Extracto
SNPs en el tallo (
PSCA
) gen de próstata antígeno de células han ha encontrado asociado con el riesgo de cáncer gástrico (CG) en un estudio de asociación de todo el genoma. Esta asociación ha sido replicado en varias poblaciones. En este estudio se evaluó el impacto de
PSCA
genotipo sobre el riesgo de lesiones precancerosas gástrico avanzado y GC. Se utilizó la línea de base de datos histopatología gástrico y de ADN a partir de biopsias gástricas congelados de 2045 sujetos incluidos en un ensayo de quimioprevención de las lesiones precancerosas gástricas en Venezuela, y 180 casos de CG de la misma zona. Se analizaron 3 SNP en el
PSCA
gen (rs2294008, rs9297976 y rs12155758) que se encontraron anteriormente a estar asociado con el riesgo de CG en los europeos. Se encontró que el alelo T de rs2294008 que se asocia con una mayor prevalencia de gastritis atrófica (OR = 1,44, IC del 95% 01/03 a 02/01 para el modelo dominante) y metaplasia intestinal (OR = 1,50, IC del 95% 1,13 a 1,98 para el dominante modelo). También confirmó la asociación con un mayor riesgo de cáncer gástrico (OR = 2,34; IC del 95%: 1,36 a 4,01 para los portadores del alelo). SNP rs12155758 no se asoció con riesgo de lesiones preneoplásicas gástricas, pero confirmó su asociación con un mayor riesgo de CG (OR 1,95; IC del 95%: 1,29 a 2,97 para el modelo dominante). Hemos probado la relevancia de la presencia de la
Helicobacter pylori cagA
gen, que se sabe que aumenta el riesgo de lesiones gástricas más graves, pero no hemos encontrado ninguna interacción con la tala rasa
PSCA
SNPs en la definición de riesgo de lesiones precancerosas o cáncer gástrico
Visto:. Rizzato C, Kato I, Plummer M, Muñoz N, Canzian F (2013) la variación genética en
PSCA
y el riesgo de cáncer gástrico avanzado Las lesiones preneoplásicas y cáncer en relación con
Helicobacter pylori
infección. PLoS ONE 8 (9): e73100. doi: 10.1371 /journal.pone.0073100
Editor: Ludmila Prokunina-Olsson, Instituto Nacional del Cáncer, de los Institutos Nacionales de Salud, Estados Unidos de América
Recibido: 28 Febrero, 2013; Aceptado: 18 Julio 2013; Publicado: 4 Septiembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Rizzato et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo recibió el apoyo de la Comunidad Europea (CT90-0555 a IK) y el Instituto Nacional del cáncer de Estados Unidos (CA 98309 a IK) DOI: 10.1002 /ijc.28019. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
La madre de la próstata antígeno de células (
LCSP) gen se localiza en el cromosoma 8q24.2 y codifica una proteína de la superficie celular de ácido amino 123 con un 30% de homología con antígeno de células madre de tipo 2 (CEA- 2), un marcador de superficie celular de linfocitos inmaduros [1].
PSCA
se sabe que se expresa principalmente en la diferenciación de las células en lugar de células madre [2], [3]. Los miembros de la /Ly-6 familia Thy-1, a la que pertenece PSCA, muestran una notable diversidad funcional que van desde la activación de células T a la regulación de la apoptosis en el sistema nervioso [4].
PSCA se expresa en el epitelio de varios órganos, como el de próstata, la vejiga, la vesícula biliar y el estómago. Su expresión es específica de algunas poblaciones de células en el epitelio de estos órganos: en el epitelio gástrico, el sitio principal de expresión es las regiones istmo y cuello, que contienen células que se diferencian. En particular, la expresión de PSCA está regulado por disminución en el tejido gástrico de tipo intestinal [2].
