Extracto
glyoxalase 1 es una enzima de eliminación de potentes precursores en la formación de especies reactivas de oxígeno y está implicado en la aparición y la progresión de tumores malignos humanos. Glyoxalase I A111E polimorfismo se ha sugerido para influir en su actividad enzimática. El presente estudio tiene por objeto investigar la asociación de este polimorfismo con el estrés oxidativo y sus implicaciones en la progresión del cáncer de próstata o la supervivencia. El polimorfismo se genotipo en líneas celulares de cáncer de próstata de manera diferente agresivos e invasivos humanos, en el cáncer de próstata o 571 588 pacientes hiperplasia prostática benigna, y 580 sujetos sanos de Cadena de la Polimerasa Polimorfismo de Reacción /Fragmentos de Restricción. Glyoxalase 1 actividad, relacionada con el 1 pro-oxidante glyoxalase Argpyrimidine y los biomarcadores de estrés oxidativo se evaluaron mediante análisis bioquímicos. Glyoxalase 1 polimorfismo se asoció con un aumento de la pro-oxidante relacionadas con 1 glyoxalase Argpyrimidine y los niveles de estrés oxidativo y la progresión del cáncer. El mutante alelo confiere un modesto riesgo de cáncer de próstata, un riesgo notable de la progresión del cáncer de próstata y un tiempo de supervivencia más baja, en comparación con el alelo C salvaje. Los resultados de nuestro estudio exploratorio señalan un papel significativo para glyoxalase 1 en la progresión del cáncer de próstata, proporcionando un candidato adicional para la evaluación del riesgo en pacientes con cáncer de próstata y un factor pronóstico independiente de supervivencia. Por último, nos presentó pruebas de la plausibilidad biológica de glyoxalase 1 polimorfismo, ya sea solo o en combinación con otros, todos ellos relacionados con el control del estrés oxidativo que representa un evento clave en el desarrollo y la progresión del CaP
Visto:. Antognelli C , Mezzasoma L, E Mearini, Talesa VN (2013) glyoxalase 1-419C & gt; Una variante es asociada con el estrés oxidativo: Implicaciones en la progresión del cáncer de próstata. PLoS ONE 8 (9): e74014. doi: 10.1371 /journal.pone.0074014
Editor: Rui Medeiros, IPO, Inst Puerto Oncología, Portugal
Recibido: 24 Abril, 2013; Aceptado: July 26, 2013; Publicado: 10 Septiembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Antognelli et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. No hay corriente fuentes externas de financiación para este estudio
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
glyoxalase 1 (GLO1) es una enzima dependiente de glutatión involucrados en el barrido de metilglioxal (MG), un potente citotóxico α-oxoaldehyde, con una fuerte capacidad para reticular con grupos amino de proteínas, que forman productos estables llamados productos finales de glicación avanzada (AGE) [1], [2]. Entre ellos, argpyrimidine (AP) representa uno de los principales productos que derivan de las modificaciones de las proteínas MG arginina residuos [3], [4]. Tanto MG y AGE son precursores eficaces de especies reactivas del oxígeno (ROS) y los radicales libres [5], [6], fuertemente implicados en la progresión del cáncer, incluyendo el cáncer de próstata (CaP) [7] - [10]. Un polimorfismo de un solo nucleótido (SNP), -419C & gt; A (rs2736654), causando una sustitución Ala111Glu (A111E), ha sido identificado en el exón 4 de GLO1 de genes [11] y se asocia con una disminución de la actividad enzimática GLO1 [11] - [ ,,,0],13]. GLO1 polimorfismo A111E se ha estudiado en algunos trastornos humanos [11], [14] - [17], incluyendo el cáncer [18], [19], sin embargo, a lo mejor de nuestro conocimiento, su papel en el CaP nunca se ha investigado antes . En el presente estudio, la hipótesis de que el polimorfismo GLO1, ligado a una disminución de la actividad enzimática GLO1, y, en consecuencia, a una acumulación de relacionados con GLO1 pro-oxidativo AP, podría estar asociado con la inducción de estrés oxidativo, contando así como un nuevo mecanismo en la progresión del CaP. Para este polimorfismo objetivo GLO1, AP y los biomarcadores de estrés oxidativo (ROS, glutatión reducido, GSH, malonyldialdheyde, MDA) [20] niveles fueron, en primer lugar, estudió en las líneas celulares de cáncer de LNCaP y de próstata PC3 diferente agresivos e invasivos humanos, en segundo lugar, en la orina sedimentos [21], [22] y la sangre de los hombres hiperplasia benigna de próstata (HBP) y el CP, o sujetos de la misma edad varones sanos. Dado que nuestros resultados iniciales indicaron un papel para GLO1 en la progresión del CaP, proporcionando un fondo biológico a la posible asociación del polimorfismo GLO1 A111E con CaP, que, además, examinamos su asociación con la progresión, evaluada por etapa y el grado. También se realizó un estudio