Extracto
Cada vez hay más pruebas que sugieren que la desregulación de algunos microRNAs (miRNAs) puede contribuir a la progresión tumoral y la metástasis y han sido propuesto para ser reguladores clave de diversos procesos biológicos tales como la regulación de la transcripción, el crecimiento celular y la tumorigénesis. Estudios anteriores han demostrado que el miR-137 se desregula en algunos tumores malignos, pero su papel en el cáncer de vejiga es aún desconocido. En nuestro estudio, encontramos que el miR-137 está regulado hasta en tejidos de cáncer de vejiga humanos y líneas celulares. Por otra parte, el nivel más alto de miR-137 se asoció con pM o pTNM etapa en pacientes con cáncer de vejiga clínicos. la expresión forzada de miR-137 en células de cáncer de vejiga mejora de forma significativa su proliferación, la migración y la invasión. Bioinformática análisis identificó el tumor PAQR3 gen supresor como un posible gen diana de miR-137. Otros estudios indicaron que miR-137 suprime la expresión de PAQR3 por la unión a su región 3 'no traducida. El silenciamiento de PAQR3 por pequeños RNAs de interferencia phenocopied los efectos de la sobreexpresión de miR-137, mientras que la restauración de PAQR3 en células de cáncer de vejiga las células del cáncer de vejiga que sobreexpresan el miR-137, revirtió parcialmente los efectos supresores de miR-137. Estos hallazgos indican que miR-137 podría ser un oncogén potencial en el cáncer de vejiga
Visto:. Xiu Y, Z Liu, Xia S, Jin C, Yin H, Zhao W, et al. (2014) microARN-137 Regulación positiva aumenta la proliferación celular y la invasión del cáncer de vejiga por la orientación PAQR3. PLoS ONE 9 (10): e109734. doi: 10.1371 /journal.pone.0109734
Editor: Alfons Navarro, Universidad de Barcelona, España |
Recibido: 15 Abril, 2014; Aceptado: September 8, 2014; Publicado: 16 de octubre 2014
Derechos de Autor © 2014 Xiu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. La autores confirman que todos los datos que se basan los resultados son totalmente disponible sin restricciones. Todos los datos relevantes se encuentran dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:. La financiación de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81170534) (http://www.nsfc.gov.cn/). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de vejiga es el quinto cáncer más común en la población general y la segunda causa más común de muerte en pacientes con neoplasias del tracto genitourinario [1], [2]. Más de 90% de los tumores de vejiga urinaria se componen de carcinoma de células transicionales (TCC) que surge de epitelio de transición [3]. Los tumores de vejiga se pueden clasificar en dos categorías distintas: no muscular y cáncer de vejiga invasivo muscular [4], [5]. La mayoría de los tumores de vejiga (75-80%) son diagnosticados como tumores no músculo invasivo de los cuales las tasas de recurrencia son altas (50-70%) [6]. El resto son tumores de alto grado del músculo invasivos (15%) que pueden progresar rápidamente hacia la metástasis y conducir a la muerte [7]. Aunque se han hecho considerables avances en el tratamiento, incluyendo la mejora de la intervención quirúrgica, la radioterapia y la quimioterapia, cáncer de vejiga sigue siendo una enfermedad común con una alta tasa de mortalidad [8], [9].
Recientemente, cada vez mayores evidencias sugieren que una nueva clase de ARN, conocida como microRNAs (miRNAs), podría regular varios genes diana, incluyendo oncogenes y supresores de tumores [10]. miRNAs son endógenas 19~22 de nucleótidos (nt) no codificante ARN que pueden regular negativamente la expresión de proteínas mediante la inducción de la degradación de ARNm diana, impidiendo su traducción o tanto por unirse específicamente a las regiones 3 'no traducida (3'UTR) del ARNm diana [ ,,,0],11], [12]. Un creciente número de estudios han demostrado que miRNAs contribuyen a la mayoría, si no todos, los procesos biológicos básicos, tales como el desarrollo, la diferenciación, la apoptosis y la proliferación celular [13] - [16]. Las mutaciones de genes miARN o expresión desregulación de miRNAs han sido bien descritos en muchos tipos de tumores, incluyendo cáncer gástrico, linfoma, de mama, pulmón, colon y cáncer de hígado [17] - [22]. Sin embargo, el papel de los miRNAs en el cáncer de vejiga sigue siendo desconocida.
