Extracto
El
BRAF oncogén
está mutado en el 15% de los cánceres colorrectales esporádicos. Aproximadamente la mitad de estos
BRAF
cánceres mutantes demuestran mutaciones de cambio de frecuencia denominado inestabilidad microsatélite (MSI), pero son diploides y cromosómicamente estable.
BRAF
cánceres de tipo salvaje son normalmente microsatélites estables (MSS) y en lugar de adquirir la inestabilidad cromosómica (CIN). En estos tipos de cáncer, CIN se asocia con un mal resultado.
BRAF
cánceres mutantes que son MSS, típicamente presentes en una etapa avanzada y que tienen un especial mal pronóstico. Hemos demostrado anteriormente similitudes clínicas y moleculares entre los cánceres del SMS con o sin un
BRAF
mutación, y por lo tanto la hipótesis de que la CIN también puede ser frecuente en
BRAF
cánceres /SMS mutantes.
BRAF mutante
/SMS (n = 60), y
BRAF
tipo salvaje /MSS CRC (n = 90) fueron investigados para CIN usando análisis de pérdida de heterocigosidad más de doce loci que abarcan regiones cromosómicas 5q , 8p, 18q y 17p. CIN era frecuente en
BRAF
cánceres mutantes /SMS (41/57, 72%), lo cual era comparable a la tasa que se encuentra en
BRAF
tipo salvaje /cánceres del SMS (74/90, 82 %). La mayor pérdida en
BRAF
cánceres mutantes /SMS ocurrió en 8p (26/44, 59%) y la menor en 5q (19/49, 39%). CIN en
BRAF mutante
/cánceres del SMS correlacionada con la etapa avanzada (AJCC III /IV: 15/17, 88%; p = 0,02); mostraron altas tasas de co-ocurrencia con la isla CpG methylator fenotipo (17/23, 74%); y CIN en 18q y 8p asociado con una peor supervivencia (p = 0,02, p & lt; 0,05). Este estudio demuestra que el CIN se presenta comúnmente en avanzado
BRAF
mutantes cánceres /SMS colorrectal en las que puede contribuir a una peor supervivencia, y las similitudes moleculares Otras características destacadas se producen entre estos y
BRAF
cánceres de tipo salvaje.
Visto: Bond CE, Umapathy a, Buttenshaw RL, Wockner L, Leggett BA, Whitehall VLJ (2012) la inestabilidad cromosómica en
BRAF mutante
, microsatélites estables cánceres colorrectales. PLoS ONE 7 (10): e47483. doi: 10.1371 /journal.pone.0047483
Editor: William B. Coleman, Universidad de Carolina del Norte Facultad de Medicina, Estados Unidos de América
Recibido: 18 Junio, 2012; Aceptado: 12 de septiembre de 2012; Publicado: 22 Octubre 2012
Copyright: © Bond et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Esta investigación el apoyo de una subvención Nacional de Salud y Consejo de Investigación médica (NHMRC 442.965); Patología de Queensland, en todo el estado clínico y Servicios, Queensland, Australia; y un Premio de Australia de Postgrado (APA). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
cáncer colorrectal esporádico (CRC) es una enfermedad diversa que resulta de la progresión de diferentes tipos de lesiones precursoras que son molecularmente y morfológicamente distintos. Estas lesiones adquieren alteraciones genéticas se asocian con uno de al menos dos vías moleculares reconocidos que conducen a la tumorigénesis. La 'vía tradicional "es la mejor caracterizada y consiste en la progresión de un adenoma de tipo convencional que se pueden adquirir mutación o pérdida de
APC
, la mutación de
KRAS
y
p53
, y la inestabilidad cromosómica antes de la formación de un carcinoma de [1] que es típicamente
BRAF
tipo salvaje. La vía más recientemente descrito 'serrado' implica la progresión de una lesión de sierra para el cáncer [2], [3], [4], [5]. Esto va acompañado de una mutación temprana del
BRAF oncogén
[6], [7], y la adquisición de la isla CpG methylator fenotipo (CIMP) que implica generalizada hipermetilación del promotor y posterior silenciamiento de genes supresores de tumores clave [ ,,,0],8], [9].
