Extracto
Antecedentes
Las células T CD8 + de tumores infiltrantes se correlacionan con progresión prolongada la supervivencia global y libre en el cáncer de ovario epitelial (EOC). Una fracción significativa de los pacientes EOC montaje respuestas de autoanticuerpos a varios antígenos tumorales, sin embargo, la relación entre los autoanticuerpos y células T infiltrantes de tumor no se ha investigado en EOC o cualquier otro tipo de cáncer humano. La hipótesis de que autoanticuerpos y las respuestas de células T pueden correlacionarse en EOC y dirigidas a los mismos antígenos.
Metodología y Principales conclusiones
Hemos obtenido se correspondía con suero y tejido tumoral de 35 pacientes con alto grado cáncer de ovario seroso. Las muestras de suero se evaluaron mediante ELISA de autoanticuerpos contra el antígeno tumoral común NY-ESO-1. El tejido tumoral se examinó mediante inmunohistoquímica para la expresión de NY-ESO-1, varios marcadores de células T (CD3, CD4, CD8, CD25, FoxP3, TIA-1 y granzima B) y de otros marcadores inmunológicos (CD20, MHC de clase I y MHC de clase II). Linfocítica infiltrados varió ampliamente entre los tumores y se incluye células positivas para CD3, CD8, TIA-1, CD25, FoxP3 y CD4. Veinte y seis por ciento (9/35) de los pacientes demostró autoanticuerpos de IgG en suero de NY-ESO-1, que se correlaciona positivamente con la expresión del antígeno de NY-ESO-1 por las células tumorales (r = 0,57, p = 0,0004). Los autoanticuerpos contra NY-ESO-1 se asociaron con un aumento de las células CD8 +, CD4 + y de infiltración tumoral FoxP3 +. En un HLA-A2 individuo + paciente con autoanticuerpos frente a NY-ESO-1, las células T CD8 + aisladas de tumores sólidos y ascitis fueron reactivos a NY-ESO-1 por IFN-gamma clase ELISPOT y MHC I pentámero tinción.
Conclusión y significado
Nos demuestran que los autoanticuerpos específicos de tumores y las células T infiltrantes de tumor se correlacionan en el cáncer humano y pueden ser dirigidas contra el mismo antígeno diana. Esto implica que los autoanticuerpos pueden colaborar con las células T infiltrantes de tumor de influir en los resultados clínicos en EOC. Por otra parte, los métodos de detección serológica pueden resultar útiles para la identificación de antígenos de células T clínicamente relevantes para la inmunoterapia
Visto:. Milne K, Barnes RO, Girardin A, Mawer MA, NJ Nesslinger, Ng A, et al. (2008) infiltrantes de tumores, las células T se correlacionan con autoanticuerpos NY-ESO-1-específicas en el cáncer de ovario. PLoS ONE 3 (10): e3409. doi: 10.1371 /journal.pone.0003409
Editor: Aric Gregson, Universidad de California en Los Angeles, Estados Unidos de América
Recibido: 6 Junio, 2008; Aceptado: September 17, 2008; Publicado: 15 Octubre 2008
Derechos de Autor © 2008 Milne et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Columbia Británica Fundación contra el Cáncer, Fundación Canaria, Departamento de Defensa de Estados Unidos (OC000018). Ninguno de los patrocinadores tenía ningún papel en el diseño y realización del estudio, en la recopilación, análisis e interpretación de los datos, o en la preparación, revisión o aprobación del manuscrito
Conflicto de intereses.: los autores han declarado que no existen intereses en competencia.
Introducción
cáncer de ovario
epitelial (EOC) es una enfermedad difícil que afecta a más de 190.000 mujeres en todo el mundo cada año (Agencia Internacional para la Investigación sobre el cáncer) . La alta tasa de mortalidad se atribuye al hecho de que la mayoría de los pacientes son diagnosticados con la enfermedad diseminada, a menudo con amplios ascitis. El tratamiento estándar consiste en una cirugía citorreductora seguida de taxanos y quimioterapia basada en platino [1]. Más del 80% de los pacientes responden muy bien al tratamiento de primera línea, pero la recurrencia de la enfermedad 60-70% dentro de 2-5 años de experiencia y, finalmente, sucumbió a su enfermedad [2], [3].
