Extracto
Antecedentes
Los recientes informes sobre
Propionibacterium acnes gratis (
P. Acnes
) sugieren que esta bacteria es frecuente en la próstata, es asociado con la inflamación prostática aguda y crónica, y podría tener un papel en la carcinogénesis de próstata.
Métodos
para evaluar el papel patogénico de esta bacteria autóctona, hacen pruebas de la bacteria en el uso de piezas de prostatectomía radical inmunohistoquímica enzima con una novela
P. acnes
anticuerpo monoclonal específico de (anticuerpo PAL), junto con un anticuerpo del factor-kappa anti-nuclear B (NF-kB). Examinamos fijado en formalina y secciones de tejidos embebidos en parafina de la prostatectomía radical muestras procedentes de 28 pacientes con cáncer de próstata y 18 pacientes control emparejados por edad con cáncer de vejiga, pero sin cáncer de próstata.
Resultados
la inmunohistoquímica con el anticuerpo PAL reveló pequeños cuerpos redondos dentro de algunos epitelio y del estroma macrófagos glandulares no cancerosas de la próstata en la mayoría de las muestras. muestras de cáncer de próstata tenían frecuencias más altas de cualquiera
P citoplasmática. acnes
o expresión de NF-kB nuclear del epitelio glandular y un mayor número de macrófagos del estroma con
P. acnes
que las muestras de control. Estos parámetros también fueron más altos en la zona periférica que en la zona de transición de la próstata, especialmente en muestras de cáncer de próstata. La expresión nuclear NF-kB fue más frecuente en las glándulas con
P. acnes
que en glándulas sin
P. acnes
. El número de macrófagos del estroma con la bacteria correlacionado con el grado de inflamación crónica en las zonas tanto el PZ y TZ y con el grado de inflamación aguda en la zona TZ.
Conclusiones
El análisis inmunohistoquímico con un anticuerpo monoclonal para la detección de
P. acnes
en la próstata sugerido que
P intraepitelial. acnes
infección en las glándulas de la próstata no cancerosas y la inflamación causada por la bacteria puede contribuir al desarrollo de cáncer de próstata
Visto:. Bae Y, Ito T, T Iida, Uchida K, M Sekine, Nakajima Y, et al. (2014) intracelular
Propionibacterium acnes
La infección en epitelio glandular y estroma Los macrófagos de la próstata con o sin cáncer. PLoS ONE 9 (2): e90324. doi: 10.1371 /journal.pone.0090324
Editor: Robert Hurst, Universidad de Oklahoma Health Sciences Center, Estados Unidos de América
Recibido: 13 de diciembre de 2013; Aceptado 29 de enero de 2014; Publicado: 28 Febrero 2014
Derechos de Autor © 2014 Bae et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyada por la Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia subvención-en-Ayudas a la Investigación Científica 24659402 (YE). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de próstata es el segundo cáncer más común en los hombres en todo el mundo, con un estimado de 900.000 casos y 258.000 muertes en 2008 [1]. Aunque se han identificado varios factores de riesgo para el cáncer de próstata, tales como el origen étnico, la edad, la historia familiar, y la dieta [2], se desconoce la etiología exacta del cáncer de próstata. Muchos estudios recientes proporcionan evidencia de que la inflamación crónica es un factor importante que contribuye a la carcinogénesis de próstata, causando daños en el ADN, la promoción de la renovación celular, y la creación de un microambiente del tejido que mejora la replicación celular, la migración, y la angiogénesis [3], [4].
En la respuesta inflamatoria, factores de transcripción como el factor nuclear-kappaB (NF-kB) se activan tras la unión de los receptores de reconocimiento de patrones (receptores de tipo Toll, dominio de oligomerización de nucleótidos vinculante [] NOD-como receptores, y otros ), receptores de citoquinas proinflamatorias (factor de necrosis tumoral α o interleucina [IL] -1), y receptores de antígenos [5] - [8]. Aunque NF-kappa B no se ajusta a la definición clásica de un oncogén, es un potente activador de la estado maligno y regula la expresión de los genes diana importantes para la proliferación celular, la supervivencia, la angiogénesis y la reparación de tejidos [8] - [12].
