Extracto
Antecedentes
El TNF-α (TNF-α) desempeña un papel crucial en el desarrollo y progresión del cáncer gástrico. Un polimorfismo funcional, -308 G & gt; A (rs1800629), que se encuentra en el promotor de
TNFA
gen, se ha sugerido para alterar la producción de TNF-α y el riesgo de cáncer influencia. En el presente estudio, hemos tratado de investigar si este polimorfismo tiene efectos sobre el riesgo y la progresión del cáncer gástrico en una población china.
Métodos
Estamos genotipo del
TNFA
-308 G & gt; un polimorfismo utilizando el método TaqMan en un estudio de casos y controles en dos etapas que comprende un total de 1686 pacientes con cáncer gástrico y 1895 sujetos sin cáncer. La regresión logística se utilizó para evaluar las asociaciones genéticas con la aparición y progresión del cáncer gástrico.
Resultados
Se encontró una asociación significativa entre los genotipos variantes y un mayor riesgo de cáncer gástrico [
P = 0,034
, odds ratio (OR) = 1,39, 95% intervalo de confianza (IC) = 1,01-1,67, GA /AA vs GG]. Se observaron resultados similares en el estudio de la replicación de seguimiento. Cuando se combinan los datos de los dos estudios, se encontró una asociación más significativa (
P = 0,001
, OR = 1,34, IC del 95% = 1,13-1,59), especialmente para los sujetos de mayor edad (& gt; 65 años). Por otra parte, los pacientes portadores de los genotipos variantes tuvieron una mayor prevalencia de T4 etapa de la enfermedad (
P = 0,001
, OR = 2,19, IC del 95% = 1,39-3,47) y metástasis a distancia (
P
= 0,013, OR = 1,61, IC del 95% = 1,10-2,35)
Conclusiones
Nuestros resultados sugieren que el promotor funcional -308 G & gt;. Un polimorfismo en
TNFA
influir en la susceptibilidad y progresión del cáncer gástrico en la población Chinese
Visto:. Hong y, Z Ge, Jing C, Shi J, Dong X, Zhou M, et al. (2013) promotor funcional -308G & gt; una variante en factor de necrosis tumoral alpha gen se asocia con el riesgo y la progresión del cáncer gástrico en una población china. PLoS ONE 8 (1): e50856. doi: 10.1371 /journal.pone.0050856
Editor: Ramón Andrade de Mello, de la Universidad de Oporto, Portugal
Recibido: 27 de mayo de 2012; Aceptado: 29 de octubre de 2012; Publicado: 10 Enero 2013
Derechos de Autor © 2013 Hong et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado en parte por "los Seis Summit Talent" Proyecto de la provincia de Jiangsu (SWYY-71-028), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de Jiangsu (BK2011194) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (30872084, 30972444, 81001274 y). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer gástrico es el cuarto cáncer más común y la segunda causa principal de muerte relacionada con el cáncer en todo el mundo, y particularmente frecuente en algunos países, entre ellos china [1], [2]. Aunque la etiología exacta del cáncer gástrico aún no se ha identificado, acumulando estudios epidemiológicos han demostrado que la dieta, el tabaquismo, el alcohol y, especialmente,
Helicobacter pylori gratis (
H. Pylori
) la infección, son bien conocidos causas de cáncer gástrico [3], [4]. Sin embargo, una alta prevalencia de estos factores de riesgo no siempre resulta en una alta incidencia de cáncer gástrico, lo que sugiere que otros factores susceptibles tales como las variaciones genéticas y las diferencias ambientales pueden contribuir, además, a la carcinogénesis gástrica. Recientemente, la evidencia emergente sugiere que los polimorfismos genéticos en los genes candidatos se asociaron con la susceptibilidad a cáncer gástrico [5], [6], [7].
Se ha sugerido que la inflamación crónica en la mucosa gástrica inducida por la
H. pylori
infección es un paso crítico en el desarrollo de cáncer gástrico [8], [9]. En ese caso, las variaciones genéticas en genes de citoquinas relacionadas con la inflamación pueden ser potenciales factores de susceptibilidad para esta enfermedad. Una de las citoquinas importantes asociados con
H. pylori
infección es el factor de necrosis tumoral (TNF) -α que está codificada por el
TNFA
gen [10]. TNF-α es una citocina pleiotrópica producida principalmente por monocitos y macrófagos activados y juega un papel importante en la respuesta inflamatoria [11]. Se ha sugerido que la sobre-expresión de TNF-α mostró una significativa la gravedad de la dosis-respuesta como marcadores de riesgo de lesiones pre-neoplásicas a cáncer gástrico [12].