BRAF
es un componente integral de la proteína quinasa activada por mitógenos (MAPK) cascada de señalización que promueve la proliferación celular y efectos anti-apoptóticos [10]. El
BRAF
mutación se considera un marcador de la vía serrada y se encuentra en aproximadamente el 10-15% de los CCR [11], incluyendo la mayoría de los que muestran CIMP. Aproximadamente la mitad de estos tipos de cáncer tendrá hipermetilación y el silenciamiento de un gen de reparación de ADN no coinciden,
MLH1
, debido a la CIMP [8], [12]. Esto resulta en múltiples mutaciones dentro de tractos de repetición de ADN, denominado inestabilidad de microsatélites (MSI) [13]. Estos MSI,
BRAF mutado
cánceres han sido previamente descrito como así diploide [14], [15], [16], que se producen con más frecuencia en las mujeres de más edad y el colon proximal, a menudo son mucina producir y pobremente diferenciado [ ,,,0],2], [15], [17], [18]. La otra mitad de la
BRAF
lesiones mutantes de la vía serrada que no tienen metilación de
MLH1
, son microsatélites estables (MSS) [19], [20]. En contraste con los cánceres MSI, éstos no han sido bien caracterizado.
Curiosamente, los dos
BRAF
subgrupos mutantes que difieren en el estado de inestabilidad de microsatélites, confieren significativamente contraste pronósticos. Mientras que
BRAF mutante
/MSI cánceres se correlacionan con un excelente resultado para el paciente,
BRAF
mutantes cánceres /SMS están asociados con un resultado muy pobre que es aún peor que el
BRAF
de tipo salvaje /SMS cánceres que surgen a través de la 'vía tradicional "[20], [21], [22]. Los mecanismos moleculares que subyacen a esta disparidad son desconocidos
Dos formas distintas de la inestabilidad genómica se sabe que ocurren en el CRC:. MSI y la inestabilidad cromosómica (CIN) [23], [24]. MSI afecta a la integridad genómica a nivel de ADN y se desarrolla en la transición de pólipos /carcinoma de
BRAF
pólipos serrados mutantes que el silencio
MLH1 fotos: por la metilación del ADN a través del fenotipo CIMP [13], [25] . Alternativamente, CIN que afecta aproximadamente al 70% de CRC [18], actúa en una escala genómica más amplio ya que se refiere a las pérdidas y /o ganancias de regiones enteras o parte cromosómicas, y se ha asociado con una peor supervivencia [16], [26] , [27], [28]. CIN se desarrolla en los adenomas convencionales que son
BRAF
tipo salvaje y el progreso hacia la malignidad a través de la 'vía tradicional ". La pérdida de heterocigosidad (LOH), que describe ya sea pérdida o reducción de uno de los dos alelos de los padres en una localización cromosómica en particular, indica la presencia de CIN. Las regiones cromosómicas 18q, 17p, 5q, y 8p, que albergan genes clave supresores de tumores, se han encontrado para mostrar extensa LOH en el CCR [1], [23].
No está claro si
BRAF
pólipos serrados mutantes que se vuelven malignas pero no metilan
MLH1 Opiniones y no desarrollan MSI, la inestabilidad cromosómica manifiesto. Por ejemplo, algunos estudios recientes han sugerido que CIMP y CIN son mutuamente excluyentes [29], [30]. Si bien esto es concordante con la naturaleza diploide de
BRAF mutante
/MSI cánceres vía serrada con CIMP que progresan a través de una alta tasa de mutación, no explica cómo
BRAF mutante
/SMS serrado cánceres de las vías el progreso y sobre todo el hecho de que su pronóstico es particularmente pobre [16], [29], [30], [31], [32].
la hipótesis de que a pesar de CIN puede ser mutuamente excluyentes con MSI, se no es mutuamente excluyente con CIMP y pueden ser comunes en
BRAF
cánceres mutantes /SMS. cánceres MSI han sido excluidos para el análisis de LOH en esta y en estudios previos debido a los bajos niveles documentados de CIN encontrados previamente, y debido a que el grado de inestabilidad en microsatélites marcadores presentes en los cánceres de MSI no permitir la evaluación informativa [26], [30] , [31], [32].
