Extracto
Antecedentes
La señalización angiogénico VEGF-independiente juega un papel importante en el desarrollo de cáncer colorrectal (CRC). Sin embargo, no se ha informado de su implicación en la evolución clínica de la CRC. Este estudio tuvo como objetivo investigar la asociación entre las variaciones genéticas en varios de los principales genes de la vía de señalización de VEGF-independiente y la supervivencia global de los pacientes con CCR.
Métodos
siete polimorfismos de nucleótido único (SNP) en cuatro importantes genes angiogénicos VEGF-independiente (
ANGPT1
,
AMOT
,
DLL4
y
ENG
) se genotipo en una población china con 408 pacientes con CCR.
resultados
Un SNP, rs1954727 en
ANGPT1
, se asoció significativamente con la supervivencia global CRC. En comparación con los pacientes con el genotipo de tipo salvaje homocigotos de rs1954727, aquellos con los genotipos variantes heterocigotos y homocigotos mostraron una supervivencia global favorable con una razón de riesgo (HR) de confianza de 0,89 (95% intervalo [IC] 0,55 a 1,43,
P
= 0,623) y 0,32 (IC del 95%: 0,15 hasta 0,71,
P
= 0,005), respectivamente (
P
tendencia = 0,008). En el análisis estratificado, esta asociación siguió siendo significativa en los pacientes que reciben quimioterapia (
P = 0,012
tendencia), pero no en aquellos sin quimioterapia. Además, evaluó los efectos de la quimioterapia en la supervivencia CRC que se estratificó por genotipos rs1954727. Se encontró que la quimioterapia resultó en una supervivencia global significativamente mejor en los pacientes con CRC (HR = 0,44; IC del 95%: 0,26 a 0,75,
P
= 0,002), lo que fue especialmente importante en aquellos pacientes con el genotipo heterocigótico de rs1954727 (HR = 0,45; IC del 95%: 0,22 hasta 0,92,
P = 0,028
).
Conclusión
Nuestros datos sugieren que rs1954727 en
ANGPT1
gen podría ser un biomarcador pronóstico para la supervivencia global de los pacientes con CCR, especialmente en aquellos que reciben quimioterapia, un hallazgo que garantiza validación en poblaciones independientes más grandes
Visto:. Dai J, Wan S, Zhou M, Myers RE, Guo X, Li B, et al. (2012) polimorfismo genético en una resección quirúrgica VEGF-angiogénesis Independiente Génica ANGPT1 y la supervivencia global de los pacientes con cáncer colorrectal después. PLoS ONE 7 (4): e34758. doi: 10.1371 /journal.pone.0034758
Editor: Masaru Katoh, Centro Nacional del Cáncer, Japón
Recibido: 7 Octubre de 2011; Aceptado: March 5, 2012; Publicado: 4 Abril 2012
Derechos de Autor © 2012 Dai et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. El trabajo informó aquí está apoyado por una beca de puesta en marcha de la Universidad Thomas Jefferson, conceder 2009CB521704 del Programa Nacional de Investigación básica de China, y otorgar 30872927 de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
a nivel mundial, el cáncer colorrectal (CCR) es el tercer cáncer más común y la cuarta causa principal de muerte por cáncer con un estimado de 1.234.000 nuevos casos y 608.000 muertes en 2008 [1]. CRC es una enfermedad que es en gran medida influenciada por el estilo de vida y factores de la dieta [2], sin embargo, estudios recientes han sugerido que las variaciones genéticas entre individuos pueden afectar de manera significativa el riesgo de CCR [3], [4], [5]. Además, la acumulación de pruebas, incluidos los de nuestros propios estudios, también se ha demostrado que los polimorfismos de nucleótido único (SNP) se pueden utilizar como biomarcadores sustitutos de los antecedentes genéticos de los pacientes de CRC para predecir la respuesta terapéutica y el pronóstico [6], [7], [8], [9].
