Extracto
quinasas activadas por p21 (Paks) son las proteínas quinasas serina /treonina que participan en los eventos biológicos vinculada a la progresión del tumor maligno. En este estudio, la expresión de Pak1, p-Pak2 Ser
20, Pak4, pPak4 Ser
474 en 21 endometrio normal, 16 endometrio hiperplásico sin atipia, 17 hiperplasia compleja atípica y 67 cánceres de endometrio se evaluó por inmunohistoquímica y correlacionados con los parámetros clínico-patológicos. También hemos accedido el papel de proliferación y las dianas moleculares de Pak1 en el cáncer de endometrio. Pak1 se expresó en el citoplasma mientras que Pak4 y p-Pak4 se expresa tanto en el citoplasma y el núcleo de los tejidos endometriales. En el endometrio normal, significativamente mayor Pak1 (
P = 0,028
) y citoplasmática p-Pak2 (
P = 0,048
) se detectó expresión en endometrio proliferativo de endometrio secretor. Pak1, Pak4 citoplasmática y nuclear y nuclear p-Pak4 se sobreexpresa significativamente en el cáncer de endometrio en comparación con endometrio atrófico (todo el
P Hotel & lt; 0,05). Por otra parte, los carcinomas endometrioide tipo I mostraron significativamente más alta expresión Pak1 de tipo II carcinomas no endometrioide (
P Hotel & lt; 0,001). Por otro lado, Pak1, Pak4 y la expresión de p-Pak4 correlacionados negativamente con el grado histológico (todo el
P Hotel & lt; 0,05), mientras que p-Pak2 y expresión citoplasmática Pak4 inversamente correlacionados con la invasión del miometrio (todo el
P Hotel & lt; 0,05). Por otra parte, los pacientes con cáncer de endometrio con una menor expresión citoplasmática Pak4 mostraron una peor supervivencia (
P = 0,026
). El análisis multivariado mostró Pak4 citoplasmática es un factor pronóstico independiente. Funcionalmente, desmontables de Pak1, pero no Pak4, en la línea celular de cáncer de endometrio condujo a la proliferación celular reducida junto con una reducción de la ciclina D1, receptor de estrógeno (ER) y del receptor de progesterona expresión (PR). correlación significativa entre Pak1 y PR expresión también se detectó en muestras clínicas. Nuestros hallazgos sugieren que Pak1 y citoplasmática p-Pak2 pueden promover la proliferación celular en el endometrio normal durante el ciclo menstral. Pak1, Pak4 citoplasmática y nuclear y nuclear p-Pak4 están involucrados en la patogénesis del cáncer endometrial especialmente en mujeres posmenopáusicas. Pak1 promover la proliferación de células de cáncer de endometrio, en particular en el tipo I endometrioide carcinoma. Citoplasmática Pak4 puede ser posible marcador pronóstico en el cáncer de endometrio
Visto:. Siu MKY, DSH Kong, Ngai SYP, Chan HY, Jiang L, Wong ESY, et al. (2015) p21 quinasas activadas por 1, 2 y 4 en cáncer de endometrio: efectos sobre los resultados clínicos y la proliferación celular. PLoS ONE 10 (7): e0133467. doi: 10.1371 /journal.pone.0133467
Editor: Steen Henning Hansen, del Hospital Infantil de Boston, Estados Unidos |
Recibido: 3 Mayo 2014; Aceptado: June 27, 2015; Publicado: 28 Julio 2015
Derechos de Autor © 2015 Siu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del apoyo de sus archivos de información en papel y
Financiación:.. Este estudio fue apoyado por el Hong Kong Sociedad de Lucha contra el cáncer Grant, de la Universidad de Hong Kong Pequeño Financiación del proyecto y de la Conferencia y el Consejo de Investigación de subvención
Conflicto de intereses: Annie NY Cheung es un miembro del Consejo Editorial PLoS ONE. Esto no altera la adhesión de los autores a PLoS ONE políticas y criterios editoriales.
