Extracto
Aplicaciones
Se describen los efectos de la soja el consumo de isoflavonas de antígeno prostático específico (PSA), los niveles de hormonas, colesterol total, y la apoptosis en los hombres con cáncer de próstata localizado.
Metodología /Principales conclusiones
Hemos llevado a cabo un estudio aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo para examinar el efecto de las cápsulas de isoflavonas de soja (80 mg /día de isoflavonas totales, 51 mg /d aglucona unidades) en suero y tejidos biomarcadores en pacientes con cáncer de próstata localizado. Ochenta y seis hombres fueron asignados al azar al tratamiento con isoflavonas (n = 42) o placebo (n = 44) por hasta seis semanas antes de la prostatectomía programado. Se realizó el análisis de microarrays utilizando un chip genético regulación del ciclo celular y la apoptosis dirigida (GEArrayTM). Los cambios en la testosterona sérica total, testosterona libre, total de estrógenos, estradiol, PSA, y el colesterol total se analizaron al inicio, punto medio, y en el momento de la prostatectomía radical. En este análisis preliminar, 12 genes implicados en el control del ciclo celular y 9 genes implicados en la apoptosis se redujeron regulado en los tejidos tumorales de tratamiento en comparación con el control con placebo. Los cambios en la testosterona sérica total, testosterona libre, total de estrógenos, estradiol, PSA, y el colesterol total en el grupo tratado con isoflavonas en comparación con los hombres que recibieron placebo no fueron estadísticamente significativas.
Conclusiones /Importancia
estos datos sugieren que la ingesta a corto plazo de las isoflavonas de soja no afectó los niveles séricos de hormonas, colesterol total, o PSA
prueba de registro
ClinicalTrials.gov NCT00255125
Cita.: Hamilton-Reeves JM, Banerjee S, Banerjee SK, Holzbeierlein JM, Thrasher JB, Kambhampati S, et al. (2013) Corto Plazo de isoflavonas de soja intervención en pacientes con cáncer de próstata localizado: Ensayo aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo. PLoS ONE 8 (7): e68331. doi: 10.1371 /journal.pone.0068331
Editor: H. Fazlul Sarkar, Wayne Facultad de Medicina de la Universidad del Estado, Estados Unidos de América
Recibido: 5 de diciembre de 2012; Aceptado: 28-may de 2013; Publicado: 12 Julio, 2013
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Financiación:. El "isoflavonas de soja en el Estudio de Cáncer de Próstata" fue apoyado por becas VA Merit Review (PV, SB, SKB) y la Universidad de Kansas programa de subvención piloto del Centro del Cáncer (JHR). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de próstata es el cáncer no cutáneo más común en los hombres estadounidenses [1]. Los estudios epidemiológicos asociado el consumo de alimentos de soja en las poblaciones asiáticas con una disminución del riesgo de cáncer de próstata [2], [3], aunque la concentración de genisteína plasma no se ha asociado con el riesgo de cáncer de próstata en exposiciones alimentarias típicas de las poblaciones occidentales [2] - [4] . Las concentraciones de isoflavonas de soja que circulan en los hombres japoneses son al menos 10 veces mayor que Americana [5], [6] y los hombres europeos [4]. Una dieta típica japonesa de soja rica en isoflavonas de soja se compone de 25-100 mg /día, mientras que una dieta típica estadounidense contiene alrededor de 2-3 isoflavonas de soja mg /día [7]. estudios sobre la migración de los hombres asiáticos sugieren que sus tasas de incidencia del cáncer de próstata aumenta en relación directa con la duración del tiempo pasado que residen en los Estados Unidos [8], [9]. Del mismo modo, la incidencia de cáncer de próstata y la mortalidad se ha incrementado en los países asiáticos simultáneamente con la occidentalización de la dieta [10].