sobre la asociación de GLO1 polimorfismo y el riesgo de CaP y la supervivencia en subgrupos seleccionados. Además, la evidencia de que el CP tiene un importante componente genético es convincente a partir de estudios epidemiológicos, genéticos de asociación y de todo el genoma [23] - [26]. Algunas variantes de genes de riesgo han sido identificados, que pueden predisponer a los portadores al desarrollo y la progresión de dicha enfermedad [24]; sin embargo, se han obtenido resultados contradictorios. Por lo tanto, se necesita con urgencia el estudio de otros genes polimórficos. Afianzar el conocimiento de cómo los factores genéticos influyen en la progresión del CaP puede mejorar el manejo clínico de este tipo de neoplasia en todo el mundo. Por último, ya que creemos que solo variantes alélicas sí mismos no son suficientes para predecir, en muchos casos, la predisposición al riesgo de PCa, se evaluó GLO1 polimorfismo A111E en combinación con otros genes polimórficos relacionados con el control del estrés oxidativo, que anteriormente nos pareció estar asociada con el riesgo de CaP en un estudio de caso /control [27], cuya HBP y CaP cohortes ha sido aquí incluido en las nuevas poblaciones agrandados. Además, el análisis se llevó a cabo en sujetos de la misma edad varones sanos
.
Los resultados de nuestro estudio exploratorio punto a cabo un papel importante en la progresión de GLO1 CaP, proporcionando un candidato adicional para la evaluación del riesgo en pacientes con CaP y una factor pronóstico independiente de supervivencia.
Materiales y Métodos
líneas celulares
cáncer de próstata humano LNCaP y PC3 líneas celulares se obtuvieron de la American Type Culture Collection (ATCC) y un mantenimiento rutinario, a 37 ° C en 5% de CO
2 en RPMI 1640 suplementado con 10% inactivado por calor FBS, 1X L-glutamina, piruvato de sodio 1 mM, aminoácidos no esenciales 1X, 100 unidades /ml de penicilina y 0,1 mg /ml de estreptomicina (Invitrogen).
Los pacientes
Un total de 1739 hombres italianos de raza blanca se inscribieron en este estudio. De ellos, 1423 (PCA, BPH, los hombres sanos) se inscribieron entre abril de 1999 y junio de 2005, del Departamento de Urología (Universidad de Perugia, Perugia, Italia), 316 (hombres sanos) fueron reclutados entre julio de 2005 y junio de 2013, desde la mismo Departamento. El grupo de casos consistió en 571 pacientes no tratados previamente con CaP histológicamente verificado, diagnosticado por biopsia guiada por ecografía transrectal. La indicación de biopsia de próstata o era un hallazgo sospechoso en el examen rectal digital o los niveles séricos elevados de antígeno prostático específico (PSA), o ambos. La enfermedad se clasifica de acuerdo con los criterios de la Organización Mundial de la Salud y por etapas de acuerdo a la clasificación del tumor nodo metástasis (TNM) y el sistema de clasificación de Gleason (puntuación de Gleason). En particular, se estratificó el análisis en función del estadio tumoral (localizado: T1 /T2; localmente avanzado: T3 /T4) y el grado histológico (de bajo grado: Gleason 2-6 o bien diferenciados; grado moderado: Gleason 7 o moderadamente diferenciado; alta grado: Gleason 8-10 o pobremente diferenciados), de acuerdo con la patológica y /o informes radiológicos. La evidencia sugiere que los tumores de próstata designados como puntuación de Gleason de 7 difieren con toda claridad en cuanto al pronóstico de los tumores con una puntuación de Gleason de 3 + 4 = 7 considerados menos agresivos que los tumores con una puntuación de Gleason de 4 + 3 = 7 [28], [29]. Dado que, en los análisis preliminares, no encontramos ninguna diferencia significativa en asociación GLO1 SNP entre los 3 + 4 + 3 o 4 grados tumorales, decidimos para reunirlos en un solo grupo (puntuación de Gleason 7). El grupo control consistió en 588 individuos por edad, según origen étnico y geográfico emparejados con HPB, cuyo diagnóstico se basó en los síntomas del tracto urinario inferior, flujometría libre, evidencia de aumento de tamaño de la próstata (obtenido mediante palpación o ecografía transrectal) y en los que el presencia de CaP fue excluido cuidadosamente y clínicamente, histológicamente (biopsias negativas para PSA & gt; 4 ng /ml, sin enfermedad T1a-T1b). Para la comparación, un grupo de hombres sanos, incluyendo individuos por edad, según origen étnico y geográficamente emparejados, no sufre de ninguna enfermedad prostática, se incluyó en el estudio. Las tasas de participación fue del 98%, 95% y 96% para el CaP, HPB y hombres sanos, respectivamente. Todas las personas que aceptaron participar en el estudio fueron evaluados con un cuestionario detallado, que resultó información sobre el estilo de vida y antecedentes familiares de cáncer.
