Extracto
Antecedentes
Recientemente, hemos mostrado que IGFBP2 se sobreexpresa en tejidos de cáncer de pulmón primario. Este estudio tiene como objetivo determinar si IGFBP2 es elevada en las muestras de sangre de pacientes con cáncer de pulmón y si su nivel se asocia con resultados clínicos.
Metodología /Principales conclusiones
Los niveles plasmáticos se determinaron IGFBP2 ciegamente por la enzima = Conectado prueba de inmunoensayo en 80 pacientes con cáncer de pulmón y 80 controles sanos emparejados por caso para la comparación. Se analizaron muestras de sangre para los niveles de IGFBP2 de un 84 pacientes adicionales con cáncer de pulmón y luego realizarán las pruebas de asociaciones entre los niveles IGFBP2 la sangre y los parámetros clínicos en los 164 pacientes con cáncer de pulmón. Todas las pruebas estadísticas fueron de dos caras y las diferencias con p & lt; 0,05 se consideró significativo. La concentración media en plasma de IGFBP2 en pacientes con cáncer de pulmón fue significativamente mayor que en los controles sanos (388,12 ± 261,00 ng /ml vs 219.30 ± 172.84 ng /ml, p & lt; 0,001). IGFBP2 se incrementó en todos los tipos de cáncer de pulmón, incluyendo adenocarcinoma, cáncer de células escamosas y el cáncer de células pequeñas, independientemente de la edad, el sexo o el consumo de tabaco de los pacientes. IGFBP2 niveles fueron ligeramente, pero significativamente asociados con el tamaño del tumor y fueron significativamente mayores en el estadio IV de la enfermedad en estadio I o III. Un análisis multivariante mostró que los pacientes con cáncer de pulmón cuyos IGFBP2 sangre fue mayor que 160,9 ng /ml tuvieron como resultado una supervivencia pobre, con un riesgo relativo de 8,76 (IC del 95%: 1,12 a 68,34; p = 0,038 después de ajustar por el tamaño del tumor, patología, y escenario). El tiempo medio de supervivencia para los pacientes con sangre IGFBP2 & gt; 160,9 ng /ml es de 15,1 meses; mientras que la supervivencia mediana del tiempo fue 128,2 meses para los pacientes cuya sangre fue IGFBP2 ≤160.9 ng /ml (p = 0,0002).
Conclusiones /Importancia
IGFBP2 sangre es significativamente mayor en los pacientes con cáncer de pulmón. Un alto nivel de circulante de IGFBP2 se asocia significativamente con la supervivencia de los pobres, lo que sugiere que los niveles de IGFBP2 sangre podría ser un biomarcador pronóstico para el cáncer de pulmón
Visto:. Guo C, H Lu, Gao W, Wang L, K Lu, Wu S, et al. Factor de Crecimiento (2013) Similar a la Insulina Binding Protein-2 nivel aumenta en la sangre de cáncer de pulmón Los pacientes y se asocia con una baja supervivencia. PLoS ONE 8 (9): e74973. doi: 10.1371 /journal.pone.0074973
Editor: Arun Rishi, Wayne State University, Estados Unidos de América
Recibido: 19 Marzo, 2013; Aceptado: August 12, 2013; Publicado: 17 Septiembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Guo et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado en parte por los Institutos nacionales de Salud a través de R01 CA092481 y R01 CA124951 a B. fang, Especializada Programa de Investigación de Excelencia (SPORE) de subvención CA070907, la Universidad de Texas MD Anderson Cancer Center, programa de subsidios para CA-016672, Programa de pulmón, Análisis de ADN y citometría de flujo, y el Fondo para el celular Imaging Core, y el Fondo de Investigación Homero Flor terapia génica, la terapia génica Fondo Charles Rogers, el flora & amp; Stuart Mason fondo de investigación de cáncer de pulmón, el Fondo Memorial Charles B. Swank para la Investigación del Cáncer de esófago, el Fondo Sweeney O. George para la Investigación del Cáncer de esófago, el Fondo Torácica génica Terapia Phalan, y el Fondo dotado MW Elkins Torácica Cirugía Oncológica, y Chapman Fundación. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
