Extracto
Antecedentes
La survivina es un inhibidor de la apoptosis de proteínas y está implicado en la aparición y progresión de tumores malignos humanos. Recientemente, un polimorfismo funcional (-31G & gt; C, rs9904341) en el promotor de
survivin
se ha demostrado que influyen en su expresión y conferir susceptibilidad a los diferentes tipos de cáncer. El presente estudio se propone investigar si el polimorfismo también influye en la susceptibilidad y progresión del cáncer de células renales (CCR) en una población china.
Métodos
Estamos genotipo este polimorfismo utilizando el ensayo TaqMan en una estudio de casos y controles compuesta de 710 pacientes con CCR y 760 controles. La regresión logística se utilizó para evaluar la asociación genética con la aparición y progresión del CCR.
Resultados
En comparación con los genotipos que contienen el alelo G (GG y GC), se encontró una mayor incidencia estadísticamente significativa de CCR asociado con el genotipo CC [
P = 0,006
, cociente de probabilidad ajustado (OR) = 1,38, 95% intervalo de confianza (IC) = 1,08 a 1,76]. El polimorfismo se asoció con riesgo de desarrollar estadio avanzado (OR = 2,02, IC del 95% = 1,34-3,07) y moderadamente diferenciado (OR = 1,75; IC del 95% = 1,20-2,54) RCC. Por otra parte, los pacientes portadores del genotipo CC tuvieron una mayor prevalencia de la enfermedad en estadio clínico alta (
P
tendencia = 0,003). Resultados similares se observaron cuando se restringió el análisis para despejar CCR de células, un importante tipo histológico de CCR
Conclusiones
Nuestros resultados sugieren que la -31G & gt funcional;. C polimorfismo en el promotor de
survivina
pueden influir en la susceptibilidad y progresión del CCR en la población china. Se requieren grandes estudios prospectivos basados en la población para validar nuestros resultados
Visto:. Qin C, Cao Q, P Li, Ju X, Wang M, Chen J, et al. (2012) promotor funcional -31G & gt; C Variant en survivina gen se asocia con el riesgo y la progresión del cáncer de células renales en una población china. PLoS ONE 7 (1): e28829. doi: 10.1371 /journal.pone.0028829
Editor: Amanda Ewart Toland, Ohio State University Medical Center, Estados Unidos de América
Recibido: 17 Agosto, 2011; Aceptado: 15 Noviembre 2011; Publicado: 25 Enero 2012
Derechos de Autor © 2012 Qin et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. El trabajo fue apoyado por el Programa para el Desarrollo de Innovative Research Team en el primer hospital Afiliado de la Universidad médica de Nanjing, Programa Provincial para la Iniciativa de Excelencia Disciplinas, provincia de Jiangsu y la Fundación de Ciencias Naturales de la provincia de Jiangsu [BK2008473]. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
cáncer de células renales (CCR) representa más del 90% de todos los tumores malignos renales [1]. Las tasas de incidencia de CCR varían entre las diferentes poblaciones, con tasas más altas en los europeos y tasas más bajas en los asiáticos [1]. Las causas exactas de la RCC, son poco conocidos. Hasta la fecha, se han establecido sólo unos pocos factores de riesgo de CCR, incluyendo el tabaquismo, la obesidad, la hipertensión y la diabetes [1]. tumorigénesis renal es un proceso complejo determinado por las interacciones entre los factores genéticos y ambientales [2]. La identificación de la susceptibilidad genética de CCR, aunque todavía se necesita más investigación, ha iluminado la patogénesis molecular de esta enfermedad [1], [3], [4], [5]. También se ha sugerido que la variación genética en candidatos-genes influyó en la progresión y pronóstico de RCC [6], [7], [8], [9].