Declaración de Ética
Todos los sujetos dieron su consentimiento informado por escrito para el estudio, que fue aprobado por el Comité de Bioética de la Universidad de Perugia, de acuerdo con los principios establecidos en la Declaración de Helsinki
GLO1-419C & gt;. Un polimorfismo Genotipado
ADN a partir de sangre periférica leucocitos se extrajo con la NucleoSpin® Blood Kit puro rápido (Macherey-Nagel). GLO1-419C & gt; Una detección de SNP se basó en el análisis de reacción en cadena de polimerasa-polimorfismo de longitud de fragmentos (RFLP-PCR) como se describe anteriormente [18], después de la amplificación por PCR. Todos los genotipos se llevó a cabo por personal de laboratorio estaban cegados al estado de casos y controles de las muestras, que incluían muestras de control de calidad para la validación. La concordancia de las muestras de control de calidad fue del 100%.
relacionada con el control del estrés oxidativo polimorfismos genéticos Genotipado
polimorfismos de nucleótido único (SNPs) de los genes relacionados con el control del estrés oxidativo glutatión S-transferasa 1 (GSTP1 Ile & gt; Val), la paraoxonasa 1 (PON1-192Q & gt; R, PON1-55 L & gt; M) y 17 del citocromo P450 (CYP17A1 & gt; A2) se detectaron como se describe por Antognelli et al. [27].
Colección de muestras de orina después de masaje de la próstata
La recogida de muestras de orina se realizó tal como se describe anteriormente [21], [22].
Colección de suero, plasmáticas y linfocitos de muestras de sangre
el suero, plasma y linfocitos fueron obtenidos a partir de muestras de sangre tomadas antes de la palpación rectal, para excluir la posibilidad de influir en los resultados debido a la manipulación de la próstata. El suero y el plasma se obtuvieron de acuerdo con protocolos estándar y se utilizan para GLO1 o mediciones de MDA y GSH, respectivamente. Los linfocitos fueron aislados en medio de separación LymphoprepTM (Axis-Shield, Oslo, Noruega) [30] y se utilizan para la detección de ROS.
GLO1 Actividad enzimática específica
Preparación de extractos de líneas celulares y enzimáticos GLO1 actividad específica estaban de acuerdo con Antognelli et al. [31] y Mannervik et al. [32], respectivamente. estimación GLO1 suero se realizó como se describe por Chavan et al. [33].
Western Blot
extracción de proteínas de células enteras y de transferencia de Western se realizaron como se describe anteriormente [31], [34]. Una dilución apropiada de ratón anti-MG-AGE (Arg-pirimidina, AP) mAb se usaron (anticuerpos en línea, GmbH) y anti-beta-actina mAb (Santa Cruz Biotechnology). medición de AP en plasma se realizó según Raj et al. [35].
medición de biomarcadores de estrés oxidativo (ROS, GSH y MDA) guía
ROS y GSH se detectaron de acuerdo con Szabados et al. [36] o Guzel et al [37], respectivamente. MDA se midió utilizando OxiSelect ™ Kit de ensayo TBARS (MDA cuantificación) (Cell Biolabs).
