Extracto
Agrupación familiar de cáncer colorrectal ocurre en el 15-20% de los casos, sin embargo reconocieron síndromes de cáncer explican sólo una pequeña fracción de esta enfermedad. Por lo tanto, se desconoce la base genética para la mayoría de cáncer colorrectal hereditario.
EPHB2
Recientemente se ha implicado como un candidato gen supresor tumoral en el cáncer colorrectal. El objetivo de este estudio fue evaluar la contribución de los
EPHB2
con el cáncer colorrectal hereditario. Tenemos pruebas de línea germinal
EPHB2
variantes en la secuencia 116 basados en la población familiares casos de cáncer colorrectal mediante secuenciación de ADN. A continuación, calcula las frecuencias de la población y caracterizaron las actividades biológicas de la EPHB2
variantes identificadas. Se detectaron tres nuevos missense alteraciones no sinónimas. Dos de estas variantes (A438T y G787R) como resultado cambios significativos de residuos, mientras que el tercero conduce a una sustitución conservadora en el dominio SAM carboxi-terminal (V945I). Las dos primeras variantes se encontraron una vez en los 116 casos, mientras que la variante V945I estaba presente en 2 casos. Genotipado de pacientes adicionales con cáncer colorrectal y el control de los sujetos reveló que A438T y G787R representan raras
EPHB2
alelos.
In vitro
estudios funcionales muestran que la sustitución G787R, situada en el dominio quinasa, provoca deterioro de la actividad de quinasa del receptor y por tanto es patógeno, mientras que la variante A438T conserva su función de los receptores y probablemente representa un polimorfismo neutral. El tejido tumoral del caso variante G787R manifiesta pérdida de heterocigosidad, con la pérdida del alelo de tipo salvaje, apoyando un papel supresor de tumores de
EPHB2 Hoteles en raros casos de cáncer colorrectal. germinal raras
EphB2
variantes puede contribuir a una pequeña fracción de cáncer colorrectal hereditario
Visto:. Zogopoulos G, C Jorgensen, Bacani J, Montpetit A, P Lepage, Ferretti V, et al. (2008) de la línea germinal
EPHB2
receptor variantes en familiar de cáncer colorrectal. PLoS ONE 3 (8): e2885. doi: 10.1371 /journal.pone.0002885
Editor: Jörg Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Alemania |
Recibido: December 20, 2007; Aceptado: 3 Julio 2008; Publicado: 6 Agosto 2008
Derechos de Autor © 2008 Zogopoulos et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el Instituto Nacional del cáncer de los Institutos nacionales de Salud en virtud de la RFA#CA-96-011 (SG) y por medio de acuerdos de cooperación con los miembros del colon Registro Familiar del cáncer y los IPs El contenido de este manuscrito no refleja necesariamente los puntos de vista o políticas del Instituto Nacional del Cáncer o cualquiera de las entidades colaboradoras o investigadores en el colon CFR, ni la mención de nombres comerciales, productos comerciales u organizaciones no implica reconocimiento alguno por parte del gobierno de Estados Unidos o Colón CFR. Cancer Care Ontario, como la organización de acogida con el Proyecto Genoma Ártico, reconoce que este proyecto fue financiado en parte por Genoma Canadá a través del Instituto de Ontario Genomics, por Genoma Québec, el Ministerio de Desarrollo ÿconomique et Regional et de la Recherche du Québec y Ontario Instituto para la Investigación del cáncer. GZ es un Académico de la Sociedad de Cirujanos de la Universidad y un receptor de un Terry Fox Fundación Beca de Investigación del Instituto Nacional del Cáncer de Canadá. TJH es un receptor de un premio Clínico-Científico en Investigación Traslacional del Fondo Burroughs Wellcome
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
cáncer colorrectal es una enfermedad común en la sociedad occidental, con 15-20% de los casos en desarrollo sobre la base de la predisposición genética aparente [1]. Sin embargo, los síndromes de cáncer reconocidos colorrectales-familiar poliposis adenomatosa familiar (FAP), hereditario no asociado a poliposis cáncer colorrectal (CCHNP) y
MYH
-asociado poliposis (MAP) -Cuenta por mucho menos de un tercio de los heredada . cáncer colorrectal, dejando el componente hereditario de esta enfermedad adicional sin explicación [1] |
en la gran mayoría de los cánceres colorrectales, la activación mutacional de la vía de señalización Wnt juega un papel esencial en la iniciación de la tumorigénesis [2] - [4 ]. Hiperactivación de señalización de WNT más comúnmente se produce temprano en el adenoma a carcinoma secuencia como consecuencia de mutaciones inactivantes en el
APC
gen supresor de tumores o la activación oncogénica
β-catenina
mutaciones. Estas alteraciones genéticas conducen a la activación constitutiva de β-catenina /TCF4 compleja, que, a su vez, impulsa la sobreexpresión de los objetivos de la señalización de Wnt. Estos efectores de la vía Wnt incluyen genes con un papel crítico en el desarrollo de los tumores colorrectales, tales como los
EphB
y
ephrin
genes [5], [6].