Introducción
El cáncer de endometrio es la neoplasia ginecológica más común en todo el mundo [1] y su incidencia en Asia está aumentando. Se puede clasificar en dos tipos principales clinicopatológicas. tipo I dependiente de estrógenos endometrioide carcinoma, comprende aproximadamente 80% de los cánceres de endometrio, se asocia generalmente con hiperplasia endometrial [2, 3]. Tipo II carcinoma no endometrioide, que es independiente de los estrógenos e incluye el carcinoma seroso y el carcinoma de células claras, por lo general se produce en el endometrio atrófico [2, 3]. Tipo I endometrioide carcinoma tiene un pronóstico favorable, mientras que el tipo II el carcinoma de endometrio es más agresivo [2, 3].
serina activada por p21 /treonina quinasas (Paks) son efectores de la pequeña Rho GTPasas Rac1 y Cdc42 que desempeñan importantes papeles en una variedad de funciones celulares, incluyendo la morfogénesis celular, la motilidad, la supervivencia, el crecimiento independiente de anclaje y la angiogénesis, todos los cuales son requisitos previos para la formación de tumores y la invasión del tumor [4, 5]. Sobre la base de las diferentes estructuras de dominio y las propiedades bioquímicas, los seis miembros de la familia Pak se clasifican en el Grupo I (Paks1-3) y el Grupo II (Paks 4-6), que tienen diferente patrón de expresión, la prioridad de sustrato y especificidad funcional en diversos tejidos [ ,,,0],5-7].
recientemente hemos identificado Pak1 y Pak4 como marcadores de pronóstico y posibles dianas terapéuticas para el cáncer de ovario [8, 9]. Aumento fosforilada (p) -Pak2
expresión Ser20 en cáncer de ovario también se detectó [9]. Pak1 y Pak4 promover la migración de células de cáncer de ovario y la invasión a través de la vía de p38 /VEGF y de la vía c-Src /MEK-1 /MMP2, respectivamente [8, 9]. Pak4 también inducen la proliferación de células de cáncer de ovario a través de la vía D1 /CDC25A Pak4 /c-Src /EGFR /ciclina [8]. También hemos revelado la sobreexpresión de Pak1 en coriocarcinoma y hidatiformes lunares que progresaron a enfermedad agresiva [10]. Pak1 regular coriocarcinoma la proliferación celular, la migración y la capacidad de invasión en asociación con alteración del nivel de p16, VEGF y MT1-MMP [10].
Sobre regulación de Pak1 y Pak4 también se ha observado en otros cánceres humanos [4 , 5, 11], tales como cánceres de mama y de colon. Un estudio reciente ha informado de que Pak1 es el regulado por la progesterona durante la fase secretora en el endometrio normal [12]. Sin embargo, la expresión diferencial de Paks en el carcinoma de endometrio es limitado. En este documento, la expresión y localización de Pak1, fosforilada (p) -Pak2
Ser20, Pak4 y p-PAK4
Ser474 (la forma activada) en condiciones normales, hiperplásicos y endometrio canceroso se evaluó y se correlacionan con parámetros clínico. El papel y aguas abajo objetivos proliferativas de Pak1 en el cáncer de endometrio se investigó más.
Materiales y Métodos
Las muestras clínicas
Sesenta y siete muestras fijadas con formalina, incluidos en parafina de cáncer de endometrio incluyendo 56 carcinomas endometrioide, 7 carcinomas serosos y 4 carcinomas de células claras fueron recuperados de Departamento de Patología, Universidad de Hong Kong, el Queen Mary hospital para inmunohistoquímica. Los parámetros clínicos y patológicos, incluyendo receptores de estrógenos alfa (ER) y el receptor de progesterona (PR) de estado [13] como se evaluó por inmunohistoquímica se recuperan. También se recuperaron los veintiún muestras de endometrio normal (incluyendo 10 atrófica, 5 y 6 secretora del endometrio proliferativo), 16 muestras de endometrio hiperplásico sin atipia (incluyendo 7 hiperplasia simple y 9 hiperplasia compleja) y 17 muestras de hiperplasia atípica compleja. Entre el 17 de hiperplasia atípica compleja, 8 casos fueron hiperplasia atípica pura, mientras que 9 casos posteriormente desarrollaron cáncer de endometrio (hiperplasia atípica con cáncer de endometrio). La edad media de estos pacientes fue de 57,2 años (rango 20-82 años). El período de seguimiento medio fue de 42,75 meses (rango 1-108 meses). escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes. Este estudio fue aprobado por el Comité de Revisión Institucional de Ética de la Universidad de Hong Kong /Hospital de Hong Kong Autoridad West Cluster (HKU /HA HKW IRB). secciones de hematoxilina eosina fueron examinados por los patólogos para revisar el diagnóstico y para asegurar que cada muestra se compone de células tumorales más del 75%.
