Extracto
Uno de los últimos avances en la investigación del cáncer es la identificación de mutaciones activadoras en diversas receptor tirosina quinasa (RTK) vías en muchos tipos de cáncer, incluyendo el cáncer colorrectal (CCR). Nuestra hipótesis es que, alternativa a las mutaciones, la sobreexpresión de varios RTK oncogénicos también puede sustentar CRC patogénesis, y diferente RTK puede acoplar con distintas vías de señalización corriente abajo en diferentes subtipos de CCR humano. Por inmunohistoquímica, se muestra aquí que los miembros RTK ErbB2, ErbB3 y c-Met eran de hecho diferencialmente sobreexpresado en muestras de cáncer de colon de pacientes que conducen a la activación constitutiva de RTK vías de señalización. Uso de ErbB2 inhibidor específico Lapatinib y c-Met inhibidor específico PHA-665752, hemos demostrado, además, que esta activación constitutiva de señalización RTK es necesario para la supervivencia de células de cáncer colorrectal. Además, nos muestran que el patrón de RTK sobreexpresión dicta el uso de aguas abajo AKT y /o vías de MAPK. Nuestros datos son importantes adiciones a los modelos actuales de mutaciones oncogénicas, y explicar con más detalle la variación clínica en las respuestas terapéuticas de cáncer colorrectal. Nuestros hallazgos abogan por un tratamiento más personalizado a la medida de cada paciente en función de su tipo de expresión RTK, además de su estado de mutación
Visto:. Yao YL, Shao J, Zhang C, Wu JH, Zhang QH, Wang JJ , et al. (2013) proliferación del cáncer colorrectal es promovida por dos patrones de expresión de señalización de transducción: ErbB2 /ErbB3 /AKT y MET /ErbB3 /MAPK. PLoS ONE 8 (10): e78086. doi: 10.1371 /journal.pone.0078086
Editor: P. Jin Cheng, H.Lee Moffitt Centro de Cáncer & amp; Research Institute, Estados Unidos de América
Recibido: 14 Junio, 2013; Aceptado: 7 Septiembre 2013; Publicado: 30 Octubre 2013
Derechos de Autor © 2013 Yao et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por la Fundación de Desarrollo Social de Kunshan (sin. KS1130) y la Fundación para la Investigación Científica de la Universidad de Jiangsu (n. ° 11JGD0090). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer colorrectal es una neoplasia epitelial que ocurre en el colon o el recto. Más de 1 millón de personas son diagnosticadas con cáncer colorrectal cada año en todo el mundo que resulta en alrededor de 0,5 millones de muertes. En 2008, fue la segunda causa más común de muerte asociado a tumores en mujeres y el tercero más común en los hombres. Es más común en los países desarrollados que en los países en desarrollo [1] - [3]. La quimioterapia puede usarse como terapia adyuvante además de la cirugía en casi todos los pacientes con cáncer colorrectal [4] - [6]. Con o sin metástasis en los ganglios linfáticos, se considera la quimioterapia para aumentar la esperanza de vida y reducir la posibilidad de recurrencia. Los medicamentos de quimioterapia están diseñados para actuar a través de una variedad de mecanismos y pueden incluir combinaciones de agentes tales como fluorouracilo, capecitabina, UFT, leucovorina, irinotecán o el oxaliplatino [7] - [9]. Sin embargo, por diversas razones, la quimioterapia puede causar otros problemas para los pacientes debido principalmente a su ataque no específica y los efectos secundarios relacionados, tales como náuseas, vómitos, pérdida de cabello, fatiga, anemia e infección entre otros. Por lo tanto, la terapia dirigida contra el cáncer se ha convertido que ha sido desarrollado basado en el conocimiento de la señalización celular. La terapia dirigida contra el cáncer depende principalmente de los fármacos de moléculas pequeñas y anticuerpos monoclonales que causan muchos menos efectos secundarios en comparación con la quimioterapia tradicional.