a pesar de la llegada de nuevos agentes contra el cáncer, el cáncer de pulmón sigue siendo la principal causa de mortalidad por cáncer en los Estados Unidos y en todo el mundo [1]. Un estudio reciente mostró que el diagnóstico precoz mediante cribado de baja dosis helicoidal tomografía computarizada (TC) podría reducir significativamente la tasa de mortalidad del 6,7% para los pacientes con cáncer de pulmón [2], lo que demuestra que el diagnóstico precoz es la clave para mejorar la supervivencia de los pacientes. Sin embargo, el diagnóstico precoz del cáncer de pulmón es un reto porque el cribado TC de baja dosis es muy costoso y no es probable asequible para la población general [3]. Por otra parte, se necesitan biomarcadores predictivos de la respuesta al tratamiento y el pronóstico en las clínicas para guiar decisiones terapéuticas sobre las diversas opciones [4,5]. Los biomarcadores que identifican subgrupos de pacientes con un pronóstico significativamente diferentes pueden proporcionar información útil sobre las estrategias de tratamiento para estos subgrupos, como si se necesita una agresiva terapia adyuvante para los pacientes con mal pronóstico. Desafortunadamente, muy pocos biomarcadores serológicos que pueden utilizarse para el diagnóstico o pronóstico de cáncer de pulmón temprano son clínicamente disponible; Por lo tanto, la identificación de estos biomarcadores es altamente deseable.
factor de crecimiento similar a la insulina (IGF) proteínas de unión (IGFBP) son una familia de proteínas (seis en los seres humanos) que se unen y sirven como portadores de los IGF, la prolongación de la IGF vida media en la circulación y la modulación de las concentraciones de IGF locales y actividades [6]. Estas proteínas comparten una estructura de tres dominio conservado, que consta de dos dominios ricos en cisteína conservados en N- y C-terminales que se requieren para IGF de unión y un dominio central no conservada que los separa [7]. En los seres humanos, IGFBP3 es el más abundante y IGFBP2 es la segunda IGFBP más abundante en la circulación. A diferencia de IGFBP3, que induce la actividad antitumoral en diferentes tipos de cáncer [8,9], IGFBP2 se ha demostrado que la promoción de tumorigénesis [10], la invasión de células del cáncer [11], metástasis [12], cáncer de expansión de células madre [13], y angiogénesis tumoral [12,14] en varios tipos de cánceres. De hecho, IGFBP2 se sobreexpresa en los tejidos tumorales de glioma [15], cáncer de mama [16,17], cáncer de ovario [18], cáncer de próstata [19], el cáncer colorrectal [20], cáncer gástrico [21], cáncer de pulmón [ ,,,0],22], leucemia [23], y astrocitoma [24]. Por otra parte, los niveles séricos o IGFBP2 plasma elevados se han observado en pacientes con glioma [25], cáncer de próstata [26,27], cáncer de ovario [28], y el cáncer de colon [29,30]. El aumento de expresión de IGFBP2 está implicada tanto en un tiempo más corto de supervivencia global [28,29,31] o la resistencia a la quimioterapia [23,32]. En conjunto, estos resultados sugieren que IGFBP2 podría ser una proteína oncogénica común para los diversos tipos de cánceres.
Para identificar posibles biomarcadores de cáncer de pulmón, se determinó recientemente la expresión diferencial de proteínas en los tejidos de tumores de pulmón primarios y tejidos pulmonares normales de los mismos pacientes mediante el uso de un ensayo de matriz de proteína de fase inversa. IGFBP2 es una de las proteínas que se encuentran para ser aumentado de manera significativa en los tejidos tumorales primarios de los cánceres de pulmón de células no pequeñas, incluyendo adenocarcinoma y cáncer de células escamosas [22]. Debido IGFBP2 es una proteína secretora, su aumento de la expresión en los tejidos tumorales se puede reflejar en sus concentraciones en sangre. Para determinar si esto es cierto, se analizaron los niveles de IGFBP2 en el plasma de pacientes con cáncer de pulmón y controles sanos emparejados por caso. Nuestros resultados mostraron que la concentración en sangre de IGFBP2 fue significativamente mayor en los pacientes con cáncer de pulmón y que una alta concentración de IGFBP2 en la sangre de los pacientes se asoció con la supervivencia global corto.