Materiales y Métodos
Ética Declaración
escrito, el consentimiento informado se obtuvo de cada paciente involucrado en este estudio. Esta investigación fue aprobado por el Real Brisbane y el Hospital de Mujeres y de los Comités de Ética de Investigación Humanos Bancroft.
muestras de pacientes
1052 esporádicos CRC y pareados muestras de mucosa normal se obtuvieron después de la extirpación quirúrgica en el Royal Brisbane y hospital de la mujer (RBWH), Queensland, Australia. Los datos clínicos, incluyendo la edad del paciente de inicio y de género, localización anatómica del cáncer, la etapa del cáncer y los resultados del paciente se recogieron en lo posible a partir de la revisión de historias clínicas, informes de patología o de la Secretaría de la muerte de Queensland. localización anatómica se especificó como sea proximal (proximal al ángulo esplénico) o distal. la etapa del cáncer se clasifica de acuerdo con tanto el Comité Conjunto sobre el Cáncer (AJCC) y metástasis en los ganglios tumorales (TNM) sistemas de clasificación [33].
estado de MSI, CIMP, BRAF, KRAS y la mutación de p53 detección.
las muestras habían sido previamente investigados por MSI acuerdo con el panel 5 en el marcador del Instituto Nacional del cáncer que consiste en dos marcadores mononucleótidos, BAT25, BAT26; y tres marcadores dinucleótidos, D5S346, D2S123 y D17S250 [34]. MSI fue clasificado si al menos uno de los marcadores mononucleótidos y al menos un otro marcador (ya sea mononucleótido o dinucleótido) fue positiva [34], [35]. CIMP fue investigado previamente usando MethyLight con un panel de cinco marcadores que consiste en CACNA1G, IGF-2, Neurog1, RUNX3, SOCS1 [36], [37] _ENREF_35_ENREF_35. Los cánceres se consideraron CIMP positivo si se metilado 3 o más marcadores. Todas las muestras habían sido seleccionadas para la mutación
BRAF V600E
(a1796t) utilizando un ensayo de discriminación alélica, y
KRAS
mutaciones en los codones 12 y 13 utilizan la tecnología Sequenom MassARRAY [37]. La incidencia de
p53
mutación en todos los exones 4 a 8 ha sido previamente informado de todos los cánceres incluidos en este estudio [37].
La pérdida de heterocigosidad Análisis
inestabilidad cromosómica ( CIN) se evaluó mediante el análisis de pérdida de heterocigosidad (LOH) durante un total de 12 loci que cubren 4 regiones cromosómicas conocidos por albergar genes clave supresores de tumores implicados en CRC. Estos se centraron sobre 5q22.2 (que contiene el
APC
gen); 8p22 (vinculado a una región supresor CRC); 17p13.1 (que abarca el
p53
locus), y 18q (por
SMAD2
,
SMAD4
y
DCC
loci). Tres marcadores se investigaron más de cada una de las cuatro regiones (5q: D5S346, D5S1466, D5S489; 8p: D8S258, D8S254, D8S1121; 17p: 17S261, 17S578, D17S926; y 18q: D18S55, D18S460, D18S487). Las secuencias de cebador para cada uno de los marcadores se obtuvieron de la página web Ensembl (http://www.ensembl.org/index.html). (Para los detalles de las reacciones de PCR LOH consulte la Tabla 1 en datos suplementarios S1). Emparejados normal y productos de PCR se sometieron a electroforesis cáncer en un gel de poliacrilamida al 5% y se observan radiológicamente.
LOH en loci individuales se anotó si uno de los dos alelos de la muestra de cáncer tenían al menos una reducción del 40% en intensidad en comparación con su muestra normal emparejado. Un marcador polimórfico donde los dos alelos de los padres fueron capaces de ser visualizado se consideró informativo. Se observó que la medida total de NC durante los 12 loci, y se le asignó CIN positividad (CIN) si se observó al menos 1 marcador informativo con LOH. CIN negatividad se anotó si al menos el 40% (5 de 12) de los marcadores fueron informativas, y ninguno de ellos ha demostrado LOH. Para el análisis de CIN en regiones individuales, se observaron los 3 loci y se calificó como CIN si al menos uno de ellos mostró LOH, y negativo si CIN 2 de los 3 loci fueron informativas y tampoco demostró LOH.
La pérdida alélica fraccional (FAL) ha sido previamente descrito [38]. Este enfoque se utilizó como un nuevo análisis de la presencia de CIN, donde el número total de eventos de pérdida alélica se dividió por el número total de marcadores informativos por muestra y por cohorte. Se utilizó este para verificar la tasa global de pérdida alélica, y las correlaciones con FAL y la etapa en la presentación, la ubicación del cáncer y de género, y las características moleculares de
p53
y
KRAS
mutación, y estábamos CIMP determinada
Análisis estadístico
relaciones significativas entre los datos categóricos se evaluaron utilizando la prueba exacta de Fisher. (SPSS versión 19; GraphPad software). Las diferencias en los datos continuos se evaluaron mediante pruebas t. modelos de riesgos proporcionales de Cox se utilizaron para investigar los efectos de varios factores sobre la tasa de supervivencia en que se tomó la muerte por cáncer a ser el evento de interés. Se utilizó una prueba de log rank para evaluar la equivalencia de las distribuciones en su caso. P-valores ≤0.05 se consideró significativo.
