Extracto
Los microARN (miRNA) son secuencias no codificantes de proteínas que pueden funcionar como oncogenes o genes supresores de tumores. Este estudio documenta la función supresora de tumores de miR-1280 en el cáncer de vejiga. Cuantitativa en tiempo real PCR y
In situ
hibridación análisis mostró que el miR-1280 es significativamente baja regulado en líneas celulares de cáncer de vejiga y tumores en comparación con una línea de células no malignas o muestras de tejido normal. Para descifrar el significado funcional de MIR-1280 en el cáncer de vejiga, que ectópica sobreexpresado de miR-1280 en líneas celulares de cáncer de vejiga. La sobreexpresión de miR-1280 tuvo efectos antiproliferativos y alteración de la formación de colonias de líneas celulares de cáncer de vejiga. FACS (clasificación de células activadas por fluorescencia) análisis reveló que la re-expresión de miR-1280 en células de cáncer de vejiga inducida detención del ciclo celular G2-M y apoptosis. Nuestros resultados demuestran que miR-1280 inhibe la migración y la invasión de líneas celulares de cáncer de vejiga. MIR-1280 también atenúa la expresión de proteínas Rock1 y RhoC. los ensayos de reportero de luciferasa demostraron que oncogén Rock1 es un objetivo directo de miR-1280 en el cáncer de vejiga. Este estudio también indica que el miR-1280 puede ser de importancia diagnóstica y pronóstica en el cáncer de vejiga. Por ejemplo, el análisis ROC mostró que la expresión de miR-1280 puede distinguir entre los casos de cáncer de vejiga malignas y normales y el análisis de Kaplan-Meier reveló que los pacientes con el miR-1280 alta expresión tenían una supervivencia global más alta en comparación con aquellos con baja expresión de miR-1280. En conclusión, este es el primer estudio que documenta que las funciones de miR-1280 como un supresor tumoral por la orientación Rock1 oncogén a la invasión /migración y la metástasis. Diversos compuestos actualmente están siendo utilizados como inhibidores de Rock1; por lo tanto, la restauración de supresor de tumor miR-1280 podría ser terapéuticamente útil, ya sea solo o en combinación con estos compuestos en el tratamiento de cáncer de vejiga
Visto:. Majid S, Dar AA, Saini S, Shahryari V, Arora S, Zaman MS, et al. (2012) microARN-1280 inhibe la invasión y metástasis por la orientación Rock1 en el cáncer de vejiga. PLoS ONE 7 (10): e46743. doi: 10.1371 /journal.pone.0046743
Editor: Natasha Kyprianou, Universidad de Kentucky College of Medicine, Estados Unidos de América
Recibido: 24 Julio, 2012; Aceptado: 30 Agosto 2012; Publicado: 4 de octubre 2012
Copyright: © Majid et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Esta investigación fue apoyado por el Centro Nacional de Recursos para la investigación de los Institutos nacionales de Salud a través de la subvención Número RO1CA138642, RO1CA130860, RO1CA160079 y VA Mérito de la opinión y el Proyecto de Programa VA. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:. Rajvir Dahiya es un miembro del Consejo Editorial PLoS ONE. Esto no altera la adhesión de los autores a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales
Introducción
Los microARN (miRNA) son secuencias no codificantes de proteínas que se cree que regulan & gt;. 90 % de los genes humanos [1]. La desregulación de la expresión de los genes miARN se ha identificado en un número de cánceres [2], [3], y la acumulación de pruebas indica que algunos miRNAs pueden funcionar como oncogenes o genes supresores de tumor. miRNAs se expresan de una manera específica de tejido y pueden desempeñar un papel importante en la proliferación celular, la apoptosis y la diferenciación [4], [5]. La inactivación de miRNAs oncogénicos [6], [7] o la restauración de miRNAs supresores de tumores [8], [9], [10] puede tener un gran potencial para el tratamiento del cáncer
.
A) Análisis cuantitativo de RT-PCR miR-1280 en las líneas celulares. B)
Fluorescente In-situ
hibridación (FISH) en líneas celulares. C) análisis en tiempo real PCR cuantitativa de la expresión de miR-23b en muestras de tejido microdissected láser Capturado emparejados. (Tumor T /N- /Normal).