miR-137 ha llamado mucho la atención, ya que es con frecuencia el regulado y funciona como un supresor tumoral en muchos tipos de cáncer como el cáncer de ovario, cáncer gástrico, glioblastoma, cáncer de pulmón, cáncer colorrectal y neuroblastoma [23] - [28]. Un estudio anterior de Shimuzu et al. también mostró que miR-137 era frecuentemente metilado en los tumores de vejiga primaria y la expresión ectópica de miR-137 proliferación de las células del cáncer de vejiga suprimida [29]. Sin embargo, nos reportamos en este documento la expresión contradictoria y la función de miR-137 en el cáncer de vejiga, que se oponen a la reportada en la literatura. En este estudio, hemos detectado upregulation frecuente de miR-137 en tejidos de cáncer de vejiga humanos y líneas celulares. La sobreexpresión de miR-137 promueve la proliferación celular, la migración y la invasión de células de cáncer de vejiga. Por otra parte, se encontró que PAQR3, un nuevo gen supresor de tumores, fue el blanco directo de miR-137 en el cáncer de vejiga. Por lo tanto, nuestros resultados sugieren un papel importante para el miR-137 en la patogénesis del cáncer de vejiga e indican su potencial aplicación en la terapia del cáncer.
Materiales y Métodos
Ética declaración
Todos estos pacientes participaron en el estudio y dieron su consentimiento informado por escrito. Tanto este estudio y el consentimiento fueron aprobados por el comité de ética del Instituto de la Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Harbin y cumplimiento de la Declaración de Helsinki.
Los tejidos humanos
Las biopsias de cáncer de vejiga y urotelio normal adyacente se obtuvieron de los pacientes sometidos a cistectomía radical para el cáncer de vejiga en el primer hospital Afiliado de la Universidad médica de Harbin, china. Las cirugías se produjeron a partir de abril 2010 hasta abril 2013, y todos los pacientes dieron su consentimiento informado firmado. Las biopsias se almacenaron en nitrógeno líquido inmediatamente después de la resección hasta la extracción de ARN. Los datos patológicos demográficas y clínicas se enumeran en la Tabla S1.
Las líneas celulares, cultivos celulares y miARN transfección
Cuatro líneas celulares de cáncer de vejiga humana T24, J82, 5637 y UMUC3 y una célula normal de la vejiga línea, SV-HUC-1, se adquirieron en el Instituto de Shanghai de Bioquímica y Biología celular de la Academia de Ciencias de china [30]. Las líneas celulares se cultivaron en medio RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal inactivado por calor al 10% bajo una atmósfera humidificada de 5% de CO2 a 37 ° C. El día antes de la transfección, las células se sembraron en medio de crecimiento sin antibióticos a una densidad de 30 a 40%. La transfección de hsa-miR-137 mímico, inhibidor, y scramble, sintetizado químicamente por GenePharma (Shanghai, China) se realizó utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acuerdo con el protocolo del fabricante y se transfectaron en las células con una final concentración de oligonucleótido de 20 nmol /L.
