Extracto
microenvironement tumor es un actor importante de la progresión del cáncer de ovario, pero las relaciones entre las células mesenquimales y las células de cáncer de ovario siguen sin estar claros. El objetivo de este estudio fue determinar las modificaciones biológicas de las células de cáncer de ovario 'inducidas por las células mesenquimales. Para abordar esta cuestión, hemos utilizado dos líneas celulares de cáncer de ovario diferentes (NIH: OVCAR3 y SKOV3) y los co-cultivadas con células mesenquimales. Al co-cultivo de las diferentes poblaciones de células fueron ordenados para estudiar su transcriptoma y propiedades biológicas. transcriptomic análisis reveló tres grupos de genes de función biológica se enriquecieron al entrar en contacto con las células mesenquimales. Estos se relacionan con el aumento de las capacidades metastásicas (adhesión, migración y la invasión), la proliferación y la quimio-resistencia
in vitro
. Por lo tanto, el contacto con el nicho de células mesenquimales podría aumentar iniciación metastásico y expansión a través de la modificación de las células cancerosas. Tomados en conjunto estos resultados sugieren que las vías implicadas en la interacción hetero-celular pueden ser el objetivo de interrumpir el perfil pro-metastásico adquirida
Visto:. Lis R, Touboul C, CM Raynaud, Malek JA, Suhre K, M Mirshahi , et al. (2012) mesenquimales Interacción celular con células de cáncer ovárico Activadores Pro-metastásicos Propiedades. PLoS ONE 7 (5): e38340. doi: 10.1371 /journal.pone.0038340
Editor: Eric Deutsch, Instituto Gustave Roussy, Francia |
Recibido: 9 Febrero 2012; Aceptado: May 4, 2012; Publicado: 30-may 2012
Derechos de Autor © 2012 Lis et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Esta publicación fue posible gracias a una subvención del Fondo de Investigación Nacional de Qatar bajo su adjudicación número Programa Nacional de Investigación Prioridades NPRP 09-1174-3-291 y NPRP 4-640-1-096. Su contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no representan necesariamente la opinión oficial del Fondo de Investigación Nacional de Qatar. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
La mayoría de los pacientes con cáncer de ovario generalmente mueren a causa de la enfermedad peritoneal [1]. Desarrollo de la carcinomatosis peritoneal consiste en definir los pasos críticos, incluyendo desprendimiento de células, la interacción y la adhesión a la capa mesoteliales, y la proliferación en el sub-mesotelio [2]. Varios informes describen un nicho premetastásico en el órgano diana, lo que facilita la supervivencia inicial de las células tumorales [3], [4], [5].
Las células mesenquimales (MC) son células pluripotentes que dan lugar a una variedad de tipos de células del tejido conjuntivo [6]. médula ósea procedentes de células madre mesenquimales (BM-MSC) son reclutados en gran número a los sitios tumorales donde contribuyen a la invasión, metástasis y la resistencia a la quimioterapia de líneas celulares de cáncer de ovario [7], [8], [9], [ ,,,0],10], [11]. MSC han demostrado que contribuyen a la tumorigenicidad cáncer de ovario a través de la producción alterada de la proteína morfogenética ósea (BMP-2) que conduce a un aumento de las células de cáncer de ovario (OCC) la proliferación
in vitro
y
in vivo
[ ,,,0],12]. Mientras que muchos estudios se centran en factores específicos en la adquisición de perfil metastásico, muy pocos estudios están evaluando los cambios de transcriptómica globales que se producen en las células del cáncer de su interacción con las células madre mesenquimales (MSC) [13]. Zhang S et al.
13 informaron de la modificación del transcriptoma de células de cáncer de próstata inducida por la interacción con los MC. Las modificaciones definen un nuevo estado pro-metastásico. Comprensión de las vías afectadas por la interacción de las células cancerosas y su microentorno y las modificaciones globales inducidos es obligatoria con el fin de ser capaz de dirigirse a vías específicas del microambiente [13].