Análisis estadístico
El análisis de los datos se realizó con el programa SPSS 11.0 para Windows. Análisis descriptivo incluyó la determinación de la desviación estándar (SD), así como la prueba t de Student. los niveles séricos Glo1 fueron log-transformados como los subgrupos (localizadas, localmente avanzado o intermedio bajo y alto grado,) no estaban mostrando la distribución normal de los datos de acuerdo con la prueba de muestra 1-KS. Distribución de metabolitos fue normal en cada uno de los subgrupos mencionados anteriormente. Se utilizó la χ
2 test para comparar las frecuencias de genotipo /alelos entre casos y controles con CaP BPH o sujetos sanos. Odds ratio (OR) se calculó para estimar el riesgo relativo de CaP mediante análisis de regresión logística incondicional y ajustado para potenciales factores de modificación, incluyendo la edad (continua) y el antígeno prostático específico (PSA, continua). Las frecuencias alélicas se calcularon mediante recuento directa de genes. χ
2 se utilizó la prueba para las pruebas de equilibrio de Hardy-Weinberg (HWE). GLO1 SNP se puso a prueba los posibles efectos sobre los rasgos relacionados con el control del estrés oxidativo mediante análisis de regresión lineal bajo un modelo aditivo, la incorporación de covariables de edad y PSA. Se utilizó el análisis de supervivencia de los casos de CaP seleccionados para probar el posible efecto de los genotipos en el riesgo de morir de CaP. Para este propósito se construyeron curvas de supervivencia mediante el método de Kaplan-Meier, y las diferencias entre los grupos fueron evaluados por el método de log-rank. El análisis multivariado de los factores pronósticos probables para la supervivencia se realizó mediante análisis de regresión de riesgos proporcionales de Cox. Los cocientes de riesgo relativo (RR) con intervalos de confianza del 95% fueron evaluados de ajustar por potenciales variables de confusión, por lo que considera si han cambiado las horas de cualquiera de las variantes genéticas en al menos un 5%. El tiempo de supervivencia se calculó a partir de la fecha de diagnóstico de CaP a la fecha de la muerte CaP específicos, recogidos de las bases de datos del Registro de Cáncer Regional de 2010. El ajuste para múltiples pruebas se ha realizado mediante métodos basados en la permutación [38], [39]. Para todos los resultados, un valor de p inferior a 0,05 se consideró estadísticamente significativa.
Resultados
Características de los CaP Los casos y controles sanos o BPH
Las principales características de CaP casos y controles sanos o BPH se presentan en la Tabla 1. Los casos y los controles parecían estar bien pareados por edad, índice de masa corporal (IMC), beber o fumar estado y la actividad física (p & gt; 0,05). Los niveles de PSA en suero fueron significativamente mayores en comparación con el CP o HPB hombres sanos (p & lt; 0,0001). Cuando se estratificó según el estadio clínico, el 52,0% y el 48,0% de los pacientes habían localizado (T1 /T2) y la enfermedad localmente avanzado (T3 /T4), respectivamente. Cuando se estratificó según el grado del tumor (puntuación de Gleason), 44,7%, 28,2% y 27,1% de los pacientes tenían bajo (2-6), moderada (7) y alta (8-10) enfermedad de grado, respectivamente.