se aisló
El aislamiento de ARN y QRT-PCR
El ARN total de muestras de tejidos y células cultivadas usando el reactivo Trizol (Takara, Dalian, china). Antes de realizar los ensayos de RT-PCR cuantitativa (qPCR), el ARN fue inverso-transcrito en miARN ADNc y ADNc total usando un solo paso PrimeScript miARN síntesis de cDNA Kit (Takara, Dalian, China) y PrimeScript RT kit de reactivos (Takara, Dalian, China), respectivamente. En tiempo real de secuencias de cebadores y condiciones de PCR se listan en la Tabla S2 y la Tabla S3, respectivamente, de acuerdo con la directriz MIQE. Los niveles de expresión de ARNm y miARN se detectaron mediante qPCR con Applied Biosystems 7500 Sistema de PCR (Applied Biosystems, Carlsbad, EE.UU.) con SYBR Premezcla Ex Taq (Takara, Dalian, China) Fast sistema de PCR en tiempo real en tiempo real de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se normalizaron frente a GAPDH ARNm y pequeño U6 ARN nuclear, respectivamente. El valor de Ct de miR-137 y PAQR3 se cuantificó con el 2
-ΔΔCt método.
Migración y ensayos de invasión
invasión celular y la migración se analizaron utilizando una cámara transwell (Millipore, EE.UU.) con y sin Matrigel (BD, Franklin Lakes, EE.UU.). Para el ensayo de invasión, una cámara transwell se colocó en una placa de 24 pocillos y se recubrió con 30 l de Matrigel y se incubó durante cuarenta minutos a 37 ° C. Tanto en transwell ensayo, las células, 48 horas después de transfección, se tripsinizaron y se sembraron en cámaras a la densidad de 8 × 10
4 células por pocillo y se cultivaron en medio con medio RPMI 1640 con 2% de suero, mientras que 600 l de 10 % de SFB-1640 se añadió a la cámara inferior. Veinticuatro horas más tarde de, las células migradas se fijaron con 100% de metanol durante 30 min. Las células no migradas se eliminaron mediante hisopos de algodón. Luego, las células en la superficie inferior de la membrana se tiñeron por cristal violeta 0,1% (Sigma) durante 20 min. Se obtuvieron imágenes de células bajo un microscopio de contraste de fases (Olympus, Tokio, Japón).
La proliferación celular
Ensayos de proliferación celular se realizaron con un Cell Counting Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japón ). las células del cáncer de vejiga se sembraron en placas de 24 pocillos a 2 × 10
5 células por pocillo. Las células se incubaron en 10% CCK-8 (Dojindo; Kumamoto, Japón) que se diluyó en medio de cultivo normal en 37 ° C hasta que se produjo la conversión de color visual. las tasas de proliferación se determinaron a 0, 24, 48 y 72 horas después de la transfección.
Western blots
cantidades equivalentes (30-50 g) de proteína fueron separados por 10% en geles de SDS poliacrilamida y transferidas a fluoruro de polivinilideno (PVDF) membranas. Las membranas se bloquearon con 5% de leche seca no grasa y se incubaron durante la noche con el anticuerpo primario adecuado a diluciones especificadas por el fabricante. A continuación, las membranas se lavaron tres veces en TBST y se incubaron con el correspondiente peroxidasa de rábano picante (HRP) conjugado con anticuerpo secundario a una dilución 1:5,0000 por 1 h. anticuerpo secundario unido se detectó usando el sistema de quimioluminiscencia potenciada (ECL) (Pierce Biotechnology Inc, EE.UU.). inmunotransferencia anticuerpos primarios fueron:. anti-GAPDH, anti-PAQR3 (Santa Cruz Biotechnology, EE.UU.)
Ensayo de la luciferasa
Las células T24 se sembraron en placas de 24 pocillos (1 x 10
5 células /pocillo) y se incubaron durante 24 h antes de la transfección. Para el ensayo de gen informador, las células se cotransfectaron con 0,5 g de pGL3-PAQR3-3'UTR o plásmido pGL3- PAQR3-3'UTR Mut, 0,05 ng del vector de control phRL-SV40 (Promega, EE.UU.), y 100 nM miR-137 o ARN de control utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen, EE.UU.). Las actividades de luciérnaga y luciferasa de Renilla se midieron consecutivamente a través de un ensayo de luciferasa dual (Promega, EE.UU.) 24 h después de la transfección.