señales exógenas, tales como el factor de crecimiento epidérmico (EGF) y factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) se informó anteriormente siendo vital para mantener el crecimiento sostenido de las células tumorales mediante la unión a sus receptores. Estos receptores pertenecen a la familia de receptores tirosina quinasas (RTK) y objetivos ideales en la terapia del cáncer como se ha demostrado en muchos estudios. Después de perfiles sistémica de los genomas del cáncer mediante el uso de la secuenciación de próxima generación, que ahora sabemos que la adquisición de la activación de mutaciones en los RTK o moléculas de señalización corriente abajo es uno de los principales mecanismos oncogénicos. Sin embargo, sólo un pequeño subconjunto de pacientes poseen estas mutaciones, lo que sugiere que otros mecanismos alternativos están en juego. Uno de estos mecanismos alternativos podría ser la sobre-expresión de pro-proliferación y pro-supervivencia RTK y /o uso diferencial de las vías de señalización corriente abajo. Con un análisis más a fondo de los genomas del cáncer, ahora empezamos a entender las diferencias individuales que significan biología de la enfermedad y el único requisito de la gestión clínica.
La familia del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) y c-Met están RTK que han sido reportados con frecuencia en la progresión del carcinoma colorrectal y metástasis. La activación de estos RTK puede estimular una serie de vías específicas que afectan directamente la migración de células tumorales, la supervivencia y la proliferación. La regulación aberrante de las RTK se observa a menudo en CCR avanzado. En comparación con EGFR, otros miembros de la familia EGFR, c-MET, ErbB2, ErbB3, y sus vías de señalización relacionadas son relativamente desconocido [10]. Por lo tanto, en el presente estudio, se investigó la expresión diferencial de las RTK c-MET, ErbB2, ErbB3, y las moléculas de señalización corriente en muestras primarias de pacientes con cáncer colorrectal, así como en líneas celulares de cáncer colorrectal humano representativos.
Materiales y Métodos
los pacientes
Un total de 105 muestras de cáncer colorrectal fueron investigados en este estudio y se obtuvieron de los pacientes en el momento de la resección quirúrgica y la endoscopia. tejidos colorrectales normales se obtuvieron de 40 pacientes chinos con enfermedades no tumorales tales como tediosamente largo colorrectal y malformación vascular. Todos los casos fueron tratados en el Hospital de las primeras personas de Kunshan, China entre enero de 2010 y agosto de 2011, y todas las muestras se recogieron de acuerdo con los principios expresados en la Declaración de Helsinki. el consentimiento informado por escrito documentado para la expresión génica análisis de todos los tejidos se obtuvo de todos los pacientes antes de la cirugía o un examen de endoscopia. Este estudio y el procedimiento de consentimiento fueron aprobados por el comité de ética local del Hospital de la primera gente de Kunshan, China. El diagnóstico y estadificación del cáncer colorrectal se evaluó de acuerdo con el sistema de estadificación AJCC (TNM).
Cultivo celular y reactivos
LoVo, SW948 y SW480 líneas celulares se obtuvieron a partir de ATCC. EGF fue de Sigma (Milán, Italia), HRG1-β1 y de IGF-1 a partir de R & amp; D Systems, (Minneapolis, MN). LY294002 era de Calbiochem, U0126 de Promega, PHA-665752 de Tocris Bioscience, y Gefitinib de Sequoia Research Products. Todas las líneas celulares se cultivaron en DMEM suplementado con 10% FBS, penicilina (100 U /ml) y estreptomicina (100 mg /ml) a 37 ° C en 5% de CO
2.
Western Blotting
Las proteínas se extrajeron a partir de tejidos humanos y líneas celulares, y se cuantificó usando un ensayo de proteínas (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Las muestras de proteína (30 mg) se fraccionaron mediante SDS-PAGE y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa. La inmunotransferencia se llevó a cabo utilizando anticuerpos contra ErbB2, ErbB3, p-C-MET, C-MET, p-MAPK, MAPK, p-AKT y AKT (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA). Los resultados se visualizaron utilizando un sistema de detección de quimioluminiscencia (Pierce ECL sustrato Western blot sistema de detección, Thermo Scientific, Rockford, IL) y la exposición a la autorradiografía película (película Kodak XAR).