Resultados
Características clínicas de pacientes con cáncer de pulmón
la información clínica de los 164 pacientes con cáncer de pulmón en nuestro estudio se resume en la Tabla 1. los pacientes (71 hombres y 93 mujeres) fueron 42-86 años de edad, con una edad media de 52. el adenocarcinoma y el carcinoma de células escamosas representó el 54% y el 21% de diagnóstico histológico, respectivamente. Hubo 33 pacientes con enfermedad en estadio I, 13 pacientes con enfermedad en estadio II, 40 pacientes con enfermedad en estadio III, y 67 pacientes con enfermedad en estadio IV. Hubo 138 pacientes (84%) que tenían un historial de consumo de tabaco /fumar. Los pacientes que recibieron cirugía, quimioterapia, radioterapia, o terapia de multimodalidad fueron 61 (37,2%), 105 (64,02%), 46 (28,05%), y 78 (46,34%), respectivamente. Seis pacientes (0,37%) no recibieron ningún tratamiento. Hubo 62 pacientes (37,8%) tenían metástasis al momento del diagnóstico, y 37 pacientes (22,56%) presentaron recidiva local durante el seguimiento. El tiempo medio de seguimiento fue de 37,5 meses. fueron los datos de supervivencia disponible para 152 pacientes, entre ellos 83 (54,61%) estaban vivos en el momento del análisis de datos. Las muestras de controles sanos fueron emparejados con la edad, el sexo, la raza y el hábito de fumar de los primeros 80 casos de cáncer de pulmón.
Variable
Paciente (N)
IGFBP2 ng /ml
Valor P
SexMale71382 0,4 ± ± 248.8Female93303.6 209.70.024Age & lt; 52 years77300.3 ± 183.3≥52 years87370.8 ± 261.40.129Smoking statusNever26306.3 ± 216.0Current & amp; carcinoma34313.5 Ever138343.6 ± ± 233.00.349Tumor HistologyAdenocarcinoma87334.8 de células 227.4Squamous ± carcinoma16310.7 de células pequeñas 251.7Non ± carcinoma24389.7 de células 143.1Small ± 222.3≥0.099
** Desconocido /faltante data3Disease StageStage I
* 33259,4 ± 187.40.001
* Etapa II13402.3 ± 282.6Stage III#40324,3 ± 245.30.029#Etapa IV
*#67383,6 ± 226.4≥0.07
** Desconocido /data11MetastasisNo92305 faltante 0,7 ± ± 229.8Yes62381.1 227.00.047Unknown /faltante Data10Table 1. características de los pacientes y los niveles de IGFBP2 de plasma (media ± dE)
* valor de p para la etapa I frente a estadio IV.;#Para la fase III frente al estadio IV;
** para otros grupos de la misma categoría CSV Descargar CSV
Los niveles plasmáticos de IGFBP2 en pacientes con cáncer de pulmón y en controles emparejados
Para probar si hay una diferencia en los niveles circulantes de IGFBP2 entre los pacientes con cáncer de pulmón y controles sanos, se obtuvieron muestras de plasma de pacientes con cáncer de pulmón 80 y 80 muestras de casos sanos emparejados del banco de sangre mantenido en el departamento de nuestra institución de la epidemiología. Los niveles plasmáticos IGFBP2 se determinaron por ELISA ciegamente sin saber el investigador de cualquier información clínica. IGFBP2 valores para cada muestra codificada se analizaron estadísticamente a continuación, para la asociación y correlación con la información clínica. Los resultados mostraron que la concentración plasmática media de IGFBP2 en pacientes con cáncer de pulmón (388,12 ± 261,00 ng /ml) era significativamente mayor que en los controles sanos (219,30 ± 172,84 ng /ml,
P
= 2,4 x 10
-7) (Figura 1A). Cuando los datos se analizaron sobre la base del sexo, la edad y la condición de fumador, los valores IGFBP2 sigue siendo significativamente mayor en los pacientes con cáncer de pulmón que en los controles dentro de cada subgrupo (Figura 1B). Dentro de los controles sanos, el nivel IGFBP2 sangre fue significativamente mayor en los mayores de 52 años o mayores de los menores de 52 (media de 255,2 ng /ml frente a 183,4 ng /ml,
P = 0,036
). Este resultado demuestra que circulan valores IGFBP2 fueron significativamente mayores en los pacientes con cáncer de pulmón, independientemente de su edad, sexo y tabaquismo.
