Extracto
La expresión de p53 parece estar correlacionado con el pronóstico en pacientes con tumores malignos, pero su papel en el carcinoma gástrico ha mantenido controvertido. Recientemente se informó de que JWA, una proteína que interactúan factor de ADP-ribosilación-como 6 5 (ARL6ip5), era tanto el pronóstico para la supervivencia global y predictivo para el tratamiento basado en platino de cáncer gástrico. En este estudio, que tuvo como objetivo investigar la expresión de p53 como marcador pronóstico y predictivo en el cáncer gástrico resecable, solo y en combinación con JWA. La expresión de p53 se examinó en tres grandes cohortes de pacientes (n total = 1155) de cáncer gástrico. Alta expresión de p53 se correlacionó significativamente con parámetros clínico desfavorable y la disminución de la supervivencia global del paciente. Por otra parte, los pacientes con alta expresión de p53 en tumores adquieren notable beneficio en la supervivencia de la primera línea de quimioterapia basada en platino adyuvante. La sinergia entre p53 y JWA en la predicción de la evolución del paciente se demostró, mientras que se observó ningún valor predictivo elevado significativamente en relación con la quimioterapia. Por lo tanto, la expresión de p53 es un factor pronóstico y predictivo potente para el cáncer gástrico resecable con quimioterapia basada en platino adyuvante. Un efecto combinado de p53 con JWA indicadores de pronóstico como eficientes se encontró por primera vez
Visto:. Liu X, Wang S, Xia X, Y Chen, Zhou Y, X Wu, et al. (2012) papel sinérgico entre p53 y JWA: Los biomarcadores pronósticos y predictivos en cáncer gástrico. PLoS ONE 7 (12): e52348. doi: 10.1371 /journal.pone.0052348
Editor: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Estados Unidos de América
Recibido: 3 Agosto 2012; Aceptado: 12 Noviembre 2012; Publicado: December 21, 2012
Derechos de Autor © 2012 Liu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado en parte por el proyecto financiado por el Programa de Desarrollo Académico prioridad (TPPA) de las IES Jiangsu (http://jsycw.ec.js.edu.cn); la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (30930080 y 81110027) (http://www.nsfc.gov.cn); la Fundación del Centro de Cáncer de la Universidad de Medicina de Nanjing (08ZLKF08) (http://202.195.178.127/zlsys). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer gástrico afecta a cerca de un millón de personas al año, siendo la segunda causa de muerte por cáncer en todo el mundo con una tasa de supervivencia global a cinco años de menos del 30% [1]. El mal resultado se ha mantenido básicamente sin cambios durante las últimas décadas, a pesar de las mejoras en la cirugía, quimio y radioterapia [2]. Existen notables diferencias en el pronóstico entre los pacientes después de la cirugía convencional, indicando Se necesitan con urgencia biomarcadores específicos [3]. Por otra parte, la selección de los pacientes que se beneficiarán de la quimioterapia es un tema importante como una fracción grande es tratada unnessesarily y sólo sufre efectos adversos graves [4]. Por lo tanto, se necesitan con urgencia marcadores moleculares eficientes para evitar tratamiento insuficiente o excesiva.
La proteína p53 (codificada por el gen humano
TP53
) es posiblemente el más conocido de todos los supresores tumorales, y se caracterizaron por la capacidad de inducir la detención del ciclo celular, reparación del ADN, la senescencia y la apoptosis [5]. Mutación o inactivación funcional de p53 es una característica casi universal de cáncer humano, que juega un papel crucial en la tumorigénesis ya p53 mutante puede adquirir nuevas propiedades oncogénicas [6] - [9]. Por otra parte, a diferencia de la proteína p53 de tipo silvestre que se degrada rápidamente, formas mutantes tienen una vida media prolongada, que favorecen el almacenamiento intranucleares, llegando a ser detectable por inmunohistoquímica [10] - [12]. La acumulación de la proteína p53 en el caso de cáncer gástrico se ha relacionado con el pronóstico y predicción del tratamiento [13], [14]. Sin embargo, su función relacionada y el mecanismo hasta ahora siguen siendo controvertidos [15], [16].