La inmunohistoquímica (IHC)
Todos los tejidos se retiraron y se fijaron en paraformaldehído al 4% durante la noche a 4 ° C, luego se procesan y se seccionaron a 5 m de espesor. diapositivas seccionados se tiñeron inmunohistoquímicamente para ErbB2, ErbB3 y c-MET (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) seguido de incubación con anticuerpo secundario a 37 ° C durante 30 min y la reacción con el reactivo DAB durante 5-10 min. Las diapositivas fueron montadas con goma neutra para el examen microscópico. Se consideraron para ser teñidas positivamente células con gránulos intracelulares marrones (citoplasma o el núcleo).
Viabilidad de las células
Las células cultivadas se sembraron a una densidad de 6 × 10
3 células /pocillo en una placa de 96 pocillos y se trata con varios agentes. La viabilidad celular se evaluó mediante un ensayo MTS. CellTiter 96® acuosa un reactivo Solution (Promega, Madison, WI) se añadió a cada pocillo de acuerdo con las instrucciones del fabricante, y las placas se devolvieron a la incubadora. Después de 4 horas, la viabilidad celular se determinó midiendo la absorbancia a 490 nm usando un ordenador controlado lector de placas.
Análisis estadístico
Los datos se expresan como media ± desviación estándar (SD). Las comparaciones entre los dos grupos se realizaron mediante la prueba t de Student o la prueba de Mann-Whitney, según el caso. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software estadístico SPSS (versión 13.0), y t-pruebas se aplicaron a todos los datos a menos que se especifique lo contrario de dos colas. Un valor de
P
inferior a 0,05 se consideró estadísticamente significativa.
Resultados
Expresión diferencial de ErbB3, ErbB2 y c-MET en cáncer colorrectal humano
con el fin de investigar la expresión de un conjunto de genes del receptor tirosina quinasa (RTK) en el cáncer colorrectal humano, se recogieron los bloques incluidos en parafina que contenía muestras de 105 casos de cáncer colorrectal. En primer lugar, la expresión de la ErbB2 importante heterodímero oncogénico /ErbB3 se determinó por IHC. Como se muestra en la Figura 1A, ErbB3 se sobreexpresa significativamente en el tejido de cáncer colorrectal humano, con la expresión distribuida principalmente en la membrana de las células cancerosas. El socio de ErbB3 en el heterodímero, ErbB2, también se localizó principalmente en la membrana de las células de cáncer y se sobreexpresa de manera similar en el cáncer colorrectal humano (Figura 1B). Otro receptor tirosina quinasa, el proto-oncogén c-MET, también fue detectado por IHC, en la membrana de las células cancerosas en la mayoría de los casos (Figura 1C). Por último, se realizó un análisis cuantitativo de la expresión de las tres proteínas usando el software de análisis de imágenes Image-Pro Plus. Las áreas IHC-positivos de los cinco campos aleatorios de cada sección teñida-IHC se evaluaron como densidad óptica integrada (IOD). Las tres proteínas se sobreexpresa significativamente en los tejidos colorrectales humanos. (ErbB3: tejidos de cáncer de 3264 ± 1032 vs. tejidos colorrectales normales 1.038 ± 354,
P = 0,0074
, ErbB2: tejidos de cáncer de 2616 ± 2019 vs. tejidos colorrectales normales 338 ± 154,
P
= 0,016, c-MET: tejidos de cáncer de 3812 ± 739 frente a tejidos normales colorrectales 978 ± 313,
P = 0,0057
mediante la prueba de Mann-Whitney)
(A, B, C. ) La expresión de ErbB3, ErbB2 y c-MET en el cáncer colorrectal humano. Los especímenes de 105 tejidos de cáncer colorrectal embebidos en parafina se analizaron por IHC para ErbB3, ErbB2 y c-MET, y figuras representativas muestran fuerte y débil tinción /negativo para cada marcador con las respectivas muestras de control normales. Media de densidad óptica integrada (IOD) se obtuvo mediante el análisis de cinco campos de cada diapositiva, evaluados por Imagen-Pro Plus software (versión 5.0) para la tinción IHC de ErbB3, ErbB2 y c-MET. Los datos se presentan como media ± desviación estándar, y * P & lt; 0,05, ** P & lt;. 0,01 por la prueba de Mann-Whitney U