A pesar de estas lamentables estadísticas, 20-30% de los pacientes con EOC sobrevivir cinco años o más después del diagnóstico. factores de pronóstico favorable incluyen etapa temprana, histología no seroso, de bajo grado, buen estado general, y la citorreducción quirúrgica óptima [4], [5]. Además, varios estudios recientes han demostrado una correlación entre las células T CD3 + CD8 + infiltrantes de tumor y los resultados favorables [6], [7]. Zhang
et. al.
informó por primera vez que los pacientes con células T CD3 + se infiltra en el epitelio del tumor había aumentado libre de progresión y la supervivencia global [8]. Esto ha sido confirmado por otros dos estudios [9], [10], y dos grupos han extendido este hallazgo para el subconjunto de células T CD8 +, en particular [11], [12]. Además, la presencia de células T CD3 + CD56 + en la ascitis se ha relacionado con la sensibilidad de platino [13]. Estos resultados están de acuerdo con estudios anteriores que muestran una correlación positiva entre la supervivencia y la expresión de interferón-γ (IFN-γ) [14], [15], el IFN-γ receptor [16], IL-18 [17], y MHC de clase I [18], [19], todos los cuales son características de respuestas de células T CD8 +. En contraste, la presencia de células T CD25 + FoxP3 infiltrantes tumorales en EOC se correlaciona con la supervivencia inferior [11], [20] - [22]. Por lo tanto, parece que el equilibrio de las células T efectoras CD8 + a las células T reguladoras CD25 + FoxP3 + es un determinante importante de los resultados clínicos en EOC.
Además de las células T infiltrantes de tumores, muchos pacientes EOC montaje de autoanticuerpos en suero respuestas a una variedad de antígenos tumorales, incluyendo NY-ESO-1, HOXA7, Ep-CAM, HSP-90, MUC-1 y p53 [23] - [25]. En la diabetes tipo I y otras enfermedades autoinmunes, el desarrollo de respuestas de autoanticuerpos presagia la infiltración de tejido y la destrucción por las células T autorreactivas [26]. Por lo tanto, la hipótesis de que los pacientes EOC pueden mostrar una relación similar entre las respuestas de autoanticuerpos específicos de tumores y linfocitos infiltrantes de tumor. Esta hipótesis se puso a prueba en una cohorte de 35 etapa avanzada, los casos de EOC serosos de alto grado para el que coinciden las muestras de suero y tumorales estaban disponibles. Uso de NY-ESO-1 como un antígeno de prueba, se demuestra por primera vez una correlación entre los autoanticuerpos específicos de tumores y las células T infiltrantes de tumor. Nuestros resultados plantean la posibilidad de que los autoanticuerpos pueden desempeñar un papel en la relación previamente reconocido entre las células T infiltrantes de tumor y los resultados clínicos en EOC.
Resultados
cohorte del estudio
investigado la relación entre los autoanticuerpos específicos de tumores y linfocitos infiltrantes de tumores utilizando muestras de tumor y suero emparejados de una cohorte retrospectiva de 35 pacientes con EOC seroso de alto grado (Tabla 1). Nos elegido para centrarse en un solo subtipo histológico, como otras subclases de EOC exhiben propiedades biológicas y clínicas distintas que podrían haber confundido el análisis [27]. Todas las muestras de sangre se recogieron antes de la cirugía o la quimioterapia, y todas las muestras de tumor se obtuvieron en el momento de la cirugía citorreductora primaria antes de la quimioterapia. muestras de sangre de control se obtuvieron de 60 mujeres de la misma edad sin conocer la historia personal de cáncer.
Análisis de los linfocitos infiltrantes de tumor
Tumor-linfocitos infiltrantes se evaluaron por inmunohistoquímica (IHC ) utilizando anticuerpos para una variedad de marcadores inmunológicos (Figura 1, Tabla 2). Todos los datos IHC primas se pueden encontrar en los cuadros suplementarios S1 y S2. Sólo el 23% (8/35) de los tumores evaluables mostró infiltrados significativos de células B CD20 +. En contraste, el 94% (33/35) de los tumores tenía infiltrados detectables de células T CD3 +. La tinción con anticuerpos frente a CD4 y CD8 revelaron que 59% (20/34) y 69% (24/35) de los tumores evaluables tuvieron infiltrados celulares importantes CD4 + y CD8 +, respectivamente. las células CD4 + y CD8 + se correlacionaron fuertemente (r = 0,69, p & lt; 0,0001). Todos los tumores evaluables (27/27) expresan MHC de clase I en cierta medida, lo que indica que el antígeno podría en teoría presentar a las células T CD8 + que se infiltran. Setenta y dos por ciento (18/25) de los tumores expresan MHC de clase II y, por tanto, podrían teóricamente antígeno presente en las células T CD4 +.