El
TNFA
gen es situado dentro de la región de clase III antígeno leucocitario humano en el cromosoma 6 (6p21) y es altamente polimórfico. Los polimorfismos en el gen
TNFA
han demostrado influir mucho en su nivel de expresión [13]. Por lo tanto, muchos estudios intentaron investigar si los polimorfismos en el promotor de
TNFA
podrían ser utilizados como determinante putativo de la susceptibilidad de diversas enfermedades, incluyendo el cáncer gástrico. Entre los numerosos polimorfismos en
TNFA
promotor, el
TNFA
-308 G & gt; Un polimorfismo se estudió ampliamente y no hay estudio funcional que sugiere que el alelo 308A se asocia con un aumento de la producción de TNF-α [14]. En cuanto a cáncer gástrico, se llevaron a cabo una serie de estudios para investigar la asociación entre el
TNFA
-308 G & gt; Un polimorfismo y el cáncer gástrico en varias poblaciones, sin embargo, forman los resultados de estos estudios siguen siendo integrador [15], [16], [17], [18], [19]. Hasta la fecha, dos publicados meta-análisis sobre este tema han sugerido que el -308 G & gt; Un polimorfismo se asocia con el cáncer gástrico en la población occidental, pero no en las poblaciones de Asia [20], [21]. En esto, en el presente estudio, se realizó un estudio relativamente grande de dos etapas de casos y controles que incluyó un total de 1686 pacientes con cáncer gástrico y 1895 sujetos sin cáncer para evaluar mejor la influencia de la
TNFA
-308 G & gt;. un polimorfismo en el riesgo de cáncer gástrico y la progresión en una población Chinese
Materiales y Métodos
Ética declaración
el estudio fue aprobado por el Consejo de Revisión Institucional de la Nanjing Universidad de Medicina, Nanjing, china. Durante el reclutamiento, consentimiento informado por escrito se obtuvo de todos los participantes involucrados en este estudio.
Estudio de población
Este es un estudio epidemiológico molecular del cáncer gástrico en curso llevado a cabo en el Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Nanjing , Nanjing, china. El diseño del estudio y los criterios de inclusión de los sujetos fueron descritos previamente en otro lugar [22]. En breve, se incluyeron dos estudios de casos y controles de base hospitalaria independientes en el presente estudio. En general, el equipo de prueba incluyó 750 casos gástricos y 835 controles de edad y sexo reclutados en el segundo hospital afiliado de la Universidad de Medicina de Nanjing, Nanjing y Hospital del Cáncer de la ciudad de Nantong, Nantong, China a partir de marzo de 2006 a enero de 2010, y la conjunto de validación incluyó 936 casos y 1.060 controles matriculados desde el hospital Popular Yixing, Yixing, china a partir de enero de 1999 a diciembre de 2006. Todos los sujetos eran de la etnia han china procedente de diferentes familias y no tenía ninguna relación de sangre. Todos los pacientes fueron diagnosticados recientemente con el estudio histopatológico confirmó, cáncer gástrico incidente y fueron reclutados consecutivamente sin restricción de edad y sexo. Las secciones histológicas de todos los casos fueron revisados por dos patólogos de forma independiente. Aquellos pacientes que tenían cáncer previo, metástasis de cáncer de origen desconocido o de otro, o se excluyeron radioterapia o quimioterapia anterior. Los controles fueron reclutados de sujetos sanos que estaban buscando un examen físico en los departamentos de pacientes ambulatorios en el hospital correspondiente y fueron a los casos por edad (± 5 años) y sexo emparejado frecuencia. Los controles sin cáncer estaban relacionados genéticamente con los casos y no tenían antecedentes de cáncer individuo. Cada paciente donó 5 ml de sangre venosa después de proporcionar un consentimiento informado por escrito. La tasa de respuesta para casos y controles fue tanto por encima del 85%.