Asociación de GLO1 polimorfismo con el estrés oxidativo y la progresión del CaP
con el fin de estudiar la asociación del polimorfismo GLO1 A111E con el estrés oxidativo, que, en primer lugar, estudiaron Glo1 genotipos y la actividad específica enzimática en dos diferente agresiva y líneas celulares de cáncer de próstata humano invasoras. Se encontró que las células LNCaP poco agresivos, menos invasivas y andrógeno-dependientes eran homocigóticos para el alelo C (Figura 1A) y tenían significativamente una actividad enzimática específica GLO1 (p & lt; 0,03) más alto (media ± DE, 1,47 ± 0,025 mmol /min /mg proteína) que las células PC3 altamente agresivos, más invasivos y andrógenos insensible (media ± SD, 0,84 ± 0,01 mol /min /mg de proteína), omozygous para un alelo (Figura 1A). Dado que se requiere GLO1 para la MG desintoxicación es decir, intracelularmente, transforman rápidamente en AGE [1], que luego analizaron los niveles intracelulares de AP, la mayor edad derivada de la aducción MG espontánea de residuos de arginina [3], [4], [40] , encontrando que en las células PC3, que alberga la isoforma Ala de GLO1, que fueron significativamente (p & lt; 0,001) duplicado en comparación con las células LNCaP, que expresan la isoforma Glu (Figura 1B). Finalmente, puesto que AP se ha demostrado que es un precursor eficaz de ROS y la producción de radicales libres [5], [6], [41], se analizaron los niveles intracelulares de biomarcadores de estrés oxidativo, la búsqueda de un aumento significativo de MDA y ROS o disminución en los niveles de GSH intracelular en células PC3 en comparación con LNCaP (Figura 1C). Puesto que éstos
in vitro
resultados parecen apoyar la posible asociación del polimorfismo GLO1 con la progresión, hemos realizado mediciones de los mismos parámetros en muestras de sangre y las células de los sedimentos de orina de pacientes con localizado y localmente avanzado o bajo, intermedio y CaP de alto grado. actividad GLO1, índices de AP y de estrés oxidativo, tanto en la sangre o células de los sedimentos de orina, fueron significativamente diferentes entre los pacientes con CaP estratificados por estadio y grado, llevando CC, CA y genotipos AA de GLO1 polimorfismo (todos p & lt; 0,05) (Tabla 2) , que refleja la tendencia obtenida en las líneas celulares de diferente agresivos estudiados
(a) GLO1 -419C & gt;. Un tipo salvaje homocigotos (CC) LNCaP y células PC3 de tipo mutante homocigótico (AA); (B) Argpyrimidine (AP) niveles intracelulares y análisis densitométrico de la detección de Western blot. Western blot se obtuvo mediante el uso de un ratón mAb anti-AP. La mancha fue despojado de la cota Ab y re-probaron con el ratón anti-β-actina, para confirmar la igualdad de carga. El Western blot se muestra es representativa de tres experimentos separados. (C) las especies reactivas de oxígeno (ROS), malondialdehído (MDA) y los niveles intracelulares de glutatión reducido (GSH). Histogramas indican medios ± desviación estándar de tres culturas diferentes cada uno de uno se puso a prueba por cuadruplicado y se expresa como factor de cambio ** P & lt;. 0,001, ** P & lt;. 0.001
GLO1 polimorfismo y PCA la progresión
la Tabla 3 presenta los efectos de GLO1 polimorfismo en la progresión de CaP evaluados por el estadio clínico y el grado histológico. Las personas que presenten al menos un alelo variante (CA + AA) tenían un riesgo moderadamente más alto de desarrollar CaP localizado (OR = 1,57, IC del 95% = 1.17 a 2.11, p = 0,002), mientras que se encontró una fuerte asociación con CaP localmente avanzado etapa (OR = 8,97, IC del 95% = 5,77 a 14,02, p & lt; 0,0001), en comparación con los individuos con el genotipo CC. Del mismo modo, las personas que presenten al menos un alelo variante A (CA + AA) tenían un riesgo moderadamente más alto de desarrollar CaP de bajo grado (OR = 1,46, IC del 95% = 1,07 a 1,98, p = 0,013), mientras que una fuerte asociación se encontró con moderada y alto grado CaP (OR = 7,20, IC del 95% = 4.28 a 12.20, p & lt; 0,0001 y OR = 10,28; IC del 95% = 5,64 a 19,05, p & lt; 0,0001, respectivamente)., en comparación con los individuos con el genotipo CC
GLO1 polimorfismo y CaP de riesgo
Un estudio sobre la asociación de GLO1 polimorfismo y el riesgo de CaP fue también performed.The frecuencias alélicas y genotípicas de GLO1 -419C & gt; Un polimorfismo en los casos de CaP y HPB o controles sanos se muestran en la Tabla 4. Las frecuencias genotípicas en pacientes con HBP y CaP o todos los hombres sanos se ajustaban a HWE (p & gt; 0,05). Se encontró que la prevalencia del genotipo de tipo CC salvaje fue menor en el CP (43,3%) que en la HPB (50,5%) o de hombres sanos (52,2%) de la población, y que la frecuencia de CA genotipo fue mayor entre la PCA (46,2% ) que entre la HPB (41,7%) o los hombres sanos (40,7% del grupo). La prevalencia del genotipo AA mutante fue mayor entre la PCA (10,5%) en comparación con la HPB (7,8%) o los hombres sanos (7,1%) del grupo. La diferencia en la distribución de frecuencias de los alelos A y C entre los pacientes con CaP y de BPH o los hombres sanos también fue significativa (p = 0,010). Varios estudios informaron que las frecuencias de la mutante alelo A en diferentes poblaciones normales en todo el mundo mostraron valores entre 27,2% y 51,7% [11], [17], [18], [42], [43]. Nuestros resultados en una frecuencia de alelos en los grupos de BPH o hombres sanos fueron también en el rango informado. Dado que no se observaron diferencias significativas entre los hombres sanos y BPH, HPB fue elegido como el grupo de referencia. Los individuos con genotipos AA y CA tenían una mayor susceptibilidad marginal pero significativa de CaP ocurrencia, en comparación con los individuos con el genotipo CC (OR = 1,34, IC del 95% = 1,06 a 1,70, p = 0,013, OR = 1,57, IC del 95% = 1,01 -2,44, p = 0,035, respectivamente). Por otra parte, la variante alelo A también se asoció con un modesto incremento significativo del riesgo de CaP, en comparación con el alelo C (OR = 1,26, IC del 95% = 1,05 a 1,51, p = 0,010).