A continuación, se investiga co-cultivo de dos diferentes tipos de líneas de OCC con MCs. Se demuestra que esta interacción aumenta la capacidad metastásica de OCC. Utilizando el análisis de transcriptómica y ensayos funcionales; demostramos que los genes relacionados con la adhesión celular, la invasión, la migración, la proliferación y la quimio-resistencia se modifican al OCC /contacto MC de una manera específica línea celular. Nuestros resultados sugieren que las vías específicas pueden ser el objetivo de interrumpir el perfil pro-metastásico adquirida.
Materiales y Métodos
Cell Cultura y
líneas celulares de cáncer de ovario SKOV3 (HTB-77 ) y OVCAR3 (HTB-161) se adquirieron de ATCC y se mantuvo en cultivo siguiendo las recomendaciones de la ATCC (DMEM de alta glucosa [Hyclone, Thermo Scientific], 10% de FBS [Hyclone, Thermo Scientific], 1% de solución de penicilina-estreptomicina-Amphotericyn B [ ,,,0],Sigma], 1X no esencial amino-ácido [Hyclone, Thermo Scientific]). Las líneas celulares de cáncer de ovario fueron establemente transducidas por los vectores lentivirales que codifican eGFP (Genethon, Evry). Las células mesenquimales se adquirieron de Células Madre, Inc (MSC-001F, Vancouver, CA) mantenido y ampliado en cultivo utilizando MesenCult® MSC medio basal completado con celulares Suplementos estimuladores madre mesenquimales (Células madre Inc, Vancouver, CA). Su capacidad de diferenciarse en adipocitos, osteoblastos y chnodrocytes se verificó de acuerdo con las instrucciones del proveedor (datos no mostrados).
co-cultivos
Hemos establecido co-cultivos de EGFP-OCC con BM- MC en relación de 1:02 durante 24 horas. OCC fueron diferenciadas a partir de BM-MC en función de su eGFP y EP-Cam. Las diferentes poblaciones de células fueron ordenados usando fluorescencia de células activadas (FACS).
Fluorescent clasificación de células activada
Las células se recogieron y se bloquearon en PBS-FBS al 5%-1% BSA-10% FcR Reactivo de bloqueo (Myltenyi Biotec). la suspensión de una sola célula fue analizada y ordenada en FACSAria2 Declaración de práctica recomendada (BD Biosciences). Los datos se procesaron con FACSDiva 6.3 (BD Biosciences). Dobletes fueron excluidos por el FSC-W × H FSC-análisis y SSC-W x SSC-H, se utilizaron canales individuales teñidas de indemnización, y fluoróforo menos uno (FMO) controles se utilizaron para la compuerta. EGFP fluorescencia fue adquirido con láser azul 488 nm y 510/50 nm de emisión, a 50 000 eventos fueron adquiridos por muestra. Gráficos muestran la mediana de intensidad de fluorescencia (IMF) con respecto al control. Durante la máscara de fase pureza de clasificación celular se aplicó. monocultivos OCC fueron procesados y ordenados como controles.
análisis
La expresión génica
Tras la clasificación de células ARNm fue aislado utilizando el reactivo Trizol seguido de purificación utilizando el kit de extracción de Qiagen RNAeasy. 200 ng de ARN total se analizaron en Affymetrix GeneChip Human Genome U133 Plus 2,0 Array. Los datos fueron analizados utilizando el software Partek (St Louis, MO). Se realizó la comparación de clases entre diferentes condiciones (tres réplicas biológicas) para identificar los cambios de expresión génica con diferencias significativas de expresión y doble aumento o disminución de la expresión [14], [15], [16]. El análisis de componentes principales (PCA) se realizaron con Partek con la configuración estándar. Las comparaciones estadísticas para los datos de microarrays se calculan con estudiantes de dos colas t-test. Benjamini-Hochberg corrección se aplicó a limitar descubrimiento tasa de falsos positivos a un 5%. Las comparaciones estadísticas para los datos categóricos se lograron mediante la prueba de Chi-cuadrado. Las correlaciones se realizaron utilizando correlación de Pearson. Todas las demás comparaciones estadísticas se calcularon utilizando la prueba t de dos colas.
