Extracto
Antecedentes
Las variantes genéticas pueden influir interacción microARN-objetivo a través de modular su afinidad de unión, la creación o destrucción de sitios de unión miARN. Set8, un miembro de la metiltransferasa que contiene conjunto de dominio, ha sido implicado en una serie variedad de procesos biológicos
Métodos
Uso de Taqman ensayo, genotipo del polimorfismo rs16917496 un T & gt;. C dentro del miR-502 sitio de unión en la región 3 'no traducida de los pacientes
set8
gen en 576 el cáncer no microcítico de pulmón no microcítico (CPNM). Funciones de rs16917496 se investigaron mediante el ensayo de actividad de la luciferasa y validados por inmunotinción.
Resultados
log-rank test y la regresión de Cox indicaron que el genotipo CC se asoció con una mayor supervivencia y un menor riesgo de la muerte de NSCLC [58,0 vs 41,0 meses,
P = 0,031
; razón de riesgo = 0,44, 95% intervalo confidencial: 0,26 a 0,74]. Un análisis más detallado de regresión por pasos sugirió rs16917496 fue un factor independiente favorable para el pronóstico y el efecto protector más prominente en los no fumadores, los pacientes sin diabetes y los pacientes que recibieron quimioterapia. Se observó una interacción significativa entre rs16917496 y el consumo de tabaco en relación con la supervivencia NSCLC (
P Hotel & lt; 0,001). Ensayo de la actividad luciferasa mostraron un menor nivel de expresión de alelo C en comparación con el alelo T, y el miR-502 tenía un efecto en la modulación de la
set8
gen
in vitro
. El genotipo CC se asoció con la expresión de la proteína reducida set8 basado en la inmunotinción de 192 muestras de tejido NSCLC (
P
= 0,007). Los niveles más bajos de set8 se asociaron con una supervivencia significativamente más larga no (55,0 frente a 43,1 meses)
Conclusión
Nuestros datos sugieren que el rs16917496 T & gt;. C situada en el miR-502 sitio de unión contribuye a la supervivencia de NSCLC mediante la alteración de la expresión set8 través de la modulación de la interacción de los genes miARN objetivo
Visto:. Xu J, Yin Z, W Gao, Liu L, Y Yin, Liu P, et al. (2013) la variación genética en una niñera Sitio microARN-502 en
set8
gen confiere resultado clínico de células no pequeñas de cáncer de pulmón en una población china. PLoS ONE 8 (10): e77024. doi: 10.1371 /journal.pone.0077024
Editor: Rui Medeiros, IPO, Inst Puerto Oncología, Portugal
Recibido: 2 Julio, 2013; Aceptado: 27 Agosto 2013; Publicado: 11 Octubre 2013
Derechos de Autor © 2013 Xu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81172140, 81272532), la prioridad Académico de Desarrollo de programas de instituciones de educación superior de Jiangsu (JX10231801) y la provincia de Jiangsu proyectos de ciencia y tecnología clínica (Clinical Research Center, BL2012008). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de pulmón sigue siendo la principal causa de muerte por cáncer en todo el mundo, debido a su alta incidencia, comportamiento maligno y la falta de grandes avances en la estrategia de tratamiento. Cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) representa aproximadamente el 80% de todos los casos de cáncer de pulmón, con menos del 15% de los pacientes que sobreviven más de 5 años [1], [2]. El descubrimiento y la aplicación de los biomarcadores de pronóstico específicos además del tumor estándar, los ganglios linfáticos y metástasis sistema de estadificación (TNM) pueden mejorar la atención médica de pacientes con NSCLC [3]. A pesar de los intensos esfuerzos [4], [5], [6], todavía hay una falta de biomarcadores específicos para la predicción del pronóstico del cáncer de pulmón. Un biomarcador ideal debería ser fácil de detectar, estable y reproducible. Las variaciones genéticas en pacientes con cáncer pueden servir como marcadores pronósticos del resultado clínico.