Se esperaba que los resultados de la expresión de las tres proteínas, no sólo por a su papel como proto-oncogenes, sino también porque los estudios similares anteriores han indicado resultados similares. Sin embargo, después de una investigación más, encontramos diferentes grados de variación en la expresión de estas tres proteínas en el cáncer colorrectal humano, especialmente en la expresión de ErbB2. De los 105 casos examinados, 45 casos (42,85%) fueron negativos para la tinción de ErbB2, 8 casos mostraron fuerte tinción ErbB2, y el resto (52 casos) mostraron tinción ErbB2 moderada o débil. Sólo 9 casos (8,5%) fueron negativos para la tinción de c-MET, mientras que 14 casos mostraron una fuerte tinción y 82 casos mostraron tinción moderada o débil c-MET. Curiosamente, ErbB3 fue positivo en todos los tejidos de cáncer colorrectal examinados (Figura 2A). Además, la expresión heterogénea de estas tres proteínas en cuatro tejidos de cáncer colorrectal se investigó adicionalmente por Western-blot (Figura 2B). La diferencia en la expresión entre los tejidos de cáncer y tejidos normales de las tres proteínas confirmó la fiabilidad de la tinción IHC y, además, indicó que tres tipos de patrones de expresión existían en los 105 casos. Todos los casos examinados se pueden clasificar como: ErbB3: cáncer colorrectal c-MET co-sobre-expresión, ErbB3: ErbB2 co-sobreexpresión del cáncer colorrectal, y ErbB3: ErbB2: c-MET co-sobreexpresión del cáncer colorrectal (Figura 2C). Creemos que estos resultados son un buen ejemplo de variación del patrón de expresión del tumor RTK, y además, que los mecanismos moleculares que subyacen a los diferentes patrones son dignos de exploración
.
(A) Relación de fuerte /moderada /débil /tinción negativa de ErbB3, ErbB2 y c-MET en el cáncer colorrectal humano. (B) Detección de ErbB3, ErbB2 y c-MET en proteínas extraídos de muestras de tejido de 4 casos de cáncer colorrectal. (C) diagrama de Venn que muestra la co-expresión de ErbB3, ErbB2 y c-MET.
proliferación de las células del cáncer colorrectal está mediado por cualquier ErbB3 /ErbB2 o ErbB3 /C-MET vías de señalización
con el fin de identificar las líneas colorrectales humanos adecuados celulares de cáncer correspondientes a los tres patrones moleculares que hemos descubierto en las muestras humanas, la expresión de ErbB2, ErbB3 y c-MET en 9 líneas celulares de cáncer colorrectal humano se analizó por Western Blot ( datos no mostrados). El resultado mostró que SW480 es una línea celular representativa que co-expresan ErbB2, ErbB3 y c-MET. La línea celular LoVo solamente co-sobre-expresa ErbB2 y ErbB3, mientras SW948 es una línea celular representante que co-sobre-expresa ErbB3 y c-MET (Figura 3A). La viabilidad celular se accede mediante el ensayo de MTS, y será discutido más los mecanismos relacionados. Se seleccionaron algunos inhibidores y agonistas de estas tres proteínas incluyendo PHA-665752 (PHA) y lapatinib, que son inhibidores de c-MET y el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), respectivamente. Una vez que la señalización de c-MET fue bloqueado por PHA, la viabilidad celular de SW480 y SW948 disminuyó significativamente (Figura 3 B y D); Sin embargo ningún cambio significativo en la viabilidad celular se produjo en las células LoVo, tal vez debido a su baja expresión de c-MET (Figura 3C). A la inversa, lapatinib, un inhibidor de ErbB2, redujo significativamente la viabilidad celular de las células LoVo y SW480, mientras que tiene casi ningún efecto sobre las células SW948 que tienen expresión ErbB2 bajo (Figura 3D). Las diferencias entre LoVo y las células SW948 en su respuesta a PHA y lapatinib son posiblemente debido a diferencias en su patrón de transducción de señales (Figura 3 C y D). Por otra parte, con el fin de investigar si los agonistas pueden rescatar la