Resultados
mutación BRAF en los cánceres colorrectales MSS
De 1052 cánceres, 128 (12,2%) tenían un
mutación. Fuera de estos
BRAF
mutantes, 60 (4.7%) fueron SMS (
BRAF
mut /MSS) y formaron la cohorte experimental. Esto se comparó con una cohorte de control seleccionada al azar de 90 MSS,
BRAF
cánceres de tipo salvaje (
BRAF
peso /MSS).
BRAF
mut /SMS cánceres fueron predominantemente localizados en el colon proximal (33/48, 69%) en comparación con el
BRAF
peso /cánceres del SMS (25/82, 30,5%) (p & lt ; 0,0001). Estos proximal,
BRAF
/cánceres del SMS mut surgieron con mayor frecuencia en mujeres (22/33, 66,7% mujeres; p = 0,01) y hubo una tendencia no significativa hacia la mayor edad (68,6 años para los cánceres proximales frente 63,1 años para los cánceres distales; p = 0,1). El
BRAF
mut /cánceres del SMS no mostraron ninguna diferencia en la tasa de CIMP en el próximo (17/27, 63,0%) frente al intestino distal (6/12, 50%), la tasa de
p53
mutación en el proximal (14/31, 45,2%) o el intestino distal (6/14, 42,9%), o en la etapa en el diagnóstico en el proximal (10/21, 47,6%) versus intestino distal (4/9, 44,4 %).
en general, la cohorte BRAFmut /MSS no fue diferente según la edad de aparición, la distribución por sexo o etapa de diagnóstico a la
BRAF
cohorte peso /SMS (Tabla 1). Molecularmente, el
BRAF
mut /cánceres del SMS no difieren de los
BRAF
peso /SMS cánceres con extensión de
p53
mutación (21/57, 37% frente al 42 /90, 47%), pero fueron significativamente más propensos a demostrar CIMP (27/47, 57% frente a 3/79, 4%) (p & lt; 0,0001) (Tabla 1). En el
BRAF
cohorte peso /MSS, un
KRAS
mutación estaba presente en 41/90 (46%) de cáncer (Tabla 1).
frecuencia global de inestabilidad cromosómica (CIN)
El
BRAF
mut /MSS y
BRAF
peso /cohortes de cáncer del SMS muestran marcadores altamente informativos para LOH en 95% (57 de 60) y el 100% (90 de 90), respectivamente.
Los dos cohortes han demostrado una alta tasa de CIN independientemente de
BRAF
estado de mutación, con 41/57 (72%)
BRAF mutante
, y 74/90 (82%)
BRAF
tipo salvaje que muestra CIN (Tabla 2). La pérdida alélica fraccional (FAL) [38] que describe la frecuencia de los eventos de pérdida alélica entre el número total de eventos informativos, se analizó como un método adicional de cuantificar el grado general de CIN dentro de una cohorte.
BRAF
mut /SMS cánceres mostraron un promedio FAL ligeramente inferior en comparación con
BRAF
peso /cánceres del SMS (132/428 = 0,308, frente a 286/745 = 0,384, respectivamente), pero esta diferencia fue no es estadísticamente significativa (p = 0,1) (Tabla 3).
CIN en regiones cromosómicas individuales
el
BRAF
mut /SMS cánceres mostraron CIN al más alto frecuencia en la región cromosómica 8p (26 de 44, 59%), y el menos en la región del cromosoma 5q (19 de 49, 39%). El
BRAF
peso /SMS cánceres tuvieron la mayor frecuencia de CIN en 17p (43 de 65, 66%), y las más bajas tasas de CIN + en 5q (43 de 80, 54%) y 8p (39 de 72, 54%) (Tabla 2).