el papel de
EPHB2
, un miembro de la familia de la tirosina quinasa del receptor Eph, como un gen supresor de tumor en la carcinogénesis colorrectal ha sido sugerida por varios hallazgos recientes.
EphB2
mapas a una región cromosómica (1p36.1) a menudo suprimido en estos tumores [7]. Además, los estudios inmunohistoquímicos han demostrado que la expresión de múltiples isoformas EphB se suprime con frecuencia en tumores colorrectales humanos invasivos [8]. Por otra parte, Alazzouzi
et al
. Recientemente hemos demostrado una alta incidencia de
EphB2
mutaciones de cambio de microsatélites inestable tumores colorrectales y aberrante
EPHB2
la metilación del promotor en ambas neoplasias estables e inestables de microsatélites [9]. La pérdida de expresión EPHB2 en tumores colorrectales también ha sido asociada con un peor pronóstico [10].
inactivación mutacional de
EPHB2
se ha relacionado con la carcinogénesis de próstata. Huusko
et al. Describe
recientemente una variedad de
EphB2
mutaciones en los tumores de próstata y en líneas celulares [11], y una mutación sin sentido común ha sido asociado con el cáncer de próstata en los hombres afroamericanos con antecedentes familiares de esta enfermedad [12]. Estos resultados tomados junto con el papel establecido de receptores EphB en el cáncer colorrectal nosotros, llevaron a la hipótesis de que la línea germinal
EPHB2
mutaciones pueden dar cuenta de al menos una fracción de las alteraciones genéticas que subyacen a la parte no explicada de cáncer colorrectal hereditario, y puede representar un nuevo síndrome cáncer que causa predisposición genética al cáncer colorectal y de próstata. Por lo tanto, en este estudio, hemos examinado 116 casos de cáncer colorrectal familiar basados en la población para la línea germinal
EPHB2
mutaciones. Los 116 probandos probados tenían al menos un familiar de primer grado afectado adicional. Estos casos tenían tumores de microsatélites estables, y no cumplieron con los criterios de diagnóstico de la FAP, HNPCC y MAP. También hemos enriquecido nuestra serie con los individuos que cumplían los criterios de inclusión anteriores y que tenían antecedentes personales o familiares de cáncer de próstata. Nuestros hallazgos sugieren que rara
EPHB2
alelos contribuyen a una pequeña fracción de cáncer colorrectal familiar.