Ingenuity Pathway Analysis
Se utilizó el software Ingenuity Pathway Analysis (IPA) (Ingenuity Systems, Redwood City, CA) para el análisis de redes de los genes que son regulados diferencialmente en co-cultivo. Se definieron las listas de genes globales que representan palabras clave IPA: "Metástasis", "proliferación de las líneas celulares" y "La muerte celular de la línea celular tumoral". Todos los bordes son apoyados por al menos una referencia de la literatura, libro de texto, o información canónica almacenada en la base de datos de conocimiento de Ingenuity Pathways.
P-
valores para el enriquecimiento de las funciones biológicas se genera en base a la distribución hipergeométrica y calculado con la cola derecha exacta de Fisher para 2 × 2 tablas de contingencia como se aplica en el ingenio.
ensayo de adherencia
placas de 96 pocillos se revistieron con Matrigel (BD-Biosciences). 20 000 OCC-eGFP se sembraron por pocillo y se incubó en 5% incubador de CO2 a 37 ° C durante 15, 30 y 60 minutos. Las células no adherentes se eliminan por lavado. Las células adherentes se cuantificaron utilizando un lector de placas de fluorescencia (Wallac, Perkin Elmer) (488 nm de excitación, emisión 510). Todos los experimentos funcionales se realizaron por triplicado biológicos.
Ensayos
migración /invasión
8 micras poros permeables Transwell soportes fueron recubiertas con Matrigel. 50 000 OCC viables (ordenados de co- y monocultivo) fueron sembradas por pocillo y se incubó en 5% de CO2 a 37 ° C durante 12 y 24 horas. a continuación, la migración y la invasión OCC se evaluó usando un lector de placas de fluorescencia (Wallac, Perkin Elmer).
Ensayo de proliferación
5000 OCC se sembraron en monocultivo o en el MSC-Morange monocapa en un suero libre /citoquinas medios de comunicación libres. OCC fueron contados cada dos días durante 14 fueron recubiertas con Matrigel. Las 50 000 días bajo un microscopio utilizando fluorescencia de GFP. Se cuantificaron cada día diez campos.
quimiorresistencia
100000 OCC se sembraron en monocultivo o con BM-MSC en relación de 01:02. Mono- y co-cultivo se trataron con 90 mM Cisplatinum y 6 M Paclitaxel (Sigma) durante 24 h. Las células fueron teñidas con calceína rojo-naranja, azul MUERTO EN VIVO /Aqua (Invitrogen, Molecular Probes), CD73-APC (Biolegend, clon: AD2) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se analizaron mediante FACS. OCC fueron definidos como células GFP + CD73-, viviendo OCC se define como calceína rojo-naranja + LIVE /DEAD acuicultura. 50 000 eventos fueron adquiridos por muestra.
El análisis estadístico
pruebas de la t de Student, test exacto de Fisher y chi-cuadrado pruebas se realizaron según el caso. Todos los valores de p son de doble cara con significación estadística evaluada en los niveles de alfa de 0,05. Se calcularon los intervalos de noventa y cinco por ciento de confianza (IC 95%) para evaluar la precisión de las estimaciones obtenidas. Todo el análisis estadístico se realizó mediante el análisis de datos plug-in de Microsoft Excel 2008.
Resultados
La modificación del transcriptoma OCC tras la interacción con MC
Con el fin de investigar las modificaciones de OCC transcriptoma al entrar en contacto MC, se diseñó un modelo de co-cultivo en el que se cultivan OCC sola (grupo de control) o en presencia de MC (condición de prueba) durante 24 h en un medio libre de suero, libre de citoquinas. OCC (condiciones de control y de prueba) fueron luego ordenados por FACS en función de su co-expresión de la molécula de adhesión celular epitelial (EpCAM, CD326) y el verde mejorada-proteína fluorescente (EGFP) (Figura 1.A).