Las líneas celulares
Una línea de células de endometrio humano normal (NEM) , se extendía desde el cultivo primario de células endometriales normales de una mujer premenopáusica ~ edad de 40 años con ciclos menstruales regulares de 28 días, fue amablemente dada por el Prof. Doris Benbrook (Universidad de Oklahoma Centro de Ciencias de la Salud) [14]. Tres líneas celulares de cáncer de endometrio humano, HEC-1B, HEC-1A y RL95-2 eran de ATCC (Manassas, VA). Todos los cultivos se cultivaron como se ha descrito anteriormente [15].
caída transitoria de Pak1 y Pak4 en RL95-2
Las células fueron transfectadas con 100 nM de cada uno de SI
GENOMA
inteligente -La piscina para Pak1, Pak4 y si
control de siRNA
nontargeting piscina (Dharmacon, Lafayette, CO), utilizando SilentFect (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) según las instrucciones del fabricante durante 48 horas antes de la extracción de ARN y proteínas, el recuento de células y de las planchas de células [10].
la inmunohistoquímica
resumen, las secciones incluidas en parafina fijadas con formalina se tiñeron con anticuerpos contra Pak1, p-Pak2
Ser20, Pak4 y p- Ser Pak4
474 (que se enumeran en la Tabla S1) utilizando el sistema EnVision + Dual Link (K4061, Dako, Carpinteria, CA) [8-10]. recuperación de antígeno de microondas se realizó usando tampón de citrato (pH 6,0). La omisión o sustitución del anticuerpo primario con suero IgG preinmune fue utilizado como un control negativo. Se evaluaron tanto la intensidad y el porcentaje de células epiteliales teñidas. Se valoró semicuantitativamente por la intensidad y el porcentaje de epitelio manchado. intensidad de la tinción se puntuó como 0 (negativo), 1 (débil), 2 (leve), 3 (moderado) y 4 (fuerte). El porcentaje de células positivas se calificó como 0 (& lt; 5%), 1 (5% -25%), 2 (26% -50%), 3 (51% -75%) y 4 (& gt; 75%) . Un compuesto "Histoscore" se le dio multiplicando la intensidad de la tinción (0-4) por el porcentaje de células teñidas (0-4) con una puntuación máxima de 16 [16].
-PCR en tiempo real
ARN total fue extraído a partir de líneas celulares de cáncer usando el reactivo Trizol (Invitrogen). 2,5 g ARN total fue inverso transcrito por la transcriptasa inversa Superscript (Invitrogen, San Diego, CA). PCR en tiempo real se realizó con ABI Prism 7700 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA) [17, 18]. primer secuencias de Pak1, Pak4, CDC25A, ciclina D1, ER, PR (apuntar ambas isoformas PRA y PRB) y GAPDH (como control interno) se muestran en la Tabla S2. La pureza de la PCR se confirmó mediante electroforesis en gel.
Immunoblotting
Se recogieron las células con tampón de lisis (0,125 M Tris, pH 6,8 a 22 oC que contiene 1% NP-40 (v /v), 2 mM de EDTA, 2 mM de N-etilmaleimida, PMSF 2 mM, ortovanadato de sodio 1 mM y 0,1 mM okadate de sodio] y se aclaró por centrifugación a 4 ° C. La concentración de proteína se determinó por DC (detergente compatible) de ensayo de proteínas (Bio-Rad laboratorios, Hercules, CA). 20 g de proteína se resolvieron mediante SDS-PAGE, se transfirieron a una membrana de difluoruro de polivinilideno, y se hibridan con los anticuerpos correspondientes (que se enumeran en la Tabla S1) [17, 18].
la proliferación celular fue determinado por el método del recuento de células
3 x 10
4 células fueron sembradas en placas de cultivo de 6 pocillos. El número de células se contó usando exclusión con colorante azul de tripano con hematocitómetro en día 4 [18].
análisis estadístico
El análisis estadístico se realizó con el programa SPSS 15.0 para Windows (SPSS Inc., Chicago, IL). se aplicó la prueba de Mann-Whitney para la comparación entre los dos grupos. Se aplicó la prueba de rangos de Kruskal-Wallis para la comparación entre varios grupos. El análisis de supervivencia se realizó mediante el análisis de Kaplan-Meier y log-rank test.