Los microARN (miRNA) son una clase de pequeña (~20-22 nt) no codificante moléculas de ARN que regulan la expresión de genes a través de la unión 3 ' región no traducida (3'UTR) del ARNm objetivo [7]. Se estima que alrededor del 30% de los genes humanos son transcripcional o posttranscriptional regulada por miRNAs. Como resultado, miRNAs están involucrados en los procesos biológicos fundamentales, incluyendo el desarrollo, la diferenciación, la apoptosis y la proliferación [8], [9]. Estudios recientes han demostrado los patrones de expresión de genes miARN desregulados en diversos tipos de cáncer, lo que indica un importante papel de miRNAs en la iniciación, progresión y metástasis de cáncer humano [10], [11]. MiRNA perfiles de expresión y miRNAs específicos se han demostrado asociarse con la supervivencia de una variedad de cánceres, incluyendo cáncer de pulmón [12], [13], [14]. polimorfismos de nucleótido simple (SNP) en la pre-miARN o maduras secuencias de genes miARN y sitios miARN vinculante puede modulada las interacciones miARN-objetivo a través de la alteración de la expresión de los genes miARN, la maduración, la destrucción o la creación de los sitios miARN vinculante, lo que resulta en la desregulación del gen diana la expresión [15], [16], [17]. Este tipo de polimorfismos han sido implicados en la susceptibilidad al cáncer, la sensibilidad de la quimioterapia y el pronóstico [16], [18], [19], [20]. Entre estos miARN sitio de unión SNPs es la que se encuentra en el sitio de unión de miR-502 en el 3'UTR de la histona metiltransferasa
set8
de genes [21].
set8
(también conocido como PR-SET7 /SETD8 /KMT5A; localizado en el cromosoma 12q24.31), un miembro de la familia metiltransferasa que contiene el dominio SET especialmente dirigidas a H4K20 para monometilación [22], [23], ha sido implicado en una matriz variedad de procesos biológicos, como la regulación transcripcional [24], [25], la formación de heterocromatina [26], la estabilidad genómica [27], [28], la progresión del ciclo celular y el desarrollo [28], [29], [30 ], [31], [32]. Recientemente, Shi et al. [33] demostrar una actividad para set8 como methylatransferase p53 y Yang et al. [34] reveló un nuevo papel para set8 en la invasión tumoral y la metástasis. Estudios previos sugieren un polimorfismo rs16917496 T & gt; C, que se encuentra dentro del sitio de unión de miR-502 en
set8
3'UTR (Figura 1A), modula la expresión de la proteína set8, y por lo tanto contribuye al cáncer de mama y cáncer de ovario susceptibilidad, y el resultado clínico del carcinoma hepatocelular [35], [36], [37].
(A) La complementariedad de secuencia de cuenta-miR-502 y
set8
3'UTR es se muestra aquí. (B) La secuenciación directa y el dibujo esquemático de las construcciones de reportero que contienen 1.650 pb 3'UTR de
set8
con rs16917496 alelo T o C. (C) La expresión de luciferasa de construcciones que contienen rs16917496 T o C alelo en células A549 y 293T. Cada transfección se realizó con plásmidos pRL-SV40 como controles normalizados.
plásmidos set8
3'UTR reportero luciferasa se cotransfectaron con sintetizada químicamente madura hsa-miR-502 con o sin el miR-502 en inhibidores de líneas celulares A549 y 293T. 3'UTR, la región 3 'no traducida.
En este estudio, hemos genotipo rs16917496 en pacientes con CPNM que demuestran que este SNP es una variante genética importante para la predicción de la supervivencia. También se validó que los SNP rs16917496 se relaciona con
set8
expresión a través de miR-502 que afecta la unión a
set8
3'UTR.
Materiales y Métodos
Declaración de ética
Este estudio fue aprobado por la junta de revisión institucional de la Universidad de Medicina de Nanjing. Todos los participantes eran voluntarios y completarían el consentimiento informado por escrito antes de participar en esta investigación.