El primer estudio de asociación de genoma completo (GWAS) en el cáncer gástrico (CG), realizado en una población japonesa, una indentified asociación entre rs2294008 SNP () de
PSCA
y riesgo del tipo difuso de GC. La sustitución del alelo C con el alelo de riesgo T en rs2294008 en el primer exón crea un nuevo sitio de inicio de la traducción (Met en lugar de Thr), extendiendo así la proteína por 9 aminoácidos y que afectan a la actividad transcripcional del gen [2]. La asociación entre rs2294008 y el riesgo de CG ha sido replicado en otras poblaciones asiáticas y caucásicas [5] - [9]. Una asociación con CG de tipo intestinal también se encuentra tanto en los caucásicos y los asiáticos, aunque con odds ratios menores que con el tipo difuso [5], [6], [10], [11].
Dos otros SNPs se encuentran encontrado previamente que se asocia con GC en los europeos [6]. Estos SNP rs9297976 son, situada en el 9,6 kb aguas arriba de
PSCA
y 0,8 kb aguas arriba de
JRK
; y rs12155758, que se encuentra en 1,7 kb aguas abajo de
PSCA
.
A continuación, se realizó un estudio para evaluar el impacto de estos 3
PSCA
SNP sobre el riesgo de gástrico avanzado lesiones precancerosas y cáncer gástrico por primera vez en una población de América Latina (Venezuela). Esta población se encuentra en riesgo relativamente alto de cáncer gástrico (la tasa de incidencia es de 10,4 casos nuevos por cada 100.000 personas por año y la mortalidad es de 8,9 muertes por cada 100.000 personas por año (http://globocan.iarc.fr/), en en particular los estados de Táchira (donde se recogieron las muestras) muestra una tasa de mortalidad por cáncer gástrico 3-4 veces más alta que el resto del país [12]. la población venezolana tiene también muy altas tasas de infección por
Helicobacter pylori ( H. pylori)
, el más conocido factor de riesgo para el cáncer gástrico [13], [14].
también puso a prueba la relevancia de la presencia de la
H. pylori cagA
gen, que en un estudio anterior [15] que han demostrado aumentar fuertemente el riesgo de lesiones más avanzadas. el
cagA
gen reside dentro de la isla de patogenicidad gen asociado a la citotoxina (cagPAI), la mejor caracterizada
H pylori
virulencia marcador;. esta región forma un sistema de secreción de tipo IV que se transloca productos bacterianos en la célula huésped. cagA es responsable de la mayor parte de la
H. pylori servicios asociados fenotipos malignos: se dispara la interleucina-8 secreción, el cebado de una respuesta inflamatoria, promueve la proliferación celular, la dispersión y la migración [16], [17]. La prevalencia de
cagA
cepas -positivos en las poblaciones de Venezuela se ha estimado entre el 59% y el 95% en
H. pylori
pacientes positivas a [18], [19].
Materiales y Métodos
Declaración de Ética
Todos los participantes del ensayo de prevención firmaron un consentimiento informado por escrito, mientras que para el participante para el consentimiento informado verbal estudio de casos y controles se obtuvo de acuerdo con el procedimiento normal aplicado en el Centro de control del cáncer y en el hospital de San Cristóbal, donde se recogieron las muestras, en el momento del estudio se llevó a cabo.
Ambos estudios fueron aprobados por los comités de ética de la Agencia Internacional para la Investigación sobre el cáncer (IARC) Comité ético en Lyon, Francia, y el Centro de control del cáncer en San Cristóbal, Venezuela.
Población de estudio
el ensayo aleatorio que sirvió de base para este estudio se ha descrito anteriormente [15]. Los sujetos elegibles fueron participantes en el programa de control de GC del Estado Táchira, Venezuela, entre 35 y 69 años de edad. Todos los sujetos fueron sometidos a gastroscopia con la obtención de biopsias gástricas, sangre y muestras de orina, y se les administró un cuestionario sobre variables sociodemográficas y de estilo de vida por un entrevistador entrenado. Durante el período de reclutamiento del estudio entre julio de 1991 a febrero de 1995, hubo 4349 sujetos elegibles, de los cuales 2272 fueron invitados a participar en el ensayo. De éstos, 72 se negaron a participar. Para 155 sujetos del ADN a partir de biopsias no estaba disponible ya o la calidad no era suficiente para el genotipado, dejando así un total de 2045 sujetos que se incluyeron en los análisis estadísticos.