viabilidad celular, HGF, un agonista de c-MET, y heregulina-β1 (HRG1-β1), que se une a HER3 e induce su heterodimerización con los otros miembros de la familia, se utilizaron. Tanto HGF y HRG1-β podrían rescatar parcialmente la viabilidad de las células SW480 (Figura 3B); Sin embargo, la situación era diferente en las células LoVo y SW948. estimulación HGF causó un aumento insignificante de la viabilidad celular en las células LoVo comparación con las células LoVo tratados con PHA (Figura 3C). células SW948 respondieron más sensible a HGF, con un aumento significativo en la viabilidad celular en comparación con células SW480 PHA tratados (Figura 3D). Sin embargo SW948 células respondieron menos sensiblemente a HRG1-β1 en comparación con LoVo, tal vez debido a su baja expresión de ErbB2, pero la viabilidad celular de SW948 todavía se incrementó, posiblemente debido a los otros receptores de la familia EGFR tales como EGFR y ErbB4 que puede tanto dimerizar con ErbB3. Por lo tanto, las respuestas se exploraron diferentes debido a los diferentes patrones moleculares de la expresión: ErbB3 /ErbB2 y ErbB3 /c-MET. A continuación, la señalización corriente abajo se procedió a investigar.
(A) Detección de ErbB3, ErbB2 y c-MET en las líneas celulares de cáncer colorrectal humano LoVo, SW948 y SW480 por Western-blot. (B, C, D) La viabilidad celular se mide mediante el ensayo de MTS en las líneas celulares de cáncer colorrectal LoVo, SW948 y SW480 tratadas como se indica en la figura. Los datos se presentan como media ± desviación estándar, y * P & lt; 0,05, ** P & lt;. 0,01 por la prueba de la t de Student para datos independientes
Los diferentes patrones moleculares de cáncer colorrectal implican la activación de MAPK Aguas abajo o señalización Akt
con el fin de investigar más a fondo el mecanismo de señalización corriente abajo de los dos patrones moleculares en el cáncer colorrectal, se utilizaron lisados de células para analizar la activación de AKT y MAPK señalización que son bien conocidas las vías de señalización corriente abajo de ErbB2 /ErbB3 y ErbB3 complejos /c-Met. Un sistema inducible siRNA participó en el estudio, y la expresión de ErbB3 puede ser silenciado por el tratamiento doxiciclina (DOXY). Una vez SW948 fue tratado con PHA o DOXY, la activación de AKT y MAPK tanto fueron bloqueados. Ambas de estas dos vías de señalización podrían ser reactivados por HGF, pero no se encontró reactivación significativa cuando ErbB3 se silenció incluso con tratamiento HGF, lo que indica que la activación de MAPK señalización en SW948 dependía más de ErbB3 (Figura 4A). Se accede a la activación de AKT y MAPK señalización de una manera diferente en las células LoVo debido a su alta expresión de ErbB2 /ErbB3. Tanto la señalización de AKT y MAPK se bloquearon con eficacia cuando son tratados con DOXY y lapatinib, lo que indica un deterioro tanto en otras moléculas de EGFR ErbB3 y que puede inactivar AKT y MAPK señalización. HRG1-β1 fue capaz de activar fuertemente tanto AKT y MAPK señalización; Sin embargo su efecto sobre la activación de AKT era más dependiente de ErbB3, mientras que su efecto sobre la activación de MAPK fue más dependiente de otros miembros de la familia EGFR (Figura 4B). Además, las condiciones de tratamiento se invierten entre estas dos células. Lapatinib tiene poco efecto sobre la activación en las células SW948, pero HRG1-β1 todavía puede inducir la activación de la señalización de AKT y MAPK aunque el grado de activación es mucho más débil que en las células LoVo (Figura 4C). Del mismo modo, la PHA inhibidor de c-MET sola tiene casi ningún efecto sobre AKT y MAPK señalización, y HGF apenas puede activar cualquiera o AKT señalización de MAPK probablemente debido a su baja expresión de c-MET (Figura 4D). La especificidad de la señalización de crecimiento a través de ErbB3 /ErbB2 o ErbB3 /c-MET se estudió adicionalmente utilizando inhibidores específicos.