A) Los diagramas de caja muestran la media (línea dentro de la caja) ± 1 SD (cuadro ) y ± 2 SD (la barra de error). La diferencia entre los valores medios de los dos grupos es significativa (
P
= 2,4 x 10
-7). B) La comparación de los pacientes con cáncer de pulmón y controles sanos sobre la base del sexo, la edad y la condición de fumador. En cada grupo, los valores IGFBP2 en pacientes con cáncer de pulmón promedio fueron significativamente más altos que los de los controles sanos (
P Hotel & lt; 0,01). C) La curva de eficacia diagnóstica (ROC) para el diagnóstico de cáncer de pulmón con valores IGFBP2 plasma.
La especificidad y la sensibilidad de la utilización de IGFBP2 de sangre para el diagnóstico del cáncer de pulmón
A continuación, se determinó la especificidad y sensibilidad de la utilización de los niveles de IGFBP2 plasma para diagnóstico de cáncer de pulmón. Los resultados mostraron que el receptor característica de funcionamiento del plot (ROC) tenía un área bajo la curva de alrededor de 0,70 (Figura 1C). A un valor de corte de 160,9 ng /ml, la especificidad y sensibilidad de la utilización de IGFBP2 solo para diferenciar el cáncer y grupos sanos fueron 76,92% y 75,61%, respectivamente. Fisher análisis exacto mostró que la diferencia entre los dos grupos fue significativa (
P = 6,01 x
10
-8). La diferencia entre los dos grupos se mantuvo significativa cuando la especificidad aumentó a 90% a un valor de corte de 437ng /ml, en el que la sensibilidad punto fue de aproximadamente 30%. Cuando la especificidad aumentó a 95% (punto de corte de 450ng /ml), sin embargo, la sensibilidad fue sólo alrededor de 13,8%, y la diferencia entre los dos grupos ya no fue significativa (
P
= 0,058). Este resultado sugiere que los valores IGFBP2 sangre por sí solos pueden no ser suficiente para el diagnóstico de cáncer de pulmón debido a que los valores de sensibilidad y especificidad globales óptimos fueron aproximadamente 70%. Sin embargo, IGFBP2 podría incrementarse de manera significativa en un subgrupo de pacientes con cáncer de pulmón.
circulante IGFBP2 en los subgrupos de pacientes de cáncer de pulmón
Con el fin de determinar qué subgrupo de pacientes pulmonares podría haber aumentado los niveles de IGFBP2 sangre , determinamos los niveles de IGFBP2 en otros 84 pacientes de cáncer de pulmón y, a continuación analizamos las diferencias de IGFBP2 sangre entre los pacientes con cáncer de pulmón en la base del diagnóstico histológico, estadio clínico, y el tamaño del tumor. Los resultados mostraron que los niveles de IGFBP2 medias en pacientes de sexo masculino (382.38 ± 248.81ng /ml) fueron significativamente más altos que los de pacientes de sexo femenino (303.58 ± 209.73ng /ml,
P
= 0,024). Hubo una tendencia para IGFBP2 aumente a medida que la etapa de la enfermedad progresó de estadios I a IV. La diferencia en los valores IGFBP2 entre los subgrupos de pacientes con estadio I y estadio IV fue significativa (etapa I: 259,42 ± 187,38 ng /ml, etapa IV: 383,6 ± 226.36ng /ml;
P = 0,001
; Tabla 1), lo que sugiere que IGFBP2 se incrementa cuando la enfermedad progresa a la etapa avanzada. El valor IGFBP2 sangre fue ligeramente pero también se correlacionó significativamente con el tamaño del tumor (R = 0,21,
P
= 0,023) (Figura 2A). Para determinar si los niveles de IGFBP2 sangre reflejan expresiones IGFBP2 en tumores primarios de pacientes, se analizaron las expresiones IGFBP2 en dos tejidos de tumor primario de pacientes con alto o bajo IGFBP2 en sus muestras de sangre. El análisis inmunohistoquímico demostró que la expresión IGFBP2 no era detectable en el tumor primario de un paciente con bajo nivel IGFBP2 sangre pero fue marcadamente elevada en el tumor de un paciente con IGFBP2 arterial alta (Figura 2B), lo que sugiere que los niveles de IGFBP2 sangre pueden reflejar la expresión IGFBP2 en los tumores. Sin embargo, la investigación en un conjunto más amplio de muestras de pacientes con muestras de sangre y tejidos emparejados será necesaria para determinar las correlaciones entre los niveles sanguíneos IGFBP2 y tumorales.