Debido a que muchos tumores tenían densos infiltrados de células T CD8 +, se analizaron tejidos para TIA-1 y granzima B, ambos de los cuales se expresan por las células T citotóxicas CD8 +, así como las células asesinas naturales [28] - [30]. Setenta y tres por ciento (25/34) de los tumores tenía importantes TIA-1 + infiltrados celulares, que mostraron una correlación positiva con infiltrados CD8 + (r = 0,83, p & lt; 0,0001) (Figura 2). En contraste, sólo el 20% (7/35) de los tumores tenía significativa granzima B + infiltrados celulares (datos no mostrados); como se esperaba, 6 de los 7 tumores positivos también fueron positivos para las células CD8 +.
Los tumores también se analizaron por infiltrados celulares que expresan FoxP3, un marcador de células T activadas y células T reguladoras [31]. Sesenta y seis por ciento (23/35) de los tumores evaluables tenía FoxP3 + infiltrados significativa (Figura 2), que fueron fuertemente correlacionados con las células CD4 + (r = 0,73, p & lt; 0,0001). También se evaluó la expresión de CD25, un marcador adicional de células T activadas y de regulación [32]. El cincuenta por ciento (17/34) de los tumores tenían CD25 significativa + infiltrados celulares (Figura 2), que se correlaciona fuertemente con las células CD4 + (r = 0,58, p = 0,0003) y FoxP3 + células (r = 0,75, p & lt; 0,0001).
más estratificada de células T se infiltra en función de su ubicación epitelial o estromal dentro del tumor, como las células CD3 + /CD8 + T intraepiteliales, en particular, se han correlacionado con un aumento de la supervivencia en EOC [8] - [12]. Para este análisis, se midió primero la composición de tumor tal como se define por la relación epithelial:stromal en cada núcleo de tejido y se ha calculado la densidad de las células T por unidad de epitelio o estroma. Como se resume en la Tabla 3, la densidad de las células T CD3 + por unidad de epitelio tumoral osciló 0-17, con una mediana de 4,6. En comparación, la densidad de las células T CD3 + por unidad de estroma tumoral osciló desde 0 hasta 138, con una mediana de 16,3. En general, la densidad de las células T CD3 + en el epitelio tumor y el estroma se correlacionaron débilmente (r = 0,34, p = 0,048), y había muchos ejemplos de tumores con densa CD3 + se infiltra en el epitelio, pero no estroma, y por el contrario, en el estroma pero no epitelio. De manera similar a las células CD3 +, CD8 +, CD4 +, FoxP3 + y TIA-1 + células fueron generalmente más densa en el estroma tumoral que el epitelio tumoral (Tabla 3).
Composición de los linfocitos infiltrantes de tumor después de la quimioterapia neoadyuvante
el TMA se usa en el anterior también análisis contenía una cohorte adicional de 15 tumores de las mujeres que, como parte de un ensayo clínico, se habían sometido a neoadyuvante platino /quimioterapia basada en taxanos antes de su cirugía primaria. Al igual que en el caso de 35 cohortes, estas mujeres tenían EOC seroso de alto grado. Los tumores se habían resecado después de tres ciclos de carboplatino /quimioterapia basada en el taxol. Aunque el tamaño de la muestra era pequeña, esto proporcionó una oportunidad única para evaluar los efectos de la quimioterapia en los linfocitos infiltrantes de tumor. Por mayoría de los parámetros, los infiltrados linfocíticos fueron similares entre los tumores tratados y no tratados. Sin embargo, los tumores tratados mostraron una tendencia uniforme hacia el aumento de la infiltración de todos los subconjuntos de células T evaluados, y este aumento fue significativamente mayor para CD3 + (mediana 80 vs 35, p = 0,02) y CD8 + (mediana 78 vs 30, p = 0,013), las células (datos no mostrados)
respuestas de autoanticuerpos séricos contra NY-ESO-1 |
a pesar de que los pacientes con cáncer de ovario demuestran las respuestas de autoanticuerpos a un amplio repertorio de antígenos [23] -. [25], se centraron en uno de los antígenos más inmunogénicos, NY-ESO-1 [24], [33], [34]. Sesenta sueros de control se ensayaron para autoanticuerpos IgG recombinante NY-ESO-1, y la media y la desviación estándar de los valores de DO se calcularon (Tablas S1 y S2). sueros individuales se calificaron como positivo si su valor OD era igual o mayor de dos desviaciones estándar de la media de los sujetos de control. En consonancia con los resultados publicados, el 26% (9/35) de los casos de cáncer de ovario demostrado autoanticuerpos IgG contra NY-ESO-1, en comparación con sólo el 5% (3/60) de los controles (Figura 3A).
