Extracto
largos ARNs no codificantes (lncRNAs) juegan un papel importante en diversos procesos biológicos, como la regulación de la transcripción, el crecimiento celular y tumorigénesis. Sin embargo, poco se sabe acerca de si lncRNA-GAS5 (detención específica de crecimiento 5) regula la progresión del cáncer de vejiga. En el presente estudio, se encontró que la expresión GAS5 es comúnmente downregulated en líneas celulares de cáncer de vejiga y especímenes humanos. Desmontables de GAS5 promueve la proliferación de células de cáncer de vejiga, mientras que la expresión forzada de GAS5 suprime la proliferación celular. Además, demostró que desmontables de GAS5 aumenta CDK6 mRNA y los niveles de proteína en células de cáncer de vejiga. Como era de esperar, la inhibición GAS5 induce una disminución significativa en la fase G0 /G1 y un aumento evidente en la fase S. Con ganancia de función y los estudios de la pérdida de la función de GAS5 mostraron que inhibe la proliferación celular del cáncer de vejiga, al menos en parte, mediante la regulación de la expresión CDK6.
Conclusiones
Downregulated GAS5 promueve la célula del cáncer de vejiga proliferación, en parte, mediante la regulación de CDK6, y por lo tanto puede ser útil en el desarrollo de estrategias de tratamiento eficaces contra el cáncer de vejiga
Visto:. Liu Z, W Wang, Jiang J, Bao e, D Xu, Zeng y, et Alabama. (2013) La regulación por disminución de GAS5 promueve la proliferación celular del cáncer de vejiga, Parcialmente mediante el control de CDK6. PLoS ONE 8 (9): e73991. doi: 10.1371 /journal.pone.0073991
Editor: Antonia Vlahou, Fundación de Investigación Biomédica de la Academia de Atenas, Grecia
Recibido: Abril 10, 2013; Aceptado: July 25, 2013; Publicado: 17 Septiembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Liu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el Premio Número 2011038 XBR de Shanghai Oficina Municipal de Salud. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
cáncer de vejiga humana es el cuarto cáncer más común en los hombres, y el décimo más común en las mujeres [1], [2]. El tipo histológico más común de cáncer de vejiga es el carcinoma urotelial (CU), que son tumores papilares no invasivos que comúnmente se repiten, pero rara vez progresar [3]. En general, el tratamiento de estos pacientes es la resección endoscópica [4], [5]. tumores de vejiga invasivos son más agresivos, y los pacientes con UC músculo invasivo suelen ser tratados con cistectomía radical. Sin embargo la mitad de los pacientes con cáncer de vejiga invasivo desarrollar enfermedad metastásica posterior, incluso después de la cirugía radical de los tumores primarios [6]. Los avances en la terapia eficaz para el cáncer de vejiga han sido limitadas debido a los mecanismos patológicos que causan tumor no se conocen. Por lo tanto, dejando al descubierto el mecanismo molecular por el proceso tumoral de vejiga es indispensable para el desarrollo de un tratamiento eficaz.
La evidencia reciente muestra que los largos ARNs no codificantes (lncRNAs) juegan un papel importante en diversos procesos biológicos, como la regulación de la transcripción, el crecimiento celular y la tumorigénesis [7], [8]. Nuestros estudios anteriores mostraron que H19 aumenta la proliferación de células de cáncer de vejiga y la metástasis [9], [10]. Upregulated H19 contribuye a la vejiga el crecimiento del cáncer mediante la regulación de la expresión de ID2. Regulada por incremento H19 también aumenta la metástasis de las células del cáncer de vejiga mediante la asociación de EZH2 y la inhibición de la expresión de E-cad. El HOTAIR (por HOX antisentido intergénica RNA) nivel se incrementa en tumores primarios y regula la progresión del cáncer [11]. La sobreexpresión de HOTAIR en las células cancerosas epiteliales conduce a la histona H3 lisina alterada 27 metilación y promueve la metástasis del cáncer [12]. HOTAIR es un elemento crítico en la progresión metastásica mediante la asociación con miembros del complejo PRC2 (SUZ12, EZH2, y H3K27me3) [13], [14]. LncRNA-MEG3 (expresado maternalmente gen 3) también está asociada con la tumorigénesis y progresión de meningioma [7]. MEG3 no se expresa en la mayoría de los meningiomas humanos o las líneas celulares meningioma humanos [7]. Re-expresión de MEG3 inhibe la proliferación de células tumorales y la formación de colonias en agar blando mediante la inducción de la acumulación de la proteína p53 y la regulación de forma selectiva la expresión de genes diana de p53 [15]. GAS5 es un ARN no codificante identificado recientemente que está asociada con la proliferación celular. GAS5 juega un papel esencial en la detención del crecimiento normal en ambos líneas de células T y linfocitos no transformadas [16]. La sobreexpresión de GAS5 reduce la tasa de progresión a través del ciclo celular, mientras que la regulación por disminución de GAS5 inhibe la apoptosis y mantiene un ciclo celular más rápida. Mourtada-M
et al
demostró que los niveles de transcripción GAS5 se disminuyeron significativamente en muestras de cáncer de mama en comparación con los tejidos epiteliales de mama normales adyacentes [17]. La sobreexpresión de GAS5 induce la detención del crecimiento y la apoptosis independientemente de otros estímulos. Sin embargo, los mecanismos subyacentes de GAS5 regulación de la proliferación de células cancerosas siguen sin estar claros.