GLO1 polimorfismo y PCA supervivencia en subgrupos seleccionados por estadio y grado del tumor
Dado que un porcentaje significativo de pacientes con localizado (60,6%, Tabla 3) o de bajo grado (58,8%, Tabla 3) CP contenían el alelo de riesgo , la hipótesis de que en estos grupos, los pacientes portadores de la variante alelo a podrían estar en un riesgo más alto de una progresión del tumor después, en comparación con los pacientes portadores de la CC. Cuando se utilizaron el log-rank y el análisis de regresión de Cox para evaluar las asociaciones entre el polimorfismo GLO1 y el tiempo de supervivencia, los individuos con los genotipos CA /AA mostraron un tiempo de supervivencia más baja que los individuos con el genotipo CC en ambos subgrupos de grado localizadas o bajas ( Tabla 5, Figura 2).
los individuos con los genotipos variante CA /AA mostraron significativamente más bajas tasas de supervivencia que los individuos con el genotipo CC en tanto localizada (a) o de bajo grado (B) subgrupos.
Además, el análisis multivariante utilizado para delinear los factores pronósticos importantes para la supervivencia, mostraron en ambos subgrupos que el riesgo alelo a es un factor pronóstico independiente de supervivencia después del ajuste por edad y PSA (CaP localizado: ajustado HR = 2,48 IC del 95%: 1,91 a 3,19; CaP de bajo grado:. ajustado RR de 2,35, 95%: 1,79 a 3,08) (Tabla 5)
Combinación de GLO1, GSTP1, PON1-192 , PON-1 5, CYP17 polimorfismos como factor predictivo de CaP y asociación con el estrés oxidativo
en un estudio de caso /control cuyo cohortes ahora se ha incluido en las presentes poblaciones agrandados, hemos encontrado previamente que los polimorfismos en oxidative- relacionadas con el control de la tensión GSTP1, PON1-192, PON-1 55 y CYP17 genes estaban asociados con el riesgo de CaP. En ese trabajo, ninguna asociación de los mismos polimorfismos de genes se encontró con la progresión tumoral o la supervivencia [27]. En este sentido, en primer lugar, confirmó los resultados observados previamente integrándolos con una comparación con un grupo de hombres sanos (Tabla 6). En segundo lugar, ya que creemos que la combinación de más polimorfismos en cada caso individual, con respecto a una sola, puede ser un factor más predictivo para la asociación con el riesgo de CaP, se evaluó una combinación de este tipo, incluyendo también GLO1 polimorfismo. La Tabla 7 muestra que la detección de la GSTP1Ile /Ile-PON1 /192RR-PON1 /55LL-CYP17A2A2-GLO1CC o GSTP1Ile /Ile-PON1 /192QQ-PON1 /55LM-CYP17A1A2-GLO1CA o GSTP1Ile /Val-PON1 /192QR-PON1 /55MM-CYP17A1A1-GLO1AA genotipo combinación a nivel individual, podría conducir a la identificación de los pacientes con bajo, intermedio y alto riesgo de CaP, respectivamente. No se observó asociación del bajo, intermedio y alto riesgo genotipos con los niveles de ROS, GSH y MDA biomarcadores de estrés oxidativo en la sangre y las células de los sedimentos de orina (Tabla 7) guía empresas
comparaciones múltiples
comparaciones múltiples eran necesarios antes de que una declaración definitiva en general acerca de la importancia de nuestros hallazgos podrían ser hecha. Todos los resultados, excepto los relativos a la asociación de GLO1 polimorfismo con el riesgo de CaP, resistieron a la corrección de múltiples ensayos (p & lt; 0,05).