Nuestros hallazgos recientes que JWA implicados, también conocido como ARL6ip5, similar con p53 en algunos aspectos, es esencial para la supervivencia celular y eficiente la reparación del ADN después de daño oxidativo del ADN, así como la apoptosis de células de cáncer inducido químicamente [17], [18]. Por otra parte, JWA y XRCC1, otra proteína de reparación del ADN, puede ser candidato y pronóstico biomarcadores predictivos para los pacientes con cáncer gástrico [19]. Además, los SNP de la
JWA
gen se asocia con una mayor predisposición al carcinoma gástrico en una población china [20]. Por lo tanto, estamos interesados considerablemente si JWA funcionaría como cooperador con p53 para mejorar la potencia de predicción en el cáncer gástrico.
En este documento, que tuvo como objetivo dilucidar la importancia de la traducción e identificar los patrones de expresión de p53 en tres grandes cohortes independientes de los pacientes con cáncer gástrico y para examinar el posible papel pronóstico y predictivo de este marcador. Más intrigante, una hipótesis sería validado sobre si p53 y JWA podrían combinarse como un nuevo factor de predicción con mayor precisión en la evaluación de la supervivencia.
Materiales y Métodos
Pacientes y muestras
se estudiaron tres grupos de pacientes retrospectivos independientes. La cohorte de formación y las pruebas de cohorte se recogieron en el Hospital del Cáncer de Nantong, Nantong, en la parte este de la provincia de Jiangsu y la cohorte de validación fue reclutado en el Hospital Popular Yixing, Yixing, en la parte sur de la provincia de Jiangsu, China. Los tejidos se obtuvieron a partir de las respectivas divisiones de patología. Los criterios de inclusión fueron el carcinoma gástrico tratados con gastrectomía radical con o sin quimioterapia adyuvante. Los criterios de exclusión fueron pacientes con cáncer gástrico anterior o el cáncer gástrico no activa. Además, los que recibieron la quimioterapia o la radioterapia antes de la cirugía fueron excluidos. escrito el consentimiento informado se obtuvo de cada paciente antes de la adquisición de tejidos y antes de la cirugía se llevó a cabo. la aprobación institucional fue adquirido de la Junta de Revisión Ética de la Universidad de Medicina de Nanjing antes de este estudio.
Los pacientes tratados con cirugía sola
La cohorte de formación incluyó a 103 pacientes que sólo se sometieron a gastrectomía radical en el Hospital del Cáncer de Nantong a partir del 1
er mayo de 1990, 1
er de junio de 1995. sin embargo, 20 muestras fueron omitidos debido a la falta de datos y una muestra se perdió durante la recuperación de antígenos o sin células tumorales presentes en el núcleo, por lo que 82 pacientes fueron apareados tejidos finalmente evaluadas para la expresión de p53.
la cohorte prueba consistió en todos los 640 casos de cirugía del hospital del cáncer de Nantong 1
de diciembre de 2000 y el 1
º de abril de 2005 y la cohorte de validación incluye todas las 1022 quirúrgica casos en el hospital Popular Yixing de 1
de enero de 1999 y el 31
de diciembre de 2006. Estos pacientes fueron tratados con solamente o con quimioterapia adyuvante postoperatoria de la cirugía (para más detalles, véase la Fig. S1). La distribución de las características demográficas y las variables clínico-patológicas de los pacientes seleccionados entre los dos distritos (Nantong y Yixing) fueron descritas anteriormente [19]. Debido a la falta de datos de supervivencia, solamente se incluyeron 578 y 998 de estos pacientes. Por otra parte, debido a la pérdida de núcleos o células tumorales suficientes en el tejido, 485 y 588 núcleos de tumores se analizaron para la expresión de p53 en la prueba y validación de cohortes, respectivamente.