El análisis estadístico
Cada experimento se repitió al menos tres veces. Los análisis estadísticos se realizaron con SPSS 15.0. Los datos se presentan como la media ± desviación estándar. Se realizaron análisis estadísticos, ya sea con un análisis de varianza (ANOVA) o la prueba t de Student y el nivel de significación estadística se estableció en α = 0,05 (dos lados).
Resultados
Expresión de miR-137 está regulado hasta en líneas celulares de cáncer de vejiga
La expresión de miR-137 se evaluó por primera vez por cuantitativa con transcripción inversa-PCR (QRT-PCR) en líneas celulares de cáncer de vejiga y una línea celular normal de la vejiga SV-HUC-1. Como se muestra en la Fig. 1, miR-137 fue significativamente hasta reguladas en todas las líneas celulares de cáncer de vejiga en comparación con SV-HUC-1. Hemos cuantificado aún más el nivel de expresión de miR-137 en 6 pares de tejidos de cáncer de vejiga humanos y tejidos de la mucosa normal adyacente por QRT-PCR (Fig. 1). Los resultados mostraron que el nivel de expresión de miR-137 fue generalmente mayor en los tejidos tumorales en comparación con tejidos no tumorales emparejados. Por lo tanto, se especuló que el miR-137 podría ser un oncogen putativo en el cáncer de vejiga.
(A). La regulación positiva de la expresión de miR-137 en líneas celulares de cáncer de vejiga y tejidos en comparación con los controles correspondientes. Relativo expresión de miR-137 en cuatro líneas celulares de cáncer de vejiga y una línea celular normal de la vejiga SV-HUC-1 se determinó mediante qRT-PCR. U6 snRNA se utilizó como control interno. (B) Expresión relativa de miR-137 en 6 muestras quirúrgicas de tejidos de cáncer de vejiga y tejidos no tumorales emparejados se determinó mediante QRTPCR. U6 snRNA se utilizó como control interno.
La expresión de miR-137 en pacientes con cáncer de vejiga clínicos y su correlación con el análisis de las características clinicopatológicas
Para estudiar la relación de miR-137 con la vejiga la incidencia de cáncer, se detectó la expresión de miR-137 en 50 pacientes clínicos usando PCR en tiempo real. De 50 muestras de cáncer de vejiga, el miR-137 es regulada hasta en 45 casos (45/50, 90%) en comparación con los tejidos adyacentes (Fig. 2B). Mientras tanto, el miR-137 se había reducido regulado en 5 casos (5/50, 10%). En general, la expresión de miR-137 en tejidos de cáncer de vejiga era significativamente mayor que en los tejidos adyacentes (Fig 2A, p & lt; 0,001).. La expresión nivel más alto de miR-137 se asoció con la etapa pTNM (figura 2C.), Y un mayor nivel de miR-137 se asoció con la etapa pm (p = & lt; 0,05, metástasis vs. no metastssis) en pacientes con cáncer de vejiga (Fig . 2D). Estos datos sugieren que las alteraciones de miR-137 podrían estar implicados en la progresión del cáncer de vejiga.