El
BRAF
peso /SMS cánceres tenían una mayor frecuencia de eventos CIN en comparación con los
BRAF
mut /SMS cánceres que ocurren en las regiones cromosómicas individuales de 5q, 17p y 18q. Esta relación fue estadísticamente significativa en 18q, con un 60% (50 de 83) de
BRAF
peso /SMS cánceres que muestran CIN, en comparación con el 40% (19 de 48) de
BRAF
mut /cánceres del SMS con CIN en este locus (p = 0,03) (Tabla 2).
p53 tasa de mutación y la presencia de CIN
la mutación de
p53
se correlacionó con la supresión del
p53
locus (cromosoma 17p) (Tabla 2). La frecuencia de
p53
mutación en relación con CIN se investigaron por lo tanto, con la exclusión de los datos de 17p con el fin de evitar la sobre-estimación de una asociación que puede ser impulsado por la inclusión de marcadores de LOH positivos que rodea el
p53
locus. Con base en el cromosoma 5q, 8p y 18q loci; en el
BRAF
peso cohorte /MSS, 38/70 (54%) de los cánceres CIN tenían un concurrente
p53
mutación, en comparación con sólo 4/20 (20%) de CIN-negativas los cánceres (p = 0,01). El
BRAF
mutantes cánceres /SMS mostró una tendencia similar pero no significativa, con 16/37 (43%) de cáncer CIN tiene un
p53
mutación en comparación con sólo 4/17 (24% ) cánceres Cin-negativa (Tabla 2). Dentro de la
BRAF
cohorte peso /MSS, LOH en todas las regiones cromosómicas individuales correlacionado significativamente con una mayor incidencia de
p53
mutación (Tabla 2). FAL promedio por cohorte demostró una mayor tasa de pérdida coincidiendo con un
p53
mutación en comparación con los de tipo salvaje para
p53
, significativamente por lo que para
cánceres BRAF
peso /SMS ( p = 0. & lt; 0,001) (Tabla 3)
La mutación KRAS tarifas y presencia de CIN en los cánceres BRAFwt /SMS
BRAF
y
KRAS
Las mutaciones se confirmó que eran mutuamente excluyentes. Los
cánceres BRAF
peso /SMS tenían un 46% (41 de 90)
KRAS
tasa de mutación (Tabla 1). No se encontró asociación significativa entre un
KRAS
mutación y la NIC en estos tipos de cáncer, con un
KRAS
mutación presente en el 43% (32 de 74) CIN cánceres, y en el 56% (9 de 16) cánceres Cin-negativa (Tabla 2). Curiosamente de los cánceres CIN, el promedio FAL fue significativamente menor en
KRAS
mutante en comparación con
KRAS
tumores de tipo salvaje (p = 0,045) (Tabla 3).
CpG isla methylator fenotipo (CIMP) y CIN en BRAFmut cánceres /SMS
CIMP estaba presente en el 57% (27 de 47)
BRAF
mut /cánceres del SMS, mientras que sólo el 4% (3 de 79 )
cánceres BRAF
peso /SMS muestran CIMP (Tabla 1). Curiosamente, una proporción sustancial de
BRAF
/cánceres del SMS mut demostrado tanto CIMP y CIN, donde el 72% de los altos
BRAF
mut cánceres CIMP /SMS mostró CIN (Tabla 2).
CIN y Clinicopathological datos
La presencia de CIN no afectó a la edad de inicio y las distribuciones de género (Tabla 2 en los datos S1). La tasa de CIN no varió independientemente de si el cáncer se originó a partir de los extremos proximal o distal de colon en cualquiera de cohortes, con frecuencia de pérdida alélica (FAL) en el
BRAF
mut /MSS cánceres en 0,33 y 0,32; y en
BRAF
peso /SMS a 0,33 y 0,42 para los cánceres proximal y distal, respectivamente (Tabla 3, Tabla 2 en los datos S1).
BRAF
mut /cánceres del SMS, CIN significativamente asociados con la etapa avanzada, que ocurre en 15 de 17 (88%) en estadio III /IV de cáncer en comparación con 6 de 13 (46%) en estadio I /II de cáncer (p = 0,02) (Tabla 4). Resultados promedio FAL fueron consistentes con este hallazgo, con el aumento de FAL correlacionar con el avance de etapa en
BRAF
mut /MSS cánceres CIN (p = 0,03) (Tabla 3). Por el contrario, el
BRAF
grupo p /MSS tenían altos niveles de CIN en ambas etapas finales y principios de presentación con 27/33 (82%) en estadio III /IV, y 31/37 (84%) Etapa I /II de cáncer CIN (Tabla 4). Esto también fue demostrado por las tasas de FAL similares que se encuentran en el
BRAF
peso /MSS tarde en comparación con los cánceres en etapa temprana (Tabla 3).