Los pacientes tratados con quimioterapia adyuvante
en la cohorte de formación, ninguno de los pacientes recibió ninguna forma de terapia adyuvante. De los 485 pacientes utilizados para el análisis de la cohorte de prueba, 111 pacientes (22,9%) fueron tratados con quimioterapia adyuvante después de la resección curativa. Los regímenes incluyen la quimioterapia combinada con fluorouracilo, leucovorina y oxaliplatino (FLO) (6 casos); monoterapia con mitomicina C (46 casos); derivados fluorouracilo (47 casos); y otros tratamientos (12 casos). De los 588 pacientes en la cohorte de validación, el régimen para 223 pacientes (37,9%) con quimioterapia postoperatoria incluyó la quimioterapia combinada con FLO (87 casos); quimioterapia combinada con fluorouracilo, leucovorina y Platinol (FLP) (79 casos); quimioterapia combinada con fluorouracilo y paclitaxel (FP) (11 casos); quimioterapia combinada con etopósido, leucovorina, fluorouracilo y Platinol (ELFP) (28 casos); y otros tratamientos (18cases). En cuanto a los pacientes con cáncer gástrico resecable con quimioterapia, la distribución de las características demográficas y las variables clínico-patológicas de los pacientes seleccionados entre grupo y grupo de FLO FLP fueron similares (todos los
P Hotel & gt; 0,05), excepto el tipo histológico (
P
= 0,001, Tabla S1). Además, 7 patológicamente confirmó el cáncer gástrico y los respectivos tejidos frescos congelados mucosa gástrica no cancerosas de los pacientes en los últimos Hospital del Cáncer de Nantong se obtuvieron para el análisis de Western blot.
La supervivencia global (SG) fue el principal punto final de este análisis. El tiempo de supervivencia se determinó a partir de la fecha de la cirugía a la fecha de la muerte o el último seguimiento. Fecha de la muerte para cada caso se obtuvo de los registros de pacientes o familiares de los pacientes a través de llamadas telefónicas de seguimiento y más de dos verificado por el departamento de asuntos civiles locales y el departamento de seguridad pública. Se obtuvo información detallada clínico patológica. Se utilizaron criterios de Lauren para clasificar los tumores de tipo intestinal o en el tipo difuso [21] y por etapas de acuerdo con el tumor, nódulo, metástasis (TNM) directrices [22].
Construcción de Tejido de microarrays (TMA) e inmunohistoquímica
incluido en parafina archivado material de tejido de tumor y se utilizó tejido gástrico normal circundante para la construcción TMA. TMA se prepararon como se publicó anteriormente [19]. En resumen, duplicado de 1,0 mm de diámetro núcleos de tejido de cada muestra fueron perforados desde el bloque de parafina y tumoral correspondientes tejidos no tumorales en la cohorte de formación o de núcleos de biopsias de tumores primarios en las cohortes de prueba y validación. Como tejido de control, las biopsias de los tejidos normales del epitelio gástrico se insertaron en los cuatro ángulos y el centro de cada diapositiva.
Un protocolo estándar fue usado para la inmunotinción de las TMA. El proceso detallado se describe anteriormente [19]. IHC se realizó con anticuerpo monoclonal DO7 (1:80; Dako, Carpinteria, CA), que detecta la de tipo salvaje y formas mutantes de la p53-proteína, junto con Kits súper HRP Elivision ™ (Maixin-Bio, Fujian, China) , la aplicación de métodos de detección y recuperación de antígeno que varían. La omisión del anticuerpo primario sirve como control negativo. Las puntuaciones de tinción de los controles de tejido en cada diapositiva microarrays se pre-evaluados como un control de calidad de la inmunotinción.
Evaluación de inmunohistoquímica
Al principio, la tinción de p53 en el tejido se puntuaron independientemente por dos patólogos que desconocían los datos clínicos, aplicando una puntuación inmunorreactividad semi-cuantitativa (IRS) en la cohorte de formación. Se informó de los criterios de puntuación para IRS en otra parte [23]. La intensidad de la inmunotinción se muestra en la Fig. S2. La concordancia de IRS puntuación de tinción de p53 entre los dos patólogos fue de 74 (90%) en 82 tumores del conjunto de entrenamiento; y las pocas discrepancias se resolvieron por consenso usando un microscopio de múltiples cabezales. La variabilidad en la tinción de p53 fue de 4 (5%) en los núcleos duplicadas de 82 tumores. Estos casos se tiñeron por el conjunto de corredera de IHC y más anotó
.
El valor óptimo de corte del IRS se obtiene por análisis de característica del receptor-operador (ROC), y el área bajo la curva (AUC) a diferentes valores de corte de p53 IRS para 1, 3 y 5 años de tiempo de supervivencia global se calculó. El valor óptimo de puntos de corte de p53 IRS en Nantong cohorte distrito (cohorte de formación combinada y la cohorte de prueba) fue del 4 por el valor predictivo de este punto de corte para la muerte era el mejor (Fig. S3). En estas condiciones, las muestras con IRS 0-4 y 5-12 IRS se clasifican como de baja y alta expresión de p53 en los tumores, respectivamente. Después de establecer los criterios de evaluación de inmunohistoquímica en la cohorte distrito de Nantong, la expresión de p53 en el distrito de cohorte de Yixing (cohorte de validación) fue marcado por los mismos patólogos con exactamente el mismo procedimiento.