P & lt
valores; 0,05 se consideró como estadísticamente significativo.
Resultado
Expresión de Pak1 y citoplasmática p-Pak2 Ser
20 fueron mayores en el endometrio proliferativo. Pak1, citoplasmática y nuclear y Pak4 nuclear p-Pak4 Ser
474 se sobreexpresa en el cáncer de endometrio en comparación con atrófica endometrio
Por inmunohistoquímica, Pak1 se expresó predominantemente en el citoplasma de los tejidos del endometrio con solamente tinción nuclear focal detectado (Fig 1A). En las muestras endometriales normales, atrófica y secretora del endometrio mostró débil expresión mientras que endometrio proliferativo muestra una fuerte expresión (Figura 1A i-iii). hiperplasia endometrial y cáncer de endometrio mostraron moderada a fuerte expresión (Figura 1A IV-IX). expresión Pak1 en endometrio proliferativo fue significativamente más alta que en atrófica (
P
= 0,001) y secretora (
P
= 0,004) endometrio, hiperplasia atípica (
P = 0,042
) y de endometrio (
P = 0,044
) (figura 1B). Significativamente más alta expresión en el endometrio hiperplásico Pak1 y de endometrio que en endometrio atrófico (ambos
P Hotel & lt; 0,05) se observó (Figura 1B). Aunque una expresión más alta se encontró en Pak1 hiperplasia endometrial y cáncer de endometrio que endometrio secretor, solamente se alcanzó una diferencia significativa entre hiperplasia simple /complejo y endometrio secretor (Figura 1B). Pak1 expresión similar se detectó en los cánceres de endometrio y de endometrio hiperplásico.
p-Pak2 se detectó tanto en el citoplasma y núcleo de los tejidos del endometrio (Figura 2A). Entre todas las categorías, endometrio proliferativo mostró el más fuerte citoplasmática y la expresión de p-Pak2 nuclear (Figura 2A). Atrófica y endometrio secretor, así como cánceres de endometrio mostró débil expresión citoplasmática y nuclear p-Pak2 mientras que endometrio hiperplásico mostró citoplasmática moderada y la expresión de p-Pak2 nuclear (Figura 2A). la expresión de p-Pak2 citoplasmática en el endometrio proliferativo fue significativamente más alta que en el resto de categorías (todo el
P Hotel & lt; 0,05), excepto que, hiperplasia compleja nuclear p-Pak2 sólo se mostraron significativamente más alta expresión en el endometrio proliferativo que atrófica (
P = 0,046
) y secretora (
P = 0,028
) endometrio y cáncer de endometrio (
P
= 0,007) (figura 2B). Aunque superior al citoplasma y la expresión de p-Pak2 nuclear se encontró en el endometrio hiperplásico de endometrio atrófico, solamente hiperplasia compleja (
P
= 0,007) y la hiperplasia atípica puro (
P = 0,013
) mostraron significativamente mayor citoplasmática p-Pak2 expresión (Fig 2B). Además, hubo una significativa reducción citoplasmática y la expresión de P-Pak2 nuclear en los cánceres de endometrio que en hiperplasia compleja (
P
= 0,009 y
P
= 0,006, respectivamente) y la hiperplasia atípica puro (
P = 0,038
y
P = 0,042
, respectivamente) (figura 2B).
Pak4 se expresa tanto en el citoplasma y núcleo de los tejidos del endometrio (figura 3) . Citoplasmática y nuclear Pak4 mostraron la debilidad de expresión en el endometrio atrófico y moderado a fuerte expresión en secretora, proliferativa, hiperplasia endometrial y cáncer de endometrio (Figura 3). Pak4 expresión citoplasmática en el endometrio atrófico fue significativamente menor que en otras categorías (todo el
P Hotel & lt; 0,05) (Figura 3B, panel superior). Significativamente más alta expresión citoplasmática Pak4 también se encontró en el endometrio secretor de hiperplasia compleja (
P = 0,047
) y de endometrio (
P = 0,036)
(figura 3B, panel superior). Pak4 nuclear en el endometrio atrófico también muestra la expresión más baja que otras categorías. Sin embargo, la diferencia significativa de la expresión Pak4 nuclear sólo observó entre los cánceres endometriales y endometrio atrófico (
P = 0,026
) (Figura 3B, panel inferior). No hay ninguna diferencia significativa de la expresión Pak4 citoplasmática y nuclear entre otras categorías.