Se identificaron los casos de cáncer gástrico en el Hospital General de San Cristóbal, capital del estado Táchira, entre enero de 1991 y enero de 1997 como parte de un estudio de casos y controles que se ejecuta en paralelo con el ensayo de intervención [13], [20]. Con el fin de ser elegibles para su inclusión en el estudio, los casos tuvieron que ser residente en Táchira durante al menos 5 años, tener más de 35 años de edad, han confirmado histológicamente cáncer gástrico y no han tenido cirugía gástrica previa. Se excluyeron los tumores no epiteliales del estómago. Los casos fueron clasificados de acuerdo a la clasificación de Lauren. Cinco de los 7 biopsias tomadas de cada sujeto al inicio del estudio se utilizaron para la evaluación histopatológica. Estos fueron tomadas del antro (3 biopsias), el ángulo de la incisura (1 biopsia) y el corpus (1 biopsia). Las biopsias se fijaron en formalina tamponada y se tiñeron con hematoxilina-eosina y Giemsa. Uno de los 3 patólogos en el Centro de Control del Cáncer clasifica cada una de las 5 biopsias como indicativos de la mucosa normal, gastritis superficial, gastritis crónica, gastritis crónica atrófica, metaplasia intestinal o la displasia, como se describió anteriormente [13], [20] Los controles de la estudio de casos y controles no están incluidos en el presente análisis, ya que no proporcionará biopsias gástricas y así no tener datos comparables sobre
H. pylori
infección.
SNPs Selección y Genotipado
Hemos seleccionado los tres
PSCA
SNPs que se había informado anteriormente a estar asociado con el riesgo de CG en los europeos [6]. Nosotros no escribimos rs2976392 SNP, originalmente encuentra asociada con el riesgo de cáncer gástrico en el primer GWAS en cáncer gástrico [2], ya que se encuentra en muy alta o completa desequilibrio de ligamiento con rs2294008 (0.97≤r
2≤1.0) en 6 poblaciones con origen en Europa, América del Norte o del Sur analizados en el proyecto 1000 genomas (http://www.1000genomes.org) [21] y por lo tanto probable que en la población venezolana también.
se extrajo
el ADN total a partir de muestras de biopsia gástrica después de la digestión con proteinasa K. en pocas palabras, las biopsias se incubaron en 250 l de una solución de Tris 10 mM - HCl (pH 8,0), EDTA 5 mM, 0,1% de dodecil sulfato de sodio, y 0,1 mg /ml de proteinasa K para al menos 2 horas a 55 ° C. Proteinasa K se inactiva por incubación a 95 ° C durante 10 minutos.
genotipificación se realizó utilizando un sistema específico de alelo basado en PCR Kaspar SNP genotipo (KBiosciences, Hoddesdon, Reino Unido). Los ciclos térmicos se realizó de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La detección se realizó a través de un prisma 7900 secuencia sistema de detección ABI HT con SDS software 2.2 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.).
La presencia de la
H. pylori cagA
de genes en muestras de biopsia gástrica se evaluó previamente por hibridación inversa usando un ensayo de sonda de línea o un inmunoensayo enzimático de ADN en el Laboratorio de Diagnóstico de Delft [22], [23]. Además, hemos escrito dos SNPs en el
cagA
gen en la posición 154 (cagA154_GA) y 858 (cagA858_CT), por el sistema de genotipificación de SNP Kaspar basado en la PCR específica de alelo. La presencia de los dos sitios polimórficos se ha evaluado mediante la secuenciación en un pequeño subconjunto de la misma población [24]. Además, los resultados obtenidos con este ensayo se compararon con los resultados de la secuenciación con 100% de concordancia. Una muestra se define como cagA positiva cuando se mostró una señal en al menos dos de cada tres PCRs (es decir, el /inmunoensayo enzimático de ADN de hibridación inversa y los dos ensayos de SNP).