Western Blot
Western Blot se llevó a cabo como se describe anteriormente [19]. anticuerpo monoclonal de ratón anti-p53 (1:1000; Dako, Carpinteria, CA), y el anticuerpo monoclonal de ratón anti-β-actina (1:2000; Beyotime Biotechnology, Nantong, China) se utilizaron para el anticuerpo primario. Las bandas inmunorreactivas se detectaron con un kit de detección por transferencia Western Phototope-HRP (Cell Signaling Technology Inc, Beverly, MA, EE.UU.). Para el análisis densitométrico, bandas de proteína p53 en las transferencias se miden mediante el software Image J (versión 1.44, Wayne Rasband, Institutos Nacionales de Salud, EE.UU.), después de la normalización en el correspondiente nivel de β-actina.
Análisis estadístico
La asociación entre la expresión de p53 y parámetros clínico se evaluó mediante la prueba exacta de Fisher. La expresión diferencial de p53 en tumores primarios y sus correspondientes tumores no fueron evaluadas por la prueba de Wilcoxon (agrupadas) y correlación de Spearman orden de rango (puntuaciones directas). La correlación entre la expresión de p53 y JWA fue establecido por la correlación de Spearman orden de rango (puntuaciones directas) y la prueba exacta de Fisher (agrupadas). Probabilidad de que las diferencias en OS como una función del tiempo se determinó mediante el uso del método de Kaplan-Meier, con una prueba de log-rank para la significación. Se realizó un análisis de regresión de Cox univariante o multivariante para estimar los coeficientes de crudo de riesgo (CR), HR ajustadas y sus intervalos de confianza del 95% (IC), con ajuste por posibles factores de confusión. A continuación, analizamos el valor predictivo de los parámetros mediante el análisis de curvas ROC dependiente del tiempo para datos censurados y AUC calculado de las curvas ROC. Se evaluaron las actuaciones de las diferentes puntuaciones trazando (t, AUC [t]) para diferentes valores de tiempo de seguimiento (t). Todos los análisis estadísticos se realizaron con el software Statistical Analysis System (versión 9.1.3; SAS Institute, Cary, NC), el software estadístico STATA (versión 10.1; StataCorp, College Station, TX), y el software R (versión 2.10.1; El R Fundación para la Computación de estadística). Un valor de p & lt; 0,05 se consideró estadísticamente significativa
Resultados
El aumento de la expresión de p53 en el cáncer gástrico Versus tejidos normales adyacentes
Siete pares de muestras de cáncer gástrico humano. , incluidos los tejidos de cáncer gástrico primario y la mucosa gástrica normal emparejado se seleccionaron para poner a prueba la expresión de proteínas p53 mediante transferencia Western. La expresión elevada de p53 se produjo en 6 de 7 tumores gástricos en comparación con la mucosa gástrica normal emparejado (Fig. 1A). La tinción inmunohistoquímica de microarray de tejido gástrico (TMA) se utilizó para confirmar aún más la expresión de p53 en 82 pacientes con cáncer gástrico en la cohorte de formación. Se demostró que la tinción de p53 fue localizada principalmente en los núcleos (Fig. 1B). La distribución de las diferencias de IRS para la expresión de p53 en los tumores y no los tumores emparejados se muestra en la Fig. 1C. Por otra parte, la expresión de p53 fue significativamente mayor en 65 de 82 (79,2%) de los cánceres gástricos en comparación con los tejidos normales emparejados gástricas (
P
& lt; 0,001, prueba de Wilcoxon; Fig. 1C). En las tres cohortes independientes de pacientes tratados sólo con cirugía sólo, la expresión de p53 se correlaciona negativamente con JWA en los tejidos cancerosos (
P Hotel & lt; 0,001 para todas las correlaciones, Tabla 1).