Sobre la base de estos resultados, hemos probado si GAS5 regula el ciclo celular y la proliferación celular en células de cáncer de vejiga. Se encontró que la expresión GAS5 se redujo significativamente en tejidos de cáncer de vejiga. Desmontables de GAS5 induce una disminución significativa en la fase G0 /G1 y promueve la proliferación de células de cáncer de vejiga, al menos en parte, mediante la regulación de la expresión de CDK6.
Materiales y Métodos
muestras de tejidos y líneas celulares
tejidos de la vejiga humanas se obtuvieron con el consentimiento informado por escrito del hospital de las primeras personas afiliadas a la Escuela de Medicina de la Universidad Jiaotong de Shanghai. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Facultad de Medicina de la Universidad Jiaotong de Shanghai. Se recogieron 28 muestras de tejido de cáncer de vejiga y sus tejidos normales adyacentes entre 02/2011 y 12/2012 (Tabla 1).
células de cáncer de vejiga humano (T24, DSH1, RT112, RT4, y KU7 células 253J) se obtuvieron de la American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA) y se cultivaron en RPMI 1640 (Gibco, Carlsbad, CA,) con suero bovino fetal al 10% (FBS;. Gibco)
real Reacción -time cadena de la polimerasa (PCR)
ARN total fue extraído a partir de tejidos de cáncer de vejiga o células utilizando el reactivo Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA), y las reacciones de transcripción inversa se realizaron utilizando cebadores aleatorios y un M- kit MLV Reverse Transcriptase (Invitrogen). PCR en tiempo real se llevó a cabo utilizando un protocolo estándar del kit SYBR Green PCR (Toyobo, Osaka, Japón) en Applied Biosystems 7300 sistema de PCR en tiempo real (Applied Biosystems, Foster City, CA) de acuerdo con las instrucciones. ß-actina se utilizó como referencia para lncRNAs. Los valores Ct se normalizaron a los niveles de ß-actina. Cada muestra se analizó por triplicado.
Western Blot Analysis
análisis de transferencia de Western para evaluar CDK6 y expresión β-actina se llevó a cabo como se describe anteriormente [18]. Los anticuerpos primarios anti-CDK6 se compraron desde Santa Cruz de Biotecnología (CA, EE.UU.). β-actina anticuerpos primarios fueron adquiridos de Sigma (MO, EE.UU.).
Análisis de citometría de flujo
células RT4 (1~2 × 10
5) tratados con GAS5-siRNA o CDK6 -siRNA se sembraron en placas de 6 pocillos. Después de la incubación de 48 horas, los cultivos se incubaron con yoduro de propidio durante 30 minutos en la oscuridad. Los cultivos se recogieron y se analizaron para el ciclo celular usando un citómetro de flujo (FACSCalibur, BD Biosciences) después de tinción con yoduro de propidio. Los cultivos también fueron teñidas con anexina V-isotiocianato de fluoresceína, y la apoptosis de las células se analizaron mediante un citómetro de flujo.