Materiales y Métodos
Sujetos de estudio y muestras de ADN
Bioespecímenes se obtuvieron del registro familiar de cáncer colorrectal Ontario (OFCCR), un miembro de los National Cancer Institute Cooperative Registros familiares de cáncer colorrectal Estudios (http://epi.grants.cancer.gov/CFR/about_colon.html) [13]. El OFCCR incluye 3.770 casos de cáncer colorrectal diagnosticados en la provincia de Ontario, Canadá entre 1997 a 2000, con una edad en el momento del diagnóstico de 20 a 74. por edad y sujetos control emparejados por sexo, sin antecedentes personales de cáncer colorrectal fueron reclutados por teléfono desde una lista de números telefónicos residenciales seleccionados al azar para Ontario y de las listas de infracción de impuestos basados en la población del Ministerio de Finanzas de Ontario. Los sujetos del estudio donaron una muestra de sangre venosa y linfocitos periféricos se aislaron utilizando Ficoll-Paque, de acuerdo con las recomendaciones del fabricante (Amersham Biosciences, Baie d'Urfé, Quebec, PQ, Canadá). El método de fenol-cloroformo se utilizó para aislar ADN genómico a partir de linfocitos y el cáncer colorrectal líneas celulares. Se empleó el protocolo de QIAamp (Qiagen Inc., Mississauga, Ontario, Canadá) para extraer el ADN genómico de los tejidos embebidos en parafina. Todos los sujetos del estudio firmaron un consentimiento para participar en un Consejo de Ética de Investigación del Hospital Monte Sinaí escritos aprobados estudio de investigación.
EPHB2
la detección de mutaciones
El uso de la secuenciación automatizada (Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer , Foster City, CA, EE.UU.), que proyectó para la línea germinal
EPHB2 gratis (Entrez gene ID: 2048; RefSeq: NM_004442, NM_017449) variantes en la secuencia 116 casos colorrectal familiar (edad media al diagnóstico de 54 años, rango 22 a 74 años, 59 mujeres, 57 hombres). Nuestro análisis incluyó a pacientes con antecedentes personales (n = 6) y /o de la familia (padre, n = 19; hermano, n = 23; medio hermano, n = 4) de cáncer de próstata. Se excluyeron los pacientes con FAP, HNPCC o MAP. Una serie de líneas celulares de cáncer colorrectal (Caco2, Colo320DM, Colo320HSR, HT29, LS513, LS1034, SW837, SW948, SW1417, T84) se proyectará también. Hemos secuenciado la región codificante y al menos 50 pb de la secuencia intrónica en los límites exón /intrón. secuencias y condiciones de PCR primers se proporcionan en la Tabla S1. Variantes identificadas están numerados en relación con RefSeq NM_004442.
A438T, D679N y G787R frecuencias de alelos
Una muestra aleatoria de casos y controles emparejados de la serie OFCCR fueron seleccionados para estudios para evaluar la A438T, D679N y G787R alelo frecuencias. muestras de ADN de linfocitos de una serie adicional de los casos OFCCR (n = 364 para A438T; n = 1160 para D679N; n = 182 para G787R) y controles de la población de concordancia (n = 384 para A438T; n = 1133 para D679N; n = 199 para G787R) se pusieron a prueba para evaluar las frecuencias de la población de las variantes A438T, D679N y G787R. ensayos de genotipado para las variantes A438T, D679N y G787R fueron desarrolladas utilizando Extensión polarización de la fluorescencia de una sola base (FP-SBE) [14], SNPstream [14] y RFLP, respectivamente (Tabla S2).
Pedigree y la pérdida de de heterocigosidad (LOH) los análisis
las pruebas para la segregación en las familias de los probandos que llevan las variantes A438T y G787R se realizó por secuenciación directa, utilizando linfocitos o ADN de archivos de bloques de tejido incluido en parafina. La pérdida de heterocigosidad se realizó por secuenciación de muestras de ADN de archivo emparejado tumorales /normales y la secuencia de la comparación de los autorradiogramas para que una disminución en la intensidad de la señal no mutado en comparación con la secuencia mutada (Tabla S2). Estas reacciones se realizaron utilizando el kit de secuenciación del ciclo Thermo Sequenase radiomarcada Terminator, de acuerdo con el protocolo del fabricante (USB Corporation, Cleveland, Ohio, EE.UU.)