Población de estudio
Todos los sujetos fueron reclutados de la Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Nanjing (Jiangsu, China ) entre enero de 2004 y septiembre de 2012. Todos los pacientes fueron diagnosticados recientemente, histopatología y sin historia previa de otros tipos de cáncer o quimioterapia o radioterapia previa. Todos los sujetos no estaban relacionados población de etnia china Han. Después se obtuvo el consentimiento informado por escrito, un cuestionario estructurado en los datos demográficos y la historia de la exposición del medio ambiente, tales como la edad, el sexo y el consumo de tabaco, se administra a través de entrevistas cara a cara por entrevistadores entrenados. Cada paciente donó sangre venosa de 5 ml para la extracción de ADN genómico. Los sujetos con una frecuencia baja (& lt; 1 de cigarrillos por día) y duración (& lt; 1 año) de fumar se definieron como los no fumadores; todos los demás fueron clasificados como fumadores. El seguimiento se realiza cada 3 meses desde el momento de la inscripción hasta la muerte o el último seguimiento programado (el último seguimiento en febrero de 2013). Se seleccionaron los pacientes con completos seguimientos y muestra de ADN adecuada. Como resultado, 576 pacientes con CPNM fueron incluidos y genotipo en nuestro estudio. El tiempo de seguimiento máximo fue de 102 meses (la última de seguimiento en febrero de 2013) y el tiempo de seguimiento medio fue de 18.0 meses.
Genotipado
Se extrajo el ADN genómico de cada sujeto por un método de rutina [38]. ensayo de discriminación alélica TaqMan fue elegido para el genotipado usando un sistema ABI 7900 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.). Cebador y la sonda son: avanzar, TTTATGATGACAAATAATTTTCAAGTT, revés, AATGTGAGACACAATGTCTTGATTATA y FAM-TTTATTTCCTTGTTTAAA-MGB, HEX-TTTATTTCCTTATTTAAAT-MGB. El genotipo ensayo incluyó dos controles en blanco (agua) en cada formato de 384 pocillos y más del 10% de las muestras fueron seleccionadas al azar para el análisis de la repetición, con un rendimiento del 100% de concordancia.
Construcción de plásmidos reportero
Desde una asociación significativa se observó más tarde para rs16917496 T & gt; C polimorfismo y la supervivencia NSCLC, se construyeron dos plásmidos informadores que contienen rs16917496 T o C rs16917496 alelo para determinar si este polimorfismo tenía ningún efecto sobre su expresión de genes (Figura 1B). La construcción de un reportero alelo T fue sintéticos utilizando técnicas estándar de ADN (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.). El producto y PMIR-INFORME ™ (Applied appied) vector con renilla y secuencias de genes de luciferasa de luciérnaga se escindieron utilizando
Mlu I y
Sac
I (NEB) y después se ligó mediante ADN ligasa de T4 (NEBRASKA). El alelo C del rs16917496 se generó con el kit de mutagénesis dirigida al sitio (Takara, Berkeley, CA, EE.UU.) con el cebador mutagénico directo 5'-AAAGAAgAAGGAACTAGGTCAAAAATCTGTCC-3 'y el cebador inverso 5'-mutagénico TAGAGCAAAAAGAACTTTTACCTCGGCATC-3' de acuerdo con el protocolo del fabricante . Todas las construcciones utilizadas en este estudio fueron verificadas por la dirección de secuenciación (Figura 1B)
ARN Interferencias, transitorios transfecciones y luciferasa Los ensayos
El rs16917496 T & gt;. C polimorfismo localizado en el sitio de unión de miR 502 (Figura 1A). Por lo tanto, hemos aplicado la mímica y el inhibidor de este miARN que sintetiza por GenePharma (Shanghai, China) para mostrar su efecto sobre el gen reportero PMIR-set8 in vitro. Las células A549 y 293T se mantuvieron en medio RPMI 1640 con 10% de suero bovino fetal inactivado por calor (Gibco, Carlsbad, CA, EE.UU.) y 50 g /ml de estreptomicina (Gibco). Las células se sembraron en placas de 24 pocillos a 1 x 10
5 células por pocillo y se cultivaron a una incubadora de 37 ° C suplementado con 5% de CO
2 para 24 h. Las células fueron entonces transitoriamente co-transfectadas con el
set8
3'UTR plásmidos de luciferasa (diferentes alelos) y miR-502 mimcs con o sin miR-502 inhibidores utilizando Lipofectamine 2000 según el protocolo (Invitrogen). El plásmido PRL-SV40 (Promega, Madison, WI, EE.UU.) también se transfectó como control normalizador. A las 24 h después de la transfección, se recogieron las células y se analizaron para la actividad de luciferasa con sistema de ensayo Dual-Luciferase Reporter (Promega). tres experimentos independientes se realizaron para cada construcción de plásmido.