Las alteraciones en las funciones celulares tales como la proliferación celular, la adhesión y la motilidad se basan en los cambios morfológicos que resultan de la reorganización del citoesqueleto de actina. proteínas de la familia Rho interactúan con el citoesqueleto de actina regulación de la formación de fibras de estrés y adhesiones focales dentro de las células. asociada a Rho de la proteína quinasa de serina-treonina, ROCK [11], [12], una de las mejores efectores caracterizados de Rho, se activa cuando se une selectivamente a la forma activa unida a GTP de Rho. ROCA activado interactúa con el citoesqueleto de actina para promover la formación de estrés de fibra y el ensamblaje de los contactos focales [13]. Los reordenamientos del citoesqueleto de actina participan en la migración de células de cáncer que es fundamental para el proceso de metástasis. Tang et al [14] examinó los efectos de la inhibición Rock1 sobre la actividad de RhoA y Rac1 aguas arriba. Rock1 disminuye indirectamente la actividad de RhoA aguas arriba mediante la estimulación de la actividad Rac1 inducida por Tiam1. Rock1 proporciona un mecanismo de retroalimentación, la mediación de Rac1 y RhoA actividad aguas arriba, lo que refleja los diversos efectos de Rock1 en el equilibrio funcional de las pequeñas GTPasas [14]. Reorganización de las proteínas del citoesqueleto de actina en respuesta a Rho es importante para la capacidad de las células tumorales de metástasis [15]. La vía Rho /ROCK desempeña un papel en la progresión del cáncer mediante la regulación de la reorganización del citoesqueleto de actina y un inhibidor de ROCA específica fue encontrado para suprimir el crecimiento tumoral y la metástasis [16], [17]. En las células de carcinoma de próstata PC-3, RhoA es un promotor endógeno crítico de la invasión celular y la migración [18]. La inhibición de RhoA o su principal efector aguas abajo, Rock1, disminuye la motilidad de células de carcinoma de próstata [18]. En el cáncer de vejiga, se informó de la vía Rho /ROCK estar involucrado en aparición y progresión de cáncer de vejiga [19]. Estas observaciones sugieren que la vía Rho /ROCK puede ser una diana molecular para la prevención de la invasión del cáncer y la metástasis. Aquí, por primera vez nos informe sobre la actividad supresora de tumores de microARN-1280 (MIR-1280) en el cáncer de vejiga y demostramos que la migración y la invasión del cáncer de vejiga atacando directamente a Rock1.
A) características clinicopatológicas de los pacientes cohorte. B) Análisis de la curva ROC que muestra el rendimiento de expresión de miR-1280 para discriminar entre muestras de tejidos malignos y no malignos. C) El análisis de Kaplan-Meier para la supervivencia global basado en la expresión de miR-1280.
Materiales y Métodos
Líneas celulares y cultivo celular
SV-HUC-1 , células T24 y J82 fueron adquiridos de la American Type Culture Collection (ATCC) y se cultivaron de acuerdo con los protocolos de ATCC. células SV-HUC-1 se cultivaron en F-12K Medio (ATCC) con 10% de FBS. células T24 se cultivaron en medio 5A de McCoy suplementado con 10% de FBS y las células J82 se cultivaron en medio esencial mínimo (MEM) suplementado con 10% FBS.
A) transfección transitoria de miR-1280 precursor aumentaron significativamente la expresión de MIR-1280 en células de cáncer de vejiga. B) La proliferación de las células T24 J82 y después de la transfección de miR-1280 se redujo significativamente en comparación con cont-MIR. C) el miR-1280 sobreexpresión inhibe significativamente la capacidad de formación de colonias de células de cáncer de vejiga.
Los plásmidos, Precursores y transfección
sondas TaqMan y precursores para hsa-miR-1280 y negativo control de pre-MIR se adquirieron de Applied Biosystems (Foster City, CA). PMIR-GLO Dual-Luciferase miRNA Target vector de expresión se adquirió de Promega. Lipofectamine 2000 (Invitrogen) se utilizó para todas las transfecciones.
La extracción de RNA
miARN y el ARN total se extrajeron de líneas celulares utilizando un kit de miRNeasy Mini y un RNeasy Mini Kit (Qiagen). miRNAs de muestras clínicas fueron extraídos utilizando técnicas de microdisección de captura por láser con un kit de miRNeasy FFPE (Qiagen).
AB) análisis FACS muestra miR-1280 sobreexpresión induce la detención del ciclo celular en G2-M en J82 y las células T24 con una disminución correspondiente de células en fase S. Los valores se muestran a partir de experimentos por triplicado ± SD.