Discusión
En el presente estudio se evaluó, por primera vez a nuestro entender, la asociación entre GLO1 -419C & gt; un polimorfismo y los niveles de estrés oxidativo en la progresión del CaP
de hecho, como se sugirió anteriormente, la a a la e sustitución debido a GLO1 SNP puede determinar una modificación conformacional en el. enzima, que conduce a una isoenzima con una capacidad inferior desintoxicación [11] - [13]. Como es bien conocido, GLO1 es una defensa eficiente antiglicación que disminuye la concentración de compuestos de carbonilo reactivos, tales como MG, uno de los más potentes precursores de AGEs relacionados con el estrés carbonilo [1]. En consecuencia, una disminución en la actividad de esta enzima puede resultar en una acumulación de AGEs y, a su vez, de ROS y los radicales libres en células de CaP humanos. De hecho, los AGE, derivados de MG tan conocidos son también muy eficaces moléculas pro-oxidantes [5], [6] que contribuyen importantemente oxidativo aparición de estrés, un acontecimiento clave en la patogénesis y la progresión del CaP [7]. De hecho, la acumulación de AP, uno de los más abundantes AGEs MG derivados de [3], [4], se ha encontrado en el presente estudio, ya sea en los modelos de líneas celulares de diferente agresivos e invasivos CaP, o en fluidos biológicos de pacientes con diferente agresivo e invasivo CaP, donde tal acumulación bien adaptado la presencia de una enzima GLO1 menos en funcionamiento, así como una condición importante de estrés oxidativo. Por otra parte, inducida por MG aducción postraduccional de proteínas diana seleccionados [44], [45] está emergiendo rápidamente como un nuevo mecanismo de la supervivencia de células de cáncer de señalización, una condición típicamente asociados con la progresión del cáncer. Nuestros resultados también se correlacionan con los de Hermani et al. que demostró que la expresión de la forma soluble del receptor de AGE (sRAGE), que refleja con sensibilidad AGEs carga [42], se ha mejorado y fuertemente asociada con la progresión de los carcinomas de próstata [46]. Además, la interacción RAGE-AGE desencadena la activación de un múltiples vías de señalización integralmente vinculados a la tumorigénesis [47] y esencial para el desarrollo del CaP [48] y la progresión [49]. Los resultados sobre el papel de GLO1 polimorfismo con el estrés oxidativo en LNCaP y las líneas celulares PC3, y, sobre todo, en las muestras biológicas de pacientes con CaP en diferente grado y el estadiaje, sugirieron un papel biológico importante de dicha enzima y su polimorfismo a la asociación con la progresión de CaP. Por lo tanto, era razonable esperar que la presencia de una forma menor actividad de la GLO1- GLO1 alelo A - podría ser predictivo sobre graves consecuencias para CaP de riesgo de la progresión de un individuo. De hecho, se encontró que el mutante alelo confiere un riesgo de la progresión dramática CaP en comparación con el alelo C silvestre, ya sea cuando los controles de BPH o hombres sanos fueron considerados como grupo de referencia. Menos importante fue la asociación de GLO1 polimorfismo con el riesgo de desarrollo de CaP. De hecho, se encontró que el mutante alelo confiere un modesto riesgo de CaP incidencia en comparación con el alelo C salvaje, de nuevo, ya sea cuando los controles de BPH o hombres sanos fueron considerados como grupo de referencia. Por lo tanto, nuestros resultados sugieren un papel importante para GLO1 en la progresión en lugar de en el desarrollo del CaP. Recientemente, se ha demostrado que también otros SNPs en GLO1 resultado locus a estar asociados con la actividad GLO1 [13]. En el presente estudio exploratorio, se analizó la codificación común GLO1 -419C & gt; Un polimorfismo, en el supuesto razonable de que podría ser más probable y directamente correlacionada con la actividad GLO1. De hecho, se ha descrito que la sustitución de Ala111Glu en GLO1 debido al-419C & gt; A SNP, puede causar cambios conformacionales de la proteína, es muy probable que interfieran con su estructura en 3D y que afectan a la actividad enzimática [14]. Ciertamente, no podemos descartar la posibilidad de que otros SNPs o número de tagSNPs de GLO1 locus, pueden afectar a la actividad enzimática GLO1. Por lo tanto, la selección de SNPs adicional es obligatoria en los estudios futuros, con el fin de evaluar mejor la influencia de las variaciones genéticas en la progresión de CaP.