la angiogénesis tumoral, la generación de nuevos vasos sanguíneos, es un proceso celular clave que influye en el crecimiento de células tumorales, invasión, recidiva locorregional y diseminación metastásica del CRC, por lo que es un objetivo atractivo para el desarrollo de fármacos contra el cáncer el crecimiento celular [10] .El tumoral, invasión y metástasis están muy influenciados por el equilibrio de las funciones de los factores angiogénicos y anti-angiogénicos endógenos [10]. Los factores de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y sus receptores (VEGFRs) desempeñan un papel central en la vía de la angiogénesis [11]. Los inhibidores funcionales de VEGF y VEGFR, tales como anti-VEGF neutralizar moléculas de anticuerpos y pequeñas que bloquean la actividad de la tirosina quinasa de VEGFR, han sido aprobados como terapias anti-angiogénesis para muchos tipos de cáncer, incluyendo CRC [12]. Sin embargo, la amplia resistencia a los tratamientos antiangiogénicos dirigidos a las vías de VEGF estimuló la búsqueda de tratamientos dirigidos a la angiogénesis vía VEGF-independiente [12], [13], tales como vías pro-angiogénicos mediadas por angiopoyetinas /TIE-2 y Delta /Notch [14], [15], así como anti-angiogénico rutas mediadas por angiomotin y endoglina proteínas [16], [17].
las variaciones genéticas en el
VEGF
gen tienen se ha informado de modular la expresión del gen VEGF [18], [19], [20]. También han sido asociados con la etiología y los resultados clínicos de CRC [21], [22], [23]. Sin embargo, aunque los estudios básicos han revelado un papel esencial de los genes de la vía VEGF-independiente de la etiología y la evolución clínica de la CRC, ningún estudio ha informado sobre la asociación entre las variaciones genéticas de estos genes y el pronóstico del CCR. El objetivo de este estudio piloto fue evaluar la asociación entre los SNPs en varias de las principales vía de los genes angiogénicos VEGF-independiente con la supervivencia global de los pacientes con CCR.
Materiales y Métodos
Ética
Este estudio fue aprobado por las juntas de revisión institucional de la Cuarta Universidad médica Militar. Se obtuvo un consentimiento informado por escrito con una firma para cada paciente.
Población de pacientes y la recopilación de datos clínicos
Este estudio se centró en los SNPs del gen VEGF-angiogénesis independiente como posibles predictores de pronóstico CRC. Por lo tanto, todos los sujetos incluidos en este estudio habían confirmado histopatológicamente CRC. Originalmente, 496 pacientes con CCR fueron reclutados entre febrero de 2006 y abril de 2010, de los Departamentos de Cirugía General en el Hospital y el Hospital Xijing Tangdu que están afiliados a la Cuarta Universidad Médica Militar en Xian, China. No hubo restricciones de contratación sobre la edad, el sexo y la etapa del cáncer. Todos los pacientes con CRC no tenían historia previa de otros tipos de cáncer, quimioterapia o radioterapia. Todos los pacientes con CCR fueron recientemente diagnosticados y confirmados histopatológicamente como tener adenocarcinoma. A los efectos de este estudio, 88 pacientes fueron excluidos, por las siguientes razones: no se sometieron a la cirugía u operación paliativa sólo recibió (26 pacientes), tenían información incompleta clínica o carecían de seguimiento (48 pacientes), murió el plazo de un mes de cirugía (6 pacientes) y tenía mala calidad y /o cantidad de muestra de ADN (8 pacientes). Finalmente, 408 pacientes con resecado quirúrgicamente clínica completa y datos de seguimiento, así como muestras de ADN de alta calidad se incluyeron en el presente estudio. Todos los pacientes eran chinos Han.