A) Correlación entre los valores IGFBP2 la sangre y el tamaño del tumor (R = 0,21 ,
P = 0,023
). B) la expresión IGFBP2 en tumores primarios de pacientes con IGFBP2 baja o alta de plasma. Los niveles de IGFBP2 en plasma se muestran en la parte superior del panel.
Sin embargo, la diferencia entre los subgrupos definidos por la histología del tumor no fue significativa, aunque el valor medio en los casos de cáncer de células pequeñas fue relativamente más alta que la de otras histologías (cáncer de pulmón de células pequeñas: 389,7 ± 222,28 ng /ml, cáncer de pulmón de células no pequeñas: 310.69 ± 143.09ng /ml, adenocarcinoma: 334.82 ± 227.39ng /ml, carcinoma de células escamosas: 315,47 ± 251,71 ng /ml,
P = 0,099
). No hubo diferencia significativa en IGFBP2 plasma cuando los pacientes se agruparon por la edad media de la población de pacientes (edad & lt; 52 años: 300.29 ± 183,29 ng /ml, ≥52 años: 370,8 ± 261.35ng /ml,
P
= 0,12), o la condición de fumador (nunca fumadores: 306,33 ± 215,95 ng /ml, cada vez fumar:. 370,8 ± 261.35ng /ml,
P
= 0,34)
Asociación de IGFBP2 circulantes con los resultados clínicos
a continuación, determinamos si el aumento de IGFBP2 sangre se asoció con la supervivencia del paciente. El análisis univariado mostró que la supervivencia se correlaciona significativamente con histopatologías, estadios de la enfermedad, el tamaño del tumor, y los niveles de IGFBP2 sangre (valor de corte a 160,9 ng /ml, que tiene la mayor área bajo la curva ROC) (Tabla 2). Un análisis multivariante mostró que los pacientes con cáncer de pulmón con la sangre IGFBP2 & gt; 160,9 ng /ml tuvieron un resultado pobre supervivencia (razón de riesgo = 8,76; IC del 95%: 1,12 a 68,34; p = 0,038 después de ajustar por el tamaño del tumor, la patología y la etapa) (Tabla 2). El tiempo medio de supervivencia para los pacientes con niveles de IGFBP2 & gt; 160,9 ng /ml fue significativamente más corta que la de los pacientes con un nivel IGFBP2 ≤160.9ng /ml (mediana de supervivencia de 15,1 meses frente a 128,16 meses,
P =
0,0002, Figura 3A). También se determinó si existía una diferencia en la supervivencia cuando los pacientes se dividieron en 4 grupos en función de sus niveles de IGFBP2 sangre. La razón de riesgo para la supervivencia pobres aumentó a medida que el nivel IGFBP2 aumentó del cuartil 1 al cuartil 4 (Figura 3B). Cada cuartil dispone de 38 pacientes. El tiempo medio de supervivencia para el 1
er, 2
ª, 3
er y 4
º cuartiles fueron 128.16, 21.81, 11.11, y 10.92 meses, respectivamente (
P
= 0,033). Estos resultados indican que los niveles de IGFBP2 sangre podría ser un parámetro útil para predecir los resultados de los pacientes.