la exposición a factores ambientales, tales como agentes infecciosos, carcinógenos dietéticos, y los desequilibrios hormonales, se cree que conducen a la lesión de la próstata y el desarrollo de la inflamación crónica [3]. Informes recientes mostraron que
Propionibacterium acnes
(
P. acnes
) se detecta con frecuencia en el tejido prostático de pacientes con prostatitis y cáncer de próstata, y que la bacteria se asocia con inflamación prostática aguda y crónica y podría tener un papel en la carcinogénesis de próstata [13] - [21]
P.. acnes
es un bacilo anaerobio Gram-positivas, no forman esporas encuentra predominantemente en las áreas ricas en glándulas sebáceas de la piel en adultos [22]. La bacteria indígena también está aislado de la conjuntiva, la boca, y el intestino [23]. Históricamente,
P. acnes
se pensaba que era de baja virulencia, pero se ha descubierto recientemente que es el agente causante de diversas patologías.
P. acnes
está implicada sobre todo en el acné vulgaris [24], pero la bacteria también podría estar asociado con una serie de condiciones inflamatorias, tales como endocarditis, infecciones de las articulaciones y del sistema nervioso central, y la sarcoidosis [25] - [28].
Hemos informado anteriormente de que muchos (71%) del serotipo I aislados clínicos de
P. acnes
invaden las células epiteliales [29], y intraepitelial
P. acnes
infección activa NF-kB en tanto un NOD1- y NOD2 que dependen de manera [30]. A pesar de la evidencia acumulada de
P. acnes
infección en la próstata mediante métodos de reacción en cadena de la polimerasa o cultivo de bacterias, hay sólo unos pocos informes en los que la bacteria se encuentra en los tejidos de la próstata mediante inmunofluorescencia en los métodos in situ con un anticuerpo policlonal de
P. acnes
[31] o la fluorescencia multicolor en los métodos de hibridación in situ de orientación
P. acnes
23S rRNA [14].
Para investigar más a fondo la asociación etiológica entre el
P. acnes
y la inflamación o la carcinogénesis, no sólo la bacteria, sino también las características histológicas del tejido de la próstata necesitan ser analizadas en las secciones histológicas idénticos. El objetivo del presente estudio fue localizar
P. acnes
en el tejido prostático con microscopía de luz por inmunohistoquímica de la enzima. Con este fin, hemos desarrollado un novedoso anti-
P. acnes
anticuerpo monoclonal que reacciona con las bacterias en secciones fijadas con formalina y del tejido de la próstata en parafina. Para evaluar el papel patogénico de esta bacteria indígena en el desarrollo del cáncer de próstata, se examinaron muestras de prostatectomía radical obtenidas de pacientes con o sin cáncer de próstata mediante inmunohistoquímica con el nuevo anticuerpo a
P. acnes
y un anticuerpo a NF-kappa B, que se utilizó para determinar una posible correlación entre
P. acnes
la infección y la expresión de NF-kB nuclear en glándulas de la próstata. Además, analizamos si
P. acnes
estado de infección se asoció con el riesgo de cáncer de próstata.
Materiales y Métodos
Declaración de Ética
Este estudio fue aprobado por el comité de ética de Tokio y Dental Medical University (nº de registro 1373). Debido a que el estudio se realizó la inmunotinción de obtenida clínicamente y está archivada muestra de tejido fijado en formol e incluidos en parafina, el comité de ética aprobó dispensa del consentimiento informado específico de conformidad con las directrices éticas para Estudios Clínicos (31 enmendado julio de 2008) por el Ministerio de Salud, Trabajo y Bienestar de Japón. El protocolo experimental animal utilizado en este estudio fue aprobado por el Centro de Experimentación Animal de la Universidad de Tokio Médica y Dental (Registro No. 0120203A) y se llevó a cabo de acuerdo con las directrices de dicho centro.