Extracción de ADN y genotipado
Se aisló el ADN genómico conjunto y purificada a partir de leucocitos de sangre periférica por digestión con proteinasa K y fenol /extracción con cloroformo. El
TNFA
-308 G & gt; Un polimorfismo se genotipo utilizando el método TaqMan-MGB (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.), que utiliza dos sondas TaqMan MGB-alelo específico y un par de cebadores de PCR para detectar el objetivo SNP específico. La secuencia de los cebadores y sondas están disponibles bajo petición. La mezcla de reacción de 10 l contenía 20 ng de ADN genómico, 3,5 l de 2 × TaqMan Genotipado Master Mix, 0,25 l de la mezcla de cebadores y sondas y 6,25 l de agua doblemente destilada. La amplificación se realizó bajo las siguientes condiciones: 50 ° C durante 2 min, 95 ° C durante 10 min seguido de 45 ciclos de 95 ° C durante 15 seg, y 60 ° C durante 1 min. Siguiendo las instrucciones del fabricante, amplificaciones se llevaron a cabo en el 384 pocillos sistema ABI 7900HT PCR en tiempo real (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.) y la discriminación alélica se realizaron utilizando el software SDS 2.4 (Applied Biosystems, Foster City, CA, ESTADOS UNIDOS). Las tasas de genotipos de estos SNP estaban todos por encima de 98%. Para asegurar la exactitud de genotipado, dos experimentales control negativo (agua) y dos controles experimentales positivos con genotipo conocido se incluyeron en cada placa de reacción. Además, alrededor del 5% de las muestras fueron seleccionados al azar para el genotipado repetido para la confirmación; y los resultados fueron 100% concordantes
El análisis estadístico
Antes de un análisis más detallado, las frecuencias de los alelos de
TNFA
-308G & gt;. Un polimorfismo en los controles de equipo de prueba, la validación establecer y combinado expuesto fueron evaluados con arreglo a la salida de equilibrio de Hardy-Weinberg (HWE) utilizando una χ2-prueba de bondad de ajuste. Las diferencias en las distribuciones de la edad, el sexo y las frecuencias de genotipos de la
TNFA
-308G & gt; Un polimorfismo entre los casos y los controles fueron evaluados mediante la prueba de χ2 de Pearson. Las asociaciones entre el -308G & gt; A genotipos y el riesgo de cáncer gástrico, así como las características clínicas de los pacientes se midieron mediante el cálculo de la odds ratio (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC) a partir de análisis de regresión logística incondicional con el ajuste por edad y el sexo. Todos los análisis estadísticos se realizaron con el software SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC, EE.UU.) y dos del lado de
valor de P Red de menos de 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.
resultados
características de la población estudiada
la distribución de frecuencias de las características demográficas y las características clínicas de los dos conjuntos de grupo de estudio se muestran en la Tabla 1. los casos y controles fueron agrupados por edad y sexo (
P = 0,383
y 0,424 en la prueba y
P = 0,164
y 0.061 en el conjunto de validación, respectivamente). Aunque los sujetos de mayor edad más (& gt; 65 años) y mujeres sujetos se presentaron en el conjunto de ensayo que en el conjunto de validación, no se observaron diferencias significativas en la edad y el sexo entre los casos y los controles cuando se combinaron las dos poblaciones (Tabla 1). En el equipo de prueba, había 295 cardias cáncer gástrico (CGC) de los pacientes con cáncer gástrico y 455 (NCGC) pacientes no cardias; 406 pacientes diagnosticados de tipo difuso de cáncer gástrico y 299 de tipo intestinal. el estadio TNM clínico se clasifica de acuerdo con la profundidad de la invasión, metástasis en los ganglios linfáticos y metástasis a distancia. El porcentaje de estadio TNM de los pacientes en el ensayo establecido de I a IV fueron 26,8%, 22,0%, 35,5% y 15,7%, respectivamente. De los 936 pacientes en el conjunto de validación, 358 eran CGC y 578 eran NCGC; 539 pacientes diagnosticados de tipo difuso de cáncer gástrico y 397 de tipo intestinal. Aproximadamente el 27,7%, 19,8%, 42,2% y el 10,3% de los pacientes se encontró que tenían el estadio TNM I, II, III y IV enfermedades, respectivamente.