Los componentes de la dieta de soja pensado para suprimir el cáncer son los isoflavonas de la soja daidzeína, genisteína, y gliciteína. Las isoflavonas de soja se unen a los receptores de estrógeno y ejercer efectos hormonales. Los dos isoflavonas primarias en la soya son la genisteína y la daidzeína. Daidzeína a equol es convertido en el intestino de ciertos individuos. Las isoflavonas se acumulan en la glándula de la próstata [10] y se ha demostrado para modular las hormonas endógenas relevante a la carcinogénesis de próstata [11], [12]. Las isoflavonas de soja también ejercen efectos no hormonales para suprimir el cáncer a través de vías que se dirigen ciclo celular y la apoptosis, tales como G2 /M detención y la expresión de p21
in vitro Hoteles en andrógenos células de cáncer de próstata PC3 independientes [13]. inducida por la inhibición de soja con isoflavonas de la proliferación celular y la inducción de la apoptosis está mediada en parte a través de la regulación de la red de señalización Akt /FOXO3a /GSK-3beta /AR [14].
intervenciones de isoflavonas de soja a corto plazo en pacientes con cáncer de próstata han arrojado resultados mixtos. En una no ciego ensayo no aleatorizado, de 38 pacientes (20 con cáncer de próstata clínicamente significativa y 18 controles), una ingesta diaria de 160 mg /día de isoflavonas derivados del trébol rojo durante unos 20 días hasta que la prostatectomía radical llevó a significativamente mayor apoptosis de las las células tumorales [15]. En los hombres con cáncer de próstata, la soja o el consumo de isoflavonas se ha reducido considerablemente el PSA medio total en suero en comparación con los controles [16] - [18], aunque varios estudios no han mostrado efectos estadísticamente significativos sobre PSA en esta población [15], [19], [20]. Los efectos reductores del colesterol de los alimentos de soja se piensa sobre todo para ser mediada a través de la proteína de soja [21]; aunque recientemente, una intervención genisteína sólo en pacientes con cáncer de próstata localizado disminuye significativamente el colesterol total y este cambio fue estadísticamente significativa en comparación con el placebo [18].
Ya hemos publicado los datos de un estudio piloto llevado a cabo por nuestro laboratorio en una cohorte de 13 pacientes de cáncer de próstata (sin tratamiento previo) que fueron tratados con un suplemento de isoflavonas de soja que contiene 112 mg en total de isoflavonas (n = 4), 168 mg totales de isoflavonas (n = 3) o 224 mg de isoflavonas totales ( n = 4). Estos datos experimentales mostraron una reducción de PSA, testosterona y estrógeno, y un efecto variable sobre la expresión de ER con la baja regulación de la expresión del receptor visto a los 224 mg de isoflavonas totales por nivel de dosis día, mientras que no se observó ningún efecto sobre la expresión de AR [22 ].
el ensayo controlado con placebo presentes doble ciego, aleatorizado, fue diseñado para investigar más a fondo la eficacia del consumo total de isoflavonas de soja en una cohorte más amplia de los hombres mediante el control de los niveles de hormonas en suero, el colesterol total y PSA . Además, se evaluaron los efectos sobre el tumor y el tejido de próstata normal adyacente con conjuntos de genes para la regulación del control del ciclo celular y la apoptosis en los hombres con cáncer de próstata localizado.
Resultados
Detalles del estudio
Ochenta y siete sujetos fueron seleccionados para el estudio; 1 decidió no participar (Figura 1). Veintitrés sujetos no completaron la tercera visita porque se ha producido la cirugía o la radioterapia fecha de tratamiento antes de que se programó la última visita. Cincuenta y seis de los pacientes fueron sometidos a prostatectomía [placebo (n = 27), isoflavonas de soja (n = 29)]. Veintiocho sujetos elegidos radioterapia al final del estudio [placebo (n = 16), isoflavonas de soja (n = 12)] y 2 sujetos eligieron vigilancia activa [placebo (n = 1), isoflavonas de soja (n = 1)]. Todos los 86 sujetos completaron 2 semanas del estudio con un buen cumplimiento, y 63 sujetos completaron el estudio completo. De los 86 participantes, 74 muestras de orina desde el punto de tiempo de 2 semanas eran analizables de los metabolitos urinarios de fitoestrógenos (daidzeína, genisteína, glyctein, O-desmethylangolensin, dihidrodaidzeína, y equol). Los participantes acordaron evitar el consumo de soja en la dieta y no tomar suplementos nuevos. Sin embargo, dos participantes en el grupo de placebo mostraron altas concentraciones de metabolitos urinarios de fitoestrógenos, lo que sugiere que estaban consumiendo soja de otras fuentes. Todos los participantes analizados en el grupo de intervención parecían estar de acuerdo, y el 29% (10/35) fueron clasificados como productores de equol determinando si su (equol: daidzeína) log10. Proporción era mayor que -1.75 [23]
eventos adversos
Todos los eventos adversos fueron de grado 1 (leve). En el grupo de isoflavona, se registraron 4 eventos: 2 gastrointestinal y 2 en general. En el grupo tratado con placebo, se registraron 9 eventos: 6 gastrointestinal y 3 en general. Ningún paciente suspendió el tratamiento debido a eventos adversos.