Los datos demográficos y clínicos
información demográfica y clínica detallada se recogió mediante entrevista personal, revisión de la historia médica, o consulta con los médicos tratantes. Los datos demográficos recogidos incluyen la edad, el género, el origen étnico, la condición de fumador, estado bebiendo, y el índice de masa corporal (IMC). Los datos clínicos recogidos incluyen la hora del diagnóstico, el momento de la cirugía y /o quimioterapia, momento de la muerte, el estadio tumoral, la diferenciación, la ubicación del sitio, la linfa invasividad nodo, protocolo de tratamiento, y el suero CEA (antígeno carcinoembrionario). Un estándar de seguimiento se llevó a cabo por un especialista clínico entrenado a través de entrevistas en el lugar, llamada directa, o revisión de la historia médica. Se obtuvieron los últimos datos de seguimiento en este análisis, en febrero de 2011. Por paciente inscrito después de agosto de 2008, 5 ml de sangre estaba disponible para la extracción de ADN genómico utilizando el E.Z.N.A. Midi Kit de ADN de la sangre (Omega Bio-Tek, Norcross, GA). Para los pacientes inscritos antes de agosto de 2008, se extrajo ADN genómico a partir de aproximadamente 100 mg de los tejidos normales adyacentes obtenidos por un patólogo después de la cirugía usando el E.Z.N.A. Kit de ADN de tejidos (Omega Bio-Tek).
selección SNP y genotipado
Se estudiaron cuatro principales genes en la vía angiogénicos VEGF-independiente, incluyendo
AGNPT1
que codifica una agonista TIE2 que estimula la vía de señalización de PI3K-Akt como una señal de supervivencia y estabiliza los vasos sanguíneos,
DLL4
(Delta-como 4 ligando), que codifica una proteína que se secreta a partir de células endoteliales y promueve la angiogénesis mediante la supresión de no brotación -funcional de las células endoteliales vasculares,
AMOT
(Angiomotin) que codifica un inhibidor de angiostatina que media la formación de tubos y migración de células endoteliales hacia factores de crecimiento durante la formación de nuevos vasos sanguíneos, y
ENG
(endoglina) que codifica un componente del complejo del receptor del factor de crecimiento transformante beta implicados en la angiogénesis, el desarrollo cardiovascular, y la homeostasis vascular. SNP potencialmente funcionales, en las regiones funcionales que incluyen promotores, exones y regiones no traducidas (UTRs) fueron seleccionados utilizando un conjunto de herramientas de selección SNP basados en la Web (disponible gratuitamente en http://snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) , por el cual se puede seleccionar SNPs basados en desequilibrio de ligamiento (LD) y pronosticado características funcionales de SNPs tanto codificantes y no codificantes. Las 'y 3' que flanquean las regiones 5 se establecieron arbitrariamente en 1000 pb para todos los genes. Sólo se seleccionaron SNPs validados y SNPs con menor frecuencia alelo (MAF) & lt; fueron excluidos del 5% de la población asiática. En el caso de múltiples SNP potencialmente funcionales dentro del mismo bloque de haplotipos (definida por el coeficiente de vinculación r
2 & gt; 0,8), sólo un SNP se incluyó. Por último, se identificaron un total de siete SNPs para los cuatro genes, incluyendo dos SNPs en
ANGPT1
(rs1954727 y rs9297395), tres SNPs en
AMOT gratis (rs2286064, rs2286063, rs640009), uno SNP en
DLL4 gratis (rs12439845) y un SNP en
ENG gratis (rs7865146). La genotipificación se realizó utilizando el sistema de determinación del genotipo Sequenom IPLEX (Sequenom Inc, CA). El personal de laboratorio que llevan a cabo el genotipado estaban cegados a la información de los pacientes. La tasa media de las llamadas para el genotipado fue del 99,4%. se llevaron a cabo medidas de control de calidad estricto durante el genotipado con más del 99% de concordancia entre las muestras con genotipo por duplicado.