La sobreexpresión y pequeños ARN de interferencia
Para expresar GAS5, el plásmido pcDNA-GAS5 se construyó mediante la introducción de un
KpnI-XhoI
fragmento que contiene el cDNA GAS5 en los mismos sitios en pcDNA3.1. El gen GAS5 se amplificó a partir de ADNc preparado a partir de células T24 por PCR utilizando los cebadores directo e inverso: ggggtaccTTTCGAGGTAGGAGTCGAC y ccgctcgagGGATTGCAAAAATTTATTAAAATTG. pcDNA-GAS5 se transfectó en la línea celular de cáncer de vejiga utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen).
Para inhibir la expresión endógena y GAS5 CDK6, 2 × 10
se transfectaron 5 células por pocillo en una placa de seis pocillos con 50 nM indicó siRNA o control negativo usando Lipofectamine 2000. a continuación se incubaron las células con siRNA durante el tiempo indicado. Tres GAS5-siRNAs diferentes (secuencia de referencia NR_002578) fueron diseñados por Ambion (Ambion, Austin, TX). El CDK6-siRNAs utilizado en este estudio eran mezclas de tres siRNAs y fueron adquiridos de Ambion.
Ensayo de proliferación celular
Ensayos de proliferación celular se llevaron a cabo utilizando Cell Counting Kit-8 kit (Dojindo Laboratorios , Kumamoto, Japón). células RT4 se sembraron en placas de 24 pocillos por triplicado a aproximadamente 1 × 10
5 células por pocillo y se cultivaron en el medio de crecimiento. células RT4 se trataron a continuación con pcDNA-GAS5 o GAS5-siRNA y el número de células por pocillo se midieron mediante la absorbancia (450 nm) de la reducción de WST-8 (2- (2-metoxi-4-nitrofenil) -3- (4-nitrofenil) -5- (2,4-isulfophenyl) 2H-tetrazolio, sal monosódica) en los puntos de tiempo indicados.
ARN y ARN inmunoprecipitación desplegable
ARN inmunoprecipitación (RIP ) o ARN Pulldown se realizó como se describe anteriormente [10]. En resumen, para el ensayo de pulldown ARN, los ARN marcados con biotina fueron
in vitro
transcrito con la biotina RNA Labeling Mix (Roche Diagnostic, Indianapolis, EE.UU.) y ARN T7 polimerasa (Roche). Cell extracto nuclear (2 g) se mezcló con ARN biotinilado (100 pmol). se añadieron estreptavidina lavada perlas de agarosa (100 mu l) a cada reacción de unión y se incubaron adicionalmente a temperatura ambiente durante 1 h. Las perlas se lavaron brevemente tres veces y se hirvieron en tampón de SDS, y la proteína recuperada se detectó mediante la técnica de transferencia Western estándar.
Los anticuerpos utilizados para CDK6 RIP se compran de Abcam (Abcam, Cambridge, MA). Los ARN coprecipitados se detectaron por PCR de transcripción inversa. Total de ARN y los controles también se sometieron a ensayo para demostrar que las señales detectadas eran de ARN que se unen específicamente a CDK6.
Análisis estadístico
La comparación estadística entre los 2 grupos se realizó usando desapareado
t
-test. Todos los grupos se compararon mediante análisis unidireccional de la varianza (ANOVA), seguido de la prueba de Tukey post hoc en su caso. La diferencia se consideró estadísticamente significativa a
p Hotel & lt; 0,05. Todos los datos se representan como media ± deviateon estándar de al menos tres experimentos separados.
Resultados
Nivel GAS5 está regulada negativamente de manera significativa en el cáncer de vejiga
Estudios anteriores mostraron que controla GAS5 celular apoptosis y es downregulated en el cáncer de mama [17]. Con el fin de investigar si GAS5 regula la tumorigénesis de la vejiga, se analizó primero el nivel de expresión GAS5 en tejidos de cáncer de vejiga y tejidos normales adyacentes. Figura 1A mostró que la expresión GAS5 es downregulated notablemente en 82% tejidos de cáncer de vejiga en comparación con los controles adyacentes. Para confirmar la validez de la reducción de GAS5, una porción del ARN utilizado para la PCR en tiempo real se sometió a análisis de transferencia de Northern. En consonancia con las conclusiones anteriores, GAS5 se redujo en la mayoría de los tejidos de cáncer de vejiga (Figura 1B). A continuación, examinó el nivel de expresión de GAS5 en líneas celulares de cáncer de vejiga (T24, DSH1, RT112, RT4, 253J, y KU7). En comparación con la célula urothelia normales, la expresión GAS5 se redujo significativamente en estas líneas celulares de cáncer de vejiga (Figura 1C). Estos datos indican que la regulación negativa de GAS5 puede estar relacionado con la progresión del cáncer de vejiga.