(A) los niveles de proteína p53 en 7 tejidos de cáncer y tejidos normales no cancerosas emparejados de pacientes con cáncer gástrico se analizaron por transferencia Western. El nivel de cada proteína se normalizó contra la β-actina, y los niveles de proteína en tejidos de cáncer indica como una relación a los tejidos normales no cancerosas pareadas. Nota: N, tejido normal no canceroso; T, tejido tumoral. (B) tinción inmunohistoquímica Representante de p53 en TMA. T, tejido canceroso gástrico; N, emparejado tejido gástrico no canceroso. Panel superior: barra de escala, 250 m; panel inferior: barra de escala, 50 micras. (C) La distribución de la diferencia de la tinción de p53 (Δ = IRS IRS IRS T-N).
valores de p se calcularon con la prueba de Wilcoxon. IRS, la puntuación de inmunorreactividad.
correlación entre la expresión de p53 y características clínico en pacientes tratados con cirugía sola
En las tres cohortes, que declaró que la expresión de p53 en los tejidos cancerosos era correlacionó significativamente con metástasis en los ganglios linfáticos (N-categoría). El aumento de expresión de p53 estaba estrechamente asociada con una mayor estadio TNM en el entrenamiento y las cohortes de prueba, pero sin significación en la cohorte de validación. Por otra parte, el aumento de expresión de p53 fue especialmente relacionado con otras características clínico-patológicas, como la profundidad de la invasión (T-categoría), metástasis a distancia (M-categoría), el diámetro del tumor y el tipo histológico en el respectivo cohorte. Curiosamente, en todos los pacientes tratados con cirugía sola (n = 817), encontramos más pacientes de tipo intestinal mostraron bajos, mientras que más pacientes de tipo difuso, muestra alta expresión de p53 (
P Hotel & lt; .001, los datos no presentados ). La expresión de p53 no tuvo correlación con la edad y el sexo (Tabla 1).
La correlación de la expresión de p53 y la SG en los pacientes tratados con cirugía sola
En la cohorte de formación, 82 muestras de tumores primarios adecuados para el análisis mostró una correlación negativa estadísticamente significativa entre la expresión de p53 y la supervivencia global a los 5 años utilizando las curvas de supervivencia de Kaplan-Meier (
P Hotel & lt; 0,001). Estos resultados se validaron en dos cohortes independientes y grandes de pacientes con cáncer gástrico con un mínimo de cinco años de seguimiento (n = 374 yn = 365, respectivamente) (Fig. 2A-C). Otros predictores negativos significativos para la supervivencia de análisis univariado en las tres cohortes independientes fueron metástasis de ganglios linfáticos (N-categoría,
P Hotel & lt; 0,01 para todos, el cuadro S2) y el estadio TNM clínico (
P
≤.001 para todos, el cuadro S2).
(a-C) Las curvas de Kaplan-Meier que representa la supervivencia global de acuerdo con el patrón de expresión de p53. curvas (D-F) de Kaplan-Meier que representa la supervivencia global de acuerdo con el patrón de expresión de p53 /JWA.
valores de p se calcularon con la prueba de log-rank.
El análisis de regresión de Cox indicó que la baja expresión de p53 es un factor pronóstico independiente positiva para el cáncer gástrico en las tres cohortes (
P Hotel & lt; 0,001 para todos, Tabla 2). A fin de evaluar el valor pronóstico de la expresión de p53, se realizó un análisis ROC dependiente del tiempo para los datos censurados, lo que indica que la combinación de la puntuación clínica de riesgo (estadio TNM, tipo histológico y el diámetro del tumor) y p53 contribuyeron mucho más que los parámetros clínicos solamente tanto en la formación y las cohortes de prueba (Fig. 3). Por ejemplo, en la cohorte de las pruebas, las AUC en el año 5 fue 0,707 (IC del 95% = 0,653 hasta 0,761) para la puntuación de riesgo clínico, mientras que se incrementó de manera significativa a 0,856 (IC del 95% = 0,818 hasta 0,894) cuando se combina con el riesgo de p53 Puntuación. Sin embargo, este efecto no fue significativo en la cohorte de validación, debido a la relativamente mayor AUC (alrededor de 0.8) de predictores clínicos (Fig. S4).