Se examinaron las secciones de tejidos fijados en formalina y embebidos en parafina de las muestras de prostatectomía de 28 pacientes (edad: 50-78 años) con cáncer de próstata que se sometieron a cirugía entre 2008 y 2011 en el hospital de la Universidad médica y Dental de Tokio, y de 18 pacientes de control (edad: 50-80 años) con cáncer de vejiga, pero sin cáncer de próstata, que se sometieron a cirugía entre 1994 y 2011 en el mismo hospital. Los pacientes que recibieron el tratamiento preoperatorio fueron excluidos del estudio. Los perfiles clínico-patológicas de los casos se muestran en la Tabla 1. Los bloques de tejido incluido en parafina fueron seleccionados a partir de bloques preparados para un examen patológico de rutina. Una sección horizontal de corte de la próstata incluyendo verumontanum fue identificado en cada caso, y las muestras se incluyeron en el estudio cuando la propagación del cáncer se limita a la derecha oa la izquierda del lóbulo de la sección. Uno de los lóbulos derecho e izquierdo en una sección libre de cáncer se analizó para examinar la distribución de los
P. acnes
y la activación intraepitelial de NF-kB en el tejido no canceroso, y se analizó el otro lóbulo para detectar
P. acnes
en el tejido canceroso.
Producción de anticuerpo monoclonal
Un nuevo anticuerpo monoclonal fue desarrollado para localizar
P. acnes Hoteles en secciones fijadas en formalina y tejidos de próstata incluido en parafina. El anticuerpo se genera de acuerdo con el protocolo descrito en un manual de laboratorio [32] con modificaciones. los ratones Balb /c (CLEA Japan, Tokio, Japón) fueron inmunizados con lisado bacteriano entero agitado cuando de serotipo I
P. acnes
aislado de próstata humano en un estudio anterior [29]. líneas celulares de hibridoma que producen anti-
P. anticuerpos acnes
se comprobaron mediante el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas con los antígenos bacterianos utilizados como inmunógenos. líneas celulares de hibridoma con resultados positivos se seleccionaron mediante inmunotinción con cortes de tejidos fijados en formalina y embebidos en parafina de
P. acnes
hígado de rata inyectados.
P. acnes
inyectan hígado de rata se obtuvo mediante la inyección intravenosa de 30 mg de
P muertos por calor. acnes
en ratas Sprague-Dawley hembra (CLEA Japón) 1 h antes de matar a la rata. También se examinaron las secciones de tejido de hígado preparado de forma similar de ratas inyectadas por cada cepa de otras bacterias de control para confirmar la especificidad de
P. acnes
. líneas celulares de hibridoma que produce el anticuerpo que se genera una fuerte reacción específica a
P. acnes
en las secciones de hígado de rata fueron seleccionados y se tamiza además por inmunotinción con fijados con formalina y las secciones de tejido de próstata embebidas en parafina de la muestra extraída por prostatectomía en la que un gran número de
P. acnes
se cultivaron en el estudio anterior [29]. El hibridoma que produce el anticuerpo que se genera el producto de reacción más específica carente de cualquier reactividad cruzada a los tejidos de próstata humanos, incluidos los pigmentos de lipofuscina, se seleccionó y se clonó mediante dos rondas de dilución limitante. A continuación, un solo clon de hibridoma se implanta en el espacio intraperitoneal de ratones de inmunodeficiencia combinada severa (CLEA Japan). En 1 o 2 semanas después de la implantación, se recogió la ascitis y se utiliza como un anticuerpo sin diluir sin purificación adicional. El anticuerpo fue nombrado PAL
.
La especificidad del anticuerpo PAL se examinó por transferencia de Western de acuerdo con el método descrito previamente [26] con el serotipo I
P. acnes
tipo de cepa (ATCC 6919 y ATCC 11827), serotipo II
P. acnes
tipo de cepa (ATCC 11828), 19 aislados clínicos de
P. acnes gratis (10 cepas de serotipo I y 9 cepas de serotipo II) de la próstata [29], otra propionibacterias cutánea (
P. granuloso
ATCC 25564,
P. avidum
, ATCC 25577, y
P. lymphophilum
ATCC 27520), y otras bacterias de control (
Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli
,
Bacteroides flagilis
, y
Enterrococcus faecalis
).