Variable
Alive, N (%)
Muerto, N (%) Índice de riesgo de
95% CI
valor de p
SexMale35 (52.24) 32 (47.76) 1Female48 (56.47) 37 (43.53) estado 0.790.49-1.270.325Age1.000.98-1.030.944Smoking Never14 (56.00) 11 (44.00) 1Former19 (50.00 ) 19 (50.00) 1.050.50-2.230.891Current50 (56.18) 39 (43.82) 1.150.59-2.260.681Tumor histología Adenocarcinoma50 (60.02) 33 (39.75) carcinoma22 de células 1Squamous (68,75) 10 (31,25) 0.580.28- carcinoma7 de células pequeñas 1.180.132Non (46.67) 8 carcinoma4 (53.33) de células 1.090.50-2.370.835Small (18,18) 18 (81,82) 2.671.45-4.900.002Disease Etapa I29 (87.8) 4 (12.12) 1stage II10 (76,92) 3 (23,08) 3.070.62-15.260.169Stage III22 (56.41) 17 (63.59) 7.012.03-24.230.002Stage IV 22 (32.84) 45 (67.16) 12.443.81-40.650.000Tumor Size1.191.05- 1.350.005Metastasis No61 (66.30) 31 (33.70) 1 Yes22 (36.67) 38 (63.33) 1.560.88-2.770.130IGFBP2 ≤160.929 (87.88) 4 (12.2) 1 & gt; 160,954 (45,38) 65 (54,62) 5.582.03 -15.34 0.001Multivariate (IGFBP2)
* ≤160.929 (87.88) 4 (12.2) 1 & gt; 160.954 (45,38) 65 (54,62) 8.761.12-68.340.038Table 2. análisis univariado y multivariado de la supervivencia de los coeficientes de riesgo
* ajustado por la histología, el estadio y el tamaño del tumor CSV Descargar CSV
a) las curvas de supervivencia de Kaplan-Meier para los pacientes con cáncer de pulmón agrupados en el valor de corte IGFBP2 sangre de 160.9ng /ml. El tiempo medio de supervivencia para los pacientes con niveles más altos IGFBP2 (N = 120) fue significativamente más corta que la de los pacientes con un nivel IGFBP2 inferior (N = 32,
P = 0,0002
). B) Las curvas de supervivencia de Kaplan-Meier para los pacientes de cáncer de pulmón subdividen en cuatro grupos sobre la base de sus niveles de IGFBP2 sangre. Cada quartitle dispone de 38 pacientes. El tiempo medio de supervivencia para el 1
er, 2
ª, 3
er y 4
º cuartiles fueron 128.16, 21.81, 11.11, y 10.92 meses, respectivamente (
P
= 0,033).
Discusión
Nuestros resultados mostraron que los niveles de IGFBP2 sangre fueron significativamente mayores en los pacientes con cáncer de pulmón que en los controles sanos, que son consistentes con un estudio reciente sobre IGFBP2 suero los niveles en 98 pacientes con cáncer de pulmón, 17 enfermedad pulmonar benigna y 23 controles normales en china, en los que los niveles de IGFBP2 suero y sus autoanticuerpos fueron significativamente elevados en pacientes con cáncer de pulmón [33]. Sin embargo, otro estudio reciente sobre 163 pacientes con diferentes tipos de cáncer, incluyendo 34 pacientes con cáncer de pulmón y 13 controles sanos en Alemania mostró que los niveles de IGFBP2 suero aumentaron solamente de manera significativa en los tumores de cabeza y cuello, pero no en otros tipos de cáncer, incluyendo cáncer de pulmón cáncer [34]. No está claro si la discrepancia con el estudio alemán es debido al tamaño de la muestra o poblaciones de pacientes. Sin embargo, nuestro estudio mostró que el aumento de IGFBP2 sangre se asocia con la progresión de la enfermedad y los pobres resultados después de ajustar por otros parámetros clínicos, lo que sugiere que el nivel IGFPB2 sangre podría ser un parámetro útil para predecir los resultados clínicos.
Nuestro estudio indica que el nivel de sangre IGFBP2 solo podría ser no específico o lo suficientemente sensible para el diagnóstico de cáncer de pulmón debido a que tanto la especificidad y la sensibilidad fueron aproximadamente el 75%. No está claro si la combinación del nivel IGFBP2 con otros biomarcadores o cribado enfoques aumentaría su especificidad y sensibilidad. De hecho, aunque se han identificado y evaluado en pacientes con cáncer de pulmón de un número de biomarcadores de sangre, ninguno tiene por sí mismo muestra la especificidad y la sensibilidad general suficiente para el diagnóstico de cáncer de pulmón [35-37]. Dado que el cáncer de pulmón es una enfermedad heterogénea, puede ser que no sea realista esperar que cualquier molécula sola pasar uniformemente elevada en los pacientes con cáncer de pulmón. Especulamos que los marcadores pueden ser utilizados juntos para aumentar la especificidad y la sensibilidad de las pruebas de detección o ser usado junto con otros métodos de selección para aumentar su especificidad. Por ejemplo, la exploración CT de dosis baja se ha encontrado que son útiles para el diagnóstico precoz del cáncer de pulmón, aunque la tasa de falsos positivos es de aproximadamente 96% [2]. marcadores de la sangre pueden proporcionar una forma no invasiva para detectar verdaderos positivos en pacientes con sospecha de cáncer pulmonar en la TC.