( a) respuestas de autoanticuerpos séricos a NY-ESO-1 en la cohorte de 35 pacientes. respuestas de autoanticuerpos son reportados como el número de desviaciones estándar de la media de 60 controles de la misma edad y el género conocido sin antecedentes personales de cáncer. (B, C) El análisis inmunohistoquímico de NY-ESO-1 de expresión en dos tumores ováricos serosos representativos con elevada (B) y negativo (C) la expresión del antígeno.
Para determinar si las respuestas de autoanticuerpos a NY-ESO-1 se correlacionó con la expresión del antígeno correspondiente, las muestras de tumor emparejados se analizaron por IHC para la expresión de NY-ESO-1. De los 34 tumores evaluables, 5 (14,7%) obtuvieron positivo para NY-ESO-1 antígeno (Figura 3B). Los cinco de estos casos también fueron positivos para autoanticuerpos contra NY-ESO-1. En contraste, 4 casos fueron positivos para NY-ESO-1 específica de autoanticuerpos pero negativo para NY-ESO-1 la expresión del antígeno.
Las correlaciones entre las respuestas de autoanticuerpos y linfocitos infiltrados
A continuación se investigó si autoanticuerpos séricos contra NY-ESO-1 se correlacionaron con los linfocitos infiltrantes de tumor. Para este análisis, se consideró epiteliales y del estroma de células T se infiltra por separado, como se describe anteriormente. Se clasificaron los casos como positivo o negativo para los autoanticuerpos contra NY-ESO-1 utilizando un punto de corte de dos desviaciones estándar de la media del grupo de control (cuadros suplementarios S1 y S2). Por la prueba t de Mann Whitney, los pacientes con autoanticuerpos frente a NY-ESO-1 tuvieron una mayor densidad del estroma de células CD8 + (p = 0,011), células FoxP3 + (p = 0,013), y las células CD4 + (p = 0,026). Por lo tanto, los autoanticuerpos a NY-ESO-1 mostraron una correlación significativa con infiltrados de células T, especialmente en el estroma del tumor.
Reconocimiento de NY-ESO-1 por autoanticuerpos y células T CD8 + infiltrantes de tumor del mismo paciente
la correlación entre autoanticuerpos contra NY-eSO-1 y las células T infiltrantes de tumor sugirió la posibilidad de que las células T infiltrantes de tumor pueden reconocer NY-eSO-1 en pacientes seropositivos. Para abordar esta cuestión, se recogieron muestras de sangre, tumores de ascitis y de una cohorte prospectiva de 15 pacientes EOC serosas recién diagnosticados. Dos pacientes fueron positivos para autoanticuerpos en suero para NY-ESO-1. De estos, uno de los casos (IROC013) era HLA-A2 +, permitiendo que las células T para ser enumerados por citometría de flujo con pentámeros de HLA-A2 cargadas con un CD8 + conocido epítopo de NY-ESO-1 (Figura 4A). células NY-ESO-1-específicas T CD8 + eran raros en la sangre periférica de este paciente (0,22% de las células CD8 +), pero fueron enriquecidos en ascitis y tumor sólido (1,53% y 6,64% de células CD8 +, respectivamente). Además, las células T de la ascitis y el tumor sólido producido IFN-γ en respuesta a NY-ESO-1 péptido (Figura 4B) pero no tiene control péptidos derivados de p53, HER-2 /
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o WT-1 ( datos no mostrados). De hecho, en la ascitis de la respuesta a NY-ESO-1 fue casi tan fuerte como la que se observa a los péptidos de control viral CEF. Curiosamente, el tejido tumoral de este paciente mostró densa CD3 + y la infiltración de células T CD8 + de estroma tumoral, pero no epitelio (Figura 4C), similar al patrón visto comúnmente con los pacientes autoanticuerpos positivos en la cohorte retrospectivo. A pesar de montaje de una fuerte respuesta humoral y de células T de NY-ESO-1, tumor sólido a partir de este paciente manchado negativo para la expresión de NY-ESO-1 antígeno; sin embargo, la ascitis de este paciente contenían células NY-ESO-1-positivos (Figura 4C).