p-Pak4 También se detectó tanto en el citoplasma y el núcleo de los tejidos del endometrio (Fig 4A). P-citoplasmática Pak4 mostró una expresión débil a moderada en todas las categorías (figura 4A) y de diferencia significativa sólo se encontró entre endometrio proliferativo y de hiperplasia simple (
P = 0,041
) (Figura 4B, panel superior). Débil a moderada expresión de p-Pak4 nuclear se observó en el endometrio atrófico mientras que otras categorías muestran expresión fuerte (Figura 4A). Se encontró diferencia significativa entre endometrio atrófico y otras categorías (todo el
P Hotel & lt; 0,05) (Figura 4B, panel inferior). Dado que el presente estudio participaron 6 casos endometrio proliferativo única, la barra de error para pPak2 nucleares y Pak4 en endometrio proliferativo es relativamente grande.
Sobre regulación de Pak1 y ARNm Pak4 y expresión de proteínas también se encontró en líneas celulares de cáncer (HEC-1B, HEC-1A y RL95-2) en comparación con las células endometriales normales por qPCR (Fig 5A) y análisis de transferencia Western (figura 5B), respectivamente.
Pak1, Pak4 y la expresión de p-Pak4 correlacionada con parámetros clínico. Pak1 correlacionado con la expresión PR
Se encontró expresión Pak1 que se correlaciona significativamente con el tipo histológico, grado histológico (grado 1/2 vs 3) y la edad de los pacientes al momento del diagnóstico (todo el
P Hotel & lt; 0,05), pero no con otros parámetros clínicos (S3 tabla). Los pacientes con carcinoma endometrioide de tipo I (Fig 1C), grado 1 y 2 y la edad ≤ 57 muestran una mayor expresión Pak1 que aquellos con carcinoma de células serosas y clara de tipo II, de grado 3 y la edad & gt; 57. Significativamente mayor citoplasmática y nuclear p-Pak2 así como la expresión Pak4 citoplasmática se observó en la invasión del miometrio superficial que la invasión miometrial profunda (todo el
P Hotel & lt; 0,05) (Tabla S3). Hubo una correlación significativa entre Pak4 y la expresión de p-Pak4 (tanto citoplasmática y nuclear) y el grado histológico (todo el
P Hotel & lt; 0,05) (Tabla S3). Un grado más alto de los tumores mostraron menor expresión de Pak4 y p-Pak4. Citoplasmática Pak4 mostró expresión significativamente menor en los pacientes con la enfermedad de la fase crónica y cánceres relacionados con el cuello uterino (todo el
P Hotel & lt; 0,05) (Tabla S3). No se encontró correlación significativa entre la expresión de p-Pak2, Pak4 y p-Pak4 con otros parámetros clínicos.
de Kaplan-Meier-análisis de supervivencia reveló que la menor expresión de Pak4 citoplasmática (
P =
0,026), pero no Pak1, p-Pak2, Pak4 nuclear y citoplasmática nuclear, nuclear y citoplasmática p-Pak4, dio lugar a una peor supervivencia en pacientes con cáncer de endometrio (figuras 1D, 2C, 3C y 4C). El análisis multivariado reveló que Pak4 citoplasmática es un factor pronóstico independiente (
P = 0,037
).
Desmontables de Pak1 en las células de cáncer de endometrio reduce la proliferación celular y las reguladas ciclina D1, ER y PR
Para determinar el papel de proliferación de Pak1 y Pak4 en células de cáncer de endometrio, caída transitoria de Pak1 y Pak4 en RL95-2 se realizó mediante siRNA enfoque. Después de confirmar la caída específica de Pak1 y mRNA Pak4 (Fig 6A) y proteína (Fig 6B), el efecto sobre la proliferación celular se determinó por el método de recuento de células. Pak1 empobrecido RL95-2 demostraron una reducción significativamente la tasa de proliferación en comparación con células de control que transfectadas con ARNsi de control (figura 6C). Sin embargo, no hubo diferencia significativa en la tasa de proliferación después de desmontables de Pak4 en RL95-2 se encontró (Fig 6C). Por otra parte, desmontables de Pak1 en RL95-2 significativamente reducido regulado de células relacionadas con el ciclo gen de la ciclina D1 y receptores de esteroides, ER y PR, pero no tienen ningún efecto en otra relacionadas con el ciclo CDC25A génica de células, tal como se evaluó por qPCR (Figura 6D). . Ciclina D1 también se redujo significativamente en siPak4 RL95-2 (Figura 6D): perfil
Barras, medias ± SD de tres experimentos; **,
P Hotel & lt; 0,005, prueba de Mann-Whitney
Discusión
Nuestros datos mostraron significativamente más alta expresión de p-Pak2 Pak1 y citoplasmática en proliferativa normal. endometrio de endometrio secretor, lo que sugiere Pak1 y p-Pak2 puede estar asociado con estrógeno regula la actividad proliferativa de endometrio durante el ciclo de menstral. En el cáncer de mama, la regulación de Pak1 por los estrógenos ha informado [19]. Los resultados también están de acuerdo con el informe anterior sobre la baja regulación de Pak1 por la progesterona en el endometrio secretor normal [12].