(A) dependiente del tiempo analiza ROC en la cohorte de formación. análisis (B) en función del tiempo República de China en la cohorte de prueba. AUC = área bajo la curva.
correlación entre la expresión de p53 y la SG en pacientes con quimioterapia adyuvante
En las cohortes de prueba y validación, el sistema operativo se analizó entre los pacientes que recibieron la quimioterapia adyuvante en comparación con aquellos que no lo hicieron. Los datos mostraron ninguna diferencia en la SG entre la cirugía único grupo y cualquier régimen de la quimioterapia adyuvante postoperatoria (datos no mostrados), excepto en el grupo que recibió fluorouracilo y leucovorina en oxaliplatino (FLO) (n = 87, prueba de log-rank,
P
= 0,032, Fig. 4). Se realizó un análisis multivariado de regresión de Cox que incluye seis variables (edad, sexo, estadio TNM, tipos histológicos, diámetro del tumor y quimioterapia) para indicar el beneficio de la quimioterapia en el sistema operativo. Hubo un beneficio estadísticamente significativo para los que recibieron quimioterapia FLO después de la operación sobre el grupo de sólo cirugía (HR = 0,55; IC del 95% = 0,37 a 0,82, datos no mostrados). Cabe destacar que este efecto sólo se ha encontrado en pacientes con alta expresión de p53 en adyuvante FLO obviamente aumentó OS en comparación con la cirugía sola (HR = 0,56; IC del 95% = 0,35 a 0,89, Tabla S3; log-rank test,
P
= 0,014, Fig. 4).
valores de p se calcularon con la prueba de log-rank. Nota: S, la cirugía sola; FLO, fluorouracilo y leucovorina en oxaliplatino.
También se analizó la importancia de otro régimen de quimioterapia basada en platino, fluorouracilo y leucovorina-Platinol (FLP) (n = 79) en el cáncer gástrico resecable. Los resultados no presentan una diferencia significativa en la supervivencia (log-rank test,
P = .134
, Fig. S5), mientras que los pacientes con baja expresión de p53 que reciben régimen de FLP incluso muestran una peor supervivencia en comparación con los que recibieron la cirugía solamente (
P = .003
, Fig. S5). Además, los pacientes sometidos a tratamiento FLP con la expresión de alto p53 no tenían discrepancia significativa en la supervivencia en comparación con aquellos con la cirugía sola (
P
= 0,648, Fig. S5). Un análisis más detallado multivariante aclarado que no se observó un mayor riesgo de mortalidad en pacientes con baja expresión de p53 que reciben tratamiento FLP comparación con la cirugía solamente (HR = 1,91; IC del 95% = 1,08 a la 3.36, Tabla S4).
Efecto de Synergetic p53 con JWA Expresión en OS en pacientes tratados con cirugía solamente o quimioterapia adyuvante
los pacientes con cirugía sola fueron estratificados su vez en tres grupos distintos en función de la tinción de p53 y p53: altas JWA con JWA baja, p53 baja con JWA alta y ambos alta o baja tanto. Se demostró que los pacientes con p53 baja y alta JWA tuvieron un mejor resultado de la supervivencia en estos tres grupos (
P Hotel & lt; 0,001, prueba de log-rank; Fig. 2D-F). El análisis de regresión de Cox multivariado demostró que la expresión combinada de baja y alta JWA p53 fue factor pronóstico positivo independiente para el cáncer gástrico en las tres cohortes (
P Hotel & lt; 0,001 para todos, Tabla 2). A fin de evaluar el valor pronóstico de p53 además de la expresión JWA, se realizó otro análisis ROC dependiente del tiempo, lo que indica que la combinación del riesgo clínico puntuación y p53 además JWA aportó más de la cooperación de puntuación de riesgo sólo con p53 en ambos formación y cohortes de prueba (Fig. 3). Por ejemplo, en la cohorte de formación, las AUC en el año 5 fue 0,568 (IC del 95% = 0,400-0,737) para la puntuación de riesgo clínico más puntuación de riesgo de p53, mientras que se incrementó de manera significativa a 0,865 (IC del 95% = 0,786 a 0,944) cuando se utilizó la combinación de la puntuación de riesgo clínico con p53, más puntuación de riesgo JWA. Sin embargo, este efecto una vez más no fue aparente en la cohorte de validación debido a la razón mencionada anteriormente (Fig. S4).