(A, B) Detección de AKT y MAPK señalización en las células SW948 y LoVo por Western-blot, con el tratamiento indicado en la figura. (C, D) Detección de AKT y MAPK señalización por Western-blot en células LoVo y SW948 con HGF o tratamiento HRG1-β1, con o sin diferentes agonistas o antagonistas, como se indica.
AKT y MAPK son dos Cell-vías de señalización de Gobierno viabilidad de las células de cáncer colorrectal líneas celulares con diferentes receptores patrones de expresión
con el fin de investigar más a fondo la expresión variación RTK en líneas de células colorrectales, una serie de pruebas de la viabilidad celular y la señalización celular vías se realizaron utilizando inhibidores específicos de AKT y MAPK. Para las células LoVo, la viabilidad celular se redujo significativamente cuando se tratan con LY294002, un inhibidor de la señalización de AKT. Sin embargo, no hubo ningún efecto significativo cuando se trata con un inhibidor de c-MET, U0126. Si LoVo se trató con ambos inhibidores, el efecto de rescate de HRG1-β1 en las células fue mucho más fuerte que la de HGF (Figura 5A), y señalización de análisis de activación por transferencia de Western también implicaba que la activación de tanto AKT y MAPK fue parcialmente restaurada por HRG1 -β1 incluso cuando se trata con inhibidores (Figura 5B). Este resultado indicó que la viabilidad celular no era muy dependiente de ErbB3 /c-MET /señalización MAPK pero en cambio depende de la señalización de ErbB3 /ErbB2 /AKT. Sin embargo, la situación no es la misma en las células SW948, en el que el deterioro de la viabilidad celular por el inhibidor de c-MET, U0126, era más fuerte que la causada por LY294002, y el efecto restaurador era diferente de la de las células LoVo cuando se tratan tanto con LY294002 y U0126, con el efecto restaurador de HGF de ser más fuerte que HRG1-β1, y la activación tanto de AKT y MAPK señalización está más fuertemente inducida por HGF de HRG1-β1 (Figura 5C, D). Tomados en conjunto, nuestros resultados muestran que el cáncer colorrectal presenta variación en oncogénico RTK debido a los diferentes patrones moleculares de la expresión, incluyendo ErbB2 /ErbB3 /AKT y ErbB3 /c-MET /MAPK.
Las diferencias en la viabilidad celular en LoVo (A , B) y SW948 (C, D) las células después del tratamiento con diferentes agonistas o inhibidores, como se indica. Los datos se presentan como media ± desviación estándar, y ** P & lt;. 0,01 por la prueba de la t de Student para datos independientes
Discusión
La activación de RTK es crítica para la proliferación y supervivencia de las normales y las células malignas. Recientemente, varias mutaciones activadoras RTK se han identificado en un subconjunto de pacientes con cáncer por secuenciación de próxima generación, lo que sugiere que la activación constitutiva de las RTK es uno de los mecanismos de recalce de desarrollo del cáncer. Sin embargo, la población restante de los pacientes con cáncer no poseen ningún tipo de mutaciones que implican que existen mecanismos alternativos RTK activantes. Aquí mostramos uno de esos mecanismos alternativos es la sobreexpresión de los miembros de la familia RTK de c-MET, y ErbB2, ErbB3, en células de CRC, así como líneas celulares de CRC representativos.