Asociación entre la
TNFA
-308 G & gt; Un polimorfismo y el riesgo de cáncer gástrico
los resultados de genotipado de la
TNFA
-308 G & gt; Un polimorfismo entre los pacientes y los controles en el conjunto de dos estudios se presentan en la Tabla 2. las frecuencias genotípicas observadas en los controles de equipo de prueba, y el conjunto de validación combinado expuesto estaban todos conformes a la HWE (
P = 0,481
, 0,448 y 0,946, respectivamente). a continuación, se utilizó el test χ2 de Pearson y análisis de regresión logística para evaluar la asociación entre el
TNFA
-308 G & gt; Un polimorfismo y el riesgo de cáncer gástrico. En el equipo de prueba, se encontró que había más genotipos variantes (GA /AA) en el grupo de casos que en el grupo control (
P = 0,034
). En comparación con los individuos con el genotipo GG, encontramos aquellos sujetos con genotipos GA /AA tenían un mayor riesgo de cáncer gástrico (OR ajustada = 1,39; IC del 95% = 1,01-1,67). No se observaron asociaciones similares en el estudio de replicación (GA vs GG: OR = 1,29 IC 95% = 1,02-1,65 y GA /AA vs GG: OR = 1,31, IC del 95% = 1,03-1,65). Cuando se combinaron los datos de los dos estudios, se observó una asociación más significativa (GA vs GG: OR = 1,33, IC del 95% = 1,12-1,59 y GA /AA vs GG: OR = 1,34, IC95% = 1,13-1,59 )
Para evaluar si el
TNFA
-308 G & gt;. basan Un polimorfismo juega un papel diferente en los subgrupos de edad, sexo, localización del tumor y tipos histológicos, que a continuación se realizó un análisis estratificado sobre estas variables. Como se muestra en la Tabla 3, el análisis estratificado mostró que el aumento del riesgo asociado con el
TNFA
-308GG /genotipos GA fue más evidente entre los sujetos de mayor edad (& gt; 65 años) (
P Hotel & lt; IC 0,001, OR = 1,70, 95% = 1.28 a 2.25). Además, no se observó ninguna diferencia significativa en la estratificación de sexo, localización del tumor y tipos histológicos
Asociación entre la
TNFA
-308 G & gt;. Un polimorfismo y las características clínicas de los pacientes con cáncer gástrico
Los polimorfismos en genes candidatos se han sugerido para influir en la progresión del cáncer. A continuación, evaluaron si el
TNFA
-308 G & gt; Un polimorfismo tiene efectos sobre las características clínicas de los pacientes, incluyendo el estadio TNM, metástasis a distancia, metástasis en los ganglios linfáticos y la profundidad de la infiltración tumoral. Como se muestra en la Tabla 4, se encontró que los pacientes portadores de los genotipos variantes tuvieron una mayor prevalencia de T4 etapa de profundidad invadida (
P = 0,001
, OR = 2,19, IC del 95% = 1,39-3,47) y metástasis a distancia (
P = 0,013
, OR = 1,61, IC del 95% = 1,10-2,35), lo que indica el polimorfismo podría estar asociado con la progresión del cáncer gástrico.
Discusión
los principales resultados de nuestro estudio son las asociaciones significativas entre el
TNFA
-308 G & gt; Un polimorfismo y el riesgo de cáncer gástrico y la progresión. TNF-α es un mediador importante en la respuesta inflamatoria inmune y se ha sugerido para ser un promotor de tumores endógena en carcinogénesis humana [23], [24], [25]. En el cáncer gástrico, Senthilkumar
et al.
Demostró que el TNF-α mRNA y las expresiones de proteína fueron significativamente superiores en pacientes con adenocarcinoma gástrico, mediante el uso de RT-PCR, transferencia de Western e inmunohistoquímica [12]. La influencia de la -308G & gt; Un polimorfismo en el nivel de expresión de
TNFA
se ha investigado previamente. . Karen
et al
mostró que el -308G & gt; Un polimorfismo podrían afectar a la afinidad del factor de unión y dar como resultado un factor de unión al alelo 308A pero no el alelo -308G, los cuales conducen a un incremento en la expresión de
TNFA
[14]. Teniendo en cuenta que el TNF-α es hasta reguladas en el cáncer gástrico, es posible que los individuos portadores del alelo 308A (es decir. GA /AA), que se asocia con un mayor nivel de TNF-α, tienen un mayor riesgo de cáncer gástrico. Por lo tanto, es biológicamente plausible que el
TNFA
-308G & gt;. Un confiere susceptibilidad de los individuos para el cáncer gástrico
Hasta la fecha, se han realizado varios estudios epidemiológicos moleculares para investigar la asociación entre las etiquetas
TNFA
-308G & gt; Un polimorfismo y el riesgo de cáncer gástrico. Sin embargo, los resultados de estos estudios no son concluyentes. Hay dos meta-análisis publicado en las asociaciones entre el
TNFA
-308G & gt; A y el riesgo de cáncer gástrico que han identificado este polimorfismo como un factor de riesgo para el cáncer gástrico en poblaciones caucásicas, pero no en las poblaciones de Asia [20] , [21]. Cuando revisado los dos meta-análisis, encontramos sólo 3 estudios con un total de 513 casos y 714 controles y 5 estudios con un total de 833 casos y 1375 controles en las poblaciones chinas fueron incluidos en el meta-análisis de Zhang
et al.