inmunohistoquímica
Las secciones histológicas (3 micras de espesor) se cortaron a partir de muestras fijadas en formalina y tejido incluido en parafina y se montaron en portaobjetos recubiertos de silano (Muto Pure Chemicals , Tokio, Japón). Después las secciones se des-con parafina y rehidratada, que eran calentados (Procesador de microondas H2850; Energy Beam Sciences, East Granby, CT) durante 40 minutos a 97 ° C en /l de tampón citrato 10 mmol (pH 6,0). Las secciones se trataron a continuación con peróxido de hidrógeno al 3% en metanol durante 10 min. Las secciones se incubaron primero con suero de caballo normal (Vectastain ABC Kit Elite universal; Vector Laboratories, Burlingame, CA) y después se incubaron durante la noche a temperatura ambiente con anticuerpo diluido apropiadamente PAL (1:60000) o anti-NF-kB anticuerpo (1 :2000, Epitomics, Burlingame, CA), o una mezcla de estos dos anticuerpos para inmunotinción cóctel, en una cámara humidificada. Las secciones se incubaron a continuación durante 30 min con el anticuerpo secundario biotinilado, seguido por 30 min de incubación con el complejo (Kit Vectastain Elite ABC universal) estreptavidina-peroxidasa, tanto a temperatura ambiente. Antes y después de cada paso, las secciones se lavaron en solución salina tamponada con fosfato que contiene 0,5% de Tween-20. La señal fue desarrollado como un producto de reacción marrón usando peroxidasa sustrato diaminobenzidina (DAB solución HistofineSimplestain; Nichirei Bioscience Inc., Tokio, Japón). Todas las muestras se contratiñeron con hematoxilina de Mayer. Las secciones adyacentes también fueron examinados con hematoxilina y eosina para el examen histopatológico convencional.
Para la identificación simultánea de citoplasmática
P. acnes
y la expresión nuclear de NF-kB en la misma sección de tejido de próstata, cóctel inmunotinción con una mezcla de anticuerpos PAL y el anticuerpo anti-NF-kB que el anticuerpo primario se realizó en todas las muestras. Para garantizar la fiabilidad de este método, dos secciones en serie de muestras idénticas se examinaron por inmunotinción cóctel y inmunoenzimática doble tinción, respectivamente. Para el inmunoenzimática doble tinción, las secciones se hicieron reaccionar primero con el anticuerpo PAL usando el método de avidina-biotina-complejo con el Kit VECTASTAIN ABC-AP (AK-5000, VECTOR) y el vector azul fosfatasa alcalina Substrato Kit III (SK-5300, VECTOR ), y después se incubaron durante 5 min en solución de desnaturalización (desnaturalización kit solución, BRR001DH, Biocare médico), y se incubó adicionalmente durante 5 min en Dako solución real con peroxidasa de bloqueo (S2023, Dako, Glostrup, Dinamarca). Después de estos procedimientos, las secciones se sometieron a la reacción secundaria con el anticuerpo anti-NF-kappa B, seguido por inmunohistoquímica utilizando un método de polímero con EnVision + System-HRP Labelled Polymer (K4001, Dako) y la solución DAB HistofineSimplestain.
El mismo muestras utilizadas para inmunoenzimática doble tinción también se analizaron por inmunofluorescencia doble la tinción de al fenotipo de las células con
P intracelular. acnes
utilizando anticuerpos a las células epiteliales y los fagocitos; anti-citoqueratina anticuerpo monoclonal (AE1 /AE3, Dako) para las células epiteliales, anti-humana de anticuerpos CD68 monoclonal (clon KP1; Dako) para los macrófagos, o anti-humano fascin anticuerpo monoclonal (clon 55K-2; Dako) para las células dendríticas, de acuerdo con los métodos descritos anteriormente [33].
para confirmar que el anticuerpo PAL no se presentan reacciones cruzadas con pigmentos de lipofuscina que se encuentran con frecuencia en las glándulas prostáticas, la tinción de inmunofluorescencia con o sin el anticuerpo PAL se comparó el uso de serie secciones de tejido de la próstata, y tinción inmunoenzimática con el anticuerpo PAL fue seguido por tinción Fontana-Masson o la observación microscópica de fluorescencia de las secciones de tejido de la próstata idénticos.