Características basales
antropometría de línea de base, la demografía, la etapa clínica, y la actividad física no difirió entre los grupos (Tabla 1). No hubo diferencias en la línea de base de hormonas en suero, las concentraciones de colesterol y de PSA entre los grupos (tabla 2).
Marcadores séricos
No hay modulaciones significativas de testosterona total en suero, la testosterona libre, total de estrógenos, estradiol, antígeno específico de la próstata, o colesterol total se observaron en el grupo de isoflavona tratados en comparación con los hombres que recibieron placebo (Tabla 2).
marcadores de tejido
genes del ciclo celular expresión.
Doce genes implicados en el ciclo celular se redujeron regulado en el tejido prostático maligno de soja tratados, en comparación con el placebo tratada tejido maligno, respectivamente (Figura 2). El conjunto de genes del ciclo celular demostró la baja regulación de ciclo de división celular 27 (Cdc27), que participan en las interacciones proteína-proteína y el momento de la mitosis; apoptóticos factor de activación peptidasa 1 (APAF1), que participan en la iniciación de la apoptosis; ciclina B2 (CCNB2), que participan en la transformación de control del ciclo de las células beta mediada por el factor de crecimiento; Ciclina G1 (Ciclina G1) y G2 ciclina (CCNG2), activado por la proteína tumoral p53; ciclina C (CCNC), que participan en la fosforilación de la ARN polimerasa II; modificador enzima activadora de ubiquitina 1 (UBE1), que participan en el marcado de las proteínas celulares para la degradación; Cullin 2 (CUL2) y Cullin 3 (Cul3); factor de transcripción E2F 4 (E2F4); kinasa de control 2 (CHEK2) la expresión génica; y ataxia telangiectasia mutada (ATM), un importante punto de control.
La figura muestra la relación entre el gen de GAPDH.
Apoptosis expresión génica.
Nueve genes en implicados en la apoptosis se redujeron regulado en el tejido de próstata maligno de soja tratados en comparación con los tratados con placebo tejido maligno, respectivamente (Figura 3). El conjunto de genes de apoptosis demostró la baja regulación de CD40, que participan en una variedad de respuestas inmunes e inflamatorias; De células B linfoma no Hodgkin-2 (Bcl-2); baculoviral repetición IAP que contiene 1, 2, y 6 (BIRC1 /NAIP, BIRC2, BIRC6), que participan en el bloqueo de la apoptosis; proteína X BCL2-asociado (BAX); miembro de la familia TRAF-asociado activador de NFKB (tanque); Hus1, y la caspasa 7 (CASP7) la expresión génica.
La figura muestra la relación entre el gen de GAPDH.
Discusión
A pesar de los datos de nuestra investigación piloto [22], no se observan cambios significativos en las concentraciones de PSA u hormonales en este ensayo clínico de fase II más grande. Nuestro estudio anterior informó de una reducción en PSA, testosterona y estrógeno en 13 pacientes de consumir el mismo suplemento de isoflavonas en varias dosificaciones. Aunque la formulación de suplemento fue idéntica en ambos estudios, las diferencias en los resultados pueden deberse al tamaño de la muestra y la amplia variabilidad de PSA en suero y hormonas en el presente estudio. Nuestro análisis exploratorio en el estudio actual sugiere que la ingesta de isoflavonas de soja puede alterar la expresión de genes en el tejido prostático.
Nuestros resultados para las hormonas en suero son consistentes con estudios previos. Un meta-análisis de 32 estudios publicados en 2010 por Hamilton-Reeves et al. informó que el consumo de alimentos de soja no está asociado con efectos significativos en la concentración circulante de testosterona o testosterona libre en los hombres [24]. Publicaciones recientes desde el metanálisis no han demostrado efectos significativos sobre la ingesta alimentaria de las isoflavonas en la testosterona [18], [25], [26]. Los datos de las concentraciones sanguíneas de estrógenos están disponibles durante catorce estudios, que consta de cinco ensayos controlados aleatorios [11], [27] - [30]. Sólo un estudio informó de un aumento significativo en las concentraciones de estradiol en la sangre a partir de la línea de base con 40 mg /d de isoflavonas, pero no 60 o 80 mg /d de los suplementos de isoflavona, y la comparación estadística con el grupo placebo no fue publicado [29]. En resumen, la ingesta total de isoflavona no parece influir en las hormonas sexuales circulantes en la ingesta comparables a la ingesta alimentaria en los países asiáticos como la dosis administrada en el presente estudio.