(A) con respecto miR-137 se determinaron por QRT-PCR niveles de expresión en tejidos de cáncer de vejiga y tejidos normales adyacentes. U6 snRNA se utilizó como control interno. (B) de miR-137 se detectó en 50 pares de tejidos de cáncer de vejiga y sus controles normales adyacentes por RT-PCR cuantitativa. Los datos se presentan como log2 de veces el cambio de los tejidos de cáncer de vejiga en relación con las regiones normales adyacentes; (C) y (D) El análisis estadístico de la asociación entre el nivel de miARN y la etapa pTNM (I, II, III y IV) y la etapa pm (No hay metástasis y metástasis); * P & lt; 0,05 y ** p & lt; 0,01, *** p & lt;. 0.001
La sobreexpresión de miR-137 proliferación de las células del cáncer de vejiga promovido, la migración y la invasión
exploraron el impacto potencial de miR-137 en la proliferación de células de cáncer de vejiga, la migración y la invasión. Las células fueron transfectadas con revueltos oligo de control o miR-137 imita y inhibidor, que mostraron una alta eficiencia de la transfección (Fig. 3A). CCK-8 ensayo de proliferación mostró que la proliferación celular fue promovido en 137 miR-células de cáncer de vejiga imita-transfectadas en comparación con las células transfectadas oligo-revueltos o las células no tratadas (Fig. 3B). A la inversa, inhibidor de miR-137 inhibió significativamente la proliferación de las células T24 (Fig. 3C). Curiosamente, la migración y la invasión de ensayo mostraron que la sobreexpresión de miR-137 promovió significativamente la migración y la invasión de las células T24 en comparación con el control, mientras que el miR-137 inhibidor inhibe tanto la migración celular y la invasión (Fig. 3D y E).
niveles (A) la expresión de miR-137 se examinaron mediante PCR en tiempo real después de la transfección de miR-137 imita o sramble o ninguna transfección. (B) El crecimiento de las células T24 se muestra después de la transfección con el miR-137 imita o sramble o sin transfección. El índice de crecimiento como se evaluó a los 0, 24, 48 y 72 h. (C) Los niveles de expresión de miR-137 se examinaron mediante PCR en tiempo real después de la transfección de miR-137 inhibidor o de control o ninguna transfección. (D) El crecimiento de las células T24 se muestra después de la transfección con el miR-137 inhibidor o de control o ninguna transfección. El índice de crecimiento como se evaluó a los 0, 24, 48 y 72 h. análisis (E) Transwell de las células T24 después del tratamiento con miR-137 imita, inhibidores o lucha o control; la proporción relativa de células que migraron por campo se muestra a continuación. (D) Análisis Transwell de las células T24 después del tratamiento con miR-137 imita, inhibidores o lucha o control; la proporción relativa de células invasivas por campo se muestra a continuación, * p & lt; 0,05, ** p & lt; 0,01 y *** p & lt;. 0.001
miR-137 objetivos PAQR3 en células de cáncer de vejiga
Como se predijo por PicTar, hubo complementariedad entre tener-miR-137 y la PAQR3 3'UTR (Fig. 4A). La sobreexpresión de miR-137 redujo la proteína y los niveles de ARNm de PAQR3 en células de cáncer de vejiga (Fig. 4C y D). El efecto de miR-137 en la traducción de ARNm en una proteína PAQR3 continuación, se evaluó usando un ensayo indicador de luciferasa (Fig. 4B). la expresión forzada de miR-137 reduce notablemente la actividad de la luciferasa del gen indicador con el constructo de tipo salvaje, pero no con el mutante PAQR3 3'UTR construir, lo que indica que el miR-137 dirija directamente a PAQR3 3'UTR.
(A) representación esquemática de PAQR3 3 'UTRs que muestran putativo sitio de destino miARN. (B) El análisis de las actividades relativas de luciferasa de PAQR3-WT, PAQR3-MUT en células T24. Las barras de error se derivan de expriments triplicado. (C) Análisis QRT-PCR de la expresión PAQR3 mRNA en células T24 después del tratamiento con miR-137 imita o despegue en tiempo mínimo o ningún transfección. La expresión de PAQR3 se normalizó a GAPDH. (D) Análisis de transferencia Western de la expresión PAQR3 en las células T24 transfectadas con el miR-137 imita o despegue en tiempo mínimo o ningún transfección. También se detectó GAPDH como control de carga.