Evaluación de inmunohistoquímica y los hallazgos histológicos
para evaluar
P. acnes
la infección y la expresión de NF-kB nuclear en cortes histológicos idénticos, imágenes microscopio de luz de las secciones immunostained con una mezcla de anticuerpos PAL y el anticuerpo anti-NF-kB (cóctel de inmunotinción) fueron incorporados en preparaciones virtuales con MIRAX MIDI BF /FL digitalizador para 12 diapositivas (Carl Zeiss MicroImaging, Jena, Alemania) y se examinaron usando un Pannoramic Visor 1.15 Service pack 2 (3DHISTECH, Budapest, Hungría). El análisis morfométrico de todas las glándulas de la próstata incluidos en las secciones se realizó bajo visión de alta potencia de las preparaciones virtuales. Cada glándula prostática se consideró
P. acnes
-positivo cuando se observaron señales positivas citoplasmáticos por el anticuerpo PAL en al menos una de las células epiteliales de la glándula. En cuanto a la expresión de NF-kappa B nuclear, la glándula se consideró positiva cuando se observaron las señales de núcleo-positiva en al menos una célula epitelial. Citoplasmática expresión NF-kB no se consideró positivo porque activado NF-kappa B se transloca desde el citoplasma al núcleo [34], [35]. De acuerdo con la presencia o ausencia de
P citoplasmática. acnes
y la expresión de NF-kB nuclear para cada glándula, todas las glándulas de la próstata (número total de las glándulas por sección que va desde 933 a la 5519 con un número medio de 2358) localizados en las áreas de zona periférica (PZ) o zona de transición ( TZ) se clasificaron en cuatro grupos (
P acnes
/NF-kappa B:.. + /+, +/- - /+ y - /-), y las glándulas categorizados para cada grupo fueron marcados por una color diferente en las preparaciones virtuales. De acuerdo con los resultados obtenidos por la clasificación de cuatro grupos, la frecuencia de detección de las glándulas, ya sea con
P citoplasmática. acnes
o expresión de NF-kB nuclear se calculó para cada caso en el PZ y áreas TZ, respectivamente. Todas las células del estroma de próstata con señales citoplasmáticas por el anticuerpo PAL se contaron en el PZ y áreas TZ, respectivamente, en las secciones de diapositivas virtuales que se inmunotiñeron con único anticuerpo PAL. Para evaluar el grado de inflamación aguda y crónica, las secciones adyacentes se examinaron con hematoxilina y eosina y se clasifican en cuatro grados (0, 1+, 2+, 3+ y) de acuerdo con los criterios utilizados por Cohen et al. [13].
Los análisis estadísticos
La frecuencia (%) de
P. acnes
glándulas -positivos o glándulas NF-KB-positivos nucleares se calculó como el número de glándulas positivos dividido por el número de glándulas totales para cada paciente; y el número de
P. acnes
macrófagos -positivos se contó para cada paciente. Estos parámetros se resumen como [th 25
75
º percentiles] mediana para cada PZ y el área TZ y se compararon entre las muestras de control y de cáncer de próstata mediante una prueba de Mann-Whitney. Los parámetros de cada muestra de control y el cáncer de próstata también se compararon entre las PZ y las áreas TZ mediante la prueba de rangos de Wilcoxon chamuscado. La asociación entre estos parámetros y el grado de inflamación aguda o crónica se analizó mediante el coeficiente de correlación de Spearman. El grado de inflamación aguda o crónica también se comparó entre las muestras de control y de cáncer de próstata mediante una prueba de Mann-Whitney. La frecuencia de expresión de NF-kB nuclear en glándulas con
P. acnes Opiniones y glándulas sin
P. acnes
se calculó para cada paciente, que se resumen como [th 25
75
º percentiles] mediana, y se compararon mediante la prueba de rangos de Wilcoxon chamuscado en el PZ y áreas TZ de las muestras de cáncer de control y de próstata. coeficiente de correlación de Spearman se utilizó para evaluar la correlación entre la frecuencia de
glándulas P. acnes
-positivas y el número de
P. acnes
macrófagos del estroma -positivos. Los análisis se realizaron para las áreas PZ y TZ, respectivamente.
p
-valores se ajustaron para comparaciones múltiples por el método de Holm en su caso. Un
p-valor
de menos de 0,05 se consideró estadísticamente significativa. el software Statview (versión 5.0; SAS Institute, Cary, NC). Se utilizó para todos los cálculos estadísticos
Resultados
La especificidad del anticuerpo monoclonal
El anticuerpo reaccionaron con PAL todas las cepas del serotipo I
P. acnes
y no reaccionar con cualquier cepa de serotipo II
P. acnes
, otra propionibacterias cutánea, u otras bacterias de control. El anticuerpo reconoce un
P. acnes
epítopo específico de del ácido lipoteicoico comúnmente compartidos por todas las cepas del serotipo I
P. acnes
.