Gráfico de contorno que muestra una discriminación típico de OCC y MC por FACS. OCC fueron definidos como eGFP + EpCAM + (población verde), mientras que los MC se definieron como eGFP-EpCAM- (población de color gris oscuro). B. Análisis de PCA para las células de cáncer de ovario líneas solos o post-contacto con las células mesenquimales
Tras el contacto MC, el transcriptoma de las dos líneas celulares que hemos probado (NIH:. OVCAR3-eGFP y SKOV3 EGFP) se modificó drásticamente (Figura 1.B). NIH: OVCAR3 significativamente upregulated 26 genes y downregulated 10 genes (Tabla S1); SKOV3 significativamente upregulated 18 genes downregulated y 3 genes (Tabla S2). Los cambios observados en las dos líneas celulares de cáncer de ovario no nos permiten establecer una firma genética común sobre el MC de contacto (Figura 1.B, el cuadro S1, S2 Tabla). Sin embargo el uso de software Ingenuity Pathway Analysis, hemos sido capaces de identificar tres grupos de funciones biológicas enriquecido al entrar en contacto con MC: "Metástasis" (NIH: OVCAR3, p = 6,48 * 10
-6; SKOV3, p = 5,42 * 10
-5), "La proliferación de líneas celulares" (NIH: OVCAR3, p = 4.36.48 * 10
-7; SKOV3, p = 6,79 * 10
-6) y "La muerte celular de la línea celular tumoral "(NIH: OVCAR3, p = 5,68 * 10
-8; SKOV3, p = 7,62 * 10
-5). Estas agrupaciones se comparten entre los NIH:. OVCAR3-eGFP y SKOV3-eGFP (Tabla 1)
En conjunto, estos datos indican que a pesar de la falta de superposición con respecto a los genes arriba o hacia abajo-regulada por MC contacto, los mismos grupos de funciones biológicas se enriquece en la línea celular de cáncer de ovario dos hemos probado. En este artículo, exponemos la idea de que el CM ejercen un efecto pro-metastásico en OCC, por lo tanto, hemos decidido validar los grupos de funciones biológicas descritas en la Tabla 1 con
in vitro
experimentaciones.
MCs aumentan función biológica OCC metástasis: la adherencia, la migración y la invasión
iniciación de la metástasis peritoneal implica la adhesión, la migración y la invasión a través del mesotelio. El uso de software IPA, hemos identificado un grupo de función biológica: "metástasis", que se enriquece con el contacto de células de cáncer de ovario con MC. Por ello, investigó el efecto biológico correspondiente a esta modificación pro-metastásico genómico realizar
in vitro
migración, adhesión y la invasión ensayos in. Tras 24 horas de co-cultivo con MC, OCC (EpCAM + eGFP +) fueron ordenadas (Figura 1A). A continuación, prueba la capacidad OCC 'a adherirse a ECM. OCC (NIH: OVCAR3 y SKOV3) se sembraron en un Matrigel (BD Biosciences) presenta el revestimiento bien para 10 min, 15 min, 30 min y 1 hora. Definimos la adherencia a la ECM como la fluorescencia de GFP residual hemos sido capaces de adquirir siguiente PBS lavado. Como se muestra en la figura 2.A, tanto la línea celular de cáncer de ovario muestran un aumento de la adhesión a la ECM: 1,38 veces mayor con relación al control de NIH: OVCAR3-eGFP en 10 min, y 1,94 veces de incremento en 1 h, 1,28 y 1,85 veces para SKOV3-eGFP a los 10 minutos y 1 hora en respectivamente.
a. OCC-eGFP (NIH: OVCAR3, gráfico de la izquierda y SKOV3, gráfico de la derecha) se sembraron en un Matrigel (BD Biosciences) recubiertas bien para 10 min, 15 min, 30 min y 1 hora. El aumento de la adhesión a la ECM se observa cuando OCC se cultivaron de forma preventiva con MC (barras de color gris claro) en comparación con el control (barras gris oscuro). B. Esquema que representa el ensayo de invasión y migración. C. Ordenada OCC se sembraron en cultivos polarizados (ONU) revestidas y GFP señal de cada pozo debajo de la membrana recubierta fue adquirida después de 24 h. El aumento de la migración y la invasión a través de la ECM se observa cuando OCC se cultivaron de forma preventiva con MC (barras de color gris claro) en comparación con el control (barras de color gris oscuro). SEM están representados, n = 3, | p. & lt; 0,05 Prueba t de Student
Para realizar ensayo de migración, sembramos 8 micras transwell con la OCC ordenados a las 24 h de cocultivo con MC. Hemos probado su capacidad para migrar a través del inserto Transwell y se midió la señal de GFP de cada pocillo a las 24 h. Se ha observado una 2 veces y 2,5 veces el incremento de la migración con el NIH:. OVCAR3 y SKOV3 después del contacto MC, respectivamente
Para llevar a cabo la invasión de ensayo, se utilizó Matrigel (BD Biosciences) recubiertas con 8 micras cultivos polarizados. Ordenado OCC se sembraron en cultivos polarizados cubiertos y GFP señal de cada pozo debajo de la membrana recubierta fue adquirida después de 24 h. La migración celular se incrementó en 2,5 veces y 1,5 veces para los NIH: OVCAR3 y SKOV3 después del contacto MC, respectivamente
Hemos demostrado aquí, que el CM a través de la interacción directa con OCC fueron capaces de cambiar drásticamente el comportamiento OCC.. Después del contacto MC OCC está representada una mayor adherencia a la ECM, una migración más rápida y una invasión más eficiente a través de la ECM. En conjunto estas observaciones hacen hincapié en el papel de MC, para mejorar, tanto en el nivel transcripcional y funcional el potencial metastásico de OCC.