Entre las cohortes, una significativamente menor número de cánceres
BRAF
mut /MSS CIN positivos presentados en las primeras fases I /II en comparación con los
BRAF
peso /SMS cánceres con CIN. Esto fue evidente global (p = 0,02) y en las distintas regiones del cromosoma 5q, 17p y 18q (p = 0,02, p = 0,04, p = 0,01, respectivamente). La tasa de cánceres CIN positivos que presenta en estadios avanzados (III /IV) fue similar en ambos grupos (Tabla 4).
De los tumores sin afectación de los ganglios linfáticos, 6/13 (46%) de
BRAF
/cánceres del SMS mut mostraron CIN en comparación con 36/42 (86%) de
cánceres BRAF
peso /SMS (p = 0,007) (Tabla 4).
BRAF
cánceres mut /SMS mostraron una tendencia a aumentar las tasas de CIN coincidiendo con la extensión de por lo menos un ganglio linfático (p = 0,07). Aunque no es significativo, estos tipos de cáncer CIN también tuvieron una mayor tasa de metástasis en 100%, en comparación con el número de cánceres CIN sin metástasis en 65%. El
BRAF
peso /SMS cánceres mostraron niveles similares de CIN ya sea con o sin propagación a nódulos linfáticos o metástasis (Tabla 4).
BRAF
mut cánceres /SMS mostrando co-ocurrencia de CIMP y CIN, una mayoría superior presentado en etapas tardías (III /IV) (10/16, 63%), en comparación con las que se presentan en las primeras etapas (I /II) (4/13, 31%) , aunque esto no alcanzó significación (Tabla 3 en los datos S1).
modelos de riesgos proporcionales de Cox se utilizaron para investigar la supervivencia específica del cáncer en general de los pacientes con cánceres CIN. Para tener en cuenta los posibles efectos de confusión de las variables
BRAF
estado (
BRAF
mut /MSS y
BRAF
peso /MSS) y la etapa (I /II y III /IV ), además de todas las interacciones estadísticamente significativas de orden superior, se incluyeron en el modelo. No hay relaciones significativas entre la presencia de CIN y la supervivencia global se demostraron en ninguno de los grupos (
BRAF
mut /MSS p = 0,81,
BRAF
peso /MSS p = 0,22). Sin embargo, el análisis a loci individuales reveló la
BRAF
mut /cánceres del SMS con CIN en 18q y 8p que tienen una supervivencia significativamente peor, una vez ajustado por el escenario (p = 0,02, p & lt; 0,05, respectivamente) (Tabla 5).
BRAF
peso /cánceres del SMS no mostraron diferencias en las tasas de supervivencia independientemente del estado de CIN en cualquier loci individuales (Tabla 5).
Los pacientes con
BRAF
mut /cánceres del SMS tenían peores tasas de supervivencia en comparación con aquellos con
BRAF
peso /cánceres del SMS, una vez ajustado por el escenario, independientemente de la presencia o no de CIN (HR = 3,4; IC del 95% [1,65, 6,99], p = 0,001 ).
Discusión
los cánceres colorrectales surgen a través de la vía neoplásica dentada se caracterizan por una alta frecuencia de
BRAF mutación
, MSI y CIMP. MSI cánceres han sido ampliamente estudiados, son diploides y mantiene un excelente pronóstico. En ausencia de MSI, un
BRAF
mutación se correlaciona con un resultado especialmente pobre paciente. El estudio muestra que un alto nivel de CIN es evidente en
BRAF
cánceres /SMS mutantes y esto demuestra al menos un mecanismo de inestabilidad genómica mediante el cual se forman estos tipos de cáncer y el progreso. CIN se evaluó con análisis de pérdida de heterocigosidad (LOH) con CIN asignado si al menos uno de los doce marcadores fue positivo para LOH. La pérdida media fraccional alélica (FAL) [38], que considera el número de marcadores que muestran LOH en relación con el número de marcadores informativos, también se calculó para proporcionar además una medida cuantificable de la tasa de CIN. Ambos métodos se encuentran igualmente elevadas frecuencias de CIN que ocurre en los cánceres de SMS independientemente de
BRAF
estado de la mutación. Muchos de los CIN positivo
BRAF
mutantes cánceres /SMS mostraron CIMP y por lo tanto este estudio desafía la creencia de que la NIC y CIMP son mutuamente excluyentes. Se proporciona evidencia adicional de que
BRAF mutante
/cánceres del SMS son fundamentalmente diferentes a sus homólogos MSI pesar de que ambos potencialmente surgen de
BRAF
pólipos serrados mutantes.