La inmunohistoquímica
La expresión de proteínas set8 en el cáncer de pulmón se detectó mediante inmunohistoquímica (IHC). Las láminas fueron preparadas usando un autoimmunostainer Ventana (Roche Ciencias Aplicadas, Mannheim, Alemania) y un anti-anticuerpo set8 (Abcam, Cambridge, Reino Unido). Detección utiliza Polímero-HRP, con 3,3-diaminobencidina. Los portaobjetos se visualizaron en 40 veces con un microscopio Nikon Eclipse.
Las secciones fueron revisados y calificados por dos patólogos que desconocían los resultados de genotipado. casos controvertidos fueron reevaluados en conjunto hasta que se alcanzó un consenso. Para la comparación de los resultados de la tinción, las muestras se puntuaron semi-cuantitativamente utilizando una puntuación histológica (H-score). La intensidad de la inmunorreactividad de células tumorales nuclear (1, ninguna o débil; 2, moderado; y 3, intenso) se multiplicó por el porcentaje de células neoplásicas positivas (1-100), obteniendo así valores de 0 a 300. set8 expresión se clasificó tan alto (por encima del valor medio H-score) o baja (por debajo del valor medio H-score).
Análisis estadístico
Hardy-Weinberg fue evaluada por una bondad de -FIT χ
2 test. La supervivencia global (OS) se calculó como el tiempo transcurrido entre el primer tratamiento y la muerte o la última fecha de seguimiento. Asociación entre la tasa de genotipo y la supervivencia se estimó mediante el método de Kaplan-Meier y log-rank test. Se calculó el tiempo medio de supervivencia (MST), y el tiempo medio se presenta cuando la mediana de tiempo no se pudo calcular. Cox modelos de riesgos proporcionales se realizaron para estimar las razones de riesgo (HR) y su 95% intervalos confidenciales (IC) para OS. El
P valor
para la prueba de heterogeneidad se basa en la χ
prueba Q basado en 2. La potencia estadística se calculó utilizando el software de PS (http://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize). Se utilizó la prueba t de Student para comparar la diferencia en los niveles de expresión del gen indicador de luciferasa. La distribución de los grados de expresión de IHC para cada
set8
genotipo se compararon mediante una χ
2 test. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software SPSS 18.0 (SPSS Inc.), y
P Hotel & lt; 0,05 en una prueba de dos lados se consideraron estadísticamente significativa
Resultados
características de la Población de estudio
las características demográficas y la información clínica de los pacientes y la asociación con el sistema operativo se muestran en la Tabla 1. la edad media al diagnóstico fue de 60 años (rango, 29-86), y había 380 varones (66,0%) y 267 fumadores (46,4%). Entre estos pacientes, 381 (66,2%) eran adenocarcinomas, 166 (28,8%) fueron carcinomas de células escamosas, y los otros 29 pacientes (5,0%), eran células grandes, carcinomas indiferenciados y de células mixtas. Durante el período de seguimiento, 206 pacientes murieron a causa de NSCLC. El nivel de tabaquismo, estadio clínico y la operación quirúrgica, pero no la quimioterapia o la terapia dirigida estado, se asociaron significativamente con el tiempo de supervivencia (todo el log-rank p & lt; 0,001). Curiosamente, los pacientes con diabetes (MST, 54,9 meses) tenían un 42% disminuyó significativamente el riesgo de muerte (HR = 0,58 IC del 95%: 0,35 a 0,97), en comparación con aquellos sin diabetes (MST, 42,0 meses)
Efecto de la set8 3'UTR rs16917496 T & gt; C polimorfismo en NSCLC Supervivencia
el genotipo frecuencias de los rs16917496 estaban en equilibrio de Hardy-Weinberg (
P = 0,272
). De acuerdo con informes anteriores, se encontró el alelo C de ser el alelo menor frecuencia [21], [35], [36], [37]. Log-rank test detectó una asociación significativa de la supervivencia rs16917496 con NSCLC en diferentes modelos genéticos (