La desregulación de la apoptosis se ha implicado en la carcinogénesis a través anormalmente prolongación de la supervivencia de células y facilitar la acumulación de mutaciones que transforman [10]. La survivina es un miembro estructuralmente única del inhibidor de la familia de proteínas de apoptosis que suprime la apoptosis y regula la división celular [11], [12]. La sobreexpresión de survivina se observó con frecuencia en una variedad de tumores malignos humanos [11], tales como el cáncer de colon [13], cáncer de pulmón [14], carcinoma hepatocelular [15], cáncer de páncreas [16], y osteosarcoma [17]. Además, la sobre expresión de survivina se correlaciona con mal pronóstico de estos cánceres. Se ha demostrado que la expresión suficiente de ARN mensajero y la proteína survivina se detectaron en líneas celulares de RCC, pero no en la línea celular epitelial de riñón humano normal [18]. elevada expresión de survivina también se observó en los tejidos de RCC en comparación con los tejidos normales adyacentes [18], [19]. Para el resultado de pacientes con CCR, la sobre-expresión de survivina se asoció significativamente con la etapa avanzada del tumor, el grado del tumor y la metástasis de los ganglios linfáticos [19], [20]. Además, los pacientes de RCC con altos niveles de survivina tenían un tiempo de supervivencia global significativamente más corto que aquellos con niveles bajos [21], [22]
Recientemente, un -31G & gt;. C (rs9904341) polimorfismo de un solo nucleótido, el cual se encuentra en los elementos dependiente del ciclo celular (CDE) y regiones de homología del ciclo celular sitio de unión (CHR) represor de la
survivina
promotor, se ha demostrado influir en
survivina
expresión mediante la modificación de la afinidad del represor CDE /CHR [23], [24] vinculante. El alelo -31G ha demostrado tener una actividad transcripcional significativamente menor que el alelo -31C [25]. Hasta la fecha, varios estudios epidemiológicos han sugerido que este polimorfismo se asoció con el riesgo y /o pronóstico de diversos carcinomas [26]. Sin embargo, el papel de este polimorfismo en la etiología de la RCC nunca se ha investigado específicamente antes. Teniendo en cuenta el papel fundamental que desempeña la survivina en la aparición y progresión de la RCC, la hipótesis de que la -31G & gt funcional; C polimorfismo en el promotor de
survivina
podrían ser un marcador potencial genético para predecir el riesgo de CCR y la progresión. Para probar esta hipótesis, genotipo este polimorfismo en un estudio de casos y controles compuesta de 710 casos y 760 controles en una población china y evaluó la asociación genética con la aparición y progresión del CCR mediante análisis de regresión logística.
Materiales y métodos
Ética Declaración
el estudio fue aprobado por el Comité de Revisión Institucional de la Universidad de Medicina de Nanjing, Nanjing, china. Durante el reclutamiento, consentimiento informado por escrito se obtuvo de todos los participantes involucrados en este estudio.
Estudio de la población
Este es un estudio epidemiológico molecular en curso de CCR llevado a cabo en el Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Nanjing, Nanjing, china, a partir de mayo de 2004. el diseño del estudio y los criterios de inclusión de los sujetos se describió previamente en otro lugar [6]. En resumen, todos los sujetos de nuestro estudio son de etnia china Han procedentes de diferentes familias y no tienen ninguna relación de sangre. Todos los pacientes fueron diagnosticados recientemente con el estudio histopatológico confirmó, RCC incidente sin historia previa de otros tipos de cáncer o quimioterapia o radioterapia previa, y fueron reclutados consecutivamente sin restricción de edad y sexo. La enfermedad se clasifica de acuerdo a criterios de la Organización Mundial de la Salud y por etapas de acuerdo con el American Joint Committee on clasificación TNM del cáncer. Se utilizó la escala de Fuhrman para evaluar el grado nuclear del tumor. Las secciones histológicas de todos los casos fueron revisados por dos patólogos de forma independiente. Los controles fueron reclutados de sujetos sanos que estaban buscando un examen físico en los departamentos de pacientes ambulatorios en el hospital y eran de los casos en la edad (± 5 años) y sexo emparejado frecuencia. La hipertensión se define como la PA sistólica (PAS) = 140 mmHg y /o diastólica (PAD) ≥90 mmHg, y /o estar en tratamiento farmacológico. diagnóstico de la diabetes se midió como la libre informado de un diagnóstico más temprano, glucemia en ayunas ≥6.1 mmol /l, y /o el tratamiento de la diabetes mellitus diagnosticada anteriormente. En comparación con nuestros estudios publicados previamente [6], otros 90 casos y 137 controles reclutado recientemente se añadieron al presente estudio.