A-B) de miR-1280 sobreexpresión induce la apoptosis en las células T24 J82 y con una disminución concomitante en el número de células viables. Los valores mostrados son de los experimentos por triplicado ± SD.
muestras clínicas humanas
Las muestras clínicas se obtuvieron de los San Francisco Veterans Affairs (VA) Medical Center. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes y el estudio fue aprobado por el Comité de Investigación Humana de la UCSF (Número de autorización: H9058-35751-01).
Cuantitativo PCR en tiempo real
miRNAs maduro se analizaron utilizando los TaqMan microARN los ensayos de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Applied Biosystems). Todas las reacciones de RT, incluidos los controles sin plantilla y RT menos controles, se llevaron a cabo en un Sistema de PCR rápida Tiempo real 7500 (Applied Biosystems). las concentraciones de ARN se determinaron con un NanoDrop (Thermo Scientific, Rockford, IL). Las muestras se normalizaron a RNU48 (Applied Biosystems). los niveles de expresión de genes se cuantificaron utilizando el software Fast 7500 secuencia sistema de detección en tiempo real (Applied Biosystems). Comparativo PCR en tiempo real se realizó por triplicado, incluidos los controles sin plantilla. Expresión relativa se calculó utilizando la comparativa Ct.
Hibridación In Situ
In situ
hibridación se realizó como se describe anteriormente [20]. líneas celulares brevemente se tiñeron con ácido marcada con DIG nucleico cerrado (LNA) sondas basadas específica para MIR-1280 siguiendo el protocolo del fabricante (Exiqon, Inc Woburn, MA) y se detectaron utilizando anticuerpos anti-DIG-fluoresceína, fragmentos Fab (Roche Applied Science , Indianapolis, IN).
ensayos a) migración de J82 y células T24 transfectadas con el miR-1280. B) imágenes representativas de ensayo de migración.
Un ensayo) Invasión muestra una disminución significativa en el número de células invasoras J82 y T24 transfectadas con el miR-1280. B) imágenes representativas de ensayo de invasión.
viabilidad celular y Clonability Ensayo
La viabilidad celular se determinó a las 24, 48 y 72 h utilizando el CellTiter 96 Solución acuosa Un ensayo de proliferación celular kit (Promega, Madison, WI) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Se midió la absorbancia a 490 nm usando SpectraMax 190 (Molecular Devices). Los datos se presentan como el valor medio para los experimentos por triplicado en comparación con el control negativo. Para el ensayo de formación de colonias, las células se sembraron a baja densidad (1000 células /placa) y se dejaron crecer colonias visibles hasta que se carguen aparecieron. A continuación, las células se tiñeron con Giemsa y se contaron las colonias.
migración y la invasión ensayos
Cytoselect 24 pocillos kits de migración celular y la invasión de ensayo (Cell Biolabs, Inc) se utilizaron para la migración y la invasión los ensayos de acuerdo con el protocolo del fabricante. Brevemente, las células T24 y J82 transfectadas con precursor de pre-miARN MIR o control negativo se cosecharon 72 horas después de la transfección y se resuspendieron en suero libre de Opti-MEM. Las células (10 x 10
4 por 300 l de medios sin suero) se añadieron a la cámara superior y la cámara inferior se llenó con 500 l de medio que contenía FBS al 10%. Las células se incubaron durante 16 horas a 37 ° C en una incubadora de cultivo de tejidos de CO2 al 5%. Después de 16 horas, no emigraron células /no-invasores se retiraron del lado superior de la membrana Transwel elementos filtrantes utilizando un hisopo de algodón. /células invadidas migrado en el lado inferior se tiñeron y se leyó la absorbancia a 560 nm de acuerdo con el protocolo del fabricante.
A) secuencias en la unión de cortesía Rock1 3'UTR de miR-1280. B) Análisis de transferencia Western muestra que el miR-1280 reprime la traducción de oncogenes y Rock1 RhoC. Los ensayos C) que muestran disminución de la actividad de luciferasa reportero después de co-transfección de cualquiera de los de tipo salvaje o mutante Src-3'UTR con el miR-1280 en células J82 y T24. Silenciamiento secuencia mutada 3'UTRROCK1. D) Representación esquemática del papel de miR-1280 en el cáncer de vejiga.