P = 0,006
, 0,031 y 0,003 para el modelo codominante, modelo dominante y modelo recesivo, respectivamente. Figura 2A). Los pacientes portadores del genotipo CC rs16917496 tenían un sistema operativo mejorado en comparación con aquellos con el genotipo TT (58,0 frente a 41,0 meses, HR = 0,44 IC del 95%: 0,26 a 0,74). Univariado de Cox análisis de regresión mostró que este SNP es un marcador pronóstico importante de NSCLC (modelo dominante: HR = 0,74; IC del 95%: 0,56-0,98; modelo recesivo: HR = 0,47; IC del 95%: 0,28 a 0,79) (Tabla 1) . La asociación sigue siendo significativa después de ajustar por edad, sexo, tabaquismo, diabetes mellitus, la histología, estadio clínico, la operación quirúrgica y el estado de tratamiento (modelo dominante: HR = 0,70 IC del 95%: 0,53-0,92). Por otra parte, un estudio de energía de 91,7% (prueba bilateral, α = 0,05) se ha logrado detectar un HR de 0,70 para los genotipos alelo C en el modelo dominante.
(A)
SET página 8 rs16917496 genotipo y la supervivencia NSCLC (log-rank
P
= 0,006) en un modelo codominante. (B) parcelas de Kaplan-Meier de supervivencia mediante la combinación de
set8
genotipos y el consumo de tabaco en la supervivencia NSCLC (log-rank
P Hotel & lt; 0,001). 0, los pacientes con el genotipo común (TT) y haber fumado alguna vez; 1, con los genotipos variantes (CT o CC) y de haber fumado alguna vez; 2, aquellos con el genotipo común pero sin fumar; 3, los que tienen genotipos variantes y sin fumar. (C) baja expresión; (D) de alta expresión. Las células con un núcleo teñido de marrón se consideran positivos. Aumento original: × 200. NSCLC, cáncer de pulmón de células no pequeñas.
Con el fin de encontrar factores pronósticos independientes, que además hizo un análisis multivariante por pasos de regresión de Cox con determinadas características demográficas, características clínicas y el genotipo set8 en la supervivencia NSCLC. Los resultados indicaron que el
set8
rs16917496 polimorfismo (
P = 0,014
) fue mantenido en el modelo predictivo final, con el hábito de fumar, la diabetes mellitus y la intervención quirúrgica (
P
= 0,006, 0,018 y. & lt; 0,001, respectivamente) (Tabla 2) guía empresas
Estratificación y Análisis de Interacción
La asociación entre el
set8
rs16917496 polimorfismo y la supervivencia NSCLC se evaluó adicionalmente mediante análisis estratificado del tabaquismo, la diabetes mellitus, la histología, estadio clínico, intervención quirúrgica, quimioterapia y terapia dirigida estado. Como se muestra en la Tabla 3, el efecto protector de los genotipos variantes de
set8
rs16917496 fueron más prominentes en nunca fumadores (HR ajustada = 0,54 IC del 95%: 0,35 a 0,83), los pacientes sin diabetes (HR ajustada = 0,70 , IC del 95%: desde 0,53 hasta 0,94), los pacientes que recibieron quimioterapia (HR ajustada = 0,69; IC del 95%: 0,51-0,92), pero no la terapia dirigida (HR ajustada = 0,52; IC del 95%: 0,24 a 1,02). prueba de heterogeneidad mostró que la heterogeneidad de cada dos estratos fueron significativas para el consumo de tabaco (
P = 0,016
). Por lo tanto, un análisis de la interacción gen-estado de fumar se llevó a cabo (Tabla 4), y hubo una interacción multiplicativa estadísticamente significativas entre los genotipos de rs16917496 y el hábito de fumar sobre la supervivencia NSCLC (
P Opiniones de interacción multiplicativa & lt; 0,001 ). En comparación con los fumadores con el genotipo TT rs16917496, que nunca habían fumado con genotipos CT CC + tenían un riesgo significativamente menor de muerte (HR ajustada = 0,50 IC del 95%: desde 0,25 hasta 0,64). De Kaplan-Meier parcelas de supervivencia por combinación de
set8
genotipos y el consumo de tabaco en la supervivencia específica a NSCLC se muestran en la Figura 2B.