C-MET es una de las receptores tirosina quinasas (RTK) que están ampliamente distribuidos en la superficie de células procedentes de epitelio endotelial. Su único conocido factor de ligando, el crecimiento de hepatocitos (HGF), se expresa principalmente en células de origen mesenquimal [11]. dimerizes C-MET y autophosphorylates tras la unión del ligando, que a su vez crea sitios de acoplamiento activo para las proteínas que median la activación de señalización corriente abajo de serie incluyendo MAPK, PI3K-AKT, SRC y STAT. Numerosos estudios han informado de que c-MET se sobreexpresa en una variedad de carcinomas incluyendo pulmón, mama, ovario, riñón, colon, tiroides, el hígado y carcinomas gástricos [12] - [14]. Es bien conocido que c-MET desempeña papeles importantes en el desarrollo del cáncer a través de su proliferation- y los efectos de la angiogénesis que promueven la ejercidas por vías oncogénicas aguas abajo, y el efecto de promoción de la metástasis, que depende principalmente de la producción de metaloproteasa. Debido a su papel en la oncogénesis y la progresión del cáncer, c-MET se considera que es un objetivo importante en la terapia contra el cáncer, y algunos antagonistas biológicos o anticuerpos monoclonales dirigidos c-MET han surgido que son conocidos como c-MET TKI [15] - [ ,,,0],18]. Ciertas líneas de cáncer gástrico y celulares de cáncer muestran una sensibilidad exquisita c-MET TKI, pero, células /tumores tratados con c-MET TKI eventualmente desarrollan resistencia. Esta resistencia a la c-MET TKI es el resultado de la superación de la inhibición a través de alta MAPK sostenida y la actividad PI3K /AKT, y miembros de la familia EGFR puede actuar como receptores complementarios para MAPK y la activación de PI3K /AKT mientras que c-MET se bloquea [19] - [22]. Mientras adquisición de nuevas mutaciones puede ser una de las posibles explicaciones a esta resistencia en el tratamiento clínico, la activación de mutaciones de varios RTK incluyendo ErbB2, ErbB3 y c-MET se descubrieron en el cáncer colorrectal humano y otros tipos de cáncer [23] - [27]. RTK sobreexpresión y la activación de la señal dowmstream proporcionan una alternativa y un mecanismo de conexión. Sin embargo, la variabilidad de los niveles de expresión oncogénica RTK también puede subrayar la importancia de la terapia del cáncer individualizada.
En el presente estudio, no sólo confirmó la sobreexpresión de c-MET, ErbB2 y ErbB3 en el cáncer colorrectal humano , pero también ha revelado la variación y complementaria de estos receptores. Por otra parte, se identificaron
in vitro
modelos de líneas celulares con diferentes patrones de expresión moleculares que muestran una diferente sensibilidad al tratamiento de ambos antagonistas y agonistas de c-MET y la señalización del EGFR.
El gen ErbB2 es también se conoce comúnmente como Her-2 /neu, uno de los receptores del factor de crecimiento de señalización relacionadas con la proliferación celular, la adhesión y el movimiento [28] de células principales, [29]. También es un objetivo caliente para el desarrollo de fármacos basados en la señalización. Trastuzumab, uno de los fármacos relacionados dirigidos ErbB2, se une a ErbB2 e induce desacoplamiento de heterodímeros HER2-HER3 independiente de ligando, inhibiendo de este modo la señalización aguas abajo. Sin embargo, varios estudios han puesto de manifiesto que el tratamiento con trastuzumab puede inducir resistencia tanto por la amplificación de la señalización a través de otros receptores ErbB y por diafonía con las RTK heterólogos [30] - [32]. Como mostramos en el presente estudio, c-MET también se ha encontrado que se upregulated en las células que sobreexpresan ErbB2-trastuzumab resistente después de la exposición al trastuzumab. Por otra parte, un estudio mecanicista reveló que la activación de c-MET protege las células contra el trastuzumab, mediante la anulación de la inducción de p27. Esto es consistente con los resultados obtenidos en nuestro estudio, mostrando que existen patrones moleculares diferentes en el cáncer colorrectal humano. la expresión heterogénea de ErbB2 y ErbB3 con diferentes combinaciones de las RTK implícitas potencialmente diferentes proyectos de quimioterapia
Se anticipa que un número creciente de medicamentos basados en la vía de señalización molecular emergerá, dirigido a una variedad de objetivos.; sin embargo, es muy posible que ninguno de estos fármacos solos tendrá un efecto anti-tumor dominante. La terapia de combinación para el cáncer es un continuo y el desarrollo de concepto y de manera importante, la detección de personal y el análisis de patrón de expresión molecular de un individuo es indispensable para la terapia más eficaz con menos efectos secundarios.