(A) MHC de clase I análisis pentámero que demuestra el enriquecimiento de NY-ESO-1-específica de células T CD8 + en la ascitis y tumor sólido en comparación con la sangre periférica. Las áreas enmarcadas y números asociados representan el porcentaje de células pentámero-positiva en relación con el total de células CD8 +. (B) Análisis de ELISPOT de IFN-γ producción por las células T después de la estimulación con un péptido HLA-A2 de unión de NY-ESO-1. Los datos se presentan como el número de células IFN-gamma que producen por 1 × 10
6 células a granel de los compartimentos de tejidos indicados. (C) El análisis inmunohistoquímico de las células infiltrantes de tumor CD3 + y CD8 + en el estroma del tumor, y la expresión de antígeno de NY-ESO-1. Mientras que el tumor sólido fue negativo para la expresión de NY-ESO-1, una fracción de células de ascitis fueron positivos. La fracción celular de la ascitis también contenía células epiteliales citoqueratina-positivas, presumiblemente de origen tumoral (datos no mostrados).
Discusión
El uso de muestras de suero y tumorales coincidentes de 35 pacientes con alto -Grado EOC seroso, hemos demostrado una correlación entre las células T infiltrantes de tumores y autoanticuerpos específicos de tumores. Para nuestro conocimiento, este es el primer estudio para identificar una correlación tal en cualquier tipo de cáncer humano. Específicamente, la presencia de NY-ESO-1-específica autoanticuerpos IgG en suero se correlacionó con la infiltración de estroma tumoral por las células que expresan CD8, CD4 y FoxP3. Por otra parte, en un paciente individual con autoanticuerpos frente a NY-ESO-1, ascitis correspondientes y las muestras de tumor sólido mostraron ser enriquecida para las células NY-ESO-1-reactiva CD8 + T, según la evaluación de MHC de clase I pentámero tinción y IFN-γ ELISPOT. Estos resultados plantean la posibilidad de que las respuestas de autoanticuerpos pueden colaborar con las células T infiltrantes de tumor para influir en los resultados clínicos en EOC.
Además de autoanticuerpos NY-ESO-1-específicas, varios factores expresados por los tumores de ovario han demostrado una correlación positiva con las células T infiltrantes de tumores, incluyendo el CXCL9 quimiocinas, CCL21, CCL22 [8], CCL2 y CCL5 [35]; mutaciones de p53 [36]; y MHC de clase I [37]. Por el contrario, las células T infiltrantes de tumores muestran una correlación negativa con VEGF [8], B7-H1 /PD-L1 [12], CD68 + macrófagos [38] y el receptor de endotelina B [39]. Por lo tanto, múltiples factores influyen en la composición de las células T infiltrantes de tumor en EOC.
Aunque este estudio se centró en un antígeno tumoral solo, comúnmente reconocido, NY-ESO-1, un gran número de otros antígenos diana de autoanticuerpos han han identificado en EOC, incluyendo HOXA7, Ep-CAM, HSP-90, MUC-1 y p53 [23] - [25]. De hecho, las respuestas de autoanticuerpos específicos de tumores son comunes entre los pacientes con EOC. Por ejemplo, Stone et al. encontrado que el 44% de los pacientes recién diagnosticados con COE tuvo una respuesta de autoanticuerpos a por lo menos 1 de un panel de 12 antígenos tumorales [24]. El trabajo futuro se determinará si las respuestas de autoanticuerpos frente a otros antígenos tumorales también se correlacionan con la presencia de células T infiltrantes de tumor.