Nuestras conclusiones respecto de colesterol total están en contraste con un meta- el análisis muestra una disminución del colesterol total con isoflavonas de soja cuando se consume en los alimentos de soja [21]. La teoría de que los componentes de la proteína de soja en sí reducir el colesterol podrían explicar por qué las isoflavonas no sólo provocarían el mismo efecto. Sin embargo, un informe reciente mostró una disminución del 4% en el colesterol total en pacientes con cáncer de próstata que consumieron 30 mg de genisteína sintética en comparación con el placebo [18]. La explicación probable de estos resultados contrastantes en comparación con nuestro estudio es debido a la formulación de suplemento dado en este ensayo. El suplemento de isoflavonas de soja se deriva de germen de soja que proporciona una mezcla de isoflavonas de soja que es mayor en la daidzeína de genisteína. Por otra parte, no estratificar nuestra asignación al azar en base a los valores previos al tratamiento de colesterol total, aunque sí que incluir el valor basal como covariable en el modelo estadístico.
administración de suplementos de isoflavonas a dosis similares a este estudio han mostrado en general ningún efecto sobre la reducción de las concentraciones de PSA en hombres con cáncer de próstata localizado. Los resultados para el PSA sérico son consistentes con un poco de [19], [20], [28], [31], pero no todos los informes [16], [17], [32] - [34]. PSA total redujo en un 4%, cuando un suplemento rico en isoflavonas se dio como parte de una dieta intensiva y la intervención del estilo de vida en pacientes con cáncer de próstata que sugiere cambios más dramáticos en la ingesta dietética que la adición de isoflavonas puede ser necesaria para alterar PSA en hombres con cáncer de próstata localizado [dieciséis]. Es posible que una intervención más larga o de seguimiento pueden haber producido un efecto inhibitorio significativo de las isoflavonas en PSA, estaban disponibles sólo 2 casos de la semana 5 y 4 casos de la semana 6 (de un total de 42 casos del grupo de tratamiento con isoflavonas) para PSA las pruebas.
a nuestro entender, este estudio fue uno de los primeros en comparar los efectos del consumo total de isoflavonas de soja sobre la expresión génica en el tejido prostático obtenido a partir de un estudio de intervención humana. Sin embargo, hay varias limitaciones de este estudio incluyen la falta de estratificación de los resultados en función de la puntuación de Gleason, el estadio patológico, o PSA. Esto puede influir en el efecto de la soja sobre todo en las vías de apoptosis. Además, se analizaron sólo un pequeño número de muestras de tejido, por lo que los resultados deben ser validados con una muestra mayor. Además, dada la múltiples focos de cáncer, las diferencias de la matriz de genes de las muestras entre los grupos pueden no representar la expresión de genes en el tejido como un todo. Una vez más, el tamaño pequeño de la muestra puede haber dado lugar a un sesgo de muestreo; Sin embargo, se evaluaron tanto tumor y el tejido normal y podría predecir que el efecto de las isoflavonas de soja efecto sería equivalente a través del tejido.
Conclusiones
El consumo de isoflavonas de soja parece seguro con eventos adversos leves informado y no hay efectos sobre las hormonas de suero. Una evaluación más profunda del papel de las isoflavonas de soja en la inducción de la apoptosis y el control del ciclo celular se justifica en el entorno preventivo y terapéutico.
Materiales y Métodos
Ética Declaración
El DPS Institucional Junta de revisión: Comité de sujetos Humanos y el Comité de revisión Institucional VAMC Kansas City aprobó el protocolo de estudio. Todos los pacientes firmaron un consentimiento informado antes de su inclusión en el estudio. El protocolo para este ensayo y el apoyo lista de verificación CONSORT están disponibles como información de apoyo; consulte Lista de comprobación S1 y el Protocolo de S1.