Extracción de ADN y genotipado del polimorfismo
El ADN genómico total se extrajo de la sangre periférica mediante digestión con proteinasa K y extracción con fenol-cloroformo. La determinación del genotipo de la -31G & gt; C polimorfismo (rs9904341) se llevó a cabo utilizando TaqMan SNP genotipificación prediseñado ensayos (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.). Las secuencias de cebadores y sondas se resumen en la Tabla S1. La amplificación se realizó en las siguientes condiciones: 50 ° C durante 2 min, 95 ° C durante 10 min seguido de 45 ciclos de 95 ° C durante 15 seg, y 60 ° C durante 1 min. De acuerdo con las instrucciones, amplificaciones y análisis del fabricante se llevaron a cabo en el 384 pocillos ABI 7900HT Real-Time PCR System (Applied Biosystems) y el software SDS 2.4 se utilizaron para la discriminación alélica. Para el control de calidad, cuatro controles negativos se incluyeron en cada placa y 5% de las muestras se seleccionaron al azar para el genotipado repetido para la confirmación; y los resultados fueron 100% concordantes
El análisis estadístico
Las diferencias en las variables categóricas como el sexo, el tabaquismo, el consumo de estado y en la distribución de frecuencias de -31G & gt;. alelos C y genotipos entre los casos y los controles fueron evaluados mediante la prueba de chi-cuadrado de Pearson. Las diferencias en las variables continuas como la edad y el IMC fueron probados mediante la prueba t de Student. Antes del análisis, las frecuencias alélicas de la -31G & gt; C polimorfismo en los controles se ensayaron frente a la salida de Hardy-Weinberg (HWE) mediante la prueba de Chi-cuadrado de bondad de ajuste. Las asociaciones entre la -31G & gt; C polimorfismo y el riesgo de CCR se evaluaron mediante el cálculo de la odds ratio (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC) a partir del análisis de regresión logística incondicional con el ajuste por factores de confusión posibles. Un niño de dos lados
valor de P Red de menos de 0,05 fue considerado estadísticamente significativo. Todos los análisis se realizaron con el software SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC, EE.UU.).
Resultados
Las características seleccionadas entre los pacientes con CCR y sujetos control se presentan en Tabla 1. Los casos y los controles parecían estar bien adaptado a la edad y el sexo (
P = 0,753
y 0,832, respectivamente). Por otra parte, no se observaron diferencias significativas entre los casos y controles en relación con el IMC y el estado de la bebida (
P = 0,078
y
P = 0,120
, respectivamente). Sin embargo, más fumadores, pacientes con hipertensión y diabetes se presentaron en los casos en comparación con los controles (
P = 0,035
, & lt; 0,001 y & lt; 0,001, respectivamente). La mayoría de los pacientes (84,8%) tenía el cáncer de células claras convencional. Cuando se estratificó según el estadio clínico, 62.8%, 19.6%, 7.3% y 10.3% de los pacientes tenían la enfermedad en estadio I, II, III y IV, respectivamente. El porcentaje de grado nuclear de I a IV fue del 19,2%, 48,0%, 24,5% y 8,3%, respectivamente
Las frecuencias alélicas y genotípicas de la -31G & gt;. C polimorfismo se muestran en la Tabla 2. El genotipo frecuencias en los controles y los pacientes tanto se ajustaba a HWE (
P = 0,467
y 0,610, respectivamente). Las frecuencias de la GG, GC y CC genotipos entre los casos fueron significativamente diferentes de los que entre los controles (
P
= 0,015). La diferencia en la distribución de frecuencias de G y C alelo entre casos y controles también fue significativa (
P
= 0,006). En comparación con los individuos portadores del alelo G (GG /GC), individuo con genotipo CC tuvo un aumento significativo del susceptibilidad a la ocurrencia RCC (OR = 1,38 IC 95% = 1,08 a 1,76,
P
= 0,006). Además, el alelo variante -31C también se asoció con un mayor riesgo de RCC, en comparación con el alelo -31G (OR = 1,11, IC del 95% = 01/03 hasta 01/20,
P
= 0,006). Se observaron resultados similares cuando se restringió el análisis de células claras RCC (Tabla 2). Estos resultados sugieren que el
survivina
-31G & gt;. C polimorfismo tuvo efecto sobre RCC ocurrencia
A continuación, evaluó el efecto del polimorfismo en el riesgo de CCR estratificado por edad, índice de masa corporal, el sexo , tabaquismo, nivel de fumar y beber de estado. Los resultados se resumen en la Tabla S2. Aunque el aumento del riesgo parece ser más evidente en los subgrupos de sujetos jóvenes, las mujeres, los fumadores pesados y nunca bebedores, no se observó heterogeneidad significativa entre los subgrupos, que implicó a efectos genéticos independientes (todo el
P
heterogeneidad & gt ; 0,05). A continuación, examinó los efectos del polimorfismo en la progresión de RCC. Tal como se presenta en la Tabla 3, el genotipo -31CC se asoció con riesgo de desarrollar CCR en estadio avanzado (OR = 2,02, IC del 95% = 1,34-3,07) y RCC-moderadamente diferenciado (OR = 1,75; IC del 95% = 1,20-2,54) . Como se muestra en la Tabla 4, en el grupo de casos, los pacientes que portan el genotipo CC tuvieron una mayor prevalencia de la enfermedad en estadio clínico alta (
P = 0,021
para el CCR y
P = 0,018 para
ccRCC ) de una manera dosis-respuesta (
P
tendencia = 0,003). Sin embargo, no se observó ninguna asociación entre este polimorfismo y el grado tumoral en los casos (
P = 0,379
para el CCR,
P = 0,700 para
ccRCC).