A diferencia de las respuestas serológicas, se sabe menos acerca de los antígenos diana de las células T infiltrantes de tumor en EOC . receptor de células T (TCR) spectratyping estudios han demostrado que las células T infiltrantes de tumor en EOC representan poblaciones oligoclonales, que es coherente con la expansión inducida por antígeno clonal [40] - [44]. Muchos estudios han demostrado el reconocimiento de células tumorales autólogas por células T infiltrantes de tumores [45] - [50]. Por otra parte, el trabajo previo ha identificado las células T específicas para
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[44], [51] HER2 /- [53], p53 [54] y la unión a folato-proteína [55], [56] entre tumor- la infiltración de células T o asociados a tumores. Para nuestro conocimiento, el presente estudio es el primero en demostrar el reconocimiento de NY-ESO-1 por tumor-infiltrante y asociado a tumor-(es decir, ascitis derivado) las células T, como se evidencia por los resultados para IROC013 paciente. Curiosamente, las respuestas de células T a NY-ESO-1 fueron indetectables en la sangre periférica de este paciente, que indica un fuerte enriquecimiento de esta subpoblación de células T en el tumor y ascitis. De hecho, la respuesta de ELISPOT de IFN-gamma a NY-ESO-1 fue similar en magnitud a la observada con péptidos de control CEF. Sin embargo, la subpoblación de NY-ESO-1-específica representaba sólo 6,6% de todas las células T CD8 + infiltrantes de tumor en la materia, lo que indica que es probable muchos otros antígenos reconocidos por células T infiltrantes. En particular, más del 80% de los cánceres de ovario presentan pérdida de BRCA1 y /o BRCA2 función, lo que conduce a la reparación comprometida DNA [57], [58]. Se puede especular que la inestabilidad genética resultante conduce a la expresión de las proteínas anormales que pueden servir como neoantıgenos al sistema inmune del huésped
.
A pesar de que las células del tumor infiltrante T están asociados con la supervivencia global y libre de progresión prolongada en EOC, no queda claro si esto refleja un papel activo o pasivo de las células T. En otras palabras, no las células T se oponen activamente el crecimiento del tumor o son simplemente marcadores de alguna otra característica del tumor que conduce a resultados? Hay varias líneas de evidencia en apoyo de la primera posibilidad. En primer lugar, no todos los subconjuntos de células T se asocian con el pronóstico; más bien, los resultados favorables están relacionados con el subconjunto CD8 + y los malos resultados a la CD25 + FoxP3 + subconjunto [11], [12], [20], [21]. En segundo lugar, hay varios factores que están asociados con respuestas CD8 + citolíticos activos también están vinculados a resultados favorables, incluyendo la expresión de IFN-γ [14], [15], el IFN-γ receptor [16] y la IL-18 [17]. MHC de clase I también se ha relacionado con una mayor supervivencia en el cáncer de ovario [18], [19]. En el presente estudio, que se centró exclusivamente en el subtipo seroso, todos los tumores evaluables expresan MHC de clase I. Resultados similares han sido reportados por otros para serosa EOC [59], lo que sugiere que la gran mayoría de los tumores serosos son MHC de clase I positiva y tener la capacidad para presentar el antígeno a las células T CD8 + infiltrantes de tumor. En tercer lugar, las células T infiltrantes de tumores muestran significativa citotoxicidad contra los tumores ováricos
in vitro
[43], [45], [47], [60], [61]. Sin embargo, hay que destacar que sólo una minoría de los tumores en este y otro estudio [59] tenían infiltrados inmunes significativas granzima B-positivos, lo que sugiere que la función citotóxica puede ser suprimida
in vivo
. Y, por último, como se discutió anteriormente, las células T infiltrantes de tumores muestran evidencia de la expansión clonal [40] - [44] y el reconocimiento de antígenos específicos [44], [51] - [56], como se muestra aquí para NY-ESO-1 (Figura 4). Por lo tanto, se están acumulando pruebas a favor de la idea de que las células T infiltrantes de tumor desempeñan un papel activo en la promoción de los resultados clínicos favorables en EOC. Del mismo modo, en el cáncer colorrectal, los marcadores funcionales asociados con Th1 activo como citolíticos respuestas de células T están vinculados a los resultados clínicos favorables [62]. Esto sugiere que las estrategias inmunomoduladoras que mejoran estas respuestas de células T de origen natural pueden mejorar los resultados clínicos más.