inmunotransferencia
La proteína se aisló a partir del 70-80% placas confluentes de células cultivadas utilizando la proteína de mamífero M-PER reactivo de extracción (Pierce Biotechnology, Rockfield, IL) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las concentraciones de proteína se determinaron por el método de Bradford. Igual cantidad de proteína se resolvieron en geles de poliacrilamida al 4-20% de sodio dodecil sulfato (SDS) y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa mediante transferencia gradiente de tensión. Las transferencias resultantes se bloquearon con leche en polvo no grasa 5% y se sondaron con anticuerpos específicos. Las transferencias se incubaron con anticuerpos secundarios conjugados con peroxidasa adecuadas y se visualizaron mediante quimioluminiscencia mejorada (Pierce Biotechnology, Rockford, IL).
luciferasa reportero de ensayo
Un pmirGLO Dual-Luciferase miARN vector de expresión diana se utilizado para los ensayos de 3'-UTR de luciferasa (Promega, Madison, WI). El oncogén objetivo de miARN-1280 fue seleccionado sobre la base de microARN en línea http://www.microrna.org/microrna/home.do base de datos destino. El primer secuencias de tipo salvaje 3'UTR fueron: Delantero 5 'CGCGGCCGCTAGTCTGTGGAATCGTGTGGGAT 3' y revertir 5 'ctagatcccacacgattccacagactagcggccgcgagct 3'. Para el mutante 3'UTR, las secuencias de los cebadores fueron: Delantero 5 'CGCGGCCGCTAGTCTGTGGAATCGTTCATACT 3' y revertir 5 'ctagagtatgaacgattccacagactagcggccgcgagct 3'. Para el ensayo lucifease, las células T24 y J82 se cotransfectaron con hsa-miR-1280 y pmirGLO Dual-Luciferase miARN vectores de expresión diana de tipo salvaje o mutante secuencia diana utilizando Lipofectamine 2000. actividades de luciferasa de luciérnaga se midieron utilizando el ensayo de luciferasa dual (Promega, Madison, WI) 18 h después de la transfección y los resultados se normalizaron con la luciferasa de Renilla. Cada plásmido reportero se transfectó al menos tres veces (en días diferentes) y cada muestra se ensayó por triplicado.
Análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron con GraphPad Prism 5 y MedCalc versión 10.3.2 . Todos los datos cuantificados representa un promedio de muestras por lo menos por triplicado o como se indica. Las barras de error representan la desviación estándar de la media. Todas las pruebas se llevaron a cabo dos de cola y
p-
valores & lt; 0,05 se consideraron estadísticamente significativos. Se calcularon las curvas de funcionamiento del receptor (ROC) para determinar el potencial de miR-1280 para discriminar entre muestras malignas y no malignas. Para progresión de la enfermedad, de Kaplan-Meier (log-rank test) se realizó el análisis.
Resultados
La expresión de miR-1280 en la vejiga tumores y cáncer líneas celulares
La expresión de MIR-1280 fue examinado por PCR en tiempo real en líneas celulares de cáncer de vejiga J82, T24 y se compara con la línea de células no malignas SV-HUC1. Los resultados indicaron que el miR-1280 se downregulated en líneas celulares de cáncer (Figura 1A).
In-situ
hibridación también confirmó la presencia de la expresión de miR-1280 (señal verde) en las células SV-HUC1 en comparación con líneas celulares de cáncer (Figura 1B). Para examinar la importancia biológica de miR-1280, su expresión se analizó en láser capturado microdissected (LCM) de vejiga humano tejido tumoral y en comparación con tejido de control emparejado normal. Se encontró que la expresión de miR-1280 para ser significativamente downregulated en todas las muestras tumorales en comparación con sus muestras normales emparejados (Figura 1C). Estos resultados indican un papel supresor tumoral putativo para el miR-1280 en el cáncer de vejiga.