Discusión
en el presente estudio, se evaluó la asociación entre la -31G funcional & gt; C polimorfismo en el promotor de
survivina
y el riesgo y la progresión del CCR. Hemos encontrado que los individuos con el genotipo -31CC tenían un riesgo significativamente mayor RCC de 1,50 y 1,38, en comparación con aquellos con los genotipos GG o GG /GC, respectivamente. El polimorfismo también se asoció con el riesgo de desarrollar etapa avanzada y RCC moderadamente diferenciado. Además, encontramos que los pacientes de RCC que portan el genotipo CC tuvieron una mayor prevalencia de la enfermedad en estadio clínico alta, en comparación con aquellos con el genotipo GG /GC. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer estudio para investigar el papel de la
survivina
-31G & gt;. C polimorfismo en la etiología de la RCC
Como inhibidor de la proteína única de la apoptosis, survivin reduce la susceptibilidad de las células tumorales a los estímulos apoptóticos y de ese modo promueve la supervivencia de las células tumorales durante el desarrollo y progresión del tumor [11], [12]. Survivina se expresa fuertemente en los tejidos fetales, pero no se expresa en tejidos normales de adultos [27], [28]. Sin embargo, la sobre-expresión de survivina se observa con frecuencia en diferentes tipos de cáncer, incluyendo el CCR. Lei
et al.
Han demostrado que la expresión de survivina fue elevado tanto en líneas celulares de RCC y en los tejidos tumorales [18]. Recientemente, varios estudios han sugerido que el
survivina
promotor -31G & gt; C polimorfismo podría modular la expresión de survivina [25], [29]. Como se mencionó antes, este polimorfismo se encuentra en el sitio de unión al represor CDE /CHR y puede influir en la afinidad de la unión a esta región represor y, a continuación, afectan a la expresión de survivina. Los estudios funcionales han demostrado que el alelo -31C mostrado una actividad transcripcional significativamente más alto que el alelo -31G, y los individuos con el genotipo -31CC tenido un aumento de los niveles de survivina que los portadores del GC y genotipos GG [25]. Desde survivin funciona como un inhibidor de la apoptosis de proteínas que desempeña un papel crucial en la eliminación de células mutadas o transformadas de cuerpo, es posible que los individuos que lleva la mayor producción de genotipo
survivin
-31G & gt; C polimorfismo puede poseer una disminución capacidad apoptótica para eliminar células con daño en el ADN que pueden contribuir a la aparición de tumores malignos. Por lo tanto, es biológicamente plausible que el
survivina
promotor -31G & gt;. C polimorfismo confiere individuos susceptibilidad a la RCC
Hasta la fecha, varios estudios han tratado de evaluar las asociaciones de la
survivina
-31G & gt; C polimorfismo y el riesgo de cáncer [26]. La correlación entre el
survivina
-31CC genotipo y el mayor riesgo de cáncer ha sido identificado por varios otros estudios [26]. Aunque el papel de este polimorfismo en la etiología del CCR no ha sido evaluado antes, hay estudios que indican que un
survivina
-31CC genotipo se asoció con un mayor riesgo de otro cáncer del sistema urinario, como el carcinoma urotelial (OR = 4,0, IC del 95% = 02/03 a 07/02) [30] y el cáncer de vejiga (OR = 1,85, 95% CI = 1,27-2,70) [31]. Nuestros resultados son comparables a los resultados de estos dos estudios y además sugieren un papel importante de la
survivina
-31G & gt; C polimorfismo en el desarrollo de cáncer del sistema urinario. Más recientemente, un estudio de meta-análisis ha sido realizado por Srivastava
et al.