BRAF
mutante /cánceres del SMS son un importante subgrupo de cáncer colorrectal debido a su asociación con un pronóstico especialmente pobre paciente. Sin embargo, debido a su relativamente baja prevalencia de aproximadamente el 5-7% de todos los cánceres colorrectales, los mecanismos moleculares que subyacen a este mal resultado no han sido bien estudiados. Mediante la identificación de 60
BRAF
mutantes cánceres de una gran serie de 1052 pacientes /SMS, se alcanzó la potencia necesaria para examinar la frecuencia de CIN en relación con otras variables clínicas y moleculares. Está bien establecido que
BRAF
cánceres mutantes predominantemente ocurre en el colon proximal [12], [18], [37]. Ciertamente, la mayoría de los
BRAF
mut /cánceres del SMS en este estudio eran de esta región (69%), sin embargo no había diferencia en la tasa de CIN se encuentra en proximal en comparación con cánceres distales (Tabla 3, Tabla 2 en los datos S1).
Hemos demostrado anteriormente que
BRAF
mutantes cánceres /SMS tienen una tasa comparable de
p53
mutación para
BRAF
de tipo salvaje /cánceres del SMS, y esto fue significativamente mayor que el
p53
tasa de mutación encuentran en
BRAF
cánceres mutantes /MSI. Además, los datos clínico-patológicos entre el
BRAF mutante
/cánceres del SMS y
BRAF
tipo salvaje /cánceres del SMS, también correlacionada en términos de una etapa más avanzada de la presentación, las edades comparables de inicio, e igual distribución de género [37]. El amplio grado de CIN encuentra en
BRAF
tipo salvaje /cánceres del SMS ha sido bien documentada. Como
Se cree BRAF
cánceres mutantes que se derivan de un pólipo dentada, y
BRAF
cánceres mutantes que son inestables microsatélites son diploides; puede postularse que
BRAF
cánceres mutantes /SMS también serían CIN-negativo. Sin embargo, basado en nuestra anterior conclusión de múltiples similitudes moleculares y clínicas entre los dos subgrupos del SMS [37], la hipótesis de que la inestabilidad cromosómica podría contribuir a la progresión de una proporción sustancial de
BRAF mutante
/cánceres del SMS. Los datos presentados aquí apoyan esta hipótesis. Nos piensan, además, que en el
BRAF
células mutantes, la adquisición de CIN es consistente con la supervivencia sólo en la ausencia de inestabilidad de microsatélites. Para encontrar este tipo de tasas igualmente elevadas de CIN se producen en una gran cohorte de
BRAF mutante
/cánceres del SMS proporciona una prueba más de las similitudes moleculares que ocurren entre estos dos subgrupos del SMS aunque uno puede progresar a partir de pólipos serrados, y el otro de lo convencional adenomas.
La presencia de CIN se examinó más de doce marcadores que abarcan cuatro regiones cromosómicas comúnmente suprimido en el cáncer colorrectal (cromosomas 5q, 8p, 18q y 17p). A pesar de que la tasa global de CIN fue alta en ambos
BRAF
cohortes mutantes y silvestres tipo, el examen de los loci individuales reveló diferencias entre las cohortes en la frecuencia de eventos CIN por loci. El
BRAF
mutantes cánceres /SMS tenían el mayor grado de CIN en el brazo cromosómico 8p, y la menor en la región 18q. Por el contrario, el
BRAF
tipo salvaje /SMS cánceres tuvieron la mayor frecuencia de inestabilidad en el brazo 17p, y la menor en 8p y 5q. Una diferencia significativa en la tasa de CIN entre los dos grupos fue evidente en la región cromosómica 18q con el
BRAF
tipo salvaje /SMS cánceres que tienen significativamente mayor pérdida en la región 18q cromosómica. 18q21.1 cromosoma alberga el tumor supresor genes
SMAD4, SMAD2
y los genes
borrado en
cáncer colorrectal (
DCC
). El
SMAD4
/
2
compleja gen está implicado en la transducción de señales de la vía TGF-beta y sobre todo en las primeras etapas de la génesis tumoral puede regular la expresión de genes diana que resulta en el crecimiento se detuvo y la apoptosis [ ,,,0],39], [40]. Dentro de la vía MAPK quinasa, la activación aberrante de efectores aguas abajo de
BRAF
se ha encontrado que modular la TGF-beta de señalización mediada de
SMAD
s [39], [41], donde
ERK
se ha implicado en la inhibición de
SMAD
translocación nuclear [42]. Como
BRAF
mutantes cánceres /SMS tienen una vía MAPK constitutivamente activa, la pérdida de la
SMAD
loci pueden ser redundantes y podrían ayudar a explicar la tasa significativamente menor de eliminación que se encuentra en la región 18q en éstos en comparación con
BRAF
tipo salvaje /cánceres del SMS.
