educación Superior) ARRIBA Gobierno, Lucknow, India.; Consejo Indio de Investigación Médica (ICMR) y el Departamento de Ciencia y Tecnología (DST), Nueva Delhi, India, por su apoyo financiero. M. A. agradece a ICMR para la beca de investigación.