Efecto de la set8 3'UTR rs16917496T & gt; C polimorfismo de Expresión set8
el rs16917496 T & gt; C polimorfismo localizado en el sitio de unión de miR-502 (Figura 1A). Como se predijo usando RNAhybrid [39], el miR-502 tiene una mayor energía libre mínima (MFE) con el alelo C (| MFE | = 16,2 kcal /mol) de rs16917496 en
set8
que con el alelo T (| MFE | = 14,5 kcal /mol). Por lo tanto, la hipótesis de la C alelo variante podría dar lugar a una expresión reducida de
set8
resultantes del aumento de la represión de los genes miARN. Para probar esta hipótesis, dos construcciones de genes informadores de luciferasa contenían rs16917496 T o C alelo se generaron para determinar si este SNP podría afectar a la expresión de genes (Figura 1C). La actividad de transcripción del gen reportero con rs16917496 alelo C fue significativamente menor en comparación con el alelo T cuando se co-transfectadas sintetizado químicamente madura de miR-502 en células A549 (
P Hotel & lt; 0,0001) y de células 293T (
P
= 0,002). Los inhibidores de miR-502 podría revertir significativamente la actividad de gen indicador con el alelo C rs16917496 (
P Hotel & lt; 0,0001 para ambos A549 y 293T); sin embargo, no se observó ningún cambio evidente para el gen reportero con el alelo T tratados con inhibidores de miR-502 (
P
& gt; 0,05 para ambos). En su conjunto, el fuerte efecto de miR-502 en la modulación de
set8 Hoteles en ambas líneas celulares A549 y 293T indicó que el miR-502 se une específicamente a la 3'UTR de
set8
gen con rs16917496 alelo C y reprimir la expresión de la
set8
gen
in vitro
Asociación de la expresión de la proteína set8 con rs16917496 T & gt;. C polimorfismo y NSCLC Supervivencia
Entre las 576 muestras de sangre de NSCLC, 192 tenía fijado en formol, especímenes de cáncer de pulmón incluidos en parafina suficiente coincidentes. A continuación, explorar el estado de la expresión de set8 en CPNM y la asociación con el polimorfismo rs16917496 mediante inmunohistoquímica (Figura 2C y 2D). Set8 fue altamente expresado en el 50,5% tejidos de cáncer de pulmón. Los pacientes con el
set8
CC genotipo tenían niveles significativamente más bajos de expresión set8 que aquellos con el genotipo CT o TT (
P = 0,007
, el cuadro S1), que confirmó los resultados del indicador de luciferasa ensayos. Estos resultados apoyaron una relación genotipo-fenotipo que la variante de genotipo rs16917496 CC confiere a una menor expresión de gen set8 en comparación con CT o TT genotipos. La tasa de supervivencia de los pacientes con CPNM con los niveles de expresión de bajo y alto set8 se examinó mediante la prueba de log-rank. Las personas con niveles bajos de set8 muestran OS más tiempo que aquellos con altos niveles de set8 (55,0 frente a 43,1 meses), aunque la diferencia no fue estadísticamente significativa (
P = 0,138
).