La localización de
P. acnes
en la próstata
En las glándulas prostáticas no cancerosas, el anticuerpo reacciona con PAL cuerpos redondos pequeños en las células epiteliales (Figura 1). Se observaron los pequeños cuerpos redondos en hiperplásico, normal, y las células epiteliales atróficas, pero más a menudo en las células epiteliales hiperplásicas (Figura 2A-B) que en las células normales o atróficas (Figura 2C-D). En el estroma prostático, también se detectaron pequeños cuerpos redondos PAL-positivo en las células como los macrófagos-, que se distribuyeron en grupos escasamente en el estroma. Estas células aparecieron en densidad relativamente alta cerca de las glándulas atróficas, acompañado por las células inflamatorias mononucleares (Figura 2E-F). En algunos focos de inflamación severa periglandular, células PAL-positivos similares a los macrófagos infiltrados las glándulas y en ocasiones se han detectado en los espacios luminales.
El anticuerpo reacciona con cuerpos redondos pequeños (flechas) en algunos epitelio glandular no canceroso las células.
las señales positivas por el anticuerpo fueron más frecuentes en las glándulas con hiperplasia epitelial (a, B) que en las glándulas normales o atróficas (C, D). En el estroma prostático, no se encontraron señales positivas en las células como los macrófagos-acompañados de células inflamatorias mononucleares (E, F). Unos señales positivas se encontraron con poca frecuencia en algunas células cancerosas (G, H). Mayor aumento de la zona indicada por la flecha se muestra en el recuadro de cada figura.
inmunofluorescencia doble tinción confirma que todas las señales glandulares detectados por el anticuerpo PAL estaban en el citoplasma de las células epiteliales teñido con anticuerpo anti-citoqueratina (AE1 /AE3) y todas las señales del estroma detectados por el anticuerpo PAL fueron en los macrófagos se tiñeron con anticuerpo anti-CD68, pero no con el anticuerpo anti-fascin (Figura 3A-C). pigmentos de lipofuscina se observaron en algunas glándulas prostáticas con
P intracelular. acnes
. Estos pigmentos de lipofuscina se tiñeron de color marrón oscuro con Fontana-Masson y producen una fuerte auto-fluorescencia, y el anticuerpo PAL hicieron no una reacción cruzada con estos pigmentos de lipofuscina (Figura 3D-J).
La inmunofluorescencia doble tinción de la
P. acnes
células positivas en los tejidos de la próstata (A-C). señal verde (FITC): anticuerpo PAL; señales rojas (TRITC): anticuerpo anti-citoqueratina (A), el anticuerpo anti-CD68 (B), y el anticuerpo anti-fascin (C). Resultados de doble tinción se fusionan en todas las imágenes. En las glándulas de la próstata, todos los
P. acnes
señales positivas a solapan (amarillo) con las células epiteliales glandulares citoqueratina-positivas (A). En el estroma de próstata, todos
P. acnes
señales positivas a solapan (amarillo) con macrófagos CD68-positivo (B) y no se superponen en absoluto (verde) con células dendríticas fascin-positivas (C). La inmunotinción con el anticuerpo PAL seguido de tinción Fontana-Masson (D). La mayoría de las señales positivas de color rojo por el anticuerpo PAL (flechas) en las glándulas de la próstata no se superponían con los pigmentos de lipofuscina (puntas de flecha), que son de color marrón oscuro con tinción Fontana-Masson. INMUNOENZIMATICAS tinción de tejido de próstata con o sin anticuerpo PAL usando secciones de tejido de próstata en serie (E, F). Se observaron muchas señales de color marrón oscuro intracelulares (flechas) en la sección con el anticuerpo PAL (E), pero no hay tales señales se observaron en la sección sin el anticuerpo (F). parte idéntica de la glándula prostática con o sin señales inmunorreactivas por el método enzimático observado por la luz y microscopía de fluorescencia (G-J). En la parte de una glándula prostática con muchas señales positivas de anticuerpos (flechas) (G), poco lipofuscina auto-fluorescencia (punta de flecha) se observó en la zona (H) idénticas. Por el contrario, en la parte de la glándula prostática con un no hay señales positivas de anticuerpos (I), un mayor nivel de lipofuscina autofluorescencia (puntas de flecha) se observó en la región idéntica (J).