Las células mesenquimales sostener la proliferación de ovario células cancerosas
Tras la infiltración mesotelial, el desarrollo de carcinosis peritoneal implica proliferación de células de cáncer de ovario en su estroma circundante. Hemos agrupado genes sobre la base de su función biológica, y se demostró que los genes implicados en la proliferación de líneas de células se enriquecieron al entrar en contacto con MC OCC (Tabla 1). Por ello, investigó la capacidad de la MC para sostener la proliferación OCC. Dado que el uso de suero con el fin podría dificultar en gran medida el estudio del efecto del microambiente de la célula de cáncer de ovario, se realizó el ensayo de proliferación en un en un contexto libre de suero, libre de citoquinas. OCC-eGFP (NIH: OVCAR3 y SKOV3) se cultivaron solo o en una monocapa MC-Morange. Hemos observado que la MC sostenido crecimiento de células cancerosas al menos durante 15 días mientras OCC eran de reposo en su ausencia (Figura 3A-C).
OCC se cultivaron en un MC que expresan Morange o direclty en el plato de plástico. Ensayo de proliferación se llevó a cabo en un suero libre de citoquinas medios libres. Imágenes fueron tomadas cada dos días, y se cuantificaron las células GFP. B. Detalle del pozo en el día 14, podemos notar OCC mostrar una morfología normal. C. Gráfico que muestra el recuento de células lleva más de 14 días. OVCAR3 eGFP cuando se sembró en un MC son capaces de sostener ciclo celular en un medio libre de citoquinas libre de suero. Se obtuvieron resultados similares con SKOV3 (datos no mostrados). SEM están representados, n = 3, | p. & lt; 0,05 t de Student prueba
MC inducen quimiorresistencia de las células de cáncer de ovario
El tratamiento del cáncer de ovario con carcinomatosis peritoneal, es decir, la enfermedad en estadio avanzado, incluye quimioterapia antes o después de la cirugía . Hemos agrupado genes sobre la base de su función biológica, y demostró que los genes que participan en "La muerte celular de la línea celular tumoral" de líneas de células se enriquecieron al entrar en contacto con MC OCC (Tabla 1). Por ello, investigó si la CM son capaces de promover la resistencia a la quimioterapia OCC.
OCC se cultivaron durante 24 horas en ausencia o presencia de MC en un libre de suero, medios libres de citoquinas. El mono- o co-cultivos se trataron a continuación durante 24 horas con 90 mM Cisplatinum y Paclitaxel 6 nm. análisis FACS Antes, las células se tiñeron con un tinte de viabilidad (calceína) y un colorante muerte celular (LIVE /DEAD). OCC y el MSC fueron discriminados en su expresión diferencial de CD73 y eGFP, OCC se define como eGFP + CD73- (Figura 4.A, panel superior). OCC viable después de la quimioterapia del tratamiento se definió como calceína alta /en vivo Dead (LD) negativo (Figura 4.A, panel inferior).