Discusión
Los microARN son una nueva clase de ARN no codificantes y han demostrado que desempeñan un papel importante en la regulación de los genes codificantes de proteínas. Nuevas pruebas ha sugerido que los polimorfismos en los genes miARN-sitios de unión pueden afectar la regulación de los genes miARN para dirigir la expresión de genes y en consecuencia modificar el riesgo de cáncer y el resultado. Por ejemplo, la variante alelo A de
RAP1A
rs6573 mejorado la capacidad de unión de miR-196a, lo que lleva a un aumento del miARN mediada por
RAP1A
la represión, y este SNP funcionó como un potencial diagnóstico personal marcador de carcinoma de células escamosas de esófago [40]. Un SNP (rs13312986) en miRNA-629 sitio de unión alteró el
NBS1
expresión y contribuyó al riesgo de cáncer de pulmón [41]. La variación alélica de rs3134615 podría destruir la capacidad de miR-1827 para regular
MYCL1
expresión y de esta variante se asoció con pequeño riesgo de cáncer de pulmón de células [42]. Rs7180135 se encuentra dentro del sitio de unión de miR-197 en el 3'UTR de
RAD51
, y se informó que el alelo menor de estar asociado con una supervivencia específica del cáncer mejorada de los pacientes con cáncer de vejiga [43]. En este estudio, hemos examinado un SNP en el sitio de unión de miR-502 de la
set8
3'UTR por su capacidad de predicción relacionados con los resultados de NSCLC. Hemos demostrado que el rs16917496 T & gt; C se asoció con la supervivencia NSCLC en una población china. El alelo variante C puede disminuir la expresión de
set8
mediante el aumento de la capacidad de unión de miR-502 para apuntar sitio en el 3'UTR de
set8
. El genotipo CC se asoció con la expresión de proteínas reducida set8, que era consistente con estudios previos en el cáncer de mama tenía carcinoma hepatocelular [35], [37]. Por otra parte, los niveles más bajos de set8 se asociaron con una mayor supervivencia en NSCLC. Se encuentra
set8 que se sobreexpresa en varios tipos de tumores, incluyendo el cáncer de pulmón [44]. La función de set8 es probable que sea muy amplio y se ha implicado en procesos patológicos como la tumorigénesis. Se ha informado de que se requiere set8 para la progresión de la fase S normal [26], [29], se dedica a la regulación transcripcional [24], [25], la replicación del genoma y la estabilidad [26], [27], [28] , y modula las funciones de detención proapaptotic y del ciclo celular [30], [31], [33]. Set8 tiene una función bien definida en la vía de TP53 por monomethylating p53 en la lisina 382 y la supresión de la activación de la transcripción mediada por p53 de genes diana [33]. La función más notable de set8 es la modulación de la dinámica de la cromatina como una enzima histona modificadores de [45]. Está bien establecido que las alteraciones epigenéticas del código de histonas contribuyen a la iniciación de varios tumores malignos, tales como linfomas, carcinoma de células escamosas y adenocarcinoma de colon [46], [47]. Estos cambios epigenéticos aparecen en una etapa temprana de la carcinogénesis y se acumulan durante la progresión [47]. Recientemente, Takawa et al. [44] reveló una función de set8 para la metilación de lisina en un PCNA proteína no histona, que funciones están relacionadas con los procesos celulares vitales. Set8 se ha encontrado para promover la carcinogénesis por la desregulación de la expresión de PCNA. Mientras tanto, un nuevo papel para set8 en la invasión tumoral y la metástasis fue establecido por Yang et al. [34]. Demostraron que set8 promueve la transición epitelio-mesenquimal (EMT) y aumenta la capacidad invasiva de las células de cáncer de mama a través de la interdependencia funcional con un toque factor de transcripción y por medio de la actividad de remodelación de la cromatina dual. Tomados en conjunto, set8 juega un papel importante en el desarrollo y progresión del cáncer.