caracterización bioquímica de la A438T & amp.; G787R variantes
El
A438T
y
G787R
cDNA variantes de secuencias se generaron utilizando la mutagénesis dirigida al sitio basada en PCR y RefSeq NM_004442 (OriGene Technologies Inc., Rockville, MD, EE.UU.) como molde. Los productos de PCR se clonaron en pcDNA3 (Invitrogen Canada Inc.), y se verificó la secuencia. DU145 (un regalo del doctor Irene Andrulis, Samuel Lunenfeld Research Institute) se cultivaron en MEM /FBS al 10%. Las células fueron transfectadas transitoriamente con los distintos
EPHB2
construcciones de ADNc (de tipo salvaje,
A438T
, o
G787R
) usando lipofectamina 2000 (Invitrogen Canada Inc., Burlington, Ontario , Canadá), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Cinco horas después de la transfección, el medio se cambió a medio de inanición (MEM /FBS al 0,5%) durante 16 h. Las células fueron entonces estimulados con 2 mg /ml preclustered ephrin B1-Fc (ephrin B1-Fc, R & amp; D Systems, Minneapolis, MN, EE.UU., anti-Fc del anticuerpo, Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc., West Grove, PA, EE.UU.) para 30 minutos. EPHB2 transfectadas se inmunoprecipitó utilizando antisuero anti-EPHB2 [15] y la inmunotransferencia con anti-fosfotirosina (4G10, Upstate Biotechnology, Lake Placid, Nueva York, EE.UU.) o anti-EPHB2. Expresión e inmunoprecipitación de variantes para EphB2
in vitro
quinasa ensayos se llevó a cabo en el anterior, excepto células se dejaron sin estimular previo a la lisis celular e inmunoprecipitación, tal como se describe anteriormente por Holanda
et al
. [16] Los geles se analizaron y cuantificaron usando un phosphoimager Storm (Molecular Dynamics Inc., Sunnyvale, California, EE.UU.).
Resultados
cribado mutacional de la
EPHB2
gen en 116 pacientes con cáncer colorrectal familiar identificadas 3 nuevos cambios de sentido erróneo de nucleótidos y la variante D679N previamente sugeridos por Huusko
et al.
[11] que se patógenos en el cáncer de próstata (Tabla 1). Se encontraron tres pacientes no relacionados portadoras del alelo D679N, con diagnóstico de cáncer colorrectal en las edades de 57, 59 y 67 años, respectivamente. Sin embargo, el posterior análisis de materias adicionales sugiere que D679N representa un
EPHB2 neutra rara
polimorfismo, ya que se observó el alelo variante en frecuencias similares en los pacientes con cáncer colorrectal (11 de 1133) y los controles de población de concordancia (11 de 1160).
también hacen pruebas de
EphB2
mutaciones en 10 líneas celulares de cáncer colorrectal, y Caco2 se encontró para expresar una nueva variante, R4Q (nt. 11 a → G), además del receptor EPHB2 de tipo salvaje. La sustitución de aminoácidos R4Q puede causar una alteración en el péptido señal, lo que puede dar lugar a disminución de la expresión EPHB2. Sin embargo, la inmunoprecipitación con antisuero anti-EPHB2, seguido por inmunotransferencia utilizando un anticuerpo antifosfotirosina, demostró que a pesar de llevar la variante R4Q, la línea celular CAC02 produce un receptor EPHB2 funcional (datos no mostrados).
Dos de los tres nuevas variantes no sinónimas (A438T & amp; G787R) se identificaron resultado de cambios de residuos bioquímicamente importantes y potencialmente patógenos. El residuo afectada por la sustitución A438T se encuentra en el dominio extracelular de fibronectina de tipo III [17]. Dado que este dominio puede estar implicado en la unión del ligando, que postula que la variante A438T podría haber disminuido la actividad de unión y la función de señalización. La variante G787R afecta a un residuo en el dominio de la quinasa, y por lo tanto esta sustitución puede afectar directamente la cinasa del receptor y la actividad biológica [18]. Se detectó la tercera nueva variante (V945I) en dos pacientes, y conduce a una sustitución conservadora en el extremo carboxi-terminal en el dominio SAM [19]; no hemos caracterizado este alelo más.