El análisis estadístico
La variable evaluada en este estudio fue la supervivencia global, definida como el tiempo desde la cirugía inicial a la muerte o el último seguimiento. razón de riesgo (HR) y el intervalo de confianza del 95% (IC del 95%) se estimaron usando un multivariante de Cox de riesgos proporcionales, ajustando por edad, sexo, tabaquismo, el consumo de estado, el IMC, la posición del tumor, la diferenciación del tumor, el estadio tumoral y la quimioterapia , donde corresponda. Haplotipo /diplotype se determinó utilizando el software HelixTree (Golden Helix, Inc.), y HR se estimó por multivariante de Cox de riesgos proporcionales, utilizando el haplotipo /diplotype que contiene todos los alelos de tipo salvaje como referencia. Las pruebas de las interacciones entre los SNPs y fuente de ADN se llevaron a cabo mediante la inclusión de un término de producto cruzado en el modelo de riesgos proporcionales de Cox. Se utilizó la prueba de log-rank para evaluar las diferencias de supervivencia global entre los diferentes grupos de pacientes. SAS paquete estadístico (software SAS versión 9,2, Cary, NC) se utilizó para los análisis. Todos los valores de
P
en este estudio fueron de dos caras.
P
≤0.05 se consideró el umbral de significación estadística.
Resultados
Características de los pacientes
Un total de 408 pacientes con CCR resecado quirúrgicamente fueron incluidos en este estudiar, con una edad media de 59,4 años (rango, 22 a 90 años) y la media de IMC de 22,7 (intervalo de 15,8 a la 32.9). Entre los pacientes, el 56,4% (n = 230) eran varones y el 46,6% (n = 178) eran mujeres. La mayoría de los pacientes nunca eran fumadores (70,8%) y nunca bebedores (89,5%). El porcentaje de los pacientes con cáncer de colon (47,1%) fue ligeramente menor que los pacientes con cáncer de recto (52,9%). Sobre el 47,1% de los pacientes tenían tumor etapa II, mientras que la etapa 0, I, III y IV de tumores estaban presentes en el 2,0%, 14,2%, 27,2% y 9,6% de los pacientes, respectivamente. Aproximadamente el 66,4% de los pacientes había diferenciado moderadamente tumores y el 78,2% de los pacientes fueron tratados con quimioterapia después de la cirugía. En una mediana de seguimiento de 22,9 meses, aproximadamente el 23,0% (n = 94) de los pacientes habían fallecido a partir del último seguimiento (febrero de 2011) (Tabla 1).
Asociación entre SNPs y la supervivencia global en pacientes con CRC
las asociaciones de los siete SNPs seleccionados con la supervivencia CRC se analizaron mediante análisis univariado y multivariado de ajustar por edad, sexo, tabaquismo, estado bebiendo, el IMC, la posición del tumor, la diferenciación del tumor , el estadio del tumor, y la quimioterapia. Los resultados se resumen en la Tabla 2. Entre ellos, un SNP, rs1954727 situado en la región 3 'UTR del
ANGPT1
gen, se asoció significativamente con la supervivencia global en pacientes con CCR en tanto univariante y multivariante. En el análisis multivariado, en comparación con el genotipo homocigoto de tipo salvaje (WW), el heterocigoto (Virginia Occidental) y la variante de genotipo homocigoto (VV) de rs1954727 se asoció con un RR de 0,89 (IC del 95%: 0,55 a 1,43,
P
= 0,623) y 0,32 (IC del 95%: 0,15 a 0,71,
P
= 0,005), respectivamente, con observó un efecto dosis-respuesta significativa (
P
tendencia = 0,008, Tabla 2 ). Log rank test indica una diferencia significativa en la supervivencia general entre los de tipo salvaje y la variante genotipos homocigotos de rs1954727 (log rank
P = 0,019
, Figura 1). Estos resultados indicaron que rs1954727 fue un predictor independiente de supervivencia CRC en la población estudiada. Además, se seleccionaron al azar 50 pacientes incluidos en este estudio con la sangre y los tejidos normales disponibles y el genotipo de todos los siete SNPs en ambos ADNs de sangre y tejidos para estos pacientes. Los resultados de genotipado fueron 100% concordantes entre las muestras de sangre y de ADN de tejidos. Por otra parte, para cada uno de los siete SNPs, se realizó una prueba de interacción (heterogeneidad) entre la fuente de SNP y ADN y no identificó ninguna interacción significativa (
P Opiniones de interacción para la supervivencia global oscila entre 0,143 para rs1954727 a 0,651 para rs2286063, datos no mostrados). En conjunto, estas líneas de evidencia indican que las diferentes fuentes de ADN no afectaron los resultados identificados en este estudio.