Para aclarar las asociaciones de este polimorfismo y el riesgo de cáncer [26]. Encontraron que el
survivina
alelo -31C se asoció con 1,27 veces más riesgo de cáncer. La magnitud del riesgo RCC encontrado con el alelo C o genotipo CC en el presente estudio (OR = 1,11 y 1,38, respectivamente) fueron similares al riesgo observado en el meta-análisis. Sin embargo, el
survivina
-31G & gt; C polimorfismo no se identifica como locus de susceptibilidad para el CCR por los estudios de asociación de genoma completo recientemente publicados en las poblaciones europeas [3], [5]; y en nuestro estudio, el valor de p para la asociación entre el polimorfismo y el riesgo de CCR también no cumplió con todo el genoma de significación estadística. El
survivina
-31G & gt; C polimorfismo no se incluye en el GWAS realizado por Purdue
et al
[3], sin embargo, el resultado para GWAS un sustituto (rs3764384) en perfecto con el - 31G & gt; C polimorfismo estaba disponible. En su GWAS, el rs3764384 no se asoció con el riesgo de CCR (
P = 0,220
, OR = 1,07, IC del 95% = 0,96-1,18). De acuerdo con la base de datos HapMap, el rs3764384 está en completo desequilibrio de ligamiento con el
survivina
-31G & gt; C polimorfismo en ambas poblaciones chinos Han y poblaciones caucásicas (
D '
= 1, r
2 = 1); la frecuencia del alelo menor de -31G & gt; C (alelo G) en la población china Han en Beijing es 0,477, que es drásticamente diferente de la población europea (0.717). Por lo tanto, se especula que las diferencias etnicidad podrían desempeñar un papel en la causa de la disparidad.
Se ha propuesto que el nivel de expresión de
survivina
era un biomarcador para predecir la progresión del CCR y el pronóstico [32]. Varios estudios han informado de que la expresión elevada de survivina fue asociado con estadio avanzado del tumor y grado, y los pacientes con altos niveles de survivina tenido un tiempo significativamente más corto de supervivencia global que los que tenían niveles bajos de survivina [20], [21], [22]. En el presente estudio, se observó que la que
survivina
-31CC genotipo se asoció con la progresión del CCR, pero estos resultados deben interpretarse con cautela ya que existe la posibilidad de que las asociaciones con mal pronóstico se deben a una tardía etapa de diagnóstico. Por lo tanto, si se confirma por estudios adicionales, este polimorfismo puede ayudar a predecir con precisión el curso clínico de pacientes con CCR. CCR se caracteriza por una alta vascularización intra-tumoral y, hasta el momento varios fármacos antiangiogénicos (bevacizumab, pazopanib y sorafenib) han demostrado beneficios en el tratamiento de CCR avanzado [33]. Dado que se ha sugerido survivina para promover la angiogénesis asociada a tumores y actúa como un factor de resistencia a diversas terapias contra el cáncer [34], [35], si sensibilidad a los medicamentos de los individuos puede predecirse por la variación genética como el
survivina
-31G & gt; C polimorfismo, la eficacia de estos fármacos se puede mejorar más. Sin embargo, la falta de información disponible sobre el tratamiento farmacológico de los pacientes con CCR y largo plazo de seguimiento restringe nuestro estudio para explorar la influencia de la
survivina
-31G & gt; C polimorfismo en la eficacia de estos fármacos. Por lo tanto, instamos a que se investigue en otros estudios que se centran en el tratamiento de pacientes con CCR.
En la interpretación de nuestros resultados, otra limitación también debe estar preocupado. Debido a que nuestro estudio de casos y controles fue un estudio basado en el hospital, que no podía descartar la posibilidad de sesgo de selección de los sujetos que pueden haber sido asociados con un genotipo particular. Sin embargo, la frecuencia del alelo -31C en nuestros controles fue similar a la de la base de datos HapMap para los chinos Han en Beijing (46,4% vs. 48,8%) y también fue similar a la de otro estudio de casos y controles de base poblacional de la población china ( 46,4% vs. 47,6%). Además, las distribuciones genotípicas del polimorfismo en nuestros controles se ajustaban a HWE. Por lo tanto, el sesgo de selección en términos de genotipo distribuciones no sería sustancial
En conclusión, nuestro estudio de casos y controles indica que el -31G & gt;. C polimorfismo en el promotor de
survivina
tienen una influencia significativa en la aparición y progresión de CCR en población china. Aunque las asociaciones parecían ser estadísticamente significativa en nuestra población, estos resultados iniciales deben ser verificados independientemente por otros estudios de población en grandes bases independientes. Además, los polimorfismos menudo varían entre los grupos étnicos; Por lo tanto, también se requieren estudios adicionales para aclarar la asociación de este polimorfismo con el riesgo de CCR en diversas poblaciones étnicas.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
Las secuencias de los cebadores y sondas utilizados para determinar el genotipo de la survivina -31 G & gt; C polimorfismo
doi:. 10.1371 /journal.pone.0028829.s001 gratis (DOC) sobre Table S2. analiza
La estratificación entre los
survivina
-31G & gt; C genotipos y el riesgo de CCR en los casos y los controles
doi:. 10.1371 /journal.pone.0028829.s002 gratis (DOC)