DCC
está sujeta a silenciamiento epigenético [43] y puede ser objetivo de este mecanismo en lugar de su eliminación en
BRAF
cánceres mutantes. En general, las diferencias en la tasa de CIN encontrado en regiones individuales, indican que ciertos loci se eliminan preferentemente para inactivar el gen supresor de tumores que reside de acuerdo con los antecedentes genéticos del cáncer.
un evento de pérdida de un alelo es típicamente precedida o seguida de un evento mutacional del segundo alelo en la misma región para inactivar el gen supresor de tumor objetivo. Esto fue evidente en el presente estudio, donde tanto en
BRAF
cánceres mutantes y de tipo salvaje,
p53
mutación correlacionado con CIN en 17p. Resultados promedio FAL se volvieron a calcular sobre la base de los cromosomas 5q, 8p y 18q con el fin de eliminar la influencia de 17p CIN en
p53
tasa de mutación. La mutación de
p53
correlacionó significativamente con una puntuación más alta FAL para CIN en
BRAF
cánceres de tipo salvaje. Una tendencia similar pero no significativa se observó en
BRAF
cánceres mutantes. Estos datos apoyan nuestra hipótesis de que
BRAF
cánceres mutantes no son totalmente distintos de los que surgen a través de la vía tradicional adenoma-carcinoma, pero pueden compartir características moleculares múltiples requeridas para la progresión tumoral.
Ha sido postulado que la CIN y CIMP son mutuamente excluyentes [29], [30]. Curiosamente, este estudio demuestra claramente una alta frecuencia de CIN y CIMP co-ocurrencia en el
BRAF
cánceres mutantes /SMS (72%), lo que sugiere estas formas de inestabilidades genéticas y epigenéticas pueden coexistir dentro de este contexto molecular. Estos resultados ponen de relieve la necesidad de la estratificación para identificar las características moleculares de importantes subgrupos de cáncer. Una relación inversa entre CIN y CIMP Se ha observado previamente en un predominantemente
BRAF
cohorte de cáncer de tipo salvaje, donde sólo el 9
BRAF
mutantes cánceres /SMS fueron investigados [29]. Un bajo nivel de CIN se ha encontrado en CIMP cánceres positivos usando un genoma enfoque de amplia gama, sin embargo
No se evaluó BRAF
estado mutacional [44]. La falta de asociación se informó en estos estudios probablemente refleja la baja frecuencia de CIMP en
BRAF
cánceres de tipo salvaje. En el presente estudio, CIMP se produjo en sólo el 4% de los
BRAF
cánceres de tipo salvaje, lo que impide el análisis significativo de CIMP se correlaciona con la NIC en este subgrupo.
BRAF
cánceres mutantes /SMS, lo que aumenta significativamente los niveles de CIN en general se encontraron con etapas avanzadas de presentación (Tablas 3 y 4), lo que sugiere que la CIN puede contribuir a la progresión de este tipo de cáncer. Este patrón también se observó en las regiones cromosómicas de 18q y 17p (Tabla 4). Una tasa considerable de CIN en la región 8p que ocurre en ambas etapas tempranas y tardías, puede dar cuenta de esta región que muestra la mayor tasa de CIN dentro de este tipo de cáncer, y además, puede implicar un papel para la pérdida de un gen supresor de 8p tumor temprano en desarrollo de la enfermedad.
por el contrario, para el CIN en general y en todas las regiones cromosómicas individuales, el
BRAF
tipo salvaje /SMS cánceres mostró tasas comparables de CIN en etapas temprana y tardía, y esto sugiere que CIN es importante para la iniciación o progresión temprana dentro de este subgrupo cáncer. La pérdida alélica fraccional media más alta (FAL) puntuación observada para
BRAF
tipo salvaje frente a los cánceres del SMS mutante puede reflejar el inicio más temprano de CIN y, por tanto, una mayor acumulación de eventos CIN (Tabla 3).