también confirmó que los resultados de detección de
P citoplasmática. acnes
y la expresión de NF-kappa B nuclear en las células epiteliales glandulares prostáticas eran casi la misma entre el inmunoenzimática doble tinción y la inmunotinción cóctel que se utilizaron para el análisis de las preparaciones virtuales (Figura 4). evaluación simultánea de
P. acnes
y el estado de NF-kB en las secciones idénticas mediante inmunotinción cóctel reveló una distribución panorámica de las glándulas clasificado en cuatro grupos en las preparaciones virtuales (Figura 5).
En la doble tinción (columna izquierda), las señales positivas detectadas por el anticuerpo PAL (flechas) y las señales nucleares positivas de anti-NF-kB anticuerpo (puntas de flecha) se visualizaron por los colores azul y marrón, respectivamente. En la tinción de cóctel (columna derecha), ambas de las señales positivas se visualizaron por el color marrón. glándulas representativas que fueron clasificados en cada uno de los cuatro grupos de acuerdo con el estado de
P intraepitelial. acnes
la infección y la expresión de NF-kB nuclear se muestran en cada fila. Los resultados de estos parámetros fueron casi igual entre inmunoenzimática doble tinción y la inmunotinción cóctel. . Nnf-KB: nuclear de NF-kB
Izquierda, muestra de cáncer de próstata (A); derecha, muestra de control (B). Los círculos rojos, glándulas con ambos
P. acnes
y la expresión de NF-kB nuclear; círculos de color amarillo, con las glándulas
P. acnes
pero ninguna expresión NF-kB nuclear; círculos azules, glándulas con expresión nuclear NF-kB, pero sin
P. acnes
; y los círculos blancos, ni glándulas con
P. acnes
ni la expresión de NF-kB nuclear. Las líneas negras indican el límite entre la zona periférica (PZ) y la zona de transición (TZ). Número total de glándulas examinados por el analizador de preparación virtual era de 1894 en la muestra (A) a partir de un paciente con cáncer de próstata y 1465 en la muestra (B) de un paciente con cáncer de vejiga, pero no cáncer de próstata. Tenga en cuenta que se observaron más círculos rojos y amarillos en el área PZ de la muestra de cáncer de próstata en comparación tanto con el PZ y TZ áreas de la muestra de control, así como a la zona de TZ de la muestra de cáncer de próstata.
células de cáncer de próstata en la mayoría de los casos fueron negativos para el anticuerpo PAL, con tres casos excepcionales (Figura 2G-H). El área de ocupación de las glándulas cancerosas con
P. acnes
infección en toda la zona de la lesión de cáncer en la sección fue del 5% en un caso y menos de 1% en los otros dos casos. se detectaron los macrófagos del estroma PAL-positivo en 13 (46%) de 28 tejidos de cáncer.
frecuencia de detección de
P. acnes
en la próstata
intraepitelial
P. acnes Red de las glándulas de la próstata no cancerosas se detectó en todas las muestras, y no se observaron macrófagos del estroma con la bacteria en 27 de 28 muestras de cáncer y 14 de 18 muestras de control.
La mediana [25
º y 75 de frecuencia
º percentiles] (%) de las glándulas de la próstata con intraepitelial
P. acnes
fue de 14.4 [8.8, 28.0] en el área PZ y 4,9 [2,4, 9,1] en el área TZ de las muestras de cáncer (Figura 6A). En las muestras de control, la frecuencia fue de 4,3 [1,3, 8,1] en el área PZ y 1,6 [1,1, 3,2] en el área TZ. La frecuencia fue significativamente mayor en las muestras de cáncer que en las muestras de control en tanto PZ y áreas TZ. En ambas muestras de cáncer y de control, la frecuencia fue significativamente mayor en el área PZ que en la zona TZ.