Diagnóstico y Significado pronóstico de los MIR-1280 en el cáncer de vejiga
demografía clínicas de la cohorte de pacientes se resumen en la figura 2A . curva de funcionamiento del receptor (ROC) se realizaron análisis para evaluar la capacidad de expresión de miR-1280 para discriminar entre los casos normales y tumorales utilizando muestras de tejido. se obtuvo (Figura 2B) lo que sugiere que la expresión de miR-1280 puede discriminar entre muestras malignas y no malignas y por lo tanto se puede utilizar un área bajo la curva ROC (AUC) de 0,886 (IC del 95% = 0,775 a 0,998 P & lt;; 0,0001) como un marcador de diagnóstico para el cáncer de vejiga, aunque las muestras adicionales pueden fortalecer estos resultados. Para determinar si el miR-1280 ha ninguna importancia pronóstica, que divide los casos en bajos de miR-1280 (expresión T /N & lt; 0,8 veces) y alta MIR-1280 (la expresión de T /N & gt; 0,8 veces) grupos y realizado el análisis de supervivencia de Kaplan-Meier . En el análisis de Kaplan-Meier, el grupo de miR-1280 alta tuvieron significativamente mayor probabilidad de supervivencia global en comparación con el grupo bajo el miR-1280 (prueba Logrank p & lt; 0,02) (Figura 2C). Estos hallazgos sugieren que el miR-1280 tiene el potencial de ser un marcador diagnóstico y pronóstico para el cáncer de vejiga.
microARN-1280 Proliferación Celular La sobreexpresión suprime el cáncer de vejiga y de la formación de colonias
Para determinado la importancia funcional de la sobreexpresión de miR-1280 en el cáncer de vejiga, transfectadas líneas celulares de cáncer de vejiga J82 y T24 con precursores de miR-1280. MIR-1280 se sobreexpresa significativamente en líneas de células J82 y T24 después de la transfección transitoria con el miR-1280 precursora en comparación con el precursor de miR-CONT (Figura 3A). La expresión ectópica de miR-1280 disminuyó significativamente la proliferación celular en comparación con las células que expresan cont-MIR (Figura 3B). miR-1280 células transfectadas también tenían baja capacidad de formación de colonias como el número de focos en células que expresan miR-1280 se redujeron cuando se compara con cont-MIR células (Figura 3C) transfectadas. Estos resultados indican un efecto anti-proliferativo de miR-1280 en el cáncer de vejiga.
MIR-1280 desencadena la detención del ciclo celular e induce la apoptosis en células de cáncer de vejiga
FACS (clasificación de células activadas por fluorescencia) reveló que re-expresión de plomo miR-1280 a un aumento significativo en el número de células en la fase G2-M del ciclo celular (17% a 35%) mientras que la población de la fase S se redujo de 15% a 8% en J82 células (Figura 4A). Se observaron resultados similares en células T24 con un aumento de la población G2-M de las células (6% a 19%) y una disminución de la población de la fase S (12% a 6%), lo que sugiere que miR-1280 desencadena una G2-M detención en las células transfectadas miR-1280 comparado con cont-MIR. análisis FACS para la apoptosis se realizó utilizando colorante anexina-V-FITC-7-AAD. El porcentaje de células apoptóticas totales (temprano de apoptosis + apoptótica) fue significativamente mayor (4% a 12%) en respuesta a la sobreexpresión de miR-1280 en comparación con cont-MIR con una correspondiente disminución de 10% en la población de células viables en células J82 (figura 5A). En las células T24, se observó un aumento (2% a 12%) en las células apoptóticas con sobreexpresión miR-1280 en comparación con cont-MIR (Figura 5B). Estos resultados indican un papel supresor de tumores para MIR-1280 en el cáncer de vejiga.
anti-migración /invasión Efectos de MIR-1280 en el cáncer de vejiga
La sobreexpresión de miR-1280 tenía anti-migratorias y efectos anti-invasivos en líneas celulares de cáncer de vejiga. Se observó menor absorbancia a 560 nm con células transfectadas miR-1280 en comparación con el miR-CONT en el ensayo de migración (Figura 6) y la sobreexpresión de miR-1280 también redujo significativamente la invasividad de las células de cáncer de vejiga (Figura 7).
MIR-1280 se dirige directamente a Oncogene Rock1
Rock1 se ha informado de que una molécula importante que impulsa la migración y la invasión del cáncer de vejiga. El uso de una base de datos destino microARN en línea encontramos oncogén Rock1 como el putativo objetivo de miR-1280 con los sitios 3'UTR complementarias para la secuencia de semillas de miR-1280 (Figura 8A). Se realizó el análisis Western para la expresión en células transfectadas Rock1 miR-1280 y encontramos que el miR-1280 atenuó la expresión de la proteína de Rock1 en comparación con el cont-MIR (Figura 8B). También se encontró una disminución en los niveles de proteína de ROHC, otra proteína oncogénica que está aguas arriba del Rock1. Para comprobar si una interacción directa entre participa miR-1280 y su Rock1 oncogén objetivo, se realizaron ensayos de reportero de luciferasa. Se encontró que el co-transfección de miR-1280 junto con la 3'UTR de tipo salvaje de oncogén Rock1 causado una disminución significativa en unidades de luciferasa en comparación con los controles (Figura 8C). Estos resultados sugieren que los objetivos de miR-1280 oncogén Rock1 directamente.