(A) Análisis del nivel de expresión GAS5 se llevó a cabo en tejidos de cáncer de vejiga o de control adyacente (n = 28). El ARN total se sometió a tiempo real de RT-PCR para analizar los valores CT de cáncer de vejiga normalizado a ß-actina en cada muestra. Los valores normalizados (Ct) de todos los tejidos se compararon con un tejido normal, en cada grupo (ΔΔCT). Los resultados se expresaron como Log10 (2
-ΔΔCt). (B) ARN de 1-7#utilizado en (A) se ensayó por análisis de Northern blot tal como se describe anteriormente [32]. niveles (C) GAS5 fueron evaluados por PCR en tiempo real en líneas celulares de cáncer de vejiga. Se utilizaron células uroteliales normales como control. *
p Hotel & lt;.
0,05
Inhibe la proliferación GAS5 vesical de células
in vitro
Para investigar la biológica papel de GAS5 en la regulación de la proliferación celular del cáncer de vejiga, se analizaron las células de cáncer de vejiga tratados con GAS5 o GAS5-siRNA. tratamiento GAS5-siRNA inhibe significativamente la expresión GAS5, y aumenta GAS5 desmontables proliferación de las células RT4 (Figura 2A y B). En contraposición, el tratamiento pcDNA-GAS5 regula al alza la expresión GAS5, y suprime la proliferación de células RT4 (Figura 2C y D). Estos datos sugieren que downregulated GAS5 en el cáncer de vejiga contribuye a la proliferación de células de cáncer de vejiga. Células RT4
(A) fueron tratados con GAS5-siRNA, y el nivel de expresión GAS5 se ensayó después de 48 h por PCR en tiempo real. (B) células RT4 se trataron con GAS5-siRNA, y en los puntos de tiempo indicados, el número de células por pocillo se midieron mediante la absorbancia (450 nm) de la reducción de WST-8. células RT4 (C) fueron tratados con pcDNA-GAS5, y el nivel de expresión GAS5 se analizó por PCR en tiempo real. células RT4 (D) se sobreexpresa transitoriamente con GAS5, y el número de células por pocillo se midieron mediante la absorbancia (450 nm) de la reducción de WST-8. Los resultados muestran los datos de al menos tres experimentos independientes, expresados como la media ± desviación estándar. *
P Hotel & lt;
0,05
GAS5 regula negativamente la expresión CDK6
in vitro
A continuación, se investigó la. posibles mecanismos que GAS5 regula la proliferación de células de cáncer de vejiga. Se realizó un ensayo de pull-down ARN para identificar proteínas que asocian con GAS5 (Figura 3A). análisis de espectrometría de masas de la banda de proteína específica de GAS5 reveló que quinasa dependiente de ciclina 6 (CDK6) se asocia específicamente con GAS5 (Tabla 2). CDK6 controla el ciclo celular, y la desregulación de CDK6 se asocia con la progresión del cáncer de vejiga [19]. A fin de validar la asociación entre el GAS5 y CDK6, A continuación realizó un ensayo RIP con un anticuerpo contra CDK6 en extractos celulares RT4. Consistentemente, se observó un nivel de enriquecimiento significativamente mayor de GAS5 con el anticuerpo CDK6 en comparación con el anticuerpo de control IgG no específico (Figura 3B). Desmontables de GAS5 aumenta significativamente CDK6 ARNm y los niveles de proteína en líneas celulares de cáncer de vejiga (Figura 3C y D), pero la regulación por disminución de GAS5 no cambian CDK2 y CDK4 nivel de expresión (datos no mostrados). Por otra parte, la sobreexpresión de GAS5 inhibe notablemente la expresión CDK6 en líneas celulares de cáncer de vejiga (Figura 3E).