[20] y Gorouhi
et al.
[21], respectivamente (Tabla 5). El número de estudios y el tamaño de la muestra de estos estudios pueden ser demasiado limitados para generar un resultado estable. De estos estudios, sólo Lu
et al. Hola, ha encontrado una asociación significativa entre el
TNFA
-308GA genotipo y el aumento del riesgo de riesgo de cáncer gástrico (OR = 1,81, IC del 95% = 01.04 a 03.14) . Nuestro estudio identifica además la
TNFA
-308G & gt; Un polimorfismo como un factor de riesgo para el cáncer gástrico en la población china, que puede ser un aporte para evaluar el papel de TNF-α en la carcinogénesis gástrica. Como se indica por el poder y software Tamaño Ejemplo de cálculo, nuestro estudio tenía un poder 96% para detectar un OR de 1,50 o mayor y un mínimo o de 0,62 con una frecuencia de exposición de 9% en el tamaño de la muestra actual (1686 casos y 1895 controles) , lo que sugiere que el tamaño de la muestra de nuestro estudio es eficiente
Además, se encontró que el
TNFA
-308G & gt;. Un polimorfismo se asoció con un mayor riesgo de cáncer gástrico entre subgrupos de sujetos de edad avanzada (& gt; 65 años) en lugar de los sujetos más jóvenes. Esta observación está bien apoyado por una gran cantidad de estudios, que conecta el sistema inmunológico débil con la edad [26], [27]. El sistema inmunológico de las personas de edad sufre alteraciones que pueden explicar una mayor susceptibilidad a tumores malignos [26]. Se ha propuesto que la alta expresión de TNF-α puede estar implicada en el crecimiento tumoral y la diseminación a través de influir en la remodelación de tejidos y el desarrollo del estroma [28], [29]. En nuestro estudio, encontramos también la
TNFA
-308G & gt; Un polimorfismo se asoció con agresividad clínica, tales como el estadio tumoral avanzado y metástasis a distancia. Similar observación también se ha reportado en otro estudio [30]. Si es confirmado por estudios adicionales, este polimorfismo podría ayudar a predecir con precisión la evolución clínica de cáncer gástrico. Sin embargo, estos resultados deben ser interpretados con cautela porque no hay posibilidad de que las asociaciones con mal pronóstico se deben a una etapa avanzada al momento del diagnóstico.
En la interpretación de los resultados, algunas otras limitaciones también deben estar preocupados. En primer lugar, ya que nuestro estudio fue el diseño basado en el hospital, la posibilidad de sesgo de selección de los sujetos que estaban asociados con un genotipo particular pudiera existir. Sin embargo, las distribuciones genotípicas en nuestros controles eran similares a las distribuciones reportados en otros estudios chinos y se ajustaban a HWE. Por lo tanto, el sesgo de selección en cuanto a las distribuciones de genotipo no sería considerable. En segundo lugar,
H. pylori
estado de infección es una causa bien conocida de cáncer gástrico y se ha sugerido para influir en la expresión de TNF-α [31]. Las variaciones genéticas en
TNFA
puede interactuar con este factor de riesgo afectan Caner gástrico. Por desgracia, la falta de información disponible en
H. pylori
estado de la infección en nuestro estudio nos limita a explorar más a fondo estas interacciones. Por lo tanto, nuevos estudios con datos más detallados sobre
H. pylori infección
están garantizados
En conclusión, nuestros resultados sugieren la -308G & gt;. Un polimorfismo en el promotor de
TNFA
tiene una influencia significativa en la aparición y progresión de la gástrico en el población china. Aunque las asociaciones parecían ser estadísticamente significativa en nuestra población, estos resultados deben ser verificados independientemente por otros estudios prospectivos con mayor tamaño de la muestra simultánea de los controles y de concordancia y participantes homogéneos-imparciales emparejado.