A. esquema explicativo del análisis FACS. B. OCC OCC o co-cultivadas con MSC se trataron durante 48 horas con 90 M de cisplatino y 6 nm de paclitaxel. Los tipos de células fueron discriminados por FACS utilizando GFP como un marcador de células de cáncer, y CD73 como marcador MC. análisis de muerte celular se lleva a cabo utilizando la doble tinción Dead calceína /en vivo. C. La cuantificación de los experimentos de análisis de la muerte celular. OCC mostrar una resistencia a tratamiento de quimioterapia convencional cuando se co-cultivada con MC en comparación con el control. SEM están representados, n = 3, | p & lt; 0,05 t de Student prueba
Co-cultivo de OCC con MC no modificó la viabilidad celular o la mortalidad antes de la quimioterapia (Figura 4.B y 4.C).. El tratamiento quimioterapéutico resultó en 61,4% (NIH: OVCAR3) y 63,4% (SKOV3) de la muerte de OCC (calceína pilas de gran baja, LD) (Figura 4.C). Mientras que la muerte OCC se redujo después de la quimioterapia con un 42,3%. (NIH: OVCAR3) y 42% (SKOV3) de calceína, pilas de gran baja LD en presencia de MC (Figura 4.C)
En la corroboración con nuestra IPA resultados, hemos demostrado que MC no sólo fueron capaces de enriquecer grupos de genes que están involucrados en la regulación de la muerte celular, sino que también estaban promoviendo la resistencia OCC (1,45 y 1,50 veces disminución en la muerte celular de NIH: OVCAR3 y SKOV3 respectivamente). a la quimioterapia
Discusión
Nuestro estudio demostró que los MC modificar OCC transcriptoma hacia un perfil metastásico. Al entrar en contacto con el MC, líneas OCC (NIH: OVCAR3 y SKOV3) enriquecieron tres grupos de funciones biológicas: "Metástasis", "proliferación de las líneas celulares", "La muerte celular de la línea celular tumoral". Hemos validado que estas funciones se modificaron
in vitro.
Nuestros datos indicaron que el CM contacto con OCC aumenta la adherencia, la migración y la invasión a /a través de la ECM, la proliferación y la resistencia a la quimioterapia. Esto es coherente con los informes de MCs que modifican el comportamiento de las células del cáncer de ovario [7], [8], [11], [12], [17].
La cavidad peritoneal está revestida por una capa continua de una sola mesotelial las células [18]. Las células mesoteliales se describen en la literatura como la primera línea de defensa contra todos los tumores que producen metástasis abdominal. Por lo tanto, el desarrollo de carcinosis peritoneal en cáncer de ovario implica varios pasos clave: la adhesión y el aclaramiento a /de la capa mesotelial, la migración y la invasión a través de la mesotelial y las capas sub-mesoteliales, y la proliferación de las células de cáncer de ovario [2], [19 ]. Aunque se han descrito las células mesoteliales para inhibir la adhesión de células de cáncer de ovario y la invasión [20], los fibroblastos de carcinoma asociada (CAF) muestran el efecto contrario [12], [20]. En nuestro estudio, hemos demostrado que las células mesenquimales (MC) aumentaron de ovario células de cáncer de adhesión y la invasión. Esto está en línea con los datos de Kenny y col donde se describen las células mesenquimales derivadas de fibroblastos promover la migración celular y la invasión de cáncer de ovario en un dependiente de la MMP-2 [21]. Recientemente, también mostraron el papel de los adipocitos en la progresión del cáncer de ovario [22]. Digno de mención, MC se describen a diferenciarse en adipocitos CAF y cuando se exponen a sobrenadante de células de cáncer de ovario [11], [17]. Tomados en conjunto estos datos demuestran que el linaje mesenquimal (MC, CAF, adipocitos) constituye un nicho permisiva a las células de cáncer de ovario, y podría explicar el tropismo peritoneal de ovario metastásico excrecencia tumoral.