Se encontró un 10% de los controles sanos tenía un nivel IGFBP2 sangre de 437ng /ml o superior. No está claro si esas personas eran variantes normales o tenían enfermedad no diagnosticada. Una limitación de este trabajo es que el seguimiento de información clínica no estaba disponible para resolver esta cuestión. Debido a que se informó IGFPB2 sangre para ser inversamente asociado con la masa corporal en personas sanas [38], sospechamos que IGFBP2 sangre podría ser alta en algunas personas sanas con la masa corporal muy baja. Aunque las concentraciones IGFBP2 de plasma en los humanos adultos sanos tenían fluctuaciones mínimas en un período de muestreo de 48 horas y no cambió significativamente postprandial o después de una infusión de glucosa, IGFBP2 plasma aumentó aproximadamente 1,7 veces mayor en los pacientes con deficiencia extrema de insulina o después de 9 días de ayuno [39].
Nuestro estudio proteómico reciente sobre los tejidos tumorales de NSCLC primario mostró que un subconjunto de pacientes con cáncer de pulmón tenían un aumento dramático de IGFBP2 en su tejido del tumor primario [22]. Sin embargo, debido a que las muestras eran de diferentes conjuntos de pacientes, no estaba claro si el aumento de IGFBP2 sangre se asoció con el aumento de expresión IGFBP2 en los tejidos tumorales, aunque se observó una correlación en dos muestras pareadas. Sin embargo, consistente con la observación en los tejidos tumorales primarios, IGFBP2 sangre fue también aumentó en un subconjunto de pacientes con cáncer de pulmón de nuestro estudio. Será de interés para investigar si el aumento de IGFBP2 en la sangre o tumor primario representa cambios específicos en la transducción de señales, el metabolismo o funciones biológicas en el cáncer de pulmón, como se informó en el glioma; en el que el cáncer, el aumento de IGFBP2 podría servir como un biomarcador para el estado de PTEN y PI3K /AKT activación [40] o el estado Ink4a-Arf [41].
La asociación entre el aumento IGFBP2 sangre con menor supervivencia global reportado aquí en los pacientes y por otros en el cáncer de ovario, cáncer colorrectal, y cáncer de próstata [28,29,31] cáncer de pulmón sugiere que IGFBP2 puede contribuir a la evolución y la progresión maligna. De hecho, el IGFBP2 /integrina /CIC /NF-kB red se informó recientemente a ser un jugador clave en la progresión del glioma y pobres resultados [42]. Se encontró una mayor expresión de IGFBP2 causada por la pérdida de miR-126 para promover la metástasis de células de cáncer de mama por el reclutamiento de las células endoteliales a través del sitio del cáncer hasta la regulación del receptor del factor de crecimiento de insulina 1 (IGF1 R) vía [12] señalización. Como una molécula capaz de unirse a IGF, integrinas, y la matriz extracelular [6], IGFBP2 probablemente juega un papel importante en la transducción de señales y la homeostasis metabólica en los tumores, incluyendo ejercer un efecto autocrino en las células cancerosas y efectos paracrinos sobre las células endoteliales y otras células mesenquimales . Caracterización de las vías IGFBP2 mediado en células de cáncer de pulmón puede proporcionar información molecular en la progresión del cáncer de pulmón y potenciales dianas terapéuticas para los pacientes con cáncer de pulmón con una mayor IGFBP2.