Asociación de rs1954727 con la supervivencia global de los pacientes con CCR estratificado por las características del huésped
además, se analizó el efecto de rs1954727 en la supervivencia global en pacientes con CRC estratificados por características demográficas y clínicas. Como se muestra en la Tabla S1, se observó la mejor supervivencia global significativa conferida por rs1954727 en pacientes de mayor edad (HR = 0,12; IC del 95%, ,03-,60,
P
= 0,010), pacientes de sexo masculino (HR = 0,20; 95% CI, 0,05 a 0,75,
P = 0,017
), nunca fumadores (HR = 0,28; IC del 95%, desde 0,11 hasta 0,73,
P
= 0,009), nunca bebieron (HR = 0,35, 95% CI, 0,15 a 0,84,
P = 0,018
), y los pacientes con menor nivel de educación (HR = 0,28; IC del 95%, 0,08 a 0,94,
P = 0,040
), con quimioterapia (HR = 0,33; IC del 95%, desde 0,14 hasta 0,79,
P = 0,012
), con el cáncer de colon (HR = 0,09; IC 95%, 0,02-0,40,
P
= 0,002), con pobres y moderada diferenciación tumoral (HR = 0,32 IC 95%, 0,13 a 0,78,
P = 0,012
), con el estadio 3 o 4 tumores (CI HR = 0,16, 95%, 0,04 a 0,65,
P = 0,011
), y con tanto mayor o menor índice de masa corporal (HR = 0,20; IC del 95%, 0,04 a 0,97,
P = 0,045
, o HR = 0,32; IC del 95%, 0,11-0,92,
P = 0,035
, respectivamente). El efecto dependiente de la dosis significativa conferida por rs1954727 era evidente en los pacientes que eran mayores (
P
tendencia = 0,006), macho (
P
tendencia = 0,012), nunca se fumador (
P
tendencia = 0,021), no bebedor (
P
tendencia = 0,025), y los pacientes con un mayor índice de masa corporal (
P
tendencia = 0,025), con quimioterapia (
P
tendencia = 0,012), con la posición del tumor de cáncer de colon (
P
tendencia = 0,012), con pobres y moderada la diferenciación del tumor (
P
tendencia = 0,016), y con el estadio tumoral avanzado de 3-4 (
P
tendencia = 0,003). Entre los 319 pacientes que reciben quimioterapia, 308 (96,6%) recibieron el régimen FOLFOX, incluyendo el ácido folínico (FOL), fluorouracilo (F) y oxaliplatino (OX). La restricción del análisis a aquellos pacientes que recibieron el FOLFOX obtuvo resultados similares a los del análisis actual (datos no mostrados).
efectos de la quimioterapia de modulación sobre la supervivencia global CRC por rs1954727
Debido a que la mayoría de CRC pacientes en este estudio fueron tratados con quimioterapia, se evaluó adicionalmente los efectos moduladores en la asociación entre la quimioterapia y la supervivencia global de pacientes, estratificada por rs1954727. Como se muestra en la Tabla 3, los pacientes que recibieron quimioterapia tuvieron una supervivencia global significativamente mejor con un HR de (IC 95%, 0,26-0,75,
P
= 0,002) 0,44, en comparación con los pacientes sin quimioterapia. Este efecto significativo sobre la supervivencia de los pacientes conferida por la quimioterapia sólo se observó en los pacientes con el genotipo heterocigótico de rs1954727 en el análisis estratificado (HR = 0,45; IC del 95%: 0,22 hasta 0,92,
P = 0,028
), pero no en los que llevan las de tipo salvaje o variante del genotipo homocigótico.