En este estudio hemos demostrado que el CM sostendrá la proliferación de células de cáncer de ovario en un contexto libre de suero, libre de citoquinas. Estos datos obtenidos in vitro, están en la corroboración con varios en el informe vivo. Por ejemplo, Pasquet y col. demostraron que la ascitis mesenquimales derivadas células estromales promueven el crecimiento del tumor de ovario en ratones desnudos [9]. Esta capacidad de las células estromales derivadas mesenquimales para promover el crecimiento de ascitis de tumor de ovario se explica por la inducción de la proliferación de células de cáncer de ovario, y por un aumento de la angiogénesis [9]. Más recientemente, Mac Lean, y col. MC mostró que también podría aumentar la heterogeneidad del tumor de ovario. la secreción alterada de BMP2 por MCS es capaz de aumentar el número de células madre de cáncer de ovario y por lo tanto estimular el crecimiento del tumor de ovario en un ratón inmunocomprometido [12]. Otro componente de linaje mesenquimal,, también se informó de los adipocitos para aumentar in vitro y el crecimiento tumoral in vivo por el suministro de energía a las células cancerosas a través de la producción de ácidos grasos [22]. El papel de los ácidos grasos en la biología de las células de cáncer de ovario se han surgido recientemente. Un trabajo reciente mostró que la quimio-resistencia fueron inducidos por MC a través de la liberación de ácidos grasos Platinium inducida [23]. Estos ácidos grasos demostró la capacidad, en un contexto de xenoinjerto, para proteger OCC de numerosos agentes quimioterapéuticos [23]. Dado que el principal problema clínico en cuanto a la enfermedad de ovario es la recaída que emerge de una enfermedad mínima resistente platino, es interesante observar que MC y otros componentes mesenquimales son capaces de conducir la proliferación y la resistencia a la terapia, proporcionando un "metabólico" nicho permisivo.
Por lo tanto MC y células derivadas-MC determinan tanto la biología del cáncer de ovario y cáncer de ovario respuesta a la terapia. La comprensión de los cambios de expresión génica que se producen en la OCC de su interacción con su nicho MC podría ayudar a definir nuevos enfoques terapéuticos. Nuestro objetivo en este estudio fue describir una relación entre los cambios que se producen en la línea celular de cáncer de ovario en el nivel de transcriptómica y las diferencias en el comportamiento celular que hemos observado con el ensayo de co-cultivo se realizó. Una limitación de este estudio es que el análisis de transcriptómica comparada NIH: OVCAR3 y SKOV3 en contacto con la MC no definió un cambio global compartida a nivel de la expresión génica. Recientemente el Atlas del Genoma del Cáncer publicaron su trabajo en los adenocarcinomas serosos de ovario [24]. Ellos fueron capaces de definir cuatro nuevos subconjuntos (diferenciado, inmunorreactiva, mesenquimales y proliferativas) adenocarcinomas serosos de alto grado de ovario en base a un estudio de la expresión de genes de 489 pacientes [24]. Una explicación para la falta de solapamiento en los cambios de expresión de genes entre NIH: OVCAR3 y SKOV3 podría ser que cada línea celular pertenece a diferente subconjunto de adenocarcinomas serosos de alto grado de ovario. De hecho OVCAR3 y SKOV3 podrían representar diferentes tipos de células basadas en el análisis de componentes principales (Figura 1 B). A pesar de la aparente discrepancia, hemos sido capaces de definir tres grupos de genes de función biológica idénticos enriquecido al entrar en contacto MC que corrobora nuestros datos in vitro. Sorprendentemente, el nicho mesenquimales parece ser permisiva con dos subconjuntos diferentes de los adenocarcinomas de ovario seroso adherencia, la migración, la invasión, la proliferación y la quimio-resistencia. Por lo tanto, se necesitan más estudios sobre el efecto del microambiente en cada subconjunto diferente de los adenocarcinomas serosos de ovario (diferenciado, inmunorreactiva, mesenquimales y proliferativas) para refinar los genes implicados y definir enfoques terapéuticos innovadores.
Información de Apoyo
Tabla S1. análisis de la expresión génica
. Doblar los cambios de expresión génica representa los cambios en el NIH:. OVCAR3 después del contacto con MC comparación con el control
doi: 10.1371 /journal.pone.0038340.s001 gratis (DOC) sobre Table S2. análisis de la expresión génica
. Doblar cambios representa los cambios de expresión génica en SKOV3 después del contacto con MC en comparación con el control
doi:. 10.1371 /journal.pone.0038340.s002 gratis (DOC)