Frecuencia (%) de
P. acnes
glándulas -positivas (A) o glándulas NF-KB-positivos nucleares (B), y el número total de
P. acnes
macrófagos del estroma -positivas (C) en las zonas periféricas y de transición de cáncer de próstata (CaP) y las muestras de control.
P
-valores se ajustaron para comparaciones múltiples (4 comparaciones en cada panel) por el método de Holm. NS:. No significativa
La mediana del número de macrófagos del estroma con
P. acnes
fue de 30 [10, 82] en la zona PZ y 12 [3,35] en el área TZ de las muestras de cáncer, mientras que el número promedio fue de 2 [0, 32] y 5 [0, 7] en el control muestras, respectivamente (Figura 6C). El número de macrófagos del estroma fue significativamente mayor en las muestras de cáncer que en las muestras de control, tanto en el PZ y áreas TZ. En muestras de cáncer, el número fue significativamente mayor en el área PZ que en la zona TZ. El número de
P. acnes
macrófagos del estroma -positivos correlacionados con las frecuencias de
P. acnes
glándulas -positivos en la zona de las muestras de cáncer PZ (coeficiente de correlación de Spearman = 0,47,
p = 0,015
).
Frecuencia de detección de la energía nuclear NF-kB expresión
se detectó
La expresión nuclear NF-B de las células epiteliales glandulares en todas las muestras. En las muestras de cáncer, la frecuencia media (%) de las glándulas NF-KB-positivas fue del 17.1 [10.3, 31.4] en el área PZ y 7.1 [2.8, 14.8] en el área TZ (Figura 6B). En las muestras de control, la frecuencia fue de 7.3 [4.4, 11.1] en el área PZ y 4.4 [2.1, 11.3] en el área TZ. En el área de PZ, la frecuencia fue significativamente mayor en las muestras de cáncer que en las muestras de control. En las muestras de cáncer, la frecuencia fue significativamente mayor en el área de PZ que en la zona TZ.
Correlación entre los
P. acnes
infección y nuclear NF-kB expresión
En las muestras de cáncer, la frecuencia media (%) de la expresión de NF-kB nuclear de las glándulas con
P. acnes
era 27.6 [18.3, 47.5] en el área PZ y 14.0 [5.8, 25.6] en el área TZ, mientras que la frecuencia media de las glándulas con la expresión de NF-kB nuclear, pero sin
P. acnes
fue de 15,9 [9,0, 27,2] en el área PZ y 6.7 [2.7, 13.7] en el área TZ (Figura 7A). En las muestras de control, la frecuencia de
P. acnes
glándulas -positivos fue 17.8 [8.9, 24.8] en el área PZ y 13.0 [1.3, 36.1] en el área TZ, mientras que la frecuencia de
P. acnes
glándulas-negativos fueron del 7,2 [4.1, 10.9] en el área de PZ y 4.1 [2.0, 10.7] en el área TZ (Figura 7B). Las frecuencias de expresión de NF-kB nuclear fueron significativamente mayores en
P. acnes
glándulas -positivos que en
P. acnes
glándulas gramnegativas en la PZ y áreas TZ de ambas muestras de cáncer y de control.
Frecuencia (%) de la expresión de NF-kappa B nuclear en las glándulas con o sin citoplásmica
P. acnes
en las zonas periféricas o de transición de cáncer de próstata (A) y el control de muestras de próstata (B).
P
-valores se ajustaron para comparaciones múltiples (2 comparaciones en cada panel) por el método de Holm.
Correlación entre la inflamación y
P. acnes
estado de la infección o la activación de NF-kB
grado de inflamación aguda o crónica en el PZ o áreas TZ de las muestras de cáncer y de control se muestra en la Figura 8. En tanto PZ y áreas TZ, el grado de la inflamación no difirió significativamente entre las muestras de cáncer y de control. El grado de inflamación aguda o crónica no se correlacionó bien con la frecuencia de las glándulas con
P citoplasmática. acnes
o la frecuencia de las glándulas con la expresión de NF-kB nuclear.