proliferación celular expresión antiguo PAQR3 parcialmente rescatado el miR-137-mejorada y la invasión
primer lugar, analizó la función de PAQR3 en células de cáncer de vejiga . Como se muestra en la Fig. 5A, la transfección de pequeños ARN de interferencia contra PAQR3 en células T24 conducido a la disminución dramática expresión de la proteína PAQR3. El silenciamiento de PAQR3 mejora de forma significativa la proliferación de células de cáncer de vejiga (Figs. 5B), que phenocopied los efectos de miR-137 en la proliferación de células de cáncer de vejiga. La co-transfección de una construcción que expresa PAQR3 y miR-137 en células T24 llevó a la restauración de la expresión PAQR3, como se confirmó por Western blot (Fig. 5C). Esta restauración de PAQR3 inhibió significativamente la proliferación y la capacidad invasiva de las células de cáncer de vejiga. Más importante aún, se encontró que la restauración de PAQR3 podría invertir de manera significativa la proliferación y la invasión promovida por miR-137 (Figs. 5D y 5E). En resumen, estos datos indican que la inhibición de la expresión PAQR3 por miR-137 es responsable, al menos en parte, por los efectos de promoción de miR-137 en la proliferación celular y la invasión en el cáncer de vejiga humana.
(A) Western blot mostró que la transfección de pequeños ARN de interferencia contra PAQR3 en células T24 conducido a la disminución dramática expresión de la proteína PAQR3. GAPDH se detectó también como control de carga. (B) El silenciamiento de PAQR3 mejora de forma significativa la proliferación de células de cáncer de vejiga. El índice de crecimiento como se evaluó a los 0, 24, 48 y 72 h. (C) Análisis de transferencia Western de las células T24 PAQR3 en co-transfectadas con cualquiera de miR-137 imitan o despegue en tiempo mínimo y 2,0 g pCDNA- PAQR3 o vector pcDNA vacío. GAPDH se detectó también como control de carga. curvas (D) el crecimiento celular en células T24 transfectadas con diferentes combinaciones a los 0, 24, 48 y 72 h. análisis (E) Transwell de las células T24 tratadas con diferentes combinaciones. La proporción relativa de las células invasoras por campo se muestra a la derecha. * P & lt; 0,05, ** p & lt; 0,01, *** p & lt;. 0.001
Discusión
Durante las últimas décadas, los miRNAs se han convertido en los principales reguladores implicados en diversos procesos biológicos tales como la regulación transcripcional, la diferenciación celular y la tumorigénesis [31]. A nivel mundial aberrantes miARN perfiles de expresión de los tumores han proporcionado información valiosa sobre las vías moleculares de la oncogénesis [32]. Como uno de los más prominentes miRNAs implicados en la tumorigénesis, miR-137 se ha presentado con un controvertido papel durante la progresión tumoral [33]. MiR-137 se encontró que ser reducido en numerosos cánceres humanos, incluyendo el cáncer gástrico, el glioblastoma y cáncer de mama [24], [25], [34]. El papel exacto de miR-137 en el cáncer de vejiga estaba todavía no está claro, aunque su función supresora tumoral se ha implicado [29]. Por lo tanto, nuestro estudio actual pretende aclarar la expresión y función biológica de miR-137 en el cáncer de vejiga. Contrariamente a los resultados de Shimuzu et al. [29], nuestro estudio demostró que el miR-137 era con frecuencia hasta reguladas en líneas celulares de cáncer de vejiga y tejidos en comparación con la línea de células y tejidos normal de la vejiga. Sobre la base de estos resultados, la hipótesis de que el miR-137 podría ser un potencial oncogen en el cáncer de vejiga. Como era de esperar, la expresión forzada de miR-137 mejora la proliferación, la migración y la invasión de las células T24. Las razones de las discrepancias entre los resultados del presente estudio y la de Shimuzu et al. siguen sin estar claros, pero el origen étnico de las muestras clínicas puede jugar un papel. Además, la función oncogénica de miR-137 puede ser específico de tejido de la vejiga ya que su función supresora de tumor ha sido ampliamente descrita en otros tipos de tejidos. Nuestros hallazgos presentes sugieren que miR-137 juega un papel crítico en el potencial invasivo y metastásico del cáncer de vejiga y puede ser potenciales biomarcadores de diagnóstico y de predicción.