Sobre la base de la contribución del nivel de expresión de p53 con el resultado de la quimioterapia, se estratificó a estos pacientes en coordinación con JWA como del siguiente modo: grupo de tratamiento FLO con la expresión de p53 alta se dividió en p53 con alta JWA baja y alta con p53 JWA alta; y el grupo de tratamiento con FLP baja expresión de p53 también se clasificó en baja con p53 y p53 JWA baja baja con JWA alta. OS fue reevaluado entre estos subgrupos. Sin embargo, hay disparidad de supervivencia evidente fue presentado en el patrón sinérgico con JWA (Fig. S6).
Discusión
El cáncer gástrico es una enfermedad heterogénea, donde el resultado varía incluso en pacientes con similares clínica y patológica caracteristicas. Incluso con la cirugía en las primeras etapas, el pronóstico puede ser deprimente, y la quimioterapia adyuvante es eficaz sólo en los subgrupos de pacientes. Nuevos marcadores moleculares son necesarios como sistemas de clasificación tradicionales para el cáncer gástrico son insuficientes para los resultados que predicen [24]. En este estudio, se registró y se demostró que la alta expresión de p53 se correlacionó significativamente con parámetros clínico desfavorable y la disminución de la supervivencia global del paciente. Por otra parte, los pacientes con alta expresión de p53 en tumores adquieren notable beneficio en la supervivencia de la quimioterapia basada en platino de primera línea adyuvante (FLO o FLP). La sinergia entre p53 y JWA en la predicción de la evolución del paciente se demostró, mientras que no se observó ningún valor predictivo elevado obvia relación con la quimioterapia.
En el presente estudio, se halló una mayor evidentemente expresión de la proteína p53 en el cáncer gástrico tejidos normales emparejados frente mucosa, lo que sugiere un estado potencialmente importante de p53 en la carcinogénesis gástrica. Según se informa, el
p53
gen está mutado en casi el 50% de todos los tumores humanos, incluyendo el cáncer gástrico [25] y la proteína mutada permanece dentro de las células para un tiempo más largo, lo que permite la detección mediante técnicas de inmunohistoquímica [26], [27 ]. Por lo tanto, en general se acepta que la tinción positiva representa principalmente las formas mutantes de p53, mientras que la proteína p53 de tipo salvaje se degrada más rápidamente y aparece débil o negativa de tinción [10], [26]. Nuestros datos fueron consistentes con estudios de otros investigadores, que reveló que la expresión de p53 positiva se asoció con características desfavorables clínico-patológicas y un mal pronóstico de los pacientes con cáncer gástrico que han sido sometidos a una gastrectomía curativa [28] - [30]. Vale la pena señalar que existen algunas diferencias en las características clínico-patológicas entre Nantong y Yixing cohortes. Desde el Hospital del Cáncer de Nantong es un hospital especial el cáncer, mientras que el Hospital Popular Yixing es un ser integral, los pacientes en los primeros están a menudo en la etapa más avanzada en comparación con este último. En consecuencia, los pacientes en Nantong cohorte mostraron peores características clínico. Además, p53 y la expresión JWA solamente se detectaron en tejidos aquí pero no en sangre o suero de pacientes con cáncer gástrico, debido a que no se secretan proteínas. Curiosamente, un estudio anterior mostró una fuerte correlación entre la alta p53 autoanticuerpos en el suero de pacientes con adenocarcinoma gástrico y mal pronóstico, metástasis de ganglios linfáticos y baja diferenciación [31]. Por otra parte, se demostró que la expresión de p53 en los tejidos de cáncer gástrico correlacionados con los anticuerpos de p53 en suero [32]. No teníamos sueros tomados para un análisis similar, pero esto sería muy interesante como una prueba de sangre es más simple y probablemente más reproducible que immonohistochemistry. En cuanto a JWA, una prueba de suero aún está pendiente y necesita ser demostrada en el futuro.