haplotipo y diplotype de
ANGPT1
gen y el CRC supervivencia global
los análisis de haplotipos y se llevaron a cabo a diplotype evaluar el efecto combinado de los dos SNPs en el
ANGPT1
gen sobre la supervivencia global CRC. Como se muestra en la Tabla 4, había cuatro haplotipos en el orden de rs9297395 y rs1954727 (W_W: 52,5%, W_V: 42,2%, V_W: 4,3%, y V_V: 1,0%) y tres diplotypes (W_W-W_W: 28,8%, W_W-W_V: 44,3%, y W_V-W_V: 19,7%) con una frecuencia & gt; 1% en la población de estudio. En comparación con el haplotipo que contiene el alelo de tipo salvaje para los dos SNPs (W_W), los pacientes con el haplotipo de W_V mostraron una supervivencia global significativamente mejor (HR = 0,59, IC 95% 0.42-0.83,
P
= 0,002), que era consistente con el análisis principal efecto del SNP rs1954727. Para el análisis diplotype, cuando se compara con el diplotype que contiene el genotipo de tipo salvaje homocigotos para ambos SNPs (W_W-W_W), diplotype que contiene una copia del haplotipo W_V (W_W-W_V) y dos copias de W_V haplotipo (W_V-W_V) exhibió un mejorado progresivamente la supervivencia general con un HR de 0,74 (IC del 95%: 0,44 a 1,24; p = 0,247) y 0,30 (IC del 95%: 0,13 hasta 0,67,
P
= 0,004), respectivamente. También se realizó el haplotipo y análisis diplotype para los tres SNPs en
AMOT
gen, sin embargo, no se observaron hallazgos significativos (datos no mostrados).
Discusión
en este estudio, se informó de una asociación significativa de la supervivencia global en una cohorte de 408 pacientes con CCR tratados quirúrgicamente con una variante genética, rs1954727, en
ANGPT1
, un gen clave en la señalización de VEGF-angiogénico independiente camino. Por otra parte, hemos identificado una interacción plausible entre este SNP y la quimioterapia en la modulación de supervivencia de los pacientes de CRC.
Inhibidores de la angiogénesis dirigidos a las vías, tales como bevacizumab, sunitinib, sorafenib y señalización VEGF, han demostrado una eficacia terapéutica significativa en varios tipos de cáncer y sido aprobado por la Administración de Alimentos y Fármacos de Estados Unidos en el tratamiento del cáncer [24]. Sin embargo, estos tratamientos anti-angiogénesis VEGF-dirigido con frecuencia dan lugar a respuestas transitorias sólo en pacientes con cáncer, debido principalmente a los dos modos de resistencia a la inhibición de la angiogénesis, la resistencia intrínseca de adaptación y la falta de respuesta [13]. Ambos modos de resistencia se pueden atribuir a la heterogeneidad inherente de las células tumorales genéticamente inestables, la presencia de factores angiogénicos redundantes, y el reclutamiento de células hematopoyéticas y células inflamatorias en la masa del tumor [13]. Es concebible que los enfoques terapéuticos dirigidos simultáneamente múltiples factores angiogénicos, las vías inflamatorias y procesos de metástasis podrían inducir respuestas significativas [25] más clínicamente. La vía ANGPT-TIE presenta una oportunidad atractiva para una intervención de este tipo terapéutico, ya que no sólo es crucial para la angiogénesis y la homeostasis vascular de una manera VEGF-independiente, sino que también proporciona un enlace importante entre la angiogénesis y las vías de inflamación [25].