Análisis estadístico
la variable de respuesta en este estudio fue el diagnóstico histológico global, que se dividió en 5 grupos: el cáncer gástrico; displasia; ESTOY; gastritis atrófica; y el epitelio normal a gastritis crónica. El último grupo sirvió como grupo de control en este estudio debido a que la frecuencia combinada de epitelio normal y gastritis superficial en esta población fue de menos de 5%. Se empleó el análisis de regresión logística multinomial, usando el procedimiento SAS CATMOD, para estimar la odds ratio (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC) asociados a los SNP para la gastritis atrófica, IM, displasia y cáncer gástrico, en comparación con los controles. Todas las RUP se ajustaron para las variables demográficas básicas (sexo, edad y nivel educativo), y otros factores de riesgo reportados previamente en esta población (consumo de cigarrillos, y la duración del uso del refrigerador) [25]. La igualdad de las RUP entre los estratos (H: β1-β2 = 0) se puso a prueba utilizando una un grado de libertad Wald estadístico chi-cuadrado. En el modelo dominante, heterocigotos y homocigotos para el alelo menor fueron considerados un único grupo de portadores de alelos menores. Con el fin de tener en cuenta el gran número de pruebas se utilizó la corrección de Bonferroni para establecer el umbral de significación, que resulta en un umbral final p & lt;. 0.004 (si dividimos 0.05 /12 (3 polimorfismos * 4 puntos finales de diagnóstico))
resultados
características básicas de la población incluida en este estudio se presentan en la Tabla 1. Genotipo éxito fue & gt; 95%. cegados muestras duplicadas (16,7%) incluidos para el control de calidad mostró & gt; 99% de concordancia genotipo. Las frecuencias de genotipo para todos los SNPs en los controles estaban de acuerdo con el equilibrio de Hardy-Weinberg (datos no mostrados).
Se evaluó el riesgo de lesiones precancerosas y cáncer gástrico, en comparación con el normal y no gastritis atrófica, de acuerdo con los genotipos en
PSCA
SNPs (tabla 2) guía empresas
para rs2294008, se observó un aumento del riesgo de gastritis atrófica (OR = 1,49;. IC del 95%: 1,05 IC del 95%: 01.03 a 02.01 en el modelo dominante), y la mensajería instantánea (OR = 1,56;; -2.11 en los portadores heterocigotos y OR = 1,44 IC 95% 1.16 a 2.9 en los portadores heterocigóticos; OR = 1,40; IC del 95%: 1,02 a 1,93 en homocigotos portadores y OR = 1,50; IC del 95%: 1,13 a 1,98 en el modelo dominante). También confirmó el aumento del riesgo de cáncer gástrico en general, tanto en los portadores heterocigotos y homocigotos del alelo T de rs2294008 (OR = 2,16, respectivamente; IC del 95%: 1,23 a 3,82; OR = 2,60; IC del 95%: 1,44 a 4,68; P
tendencia = 0,002) y una asociación significativa con el alelo T en el marco del modelo dominante (OR = 2,34; IC del 95% 1,36 a 4,01)
Para rs12155758 no se observó ninguna asociación estadísticamente significativa con lesiones preneoplásicas gástricas, sin embargo. heterocigotos portadores del alelo A se asociaron con mayor riesgo de CG (OR 2,13; IC del 95%: 1,38 a 3,28) y bajo el modelo dominante del alelo A también se asoció con un mayor riesgo de CG (OR = 1,95; IC del 95%: 1,29 a 2,97 ).
rs9297976 no mostraron ninguna asociación estadísticamente significativa con lesiones preneoplásicas o riesgo de CG.
Asociaciones con GC Subgrupos
Se realizó un análisis de subgrupos en los sujetos de la asociaciones significativas con cáncer gástrico en la tabla 2 para ver si la fuerza de la asociación difiere según el tipo histológico (103 casos de subtipos intestinales, 56 difusa y otros 21 tipos) y anatómica sub-sitio (18 casos de cardias y 162 casos no cardias) . Los resultados se muestran en la Tabla 3; rs9297976 se omite porque no mostró asociación con el cáncer gástrico. Ninguna de las diferencias observadas entre los subgrupos de asociación GC fue estadísticamente significativa (tabla 3).