A diferencia de infiltrados de células T, la relación entre autoanticuerpos específicos de tumores y los resultados clínicos es menos claro. Este problema se ha estudiado más extensivamente para el antígeno tumoral p53, lo que provoca respuestas de autoanticuerpos en el 20-25% de los pacientes con EOC. Goodell et. Alabama. reportado una correlación positiva entre los autoanticuerpos contra p53 y el aumento de la supervivencia global en EOC [63]. Sin embargo, otros estudios han encontrado una correlación negativa [64], [65] o ninguna correlación [66], [67]. En cuanto a NY-ESO-1, encontramos una tendencia hacia los pobres resultados en los pacientes con autoanticuerpos contra NY-ESO-1 en la cohorte de 35 casos estudiados aquí (datos no mostrados), pero esta tendencia no se observó en una cohorte independiente de 35 pacientes de un estudio previo [24] (datos no mostrados). Como se discutió anteriormente, la respuesta inmune a EOC implica múltiples antígenos, por lo tanto creemos que la importancia pronóstica de autoanticuerpos se aborda mejor mediante un grupo ampliado de antígenos tumorales y las grandes cohortes de pacientes.
La respuesta de autoanticuerpos a NY-ESO -1 correlacionada con la infiltración de células T de estroma tumoral en comparación con el epitelio tumoral. Esto puede reflejar un problema de estadística, como el número absoluto de células T fue mayor en el estroma del tumor en comparación con el epitelio, permitiendo que los valores del estroma para lograr la significación estadística. De hecho, el análisis de correlación de Spearman rango mostró una relación positiva entre autoanticuerpos contra NY-ESO-1 y la infiltración del epitelio tumoral por células CD3 + y CD8 +, pero esto no alcanzó significación estadística (datos no mostrados). Alternativamente, puede haber una explicación biológica. En el paradigma Th1 /Th2, se cree que las respuestas inmunes a polarizar hacia mecanismos efectores humorales o citolíticos [68]. Aplicado a nuestros resultados, esto sugeriría que los pacientes con una fuerte respuesta de autoanticuerpos tendrían respuestas citolíticas débiles, que pueden dar lugar a la infiltración incompleta (es decir, del estroma) de tejido tumoral por las células T. Una segunda posibilidad es sugerido por modelos murinos donde las respuestas de autoanticuerpos se han relacionado con la debilidad de las respuestas de células CD8 + T citolíticas [69]. En este caso, se propuso que los autoanticuerpos facilitar la captación y presentación de antígenos tumorales por las células B a expensas de las células dendríticas. Puesto que las células B son células presentadoras de antígenos menos potente que las células dendríticas, el resultado neto es una respuesta inferior de células T contra el tumor [69]. Una consideración final es que, en el presente estudio, las respuestas de autoanticuerpos a NY-ESO-1 se correlacionaron con infiltración de tumor, no sólo por las células T CD8 +, sino también por CD4 + y células T FoxP3. Las últimas células pueden representar células T reguladoras, que podrían inhibir las células T citolíticas respuestas y limitar el grado de infiltración del tumor [32]. Actualmente estamos recogiendo muestras de sangre y del tumor emparejados a partir de una cohorte más amplia, prospectivo de pacientes con EOC para entender mejor la relación entre los autoanticuerpos específicos de tumores, las células T infiltrantes de tumor y los resultados clínicos.
Aunque no es el objetivo principal de este trabajo, hemos tenido la oportunidad de evaluar el efecto de la quimioterapia neoadyuvante en las células T infiltrantes de tumores en 15 pacientes. En general, los tumores tratados mostraron una mayor infiltración de todos los subconjuntos de células T, y esto alcanzó significación estadística para CD3 + y CD8 +. Esto es una reminiscencia de los estudios de cáncer de mama, que indicaron un aumento en la infiltración de células T después de la quimioterapia con taxanos [70] y otros agentes [71] y una asociación con respuestas clínicas favorables. Los taxanos también pueden promover la inmunidad tumoral mediante la mejora de la actividad de T y NK de células [72] - [75] y la presentación de antígenos [76]. Asimismo, agentes de platino pueden mejorar la síntesis de citoquinas por las células T humanas [77], abrogar supresor de la actividad de células T [78] y sensibilizar a las células EOC a la apoptosis mediada por Fas [79]. Por lo tanto, el platino /quimioterapia basada en taxanos puede tener efectos favorables sobre la inmunidad del huésped a la EOC, una hipótesis que estamos investigando actualmente en una cohorte prospectiva de pacientes.