El papel de proliferación de Pak1 y Pak2 se ha documentado en las células normales. Por ejemplo, en los fibroblastos, Pak1 fosforilada por CDC2A se ha encontrado para alterar la difusión de post-mitótico, que es un paso esencial para la progresión y la proliferación [20] ciclo celular. Nuestro estudio anterior también reveló la participación de Pak1 en la proliferación de trofoblasto [10]. En las células epiteliales mamarias normales, hiperactivo Rac3 fue encontrado para mejorar la proliferación celular a través de Pak2 [21]. La fosforilación de Pak2 en Ser
20, su sitio de fosforilación correspondiente de Pak1 en Ser
20 se ha encontrado para modular la unión entre Nck citosol y la membrana, por lo tanto regular la migración celular [22, 23]. En nuestro estudio anterior, citoplásmica p-Pak2 se detectó en citotrofoblasto que puede ser considerado como células madre trofoblásticas responsables de la proliferación [10]. También se detectó nuclear p-Pak2 en los tejidos del endometrio, aunque los papeles de p-Pak2 en el núcleo todavía necesitan ser más estudiado. Al igual que Pak1 y Pak4 [8, 24], p-Pak2 en el núcleo puede desempeñar la función en la transcripción de genes. En estudios futuros, es interesante determinar si el estrógeno puede regular Pak1 y la expresión de p-Pak2 que conduce a una mayor actividad proliferativa del endometrio durante el ciclo menstral.
Encontramos significativamente mayor Pak1, Pak4 citoplasmática y nuclear y p- nuclear Pak4 expresión en los cánceres endometriales que endometrio atrófico. El aumento de expresión de Pak1 y Pak4 también se detectó en las líneas celulares de cáncer de endometrio. La mayoría de las funciones de Pak4 dependen de su actividad quinasa [8]. En nuestro estudio anterior, además de la migración de células ejecutado en el citoplasma, hemos puesto de manifiesto regulación de la transcripción de genes por Pak4 nuclear en el cáncer [8] de ovario. Los presentes hallazgos sugieren que Pak1, Pak4 citoplasmática y nuclear y nuclear p-Pak4 puede jugar un papel importante en la patogénesis del cáncer endometrial especialmente en mujeres posmenopáusicas y puede ser útil en la detección de carcinoma endometrial en pequeña biopsia endometrial de mujeres posmenopáusicas.
Se demostró además disminución de la proliferación de células de cáncer de endometrio después de la caída Pak1 junto con la expresión de ciclina D1 reducida. Nosotros y otros han documentado papel proliferativa de Pak1 en otros cánceres humanos, tales como cáncer de mama [25], no pequeñas carcinoma de pulmón de células escamosas [26] y coriocarcinoma [10]. La sobreexpresión de ciclina D1, una ciclina de tipo D de la regulación de G1-S progresión del ciclo celular de fase, se ha informado en el cáncer de endometrio [27, 28]. Previo estudio también encontró que regula Pak1 prolactina mediada por la actividad del promotor de ciclina D1 en el cáncer de mama [29]. Los presentes hallazgos sugieren que Pak1 puede regular la proliferación celular a través de la alteración de la progresión del ciclo celular. Desde la ciclina D1 puede ser un objetivo alternativo de la terapia [30] y los inhibidores de molécula pequeña de la familia Pak se están desarrollando [7, 31], la terapia dirigida-combinada se puede lograr para la orientación del cáncer endometrial. Aunque hemos puesto de manifiesto la proliferación mejorar efecto de Pak4 sobre el cáncer de ovario [8] y la reducción de expresión de ciclina D1 detectado en las células después de la caída RL95-2 Pak4 en el presente estudio, no tiene efecto significativo de Pak4 sobre la proliferación celular del cáncer de endometrio se pudo demostrar que era Pak4 transitoriamente silenciado en células RL95-2 en el presente estudio. Es posible que el efecto sobre la proliferación celular tiene que ser determinada usando desmontables células estables con el tiempo de incubación más largo antes de hacer método de recuento de células. Esta posibilidad se debe considerar en futuros estudios. Los papeles de Pak4 necesitadas cáncer de endometrio ser estudiada posteriormente.