Materiales y Métodos
muestras de pacientes
Nos corresponde muestras de sangre de 80 pacientes con cáncer de pulmón y 80 controles sanos de edad, el sexo, la raza y la historia de tabaquismo. Se obtuvieron las muestras recogidas en el banco muestra de sangre mantenido en el Departamento de Epidemiología en nuestra institución. Las muestras de sangre de otros pacientes con cáncer de pulmón 84 o bien se obtienen de manera similar o recogidos de los pacientes que se sometieron a cirugía en la Universidad de Texas MD Anderson Cancer Center entre 2007 y 2011. Las muestras de sangre fueron recogidas con heparina o ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) como agentes de anticoagulación . El plasma se aisló por centrifugación de las muestras a 1500 g durante 5 min a temperatura ambiente. Un estudio piloto en tres controles sanos no mostró ninguna diferencia significativa en los niveles de IGFBP2 en suero o plasma obtenidos con heparina o EDTA de la misma persona. Todos los pacientes con cáncer de pulmón y voluntarios sanos habían firmado formularios de consentimiento informado para la toma de muestras. Este estudio fue aprobado por el comité de ética de la Universidad de Texas M D Anderson Cancer Center. Las muestras de plasma se congelaron y se mantuvieron a -80 ° C hasta que se llevaron a cabo los ensayos.
Enzyme-ensayo inmunoenzimático (ELISA)
Plasma IGFBP2 se midió mediante un inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA ) kit (Cell Sciences, Canton, MA, EE.UU.), siguiendo las instrucciones del fabricante. Brevemente, las muestras de plasma se diluyeron 1: 200 con tampón de dilución. Se añadieron cien microlitros de las muestras diluidas y los estándares IGFBP2 diluidos en serie por duplicado en cada pocillo de una placa de 96 pocillos pre-recubiertas con anticuerpo de captura IGFBP2. Después de incubar a 4 ° C durante la noche, las placas se lavaron con solución salina tamponada con fosfato que contiene 0,05% de Tween 20 y se incubaron con anticuerpo de detección IGFBP2 anti-humano biotinilado y rábano picante estreptavidina conjugada con peroxidasa. La actividad enzimática de la peroxidasa de rábano picante se determinó con su sustrato 3,3 ', 5,5'-tetrametilbencidina midiendo la absorbancia a 450 nm usando un lector de placas de 96 pocillos (Dynatech International, Chantilly, VA, EE.UU.). IGFBP2 concentración se calculó a partir de la curva estándar.
tinción inmunohistoquímica
La tinción inmunohistoquímica se realizó en el Laboratorio de Histología núcleo de nuestra institución con el Laboratorio de Visión Autostainer 360 (Thermo Scientific). secciones fijadas en formalina e incluido en parafina de tejido (5 m de espesor) se deparaffinized, hidratados, y se calienta en un vapor para la recuperación de antígenos. Los portaobjetos se incubaron después con anticuerpo de conejo anti-humano IGFBP2 (Cell Signaling Technology). Rabbit IgG anti-humano se utilizaron como un control negativo para el anticuerpo primario. La peroxidasa de rábano conjugada con anticuerpo secundario fue proporcionada por el laboratorio central Histología.
El análisis estadístico
Se utilizó el software estadístico Stata 10.1 para Windows (StataCorp LP, College Station, TX, EE.UU.) para llevar a cabo todos los análisis estadísticos. Los valores de IGFBP2 se expresan como media ± desviación estándar (SD). Se analizaron los datos demográficos con la prueba de chi-cuadrado y los datos continuos en comparación con una prueba t de Student para muestras independientes. Se compararon las diferencias en los niveles plasmáticos de IGFBP2 entre los casos y controles mediante la prueba de Mann-Whitney no paramétrico y se evaluó la relación entre los niveles de IGFBP2 y parámetros clínicos mediante análisis de regresión lineal univariante. Se construyeron curvas de supervivencia de acuerdo con los niveles plasmáticos de IGFBP2 utilizando el método de Kaplan-Meier y las medianas de supervivencia en comparación con la prueba de log-rank. Las razones de riesgo y los intervalos de confianza del 95% para la supervivencia se estimaron mediante análisis de regresión de riesgos proporcionales de Cox, ajustando por el tamaño del tumor, estadio de la enfermedad, y la histología del tumor. Todos los
valores de p fueron de dos colas con 0,05 especificado como el umbral de significación estadística.
Reconocimientos
Nos gustaría dar las gracias a Luanne Jorewicz por su revisión editorial de este manuscrito .