Asociaciones por Estado cagA
También llevó a cabo un análisis de subgrupo de asociaciones significativas con GC y con lesiones precancerosas en el marco del modelo dominante, para ver si la fuerza de asociación difería por
estado cagA gratis (Tabla 4). Asociaciones que no fueron significativas en la Tabla 2 se omiten. También hemos combinado la metaplasia intestinal y displasia en una sola categoría, debido al pequeño número de displasias en el grupo negativo cagA [15].
Una interacción significativa límite entre el
H. pylori cagA
de estado y genotipos en rs2294008 se observó para el grupo combinado de pacientes con IM o displasia (p = P = 0,056), en el que la asociación apareció más fuerte en el
cagA
grupo -positivo (OR = 1,80, IC del 95%: 1,29 a 2,42) que el
cagA
grupo -negativo (OR = 1,03; IC del 95%: 0,63 a 1,68). Sin embargo, no se observó dicha interacción para GC, donde las RUP aparecieron igualmente fuerte en los dos sub-grupos (OR = 2,40 vs O = 2,55, p = 0,99) (Tabla 4).
Discusión
Presentamos aquí la reevaluación de 3 SNP en
PSCA Hola, ha encontrado para ser asociado con el riesgo de cáncer gástrico en los europeos [5], [6] y su posible participación en el riesgo de lesiones precancerosas y cancerosas en relación con la infección por
cagA
-positivo
H. pylori
.
Tres GWAS anterior encontró una asociación significativa del alelo T del rs2294008, un SNP funcional en el
PSCA
gen, con el riesgo de cáncer gástrico y de la vejiga [2] , [26], [27] y el alelo C de la úlcera duodenal [28]. Varios estudios de casos y controles confirmaron la asociación de este SNP con GC en poblaciones asiáticas y caucásicas. Los meta-análisis [10], [11], [29], [30] mostraron RUP que oscilan entre 1,41 a 1,66 para el modelo dominante y entre 1,14 a 1,33 para el modelo recesivo. Los otros dos
PSCA
SNPs de nuestro estudio fueron encontrados previamente a ser asociado con el riesgo de CG en los europeos [6]. Confirmamos la asociación entre el alelo T del rs2294008 y rs12155758 alelo A con riesgo de CG.
La atrofia, metaplasia intestinal, displasia y cáncer desarrollan de forma secuencial durante varias décadas en pacientes susceptibles con persistente
H. pylori
gastritis -asociado [31]. Lochhead et al [5] encontró que el alelo rs2294008 T se asocia también con la gastritis atrófica. Los resultados del presente estudio muestra la asociación entre el alelo T del rs2294008 con riesgo de gastritis atrófica y la mensajería instantánea. Un mayor grado de la asociación se observa también para la displasia, aunque no es estadísticamente significativa, posiblemente debido al pequeño número de muestras analizadas. Observamos un gradiente de riesgo consistente con la progresión de la menos grave de lesiones preneoplásicas más graves y con el cáncer. Estos resultados deben ser interpretados con precaución debido al pequeño tamaño de los grupos individuales de los sujetos con lesiones preneoplásicas específicos. Se necesitan más estudios, con muestras de mayor tamaño para sacar conclusiones definitivas sobre este punto.
in vitro
reportero ensayos mostraron que el alelo T del rs2294008 reduce la actividad transcripcional del
PSCA
promotor en ambas líneas celulares gástricas y de la vejiga [2], [27]. Además, un estudio funcional reciente mostró que la variación genética en
PSCA
podría alterar la localización subcelular y la estabilidad de la proteína [28]. Estos hallazgos llevaron a la hipótesis de que la susceptibilidad a la úlcera duodenal y cáncer gástrico está influenciada por la variación genética en
PSCA
través de un efecto promotor del crecimiento del alelo T y un efecto en la activación de células T por el alelo C [ ,,,0],28]
intestinal y adenocarcinomas gástricos de tipo difuso son diferentes en su características epidemiológicas, la etiología y el pronóstico [32] -. [36]. En consonancia con los estudios en los europeos y los metanálisis de estudios en los asiáticos [5], [11], [29], [30], se observa una asociación de este SNP con todos los tipos histológicos de GC, sin ninguna evidencia estadísticamente significativa para la diferencia en el riesgo entre los subtipos de GC de acuerdo con la histología o la ubicación. Debe tenerse en cuenta sin embargo, que el tamaño de la muestra de los subgrupos en este estudio es más bien pequeño.