Hemos demostrado significativamente más alta expresión Pak1 en el carcinoma endometrioide Tipo I Tipo II de carcinoma no endometrioide. Tipo I endometrioide carcinoma es un estrógeno dependiente de tumor [2, 3]. Aunque estudios previos han demostrado ningún efecto sobre la expresión Pak1 después del tratamiento con estrógenos en las células de Ishikawa (una línea celular de adenocarcinoma de endometrio bien diferenciado) [12], encontramos ER y ER PR gen diana, se redujo después de la caída Pak1 en RL95-2. Por otra parte, la correlación positiva entre la expresión Pak1 y PR en nuestras muestras clínicas de cáncer de endometrio apoyar aún más su enlace. La fuerte asociación entre ER y PR expresión y el carcinoma endometrioide tipo I en comparación con el tipo II el carcinoma endometrioide no [32], explica la eficacia de la terapia con progestina para el tipo I endometrioide carcinoma. En las células de cáncer de mama, Pak1 inhibidor bloqueado funciones de transactivación de ER y ER downregulated producto objetivo PR (tanto PRA y PRB isoformas) expresión de la proteína [33]. Por otra parte, Pak1 mediada por fosforilación de ER en Ser305 ha demostrado que mejora la transactivación de ER conduce a la sobre regulación de ER-genes regulados, como la ciclina D1, que a su vez promueven el crecimiento independiente de hormonas de las células de cáncer de mama [33-35]. Es posible que Pak1 es uno de los mediadores aguas arriba para la expresión de ER y PR en el carcinoma endometrioide tipo I y Pak1 puede mejorar el crecimiento de las células de cáncer de endometrio a través de la regulación de ER
Se encontró un menor expresión de Pak4 citoplasmática se asoció con peor pronóstico en los cánceres de endometrio. Estudios anteriores han incluido el nuestro encontrado una expresión más alta Pak4 contribuir a un mal pronóstico en los pacientes de cáncer de ovario [8] y el carcinoma de células escamosas orales [36]. Esta asociación relativamente sorprendente puede estar relacionado con el medio ambiente biológico único del endometrio, que es un tejido de proliferación cíclica sensibles a la regulación hormonal. La razón de esta observación necesita ser estudiado más en el futuro.
En resumen, Pak1 y citoplasmática p-Pak2 pueden desempeñar funciones en la actividad proliferativa de endometrio durante el ciclo menstral. Pak1, Pak4 citoplasmática y nuclear y nuclear p-Pak4 están involucrados en la patogénesis del cáncer endometrial y pueden ser posibles dianas terapéuticas especialmente en mujeres posmenopáusicas. Pak1 mejorar la proliferación de las células del cáncer endometrial en particular en el tipo I endometrioide carcinoma. Citoplasmática Pak4 puede ser posible marcador pronóstico en el cáncer de endometrio.
Apoyo a la Información sobre Table S1. Fuentes y diluciones de trabajo de los anticuerpos utilizados en este estudio
doi: 10.1371. /Journal.pone.0133467.s001 gratis (DOC) sobre Table S2. Los cebadores utilizados para la PCR en tiempo real
doi:. 10.1371 /journal.pone.0133467.s002 gratis (DOC) sobre Table S3. Correlación de Pak1, nuclear y citoplasmática p-Pak2, Pak4 y p-Pak4 con parámetros clínico en cáncer de endometrio
doi:. 10.1371 /journal.pone.0133467.s003 gratis (DOC) guía
Reconocimientos
Este estudio fue apoyado por el Hong Kong Sociedad de Lucha contra el cáncer Grant, de la Universidad de Hong Kong Pequeño Financiación del proyecto y de la Conferencia y el Consejo de Investigación Grant.