El estado de expresión y el papel función de miR-502 en el cáncer de pulmón es en gran parte desconocida. Sin embargo, el miR-502 se encontró que estaba regulado por disminución en muestras de cáncer de colon en comparación con las muestras de control normal emparejados. La expresión ectópica de miR-502 inhibe la autofagia, el crecimiento celular y la progresión del ciclo celular de las células de cáncer de colon in vitro. MIR-502 también inhibe el crecimiento del cáncer de colon en un modelo de xenoinjertos de tumores de ratón [48]. El miR-502 sitio de unión SNP rs16917496 en el 3'UTR de
set8
, identificada por primera vez por Yu et al. [21], se ha informado de contribuir a la susceptibilidad del cáncer de mama y cáncer de ovario [35], [36], y el resultado clínico de cáncer de pulmón de células pequeñas y carcinoma hepatocelular [37], [49]. De acuerdo con
in silico
análisis utilizando la base de datos RNAhybrid, miR-502 se prevé que se unen fuertemente con el sitio de destino de
set8
albergar alelo C de rs16917496. Ensayo de la luciferasa indicó que la actividad de transcripción del gen reportero con rs16917496 alelo C se redujo significativamente de que con T alelo. El nivel de downregulated set8 podría dar lugar a un inhibidor a la tumorigénesis y progresión. Esto fue consistente con los resultados de la asociación que el alelo C del rs16917496 se asoció con un mejor pronóstico de NSCLC. Más en profundidad se requieren estudios funcionales para descubrir el mecanismo exacto de esta variante.
Es bien estudiado que el tabaquismo es un factor de riesgo de cáncer de pulmón. También nos pareció que era un factor pronóstico desfavorable para los pacientes con CPNM. Carcinógenos en los cigarrillos pueden causar daños en el ADN, lo que puede conducir a la sobreexpresión de p53 en el cáncer primario de pulmón [50] y regulación a la baja de la expresión set8 [33]. Set8 modula la expresión de p53 por metilación de p53 en la lisina 382. El agotamiento de set8 aumenta las funciones de activación pro-apoptóticos y el puesto de control de p53 [33]. Mientras tanto, el rs16917496 alelo C puede disminuir la expresión de
set8
mediante el aumento de la capacidad de unión de miR-502 para orientar el 3'UTR de
set8
. En el presente estudio, se observó una interacción significativa entre rs16917496 y tabaquismo. pacientes que presenten al menos un alelo C del rs16917496 no fumadores tienen un sistema operativo mucho más tiempo que los fumadores o aquellos con el genotipo TT. Es plausible que las variaciones genéticas en
set8
gen puede modificar el desarrollo del cáncer de pulmón mediada por el consumo de tabaco.
Además, todavía hay algunas limitaciones en este estudio. En primer lugar, sólo un potencial SNP funcional de
set8
gen fueron investigados, que no cubría todas las variantes de
set8 Opiniones y análisis de haplotipos más restringido. En segundo lugar, nuestro estudio se basó en un tamaño relativamente pequeño de la muestra. Aunque se observó una asociación significativa entre el polimorfismo rs16917496 y la supervivencia NSCLC y un efecto de interacción entre este SNP y el hábito de fumar. Los ensayos biológicos han demostrado que rs16917496 es biológica funcional. Por lo tanto, el apoyo que nuestro hallazgo de que el genotipo variante rs16917496 CC asociado con un menor riesgo de muerte para el NSCLC es improbable que sea alcanzado por casualidad.
En resumen, se confirmó que
set8 página 3 ' UTR rs16917496 T & gt; C polimorfismo podría predecir la supervivencia de los pacientes con CPNM en una población china. Un ensayo funcional sugirió que el rs16917496 variación genética en el sitio de unión de miR-502 podría modificar el resultado NSCLC través de la regulación de la expresión de
set8
. Los resultados ponen de relieve, además, que los polimorfismos en los genes miARN sitios de unión pueden desempeñar un papel importante en el cáncer de pulmón y pueden tener un efecto en el resultado clínico de los pacientes.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
Correlación del genotipo rs16917496 y nivel de expresión set8
doi:. 10.1371 /journal.pone.0077024.s001 gratis (DOC)