Una cuestión importante y fascinante que nos atrae a la mayoría es por eso pude alta expresión de p53 juego papeles precisamente opuestos en efecto pronóstico y predictivo. Este fenómeno puede atribuirse a las diferentes formas de p53 y sus propiedades distintas en la biología del cáncer y la resistencia al tratamiento. Es ampliamente conocido proteínas p53 mutantes son altamente expresado en muchos cánceres y contribuyen a la transformación maligna, la proliferación y la metástasis, en parte, mediante la inhibición de p53 de tipo salvaje, así como otros miembros de la familia p53 [6], [33]. Ratón modelos rodamiento ronda de mutaciones de p53 mostró que las proteínas p53 mutantes pueden impulsar la formación de tumores, invasión y metástasis a través de la inhibición dominante negativa de p53 de tipo salvaje junto con ganancia de función o actividades 'neomorphic' que pueden inhibir o activar la función de otras proteínas [34], [35]. Del mismo modo, en nuestro estudio, la expresión de alto p53 en tumores gástricos correlacionados con metástasis en los ganglios linfáticos, mayor estadio TNM y otras características clínico desfavorable, dando lugar a un fenotipo más agresivo con un pronóstico peor cuando no se tratan. En contraste, el efecto predictivo positivo de la expresión de alto p53 en la supervivencia tanto en los pacientes tratados con platino pueden señalar a un doble papel de p53 en la quimio-resistencia. Actualmente, un obstáculo importante en la quimioterapia de platino es la reparación de ADN de platino-dañado que resulta en aumento de la resistencia, la reducción de la apoptosis, y, finalmente, el fracaso del tratamiento. P53 de tipo salvaje puede jugar un papel parcialmente tales durante este proceso a través de la detención del ciclo celular y después de la reparación de los daños inducidos por agentes químicos [36] - [39]. Por el contrario, las proteínas p53 mutantes son incapaces de funcionar en la reparación del daño en el ADN como su homólogo de tipo salvaje, donde los pacientes se vuelven más sensibles a los productos químicos [36], [40], [41]. Sin embargo, el mecanismo detallado de p53 mutante en el tratamiento de platino necesita de mayor investigación. Debe tenerse en cuenta que los pacientes recibieron más beneficio en la supervivencia de FLO que de FLP, que puede ser parcialmente debido a que FLO reduce la toxicidad en comparación con FLP como se ha señalado antes [19].
JWA es una respuesta de estrés típico de genes, así como un supresor de tumor [18], [42]. In vitro e in vivo confirmaron que la pérdida de JWA suprime la diferenciación celular y el aumento de la migración celular y la metástasis [42] - [44]. Nuestros últimos resultados manifiestan una baja expresión en tumores gástricos JWA correlacionados con indicadores desfavorables clínico-patológicas, pero mejor resultado de la quimioterapia [19]. En el presente estudio, se encontró que JWA mejoró el valor pronóstico de p53, lo que sugiere que la pérdida de JWA combinada con la mutación de p53 puede aumentar la agresividad del tumor y la metástasis, lo cual probablemente porque JWA es también un miembro de la vía de reparación del ADN y posiblemente jugar un papel mutua en la carcinogénesis gástrica. Curiosamente, incluso si ambos marcadores por separado fueron predictivos para el tratamiento de platino, la combinación no mejoró el valor predictivo, pero este resultado se ve obstaculizada por pequeño grupo de pacientes en los subgrupos. Un mayor número de pacientes tratados con regímenes de quimioterapia a base de platino se debe incluir en nuestro estudio futuro para validar nuestros resultados. Además, ningún efecto regulador directo se demostró entre p53 y JWA (datos no mostrados), tal vez actúan en diferentes vías de reparación [17], [18], [45] - existe [48] e indirecta relación entre ellos en determinadas situaciones. Por otra parte, p53 y JWA pueden regular de forma sinérgica las mismas moléculas o vías de señalización que debe ser dilucidado en estudios posteriores.
En resumen, hemos puesto de manifiesto un valor combinado de p53 tumoral con JWA factores pronósticos como eficientes por primera vez , a lo mejor de nuestro conocimiento. A pesar de que un compañero de acción definida de estas dos proteínas aún no se ha probado, puede proporcionar los predictores potenciales para la quimioterapia adyuvante con un régimen basado en platino.
Apoyo a la Información
Figura S1. Diagrama
Consort para el estudio de microarrays de tejidos
doi:. 10.1371 /journal.pone.0052348.s001 gratis (TIF)
figura S2.
Imágenes representativas de la tinción inmunohistoquímica de p53 en el cáncer gástrico humano. A, tinción negativa; B, tinción positiva débil; C, tinción positiva moderada; D, fuerte tinción positiva (A-D: barra de escala, 25 micras)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0052348.s002 gratis (TIF)
Figura S3.