familia de proteínas ANGPT-TIE humano se compone de tres ligandos, ANGPT1, ANGPT2 y ANGPT4, así como dos receptores, TIE1 y TIE2. ANGPT1 es el mediador más importante de la vía VEGF-independiente pro-angiogénico de señalización, que activa la vía PI3K /AKT aguas abajo a través de la interacción con la proteína TIE2 [26], [27]. ANGPT2 inhibe ANGPT1 la unión al receptor Tie2 y previene su activación [28]. Se requiere equilibrio dinámico y la expresión secuencial de ANGPTs y VEGF para el mantenimiento de la angiogénesis [29], [30]. La sobre regulación de ANGPT1 se ha investigado en muchos tipos de cáncer, lo que sugiere que ANGPT1 está fuertemente correlacionado con la malignidad del tumor [25]. Sin embargo, varios estudios han informado de un efecto inhibidor de ANGPT1 en la expansión vascular patológico, lo que indica que ANGPT1 también puede funcionar como un supresor de tumores en varios tipos de cáncer, incluyendo CRC [31], [32], [33], [34]. Estos resultados fueron consistentes con los informes de varios estudios independientes que muestran que la mayor proporción de ANGPT2 /ANGTP1 se asoció con un mal pronóstico de varios tumores malignos, incluyendo CRC [25]. Estos hallazgos sugieren que los efectos paradójicos de ANGPT1 sobre las características del tumor y el pronóstico puede ser específica para el cáncer y también depende de otros genes relacionados con la angiogénesis.
Las variaciones genéticas en los genes ANGPT pueden conducir a la producción de genes alterados y como resultado la activación /la inactivación del gen. SNPs en
ANGPT1
gen se han asociado con el riesgo de enfermedades como las enfermedades autoinmunes, artritis idiopática juvenil, y la hipertensión portopulmonar [35], [36]. Sin embargo, hasta la fecha, no ha habido ningún estudio que informó una asociación de
ANGPT1
SNPs con el riesgo y el resultado clínico de los cánceres. En este estudio, hemos identificado un
ANGPT1
SNP, rs1954727, que puede predecir la supervivencia global de los pacientes con CCR después de la cirugía. Este SNP se encuentra en el 3 'UTR de
ANGPT1
gen. SNPs funcionales en esta región pueden afectar a la estabilidad del ARN mensajero o unión de microARN. Una búsqueda de la base de datos de bioinformática PolymiRTS no identificó ningún sitio de unión miARN potencial en la región circundante inmediata de este SNP [37]. Sin embargo, una búsqueda adicional condujo a la identificación de cuatro SNPs en el 3'UTR de
ANGPT1
gen que se encuentra dentro de putativo miARN regiones de unión (datos no mostrados). El SNP más cercana está a unos 600 nucleótidos lejos de rs1954727. Se necesitarán caracterizaciones funcionales tales como PCR en tiempo real, seguido de ensayo de luciferasa para determinar si rs1954727 tiene ningún efecto fisiológico directo sobre la expresión del ARN mensajero de
ANGPT1
.
En el análisis estratificado, nos encontramos el efecto protector conferido por rs1954727 fue más prominente en pacientes que reciben quimioterapia (Tabla S1). Estudios previos han informado de un aumento significativo de la actividad antitumoral de la utilización conjunta de anticuerpos ANGPT1 y la quimioterapia en el tratamiento de tumores sólidos, incluyendo CRC [38]. Estas líneas de evidencia nos llevó a evaluar más a fondo el efecto modulador de la quimioterapia en la supervivencia de los pacientes estratificados por los genotipos de rs1954727. Consistente con el hallazgo de que los genotipos variantes de rs1954727 confieren una mejor supervivencia global en pacientes tratados con quimioterapia, encontramos la mejora de la supervivencia conferida por la quimioterapia sigue siendo evidente en los pacientes con el genotipo heterocigótico de rs1954727 (Tabla 4). También hemos observado que en los pacientes con la variante rs1954727 genotipo homocigótico de la
P
valor no fue significativa (p = 0,297), aunque la mejora de la supervivencia global conferida por la quimioterapia era mucho más prominente (HR = 0,19). Esto puede ser debido a una estimación inestable resultante de la pequeño número de pacientes en este grupo (sólo 1 muerte en pacientes sin quimioterapia, Tabla 3) estudios .Future con mayor tamaño de muestra se necesitan para proporcionar suficiente poder estadístico para el análisis de las interacciones entre rs1954727 y la quimioterapia en la supervivencia de los pacientes
.