La variante A438T se encontró en un paciente que tenía dos cánceres primarios. Se le diagnosticó un cáncer de próstata y cáncer de colon un establo en el lado derecho de microsatélites en las edades de 61 y 64 años, respectivamente (Figura 1 A, 1) de la familia. El padre del individuo estudiado también llevó a la variante A438T y es el único otro miembro de la familia con cáncer de colon, se le diagnosticó un cáncer de colon sigmoide un microsatélite estable a la edad de 76 años. De los 6 miembros de la familia no afectados probados para este cambio de sentido erróneo, se encontraron 3 para llevar a la variante A438T (Figura 1A). Los análisis de secuenciación de muestras de ADN genómico de tumores normales emparejados revelado pérdida de la de tipo salvaje
EPHB2
alelo en el cáncer de colon a partir del probando, pero no en el cáncer de colon, de su padre (datos no mostrados). tumor del padre manifiesta LOH de la variante, en vez de la de tipo salvaje,
EPHB2
alelo. Esta última observación puede reflejar la pérdida frecuente de la región cromosómica 1p36.1 durante la tumorigénesis [7], [8], y no a la inactivación selectiva de la
EPHB2
locus por LOH.
/-, portador; - /-, No portador; LOH +, se encontró tejido tumoral colorrectal para manifestar LOH, con la pérdida del alelo de tipo salvaje; Ca, el cáncer.
La variante G787R se detectó en un paciente con un diagnóstico de cáncer de recto a la edad de 67 años (Figura 1B, Familia 2). Este tumor mostró la pérdida del alelo de tipo salvaje (Figura 2). El paciente también tenía antecedentes de cáncer de tiroides folicular tipo a la edad de 73 años. Este caso índice fue seleccionado para la detección de mutaciones debido a una historia familiar de cáncer colorrectal en el lado materno. Sin embargo, los datos de genotipado revelaron que el alelo variante G787R o bien se origina en el lado paterno o es el resultado de un
de novo
mutación (Figura 1B). La hija del índice es el único otro portador de esta variante, y ella es hoy no está a la edad de 45 años.
En relación con las intensidades de las bandas de guanina en la reacción de secuenciación, la intensidad del nucleótido guanina en posición 2359 se reduce sustancialmente en la muestra del tumor, lo que sugiere la pérdida del alelo de tipo salvaje (G) en el tumor pero no en el tejido normal adyacente (flecha muestra nt. 2359).
se estimó la las frecuencias alélicas de las variantes A438T y G787R mediante el cribado de una serie adicional de casos de cáncer colorrectal basados en la población y misma edad y sexo sujetos de control. Los resultados de genotipado sugieren que estos dos alelos son variantes raras (Tabla 1). Tampoco se detectó la variante en los sujetos control y no se identificaron en ningún otro caso de cáncer colorrectal. Por lo tanto, para evaluar mejor el posible papel patogénico del A438T y variantes del receptor G787R, que caracteriza su actividad intrínseca de tirosina quinasa.
La caracterización bioquímica de las isoformas A438T y G787R reveló que que la variante G787R es una discapacidad funcional, mientras que el cambio A438T probablemente representa un polimorfismo neutral. las células DU145, que no expresan un receptor funcional EPHB2 endógeno [11], se transfectaron transitoriamente con el receptor, ya sea EPHB2 de tipo salvaje o una de las dos variantes. Encontramos disminución de la autofosforilación del receptor G787R, pero no la variante A438T, después de la estimulación ephrinB1 comparación con el receptor de tipo salvaje (Figura 3A). Se confirmó que el receptor de G787R ha reducido la actividad catalítica mediante el uso de un ensayo de quinasa in vitro. La capacidad del receptor G787R para autofosforilarse o para fosforilar el sustrato enolasa fue aproximadamente 9 veces más baja que la del receptor de tipo salvaje (Figura 3B), demostrando que la mutación G787R altera la actividad del receptor y no es un polimorfismo neutral raro.