A continuación, se abordó el mecanismo molecular de miR-137 en la promoción de la proliferación , la migración y la invasión de células de cáncer de vejiga. En este estudio, la PCR en tiempo real, transferencias de Western y ensayos de luciferasa mostró que PAQR3 es un objetivo de miR-137. Es importante destacar que, PAQR3 específica desmontables con siRNA phenocopied los efectos a la migración y la invasión de promoción de miR-137 sobre-expresión. También puso de manifiesto que, cuando las células de miR-137 que expresan reanudó la expresión PAQR3, sus deficiencias de invasión se invirtieron en parte. Por lo tanto, creemos que miR-137 juega un papel en la promoción de la metástasis en los cánceres de vejiga, al menos en parte, por la regulación negativa de la expresión de la proteína de PAQR3. PAQR3 pertenece a la progesterona y el receptor AdipoQ familia (PAQR) y es una proteína transmembrana de siete específicamente situada en el aparato de Golgi en las células de mamífero [35]. Estudios anteriores han demostrado que PAQR3, también conocido como RKTG (Raf quinasa de captura a Golgi), podría actuar como un regulador espacial de Raf quinasa Raf secuestrando al aparato de Golgi [36]. funciones PAQR3 como un supresor de tumores debido a su actividad inhibidora sobre la Raf /MEK /ERK señalización [37]. Cuando se sobreexpresa en células de melanoma humano A375, una línea celular de melanoma maligno humano con mutación B-Raf, PAQR3 /RKTG inhibe la activación de ERK, la proliferación celular y la transformación de las células [37]. Por otra parte, la supresión de PAQR3 en ratones dio lugar a mayor incidencia de tumorigénesis piel. PAQR3 /RKTG también podría inhibir la proliferación celular, la migración, la germinación y la angiogénesis de las células endoteliales, y el nivel de expresión de PAQR3 se downregulated significativamente en muestras de carcinoma de células renales de células claras clínicos, con una correlación inversa con el nivel de expresión de VEGF [38]. Además, los estudios anteriores han indicado también que PAQR3 tiene una interacción funcional con p53 en la formación del cáncer y la transición epitelio-mesenquimal [39]. El nivel de expresión de PAQR3 fue significativamente menor en las muestras de cáncer colorrectal en comparación con los tejidos normales adyacentes y el nivel de expresión de PAQR3 se asoció inversamente con el grado del tumor en las muestras de cáncer colorrectal [40]. Nuestros estudios también han demostrado que la sobreexpresión de PAQR3 puede inhibir la proliferación celular y la invasión. Upregulation de estos miRNAs en el cáncer puede facilitar la expresión de PAQR3, que conduce al aumento de la metástasis del cáncer.
En conclusión, nuestros resultados han demostrado que miR-137 se upregulated significativamente en células de cáncer de vejiga y tejidos. la expresión forzada de miR-137 promueve la proliferación de células de cáncer de vejiga, la migración y la invasión a través de la orientación directa PAQR3. Este nuevo eje de miR-137 /PAQR3 puede proporcionar nuevos conocimientos sobre los mecanismos que subyacen a la metástasis del tumor, y la represión de miR-137 expresión puede ser una estrategia terapéutica potencial para el tratamiento de cáncer de vejiga en el futuro.
Información de Apoyo
Tabla S1. CARACTERISTICAS
clínico-patológicas de los pacientes con cáncer de vejiga
doi: 10.1371. /journal.pone.0109734.s001 gratis (DOCX) sobre Table S2. .
Primer secuencias
doi: 10.1371 /journal.pone.0109734.s002 gratis (DOC) sobre Table S3.
Lista de verificación de la directriz MIQE
doi:. 10.1371 /journal.pone.0109734.s003 gratis (DOC)