En cuanto al análisis de supervivencia, se encontró que GLO1 -419 Un alelo se asoció significativamente con una pronóstico desfavorable de supervivencia en pacientes con localizado (T1 /T2) o de bajo grado (GS 2-6) CaP. Por lo tanto, si se confirma por estudios adicionales, este polimorfismo, preferiblemente en combinación con otros, puede ayudar a diferenciar entre los cánceres de próstata clínicamente significativas e indolentes y predecir el curso clínico de primeras etapas CaP. Desafortunadamente, los polimorfismos adicionales estudiados en el presente trabajo, ya sea individualmente o en combinación, no mostraron ninguna asociación significativa con la supervivencia o la progresión del CaP. La combinación fue, sin embargo, importante en la asociación con el riesgo de CaP y se correlacionó positivamente con el estado de estrés oxidativo se muestra por los pacientes que pertenecen a las clases de riesgo específicos, proporcionando así verosimilitud biológica. De hecho, tales genes codifican proteínas relacionadas con el control del estrés oxidativo, siendo capaz de desintoxicar los radicales libres (PON 1 y GSTP1) o reducir sustratos potenciales para su producción (CYP17). De manera similar a GLO1, las variantes polimórficas pueden determinar modificaciones conformacionales que conduce a isoenzimas con una capacidad funcional alterada y, en consecuencia, contribuyen a la aparición de una condición de estrés oxidativo marcado como, de hecho, aquí, señalado por la asociación genética con niveles en sangre o la orina de los índices de estrés oxidativo.
En la actualidad se acepta que los estudios de asociación genética han ayudado a mejorar nuestra comprensión de la patogénesis de los cánceres humanos, incluyendo el CaP. Sin embargo, establecer la utilidad clínica de estos SNPs han demostrado ser un desafío debido principalmente a las dificultades encontradas en la realización de análisis de SNP (falta de reproducibilidad, tamaños de muestra inadecuados, el sesgo de publicación, la dotación genética) [50]. Otro análisis adicional cuestión relativa a SNPs es la plausibilidad biológica de asociación genética. La posibilidad de que las asociaciones significativas, incluso con valores de p bajos impresionantes, son realmente cierto, depende en gran medida de si la asociación es plausible biológica [51]. Nos gustaría hacer hincapié en que el presente trabajo, proporcionando plausibilidad biológica de la asociación de GLO1 polimorfismo con la progresión o la combinación de todos los polimorfismos analizados con el riesgo de CaP, que aparezca una contribución válida para el estudio de las asociaciones genéticas. Desde que se aplica un número significativo de pruebas estadísticas independientes en el estudio, comparaciones múltiples eran necesarias antes se podría hacer una declaración definitiva en general acerca de la importancia de nuestros hallazgos. A excepción de los datos de la ya observada débil asociación de GLO1 polimorfismo con el riesgo de CaP, que no resisten la corrección de múltiples ensayos, por lo que seguramente lo que sugiere una mayor investigación, hemos encontrado evidencia en contra de la hipótesis nula (
p
valor se quedaron siendo significativo. & lt; 0,05 después de la corrección de múltiples ensayos utilizando métodos basados en la permutación) para todos los demás análisis, lo que indica la robustez de los resultados
en conclusión, nuestro estudio señaló un papel importante en la progresión de GLO1 CaP y que el alelo de riesgo GLO1 -419A puede ser un factor pronóstico independiente de supervivencia. Por último, hemos proporcionado evidencia de la plausibilidad biológica de tal polimorfismo, ya sea solo o en combinación con otros, todos ellos relacionados con el control del estrés oxidativo que, como se sabe, representa un acontecimiento clave en el desarrollo y la progresión de CaP. Dado que este es el primer estudio que examina la asociación entre GLO1 -419C & gt; Un polimorfismo y CaP, se requiere investigación adicional
Reconocimientos
Los autores agradecen a la señora Roberta Frosini por la excelente asistencia técnica..