Panel a: Disminución de la autofosforilación de la variante G787R EPHB2 en respuesta a la estimulación ephrinB1. células DU145 fueron transfectadas transitoriamente con construcciones de ADNc (vector vacío; de tipo salvaje, en peso; A438T; G787R) y, o bien no estimulada izquierda (-) o se estimularon (+) con preclustered ephrinB1-Fc durante 30 min. EPHB2 se inmunoprecipitó (IP) y inmunotransferencia (IB) con antifosfotirosina (4G10) para evaluar la autofosforilación del receptor. El lisado celular se inmunotransferencia con antiEPHB2 para determinar que no había la misma eficacia de transfección. Panel B: actividad de la quinasa suprimidas de la variante G787R EPHB2. En ensayos de quinasa in vitro se realizaron usando de tipo salvaje o EPHB2 inmunoprecipitados G787R y enolasa como sustrato exógeno. Antes de la formación de imágenes o immonoblotting contra EPHB2, proteínas fosforiladas se separaron por electroforesis en gel y se tiñeron con Coomassie. Autorradiograma que muestra
32PγATP incorporación en EPHB2 y enolasa (panel superior), inmunoblot anti-EPHB2 (panel central) y la igualdad de la carga de la enolasa se muestra (panel inferior). La tabla muestra la actividad de la quinasa relativa del receptor EPHB2 de tipo salvaje (ajustado a 100%)
vs. México La variante G787R.
Discusión
El Ef familia de receptores es el subgrupo más grande conocida de receptores tirosina quinasas. Esta familia se subdivide en dos clases distintas, EphA (A1 a A10) y EphB (B1 a B6), en base a sus afinidades de unión para dos familias de ligandos ancladas a la membrana con los nombres correspondientes de tipo A (A1 a A5) y B (B1 a B3) efrinas [19], [20]. Tras la unión del ligando, los receptores Eph activar las vías de repulsión celulares para modular la compartimentación celular y la migración de células clasificadas en una variedad de procesos biológicos [19].
Mouse estudios en modelos animales han demostrado que, en el intestino delgado, los receptores de EphB median la proliferación intestinal de células madre [21], así como la migración de células epiteliales y la organización a lo largo del eje cripta-vellosidades [5]. Dado que la pérdida de control de la actividad mitótica, el patrón de tejido epitelial y la arquitectura son los rasgos distintivos de la tumorigénesis, la alteración de la expresión normal de los receptores EphB y la función probable promueve la carcinogénesis colorrectal. la expresión del receptor EphB constitutiva puede estimular la iniciación del tumor por perturbar la homeostasis de células madre proliferativa, y el silenciamiento secundaria de la actividad del receptor EphB puede permitir la expansión de las células cancerosas, más allá de los límites espaciales impuestas por la función del receptor EphB intacta para rellenar las estructuras de tejido adyacentes [5], [6 ], [21]. En apoyo de esta hipótesis, nosotros y otros han demostrado recientemente un papel causal para la inactivación EphB en la progresión tumoral [22]. Hemos encontrado que
EphB2
o
EphB3
silenciar en Apc
Resultados Min /+ ratones en la tumorigénesis colorrectal acelerado y más agresivo.
En el presente estudio, se proyectarán casos familiares de cáncer colorrectal 116 basado en la población de mutaciones en un gen supresor de tumores candidato, EPHB2, e identificado tres variantes candidatos (A438T, D679N, G787R), que se caracteriza además. A pesar de que el alelo A438T no se observó en los sujetos de control y se encontró que segregan con la enfermedad en la familia 1, caracterización bioquímica sugiere que A438T es un polimorfismo neutral rara; no podemos excluir la posibilidad de que afecta a los aspectos más sutiles de la señalización de EPHB2, tales como la formación de oligómeros de orden superior. La variante D679N se ha informado anteriormente que se asocia con el cáncer de próstata [11]. Aunque, sigue siendo posible que esta variante modula la predisposición al cáncer de próstata, nuestros datos sugieren que se produce a una frecuencia de población de aproximadamente 1% y que no lo hace, en sí mismo, aumentan la susceptibilidad a cáncer colorrectal. Hemos observado el alelo D679N en un número similar de pacientes con cáncer colorrectal y los controles de población de concordancia. En contraste con estas últimas variantes, nuestros datos sugieren que la variante G787R es funcionalmente comprometida y puede ser una causa poco frecuente de cáncer colorrectal hereditario. La variante G787R fue identificado en un paciente diagnosticado con cáncer rectal a los 67 años de edad, y la caracterización bioquímica reveló que la sustitución G787R disminuye marcadamente la actividad quinasa intrínseca del receptor.