Varios grupos han intentado inmunoterapia adoptiva del cáncer de ovario usando células T expandidas de Las células T infiltrantes de tumor [50], [80] - [89]. Aunque se han reportado respuestas anecdóticas prometedores, estos esfuerzos generalmente han tenido un éxito limitado. Es de destacar que el tejido de tumor sólido de IROC013 paciente estaba en gran parte negativa para la expresión de NY-ESO-1, a pesar de tener células T NY-ESO-1-específicas en tumor y ascitis. Si este escenario es representativo de otros pacientes EOC, esto sugeriría que muchas células T infiltrantes de tumor pueden reconocer antígenos que están mal expresados por el tejido tumoral, posiblemente debido a la selección inmune durante el desarrollo del tumor. Si vamos a hacer realidad la promesa de la inmunoterapia para el COE, existe una necesidad urgente de identificar antígenos diana que son esenciales para el crecimiento y la supervivencia de los tumores recurrentes, resistentes a la quimioterapia. Nuestros resultados sugieren que las respuestas de autoanticuerpos tienen un valor práctico para la identificación de antígenos y deben estudiarse con respecto a su papel en la inmunidad tumoral de acogida y los resultados clínicos.
Materiales y Métodos
Los sujetos del estudio
Todas las muestras y datos clínicos se obtuvieron con consentimiento informado en virtud de los protocolos aprobados por el Consejo de Ética de Investigación de la BC Cancer Agency y la Universidad de la Columbia británica. El caso de cohorte retrospectivo consistió en 35 mujeres con cáncer de ovario seroso de alto grado de los que se obtuvo el suero emparejado y el tumor de tejido ovárico (OvCaRe Banco de Tumores, Vancouver, BC, Canadá). se obtuvo el tejido tumoral en el momento de la cirugía primaria antes de cualquier otro tratamiento. La Tabla 1 muestra las características clínicas generales de la 35-caso cohorte. La cohorte retrospectiva también incluye un tejido de 15 mujeres adicionales que recibieron quimioterapia neoadyuvante antes de la cirugía primaria; estos casos se discuten por separado en los resultados. Las muestras de sangre, ascitis y del tumor también se recogieron a partir de una cohorte prospectiva de 15 pacientes a través del repositorio de tejido tumoral de la BC Cancer Agency. muestras de suero de control se obtuvieron de 60 mujeres sin antecedentes personales conocidos de cáncer de ovario o de otros tipos de cáncer. Todos los sujetos informaron de autocontrol recibir un resultado negativo mamográfica en el último año. La distribución por edades de la cohorte de control (media de 62,0 años, desviación estándar de 12,3 años, rango de 45,9 a 88,9 años) fue similar a la del caso de cohortes.
Especímenes
tumorales séricos y
cohorte retrospectivo .
se obtuvo tejido tumoral durante la cirugía citorreductora primaria. Tejido tenía un tiempo de isquemia de menos de 30 minutos y pasó menos de 48 horas en formalina antes de ser procesados en parafina. Un microarray tisular (TMA) se construye tomando núcleos duplicadas 0,6 mm a partir de bloques tumorales después de la revisión de las secciones con hematoxilina y eosina por un patólogo. Los núcleos se seleccionan de regiones de tumor que contienen proporciones representativas de epitelio y el estroma, evitando al mismo tiempo las regiones altamente necróticos. TMA se ensamblaron utilizando un tejido arrayer Patología dispositivos (Westminster, MD). Las muestras de suero de casos se recogieron antes de la cirugía o la quimioterapia. Las muestras de sangre se procesaron por procedimientos estándar de laboratorio.
cohorte prospectivo.
Se recogió sangre antes de la cirugía en tubos Vacutainer heparanized, y las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislaron por centrifugación de densidad Ficoll. estado de HLA-A2 se determinó mediante citometría de flujo en un FACSCalibur (BD Biosciences, San Jose, CA) después de tinción de la superficie PBMC con anticuerpo anti-HLA-A2 (BB7.2 clon, BD Pharmingen, San Diego, CA). Ascitis recogidos durante la cirugía se centrifugó (