La asociación entre rs2294008 y
H. pylori
infección se ha investigado en 3 estudios, pero ninguno de ellos ha encontrado una asociación estadísticamente significativa, a excepción de una interacción débil entre el SNP y la infección que se encuentra en una población europea [5], [6], [37] . Hemos estudiado la interacción entre los
PSCA
polimorfismos y la presencia o ausencia de
cagA
cepas más que de
H. pylori
la infección, ya que en un estudio anterior [15] en la misma población se observó una fuerte correlación entre el
cagA
presencia y riesgo de lesiones premalignas avanzadas. No se observó ninguna interacción convincente entre
PSCA
SNPs y
cagA
estado de riesgo de lesiones gástricas preneoplásicas o GC. La interacción significativa entre débilmente rs12155758 y
cagA
de estado con respecto al riesgo de IM /displasia es difícil de interpretar debido a rs12155758 se muestran ahora una asociación con el riesgo de IM /displasia por sí solo. Estas observaciones sugieren que PSCA puede estar implicado en la carcinogénesis gástrica a través de ambas vías cagA-dependientes e independientes del.
Nos damos cuenta de que nuestro estudio tiene algunas limitaciones. En primer lugar, aunque el estudio general es bastante grande, el tamaño de la muestra para los subgrupos específicos es más bien pequeño. Por otra parte, inferir una relación causal de las asociaciones observadas en un estudio transversal puede ser difícil, porque las relaciones temporales entre exposición y los resultados no son claros. Sin embargo, el análisis de la sección transversal tiene una ventaja en la acumulación de cambios histológicos en desarrollo durante varias décadas como
H. pylori
se adquiere generalmente en la infancia en poblaciones de alto riesgo [38]. En tercer lugar, no tenemos información sobre el origen étnico de los sujetos de estudio. Existen diferencias en las distribuciones alélicas de estos SNPs en diferentes poblaciones (véase el cuadro complementario S1), sin embargo las frecuencias que observamos son similares a las otras poblaciones de América Latina para los que hay datos disponibles (Tabla S1). Aunque no podemos demostrar formalmente que estas tres variantes cubren adecuadamente los marcados en la población europea estudiado por la Sala
et al
. [6], la población venezolana se ha estudiado tiene un fuerte componente de ascendencia europea, por lo tanto, el patrón de desequilibrio de unión podría decirse que no debería ser muy diferente. Por último, nuestro estudio se limitó a una población venezolana y los resultados no son necesariamente extrapolables a otras poblaciones.
En resumen nos mostró que un SNP funcional en el
PSCA
gen se asocia con el riesgo de lesiones precancerosas avanzadas gástricas y cáncer gástrico y la evaluación del riesgo no parece ser modificados por la presencia o ausencia de
H. pylori
cepas portadoras del gen que codifica la citotoxina cagA bacteriana.
Información de Apoyo
Tabla S1.
alelo y genotipo frecuencias de la población venezolana estudiado y las poblaciones del Proyecto 1000 Genomas
doi:. 10.1371 /journal.pone.0073100.s001 gratis (DOCX)
Agradecimientos
Estamos muy agradecidos a Leen Jan van Doorn (Laboratorio de diagnóstico DDL, Voorburg, Países Bajos) para la caracterización inicial de las muestras venezolanos CagA positivas, y para Silvia Franceschi (Agencia Internacional para la Investigación sobre el cáncer, Lyon, Francia) por lectura crítica del manuscrito.