Ha habido otras dos investigaciones que examinan la contribución de germinal
EphB2
mutaciones de susceptibilidad al cáncer colorrectal. Oba
et al.
Proyectó para
EphB2
mutaciones en los tumores de colon y respectivos tejidos de colon normales de 50 pacientes con cáncer colorrectal, y identificado una alteración intrón 8 en una sola muestra de tumor, lo que resulta en una mutación sin sentido. Sin embargo, no está claro si esta es una mutación somática, ya que no hay indicación de si este cambio genético también se observó en la muestra de colon normal emparejado [23]. Esta investigación también identificó 15 casos con LOH que implican el
EPHB2
genes y pruebas de mutaciones en el restante
EPHB2
alelo. Dado que las mutaciones en el alelo restantes no fueron identificados, Oba
et al.
Sugirió que
EPHB2
no es un gen supresor de tumor clásica. Sin embargo, dado que sólo se analizaron 50 muestras de casos esporádicos probables de cáncer colorrectal, una función supresora de tumores de
EPHB2
no puede excluirse. En un estudio más reciente, Kokko
et al.
Informó una asociación de tres nuevas variantes con cáncer colorrectal [24]. Se observaron cambios de sentido erróneo de la línea germinal resulta en I361V, R568W, y D861N en pacientes con cáncer colorrectal, pero no en los controles sanos. Sin embargo, es posible que estas tres variantes son polimorfismos neutros raras ya que la importancia biológica de las variantes no se evaluó usando ensayos funcionales directos. Los pacientes seleccionados en estos dos últimos estudios no necesariamente tienen antecedentes familiares significativos de cáncer colorrectal. En contraste con estos dos informes anteriores, nuestro estudio fue diseñado para evaluar específicamente la función de la línea germinal
EPHB2
mutaciones en pacientes con cáncer colorrectal familiar, y no en casos esporádicos. A pesar de las diferencias de diseño del estudio, en conjunto, estos tres investigaciones sugieren que
EphB2
mutaciones germinales no son acontecimientos comunes en el cáncer colorrectal. Se necesitan más investigaciones de muestras de mayor tamaño para confirmar esta observación.
En resumen, hemos identificado una línea germinal
EPHB2
variante (G787R) con actividad biológica disminuida en un paciente con cáncer colorrectal, y sugieren que
EphB2
mutaciones contribuyen a una pequeña fracción de cáncer colorrectal hereditario. La rareza de la línea germinal
EPHB2
mutaciones apoya un papel más significativo para EPHB2 en la progresión tumoral colorrectal en lugar de en la iniciación del tumor. Dado que los receptores EphB (EPHB2, EphB3 y EphB4) siguen un patrón similar de silenciamiento transcripcional en cánceres colorrectales, todos los miembros de la familia de receptores EphB probablemente juegan un papel similar en esta enfermedad. Por lo tanto, la familia EphB probablemente representa una proporción menor de la predisposición genética al cáncer colorrectal, pero tiene un papel importante en la progresión del tumor. Aunque nuestros hallazgos sugieren que el
EphB
familia de genes no deben ser rutinariamente para detectar mutaciones germinales en los casos familiares, la
EphB
genes supresores de tumores son candidatos, probablemente la contabilidad para los casos raros de cáncer colorrectal familiar .
Apoyo a la Información sobre Table S1.
doi: 10.1371 /journal.pone.0002885.s001 gratis (DOC 0,06 MB)
Tabla S2.
doi: 10.1371 /journal.pone.0002885.s002 gratis (0.05 MB DOC)
Reconocimientos
Los autores agradecen al Dr. D. Daftary, Sra. S. Holter, Sra. A. Janson por su ayuda en la recogida de datos, y la Sra Joelle Fontaine, Sra. T. Selander y el hospital Monte Sinaí de muestras biológicas de repositorio para la asistencia técnica.