Hay varios puntos fuertes en este estudio. Los pacientes fueron reclutados de Xi'an y zona adyacente, una región que es altamente atractiva para la realización de la investigación basada en la población debido a la estabilidad geográfica con baja tasa de movilidad. Además, los pacientes analizados en este estudio fueron altamente homogénea, en que todos los pacientes tenían adenocarcinoma y fueron tratados quirúrgicamente para eliminar los tumores primarios. Además, todos los tratamientos de quimioterapia se iniciaron dentro de los 2 meses de la cirugía y casi el 80% de los pacientes recibieron quimioterapia. Las características altamente homogéneos de pacientes y tratamientos, así como la baja tasa de pérdida de pacientes durante el seguimiento, reducen en gran medida los efectos de confusión de las modalidades terapéuticas heterogéneos en muchos otros estudios de biomarcadores similares de CRC pronóstico. Las limitaciones de este estudio incluyen la cuestión de generalizar, ya que nuestro estudio se limitó a los chinos Han. La evaluación adicional es necesaria para determinar si estos resultados pueden generalizarse a otros grupos étnicos. Por otra parte, el tamaño de la muestra moderada limita la validez de algunos análisis estratificados con el tamaño pequeño de la muestra. Se analizó la potencia de estudio para el análisis principal efecto, así como el análisis de quimioterapia estratificado. Bajo la condición de un modelo genético aditivo (utilizado en el análisis de este estudio), con efectos monótona, un MAF de 43,5% para rs1954727, el único SNP significativos identificados en este estudio, el 23,0% de tasa de mortalidad entre la población total del estudio, una tiempo medio hasta la muerte de 15,2 meses en los pacientes fallecidos y un tiempo medio de seguimiento de 23,9 meses en los pacientes censurados, tenemos aproximadamente el 82% de potencia para detectar un HR de 0,6 (genotipo heterocigótico vs. genotipo de tipo salvaje homocigotos) y 0,4 (variante de genotipo homocigoto vs. genotipo de tipo salvaje). La potencia es ligeramente superior si se utiliza una prueba de tendencia. Cuando el análisis se restringe a los pacientes que reciben quimioterapia, nuestro poder es de aproximadamente 70% para detectar los tamaños del efecto antes mencionados. Sin embargo, nuestro poder es limitado cuando el análisis se limita a los 89 pacientes sin quimioterapia o algunos otros SNPs no significativas en este estudio que tienen una baja MAF, y los resultados de estos análisis con menos potencia son exploratorios y debe interpretarse con precaución . No obstante, la inscripción de esta población está aún en curso, con una baja tasa de pérdida del paciente, lo que nos permitirá obtener una mayor potencia estadística para un análisis en profundidad en el futuro.
En conclusión, nuestro hallazgo sugiere que una polimorfismo genético en
ANGPT1
gen se asocia con una supervivencia global significativamente mejor en los pacientes con CCR después de la cirugía. Se necesitan más estudios con poblaciones más grandes para validar este hallazgo.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
Asociación de rs1954727 en ANGPT1with la supervivencia global en pacientes con CRC estratificados por características del huésped.
doi: 10.1371 /journal.pone.0034758.s001 gratis (DOC)
Reconocimientos
Agradecemos al Dr. Marie Dennis y Heidi cisne (División de Población de la Ciencia, Departamento de Oncología médica, Thomas Jefferson University) para la edición científica.