Los pacientes
Entre abril de 2006 y mayo de 2009, 86 hombres con cáncer de próstata localizado fueron reclutados de la Clínica Universidad de Kansas (DPS) Clínica de Urología y la Ciudad de Kansas Veterans Affairs Medical Center (VAMC). Los pacientes con un estadio clínico T1 o T2 del cáncer de próstata (utilizando American Joint Committee on Cancer criterios) y los candidatos quirúrgicos se consideraron fueron elegibles para el estudio. Los pacientes tratados con quimioterapia concurrente, radiación o terapia hormonal neoadyuvante fueron excluidos del estudio. Los pacientes que consumieron los alimentos de soja dentro de los 90 días anteriores a la inscripción también fueron excluidos, y se determinó el consumo de soja previo al inicio del estudio mediante el uso de la soya cuestionario validado [35]. También se excluyeron los pacientes con antecedentes de alergia a la soja o la intolerancia. Durante el curso del estudio, los pacientes estuvieron de acuerdo para evitar el consumo de soja en la dieta y no tomar ninguna nueva administración de suplementos de vitaminas o remedios herbales.
Estudio de diseño em
Un estudio doble ciego, aleatorizado, controlado con placebo, se realizó un ensayo paralelo, en el que recibieron 86 hombres con un diagnóstico histológico de cáncer de próstata que fueron programado para someterse a una prostatectomía, ya sea cápsulas de isoflavonas de soja (Flav-ein, 3 B Ltd, Lenexa, KS) o cápsulas de placebo equivalente. Los pacientes fueron asignados al azar de forma secuencial en uno de los dos brazos. Random aleatorización de bloques permutados se utilizó para mantener las asignaciones equilibradas en varios puntos a lo largo de la inscripción de pacientes. El estadístico generado códigos y proporcionó una copia de los mismos a los farmacéuticos. La farmacia distribuye los suplementos para los pacientes. El ciego fue mantenido por el farmacéutico y el estadístico hasta el final del estudio. Los 42 pacientes asignados al azar a las isoflavonas de soja recibieron cápsulas que contribuyen 51 mg de isoflavonas totales equivalentes de aglicona /d con una distribución media de las isoflavonas de 55% daidzeína, 30% glycitein, y el 15% según el análisis de la genisteína NP Analytical Laboratories en St. Louis, MO. Los 44 pacientes que recibieron suplementación con placebo consumido & lt; 0,06 mg totales equivalentes isoflavonas agliconas /d. Ambos grupos consumieron las cápsulas en dosis divididas dos veces al día. Los pacientes tomaron su última dosis del suplemento de la noche antes de la admisión para la cirugía. Las cápsulas fueron adquiridos a granel con el fin de minimizar la variación en el contenido de isoflavonas que puede ocurrir de lote a lote. Los sujetos fueron instruidos para consumir sus dietas habituales, y para excluir los productos de soja con el fin de minimizar el consumo de isoflavonas de otras fuentes. Para evaluar el cumplimiento en el punto de tiempo de 2 semanas, la concentración urinaria de isoflavonoides seis [genisteína, daidzeína, gliciteína, equol, DHD y ODMA] se midieron en la Universidad de Minnesota usando una alta presión en tandem con cromatografía líquida espectrometría de masas (LC método MS /MS) modificado a partir de metodología publicada [36]. Los datos se normalizaron mediante el ajuste de la excreción de creatinina y creatinina en orina fue analizada por el VA Medical Center de Kansas City utilizando un método de picrato alcalino cinética (Abbott 8200, Abbot Laboratories., Abbott Park, IL).
Suero recopilación y el análisis se recogió
sangre en ayunas por la mañana a las 0, 2 semanas, y el día antes de la cirugía programada o curativo. El último punto de tiempo varió según el sujeto en función de la fecha programada para la cirugía. El tratamiento no se retrasó para cumplir con los requisitos del estudio. Se separó el suero y se envía a Quest Diagnostics (Lenexa, KS) para su análisis. Las muestras de suero se analizaron para la testosterona total por cromatografía líquida con espectrometría de masas en tándem, la testosterona libre por diálisis de equilibrio, total de estrógenos por radioinmunoensayo, el estradiol y el antígeno prostático específico (PSA) por inmunoensayo de quimioluminiscencia, y el colesterol total en un ensayo enzimático.