In vivo
, una correlación negativa significativa se observa también entre los niveles GAS5 y los niveles CDK6 en tejidos de cáncer (
r
2 = 0,168,
p =
0,013, Figura 3F). Estamos investigando el papel de GAS5 en la regulación de la apoptosis celular y el ciclo celular. Figura 4A mostró que el tratamiento GAS5-siRNA inhibe la apoptosis celular. A continuación, el GAS5 o CDK6 es derribado y el ciclo celular se analizaron mediante citometría de flujo. En comparación con el control de siRNA, GAS5 downregulation muestra una disminución en el porcentaje de células en fase G0 /G1 y más células en la fase S (Figura 4B). El análisis cuantitativo también revela una disminución significativa en la población de células en fase G0 /G1 en las células transfectadas con GAS5-siRNA (Figura 4B). Más importante, desmontables de CDK6 por siRNAs específicos reduce el porcentaje de células en fase S en células tratadas con ARNsi GAS5 (Figura S1, Figura 4B). Estos datos indican que GAS5 regula el ciclo celular de cáncer de vejiga, al menos en parte, mediante la regulación de CDK6.
(A) biotinilado GAS5 o control se incubaron con extractos nucleares (células RT4), dirigida con perlas de estreptavidina y las proteínas asociadas se resolvieron en un gel. La tinción con plata del gel de SDS-PAGE que contenía alícuotas de muestras derivadas de proteínas bajó por GAS5. (B) RIP experimentos se realizaron usando anticuerpo CDK6 para inmunoprecipitar el ARN y un cebador para detectar GAS5 ARN. (C) Análisis de nivel CDK6 mRNA se realizó en líneas celulares de cáncer de vejiga después del tratamiento GAS5-siRNA. (D) Western blot de nivel de proteína CDK6 se realizó en células de cáncer de vejiga tratados con GAS5-siRNA. (E) Análisis de nivel CDK6 mRNA se realizó en líneas celulares de cáncer de la vejiga después de la sobreexpresión GAS5. Los resultados muestran los datos de al menos tres experimentos independientes, expresados como la media ± desviación estándar. *
P Hotel & lt;
0,05
. (F) la correlación negativa entre los niveles GAS5 y los niveles CDK6 en 16 muestras de cáncer de vejiga (
r
2 = 0,168,
p = 0,013
).
expresión (A) GAS5 fue inhibida por siRNAs específicos en RT4, y la apoptosis de las células se analizó por citometría de flujo 48 h más tarde. (B) Las células fueron tratadas con RT4 GAS5-siRNA o CDK6-siRNA. Cuarenta y ocho horas más tarde, el número de células relativas en cada fase del ciclo celular después de la tinción con yoduro de propidio se determinaron por análisis FACS. Los datos son de uno de tres experimentos independientes. Los histogramas se analizaron y se muestra el porcentaje de células en cada fase del ciclo celular. Los resultados se presentan como media ± desviación estándar de tres experimentos.
GAS5 Disminuciones cáncer de vejiga proliferación celular mediante el control de la proliferación celular CDK6
cáncer de vejiga
Downregulated GAS5 aumenta, y una significativa se observó una correlación negativa entre el GAS5 y CDK6. Por lo tanto, pensamos que el papel de GAS5 en la regulación de la proliferación celular del cáncer de vejiga está mediada por la modulación de la expresión de CDK6. De acuerdo con estudios anteriores, desmontables de CDK6 inhibe la proliferación de células RT4 (Figura 5A). Además, la proliferación de células RT4 se suprime parcialmente por CDK6 caída en las células tratadas con GAS5-siRNA (Figura 5A). En las células que sobreexpresan GAS5, expresión de los resultados CDK6 forzado en una proliferación celular restaurado (Figura 5B). Estos datos confirman que GAS5 disminuye la progresión del cáncer de vejiga, al menos en parte, mediante la regulación de la expresión de CDK6.
células RT4 (A) se trataron con GAS5-siRNA y CDK6-siRNA y el número de células por pocillo eran medida por la absorbancia (450 nm) de la reducción de WST-8. *
p Hotel & lt;
0,05
. (B) células RT4 se sobreexpresa con GAS5 y CDK6, y el número de células por pocillo se midieron mediante la absorbancia (450 nm) de la reducción de WST-8. *
p Hotel & lt;
0,05
Discusión
Estudios recientes muestran que el transcriptoma humano es más complejo que una colección de proteínas-. genes de codificación; mostrando extensa antisentido y ARN no codificante (ncRNA) expresión [20], [21], [22]. Aunque en un principio argumentado que el ruido de la transcripción espurios, la nueva evidencia demuestra que ncRNAs (como microARN y lncRNAs) participan en la regulación del desarrollo celular, el crecimiento celular y las enfermedades humanas [23], [24]. Estudios recientes están empezando a desentrañar su importancia en la tumorigénesis. Por ejemplo, el nivel de lncRNA-H19 se eleva notablemente en un gran número de cánceres humanos [25], [26] y H19 sobreexpresión confiere una ventaja de crecimiento sobre las células del cáncer [27].