Discusión
Aunque poco se sabe acerca de microARN-1280, un estudio ha demostrado que el miR-1280 se expresa en cánceres de colon y de páncreas basa en el análisis de expresión de 19 colorrectal y 17 muestras de cáncer de páncreas humanos [21]. Aquí por primera vez informe que el miR-1280 juega un supresor de tumores y tiene un potencial diagnóstico y pronóstico en el cáncer de vejiga. También se realizó el análisis funcionales para confirmar los efectos antitumorales de miR-1280 y mostramos que el miR-1280 se dirige directamente a Rock1 oncogén, una molécula importante en la migración celular y la invasión del cáncer de vejiga.
También observamos que miR 1280 es downregulated significativamente en líneas celulares de cáncer de vejiga y tejidos tumorales en comparación con la línea de células no malignas o tejidos normales que indican que miR-1280 podría ser un supresor tumoral en el cáncer de vejiga. Estudios anteriores han demostrado que los microARNs son altamente específico de tejido y que pueden actuar como supresor de tumores o oncogenes [5], [6]. Los microARN poseen varias características que los hacen candidatos atractivos como nuevos biomarcadores pronósticos y herramientas poderosas para el diagnóstico precoz del cáncer [22]. En este estudio, encontramos que el miR-1280 fue predictivo de la supervivencia global de tal manera que los pacientes con expresión de miR-1280 superior tenían una mayor supervivencia global en comparación con los pacientes con baja expresión de miR-1280. la expresión de microARN-1280 también se distingue malignos de los tejidos normales que indican la importancia diagnóstica de miR-1280 en el cáncer de vejiga aunque esto debe ser confirmada en una cohorte más amplia de muestras de tejido. Nuestros ensayos funcionales revelado que miR-1280 tiene efectos anti-proliferativos, que inducen la detención del ciclo celular y la apoptosis en el cáncer de vejiga. También mostró efecto anti-migratoria y anti-invasiva de las células del cáncer de vejiga.
Desde Rock1 es una molécula importante que está implicado en la migración y la invasión del cáncer de vejiga [19], se examinó si Rock1 es un objetivo del MIR -1280 en el cáncer de vejiga. La sobreexpresión de Rock1 ha informado que se producen en varios tipos de cáncer [14], [19] y la Rho /vía de roca ha sido encontrado para ser asociado con la progresión del cáncer de vejiga [19]. ROCA media las respuestas en la vía iniciada por Rho, y regula la reorganización de las proteínas cytosleletal tales como la formación de fibras de estrés y adhesiones focales [23]. Reorganización de las proteínas del citoesqueleto es importante para la capacidad de las células tumorales de metástasis [15] y nuestro estudio mostró que miR-1280 atenúa la expresión de oncogén Rock1. Los ensayos de luciferasa también revelaron una interacción directa de miR-1280 y Rock1. Por tanto, estos resultados indican que miR-1280 inhibe la migración /invasión y por lo tanto la metástasis de cáncer de vejiga que está mediada a través de regulación a la baja de oncogén Rock1 (Figura 8D). También encontrado disminución de la expresión de oncogén RhoC que está aguas arriba del Rock1. Un estudio previo ha informado de que Rock1 disminuye la actividad de sus miembros de la familia RhoA aguas arriba indirectamente [14]. Por el mismo principio, la inhibición de Rock1 por el miR-1280 puede tener una acción inhibidora indirecta sobre el oncogén RhoC.
En conclusión, nuestro estudio es el primer informe para documentar el papel supresor de tumores de miR-1280 en la vejiga cáncer. MIR-1280 se dirige directamente a Rock1 oncogén, inhibiendo la migración /invasión de los cuales son fundamentales para el proceso de metástasis. Diversos compuestos, tales como Y-27632, se han encontrado para inhibir Rock1. Nuestros hallazgos indican que la restauración del supresor de tumores de miR-1280 podría ser útil terapéuticamente, ya sea solo o en combinación con estos compuestos en el tratamiento de cáncer de vejiga.
Reconocimientos
Agradecemos al Dr. Roger Erickson para su apoyo y asistencia en la preparación del manuscrito.