Recogida de tejido y análisis
en el momento de la cirugía y muestras de núcleo mientras que todavía en la sala de operaciones, el cirujano urológico obtuvo tanto de la próstata normal adyacente y el tejido tumoral de cada muestra de la próstata. En resumen, la próstata y se seccionó el tumor identificado basa en la palpación, visualización y localización del cáncer conocido. Estos núcleos se colocaron a continuación inmediatamente en nitrógeno líquido y se transfieren al laboratorio para su procesamiento. En el laboratorio se obtuvo un (5 micras) sección fina congelada del núcleo y H & amp; E manchada. A continuación, esta sección ha sido revisada por un patólogo que confirmó la presencia de cáncer o tejido normal en cada muestra de núcleo. A continuación, la muestra de núcleo fue etiquetado, colocado en los medios de almacenamiento, y se mantuvo hasta el análisis. Este proceso de recogida de núcleo no interfirió con la evaluación patológica del tumor y el procesamiento posterior.
ciclo celular y apoptosis de Gene Arrays
Con el fin de identificar el ciclo celular dependiente de la soja y el perfil de expresión de genes relacionados con la apoptosis en muestras de tumores, se utilizó ciclo celular humana y kits de análisis de la expresión de genes de apoptosis SuperArray (serie GEArray Q-01001, Súper matriz Co, MD). El ARN total se extrajo usando el reactivo Trizol, como se describe anteriormente [37] a partir de dos muestras de los pacientes seleccionados al azar, que consume isoflavonas y uno que tomaron el placebo. A continuación, la biotina etiquetada síntesis de ADNc, y la hibridación con la membrana se realizó de acuerdo con las instrucciones del fabricante para el conjunto de genes de nuestro interés. Las señales fueron detectados utilizando los tampones optimizados y condiciones experimentales. Los datos fueron corregidos para el fondo y se normalizaron a un gen de mantenimiento.
Análisis estadístico
El tamaño de la muestra se determinó a partir de un estudio piloto previo usando la misma formulación de suplemento [22]. Los datos del estudio piloto indicó que las reducciones totales séricos de estrógenos serían 0 y 47 en el grupo control y tratamiento, respectivamente, con una desviación estándar común de 36. Desde el mismo estudio piloto predijimos que la reducción de la testosterona sérica sería 0 y 1,36 para el el control y el brazo de tratamiento, respectivamente, con una desviación estándar común de 2. El tamaño de la muestra se calculó con dos puntos finales primarios, los estrógenos y la testosterona sérica total, a un nivel de dos caras de significación de 0,025. Utilizando una prueba t de dos muestras, 43 sujetos por grupo nos dieron más de 95% de potencia para detectar la diferencia esperada en el estrógeno y el 80% de potencia para detectar la diferencia esperada en la testosterona.
Las características basales se compararon con t -Pruebas para las variables continuas después de comprobar los supuestos de normalidad y la prueba exacta de Fisher para las variables categóricas. Este experimento utiliza un diseño de medidas repetidas y los análisis para los resultados de suero se llevaron a cabo utilizando Proc Mixed que permite el modelado de los dos medios de resultado de suero y la estructura de covarianza, que es necesaria para estos diseños. Se consideraron dos modelos separados, se utilizó un modelo de análisis de covarianza para comparar los grupos ajustados por el valor de línea de base de los resultados utilizando una variable adicional para la observación de línea de base y una variable de clase tiempo para los dos puntos de tiempo restantes, y un segundo modelo que hizo no dividir a cabo la observación de línea de base como una variable independiente. Para todos los resultados y modelos de suero, se considera un tratamiento por interacción de semana. Ambos modelos utilizan una estructura de covarianza autorregresivo AR (1), que fue seleccionado en base a modelos estadísticos de ajuste de Proc Mixed y la estructura de correlación esperada para el experimento. Un nivel de significación de
p Hotel & lt; 0,05 se consideró estadísticamente significativa. Todos los análisis se realizaron con SAS versión 9.3 TS Nivel T1M0 (SAS Institute, Inc., Cary, NC).
Apoyo a la Información
Lista de verificación S1. Lista de comprobación CONSORT
doi:. 10.1371 /journal.pone.0068331.s001 gratis (DOC)
Protocolo S1. Protocolo de ensayo
doi:. 10.1371 /journal.pone.0068331.s002 gratis (DOC)
Reconocimientos
Los autores desean agradecer a Sara Spencer, Christopher Bairl y Neela Saxena para obtener ayuda con visitas a la clínica, la entrada de datos, y ensayos de conjunto de genes.