GAS5 se identificó una nueva lncRNA involucrados en la regulación del ciclo celular [16], [28]. Mourtada-M
et al
mostró que GAS5 juega un papel crucial en la detención del crecimiento normal en ambos líneas de células T y los linfocitos no transformadas [16]. resultados GAS5 sobreexpresión tanto en un aumento de la apoptosis y una reducción en la tasa de progresión a través del ciclo celular, mientras que GAS5 knockdown inhibe la apoptosis y mantiene un ciclo celular más rápida, lo que indica que la expresión GAS5 es necesario para detener el crecimiento normal de las células T las líneas y las células T de sangre periférica humana [16]. niveles GAS5 también se reducen significativamente en muestras de cáncer de mama [17]. Sobre la base de estos hallazgos, se especuló si la expresión de la GAS5 es anormal y GAS5 desregulada regula la proliferación celular en el cáncer de vejiga. En el presente estudio, identificamos que la expresión GAS5 es comúnmente regulado por disminución en la mayoría de los especímenes de cáncer de vejiga y en líneas celulares de cáncer de vejiga. inhibición GAS5 contribuye a la proliferación de células del cáncer de vejiga, mientras que la sobreexpresión de GAS5 inhibe la proliferación celular. Estudios anteriores demostraron que GAS5 se une al dominio de unión a ADN del receptor de glucocorticoides (GR), actuando como un elemento de respuesta a glucocorticoides señuelo (GRE), compitiendo por lo tanto con el ADN GREs por la unión al GR. Por lo tanto GAS5 es un "riborepressor" del GR, que influyen en la supervivencia celular y actividades metabólicas durante la inanición por la modulación de la actividad transcripcional de la GR [29]. Aquí se realizó un ensayo de pull-down RNA para investigar el mecanismo potencial de GAS5 en la regulación del crecimiento celular. Nuestros datos revelaron que GAS5 podría combinar con la quinasa dependiente de ciclina 6 (CDK6), y reprimir aún más la expresión de CDK6. Por lo tanto, la regulación por disminución de GAS5 aumenta la expresión CDK6 en células de cáncer de vejiga. inhibición GAS5 induce una disminución significativa en la fase G0 /G1 y un aumento en la fase S por forma CDK6-dependiente. De ganancia de función y los estudios de pérdida de función confirmaron que GAS5 regula el ciclo celular e inhibe la proliferación de las células del cáncer de vejiga, en parte por regulación de la expresión CDK6
.
desarrollo y progresión tumoral se ha demostrado ser dependiente de la acumulación celular de varios eventos epigenéticos y genéticos, incluyendo las alteraciones en la maquinaria del ciclo celular en G1 /S de control [30]. La transición de fase G1 /S está regulada principalmente por las ciclinas de tipo D (D1, D2, D3) o en complejo con las ciclinas CDK4 /CDK6, y de tipo E (E1 o E2) en complejo con CDK2 [30]. CDK6 se mostró que se sobreexpresa en el cáncer de vejiga [31], y el concepto ha surgido que Rb fosforilación por CDK4 /6 no sólo conduce a la transcripción E2F-dependiente crítico de enzimas y reguladores del ciclo celular esenciales, sino también para el montaje de la pre-replicación complejo en la fase G1 [31]. Por lo tanto, la vía /CDK6 GAS5 puede jugar un papel importante en la regulación del desarrollo y progresión del cáncer.
Conclusiones
Estos resultados sugieren que la regulación por disminución de GAS5 aumenta la proliferación de células del cáncer de vejiga, al menos en parte, por la regulación de CDK6. Nuestros resultados contribuyen a una mejor comprensión de la importancia de los lncRNAs desregulados en la progresión del cáncer de vejiga y proporciona una base para el posible desarrollo de enfoques específicos basados en lncRNA para el tratamiento de cáncer de vejiga.
Información de Apoyo
Figura S1.
Western blot de nivel de proteína CDK6 se realizó en células de cáncer de vejiga tratados con siRNA-CDK6
doi:. 10.1371 /journal.pone.0073991.s001 gratis (TIF)