Extracto
largos períodos de actividad element-1 (L1) es un elemento de transposición que puede moverse dentro de el genoma, que puede conducir a la diversidad del genoma y la función del gen modificado. Aunque la actividad de L1 en las células somáticas se suprime normalmente a través de la metilación del ADN, algunos L1 se activan en el carcinoma colorrectal. Sin embargo, la forma L1-retrotransposition (L1-RTP) está implicada en los trastornos gastrointestinales que queda por esclarecer. La hipótesis de que L1-RTP en las células somáticas podría contribuir al cáncer asociado con la colitis (CAC). Para solucionar esto, se empleó un modelo experimental de CAC utilizando ratones L1-reportero transgénicos portadores de un gen indicador L1-EGFP humano. Los ratones fueron sometidos a ciclos repetidos de la colitis inducida por la administración de sulfato de sodio dextrano (DSS) en el agua potable con la inyección del carcinógeno azoximetano (AOM). niveles L1-RTP se midieron mediante una reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa dirigidas a la EGFP reportero recién insertado en diversos tejidos y tipos celulares, incluyendo muestras obtenidas por microdisección láser y clasificación de células con citometría de flujo. los niveles de metilación de ADN del promotor L1 humano se analizaron mediante pirosecuenciación bisulfito. ratones mostraron niveles significativamente más altos de L1-RTP en el tejido de colon todo durante la fase aguda de la colitis AOM + tratados con DSS en comparación con los ratones no tratados previamente de control. niveles L1-RTP en el tejido de colon entero se correlacionó positivamente con la gravedad histológica de la colitis y el grado de infiltración de neutrófilos en la lámina propia (LP), pero no con el desarrollo de tumores en el colon. L1-RTP se enriqueció en LP células mesenquimales en lugar de células epiteliales (ECS), mieloide, o células linfoides. los niveles de metilación de ADN de la región promotora L1 humana mostraron una correlación negativa con los niveles L1-RTP. L1-RTP estaba ausente de la mayoría de los tumores encontrados en los ratones 22 semanas de edad. En conclusión, hemos demostrado que L1-RTP fue inducida en la mucosa CAC ratón de acuerdo con la respuesta inflamatoria aguda; Sin embargo, retrotransposition no parece tener relación directa con el cáncer de iniciación colitis inducida por
Visto:. Otsubo T, T Okamura, Hagiwara T, Y Ishizaka, Dohi T, Kawamura YI (2015) retrotransposition de largos períodos de actividad de nucleótidos Elemento -1 está asociada con la colitis, pero no los tumores en un modelo de cáncer murino con colitis. PLoS ONE 10 (2): e0116072. doi: 10.1371 /journal.pone.0116072
Editor Académico: Emiko Mizoguchi, el Hospital General de Massachusetts, Estados Unidos |
Recibido: 30 de septiembre de 2014; Aceptado: 5 de diciembre de 2014; Publicado: 24 Febrero 2015
Derechos de Autor © 2015 Otsubo et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel
Financiación:. Esta investigación fue apoyado en parte por subvenciones de los programas de subvenciones-en-ayudas a jóvenes científicos; Subvenciones-en-Ayudas a la Investigación Científica (C); Subvenciones-en-Ayudas a la Investigación Científica en Áreas Prioritarias del Ministerio de Educación, culturas, Deportes, Ciencia y Tecnología; Subvenciones de Cooperación Internacional de Investigación del Ministerio de Salud, Trabajo y Bienestar Social; y el Centro Nacional para la Salud Global y Medicina (21-110, 22-205, 21-129, 23-101, 25-104, 26-110); y la subvención-en-Ayudas a la Investigación del Ministerio de Salud, Trabajo y Bienestar de Japón (09156296)
Conflicto de intereses:. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción.
Long elemento intercalado -1 (L1) es un elemento de transposición que se puede mover dentro del genoma de inducir deleciones de genes, inversiones e inserciones, que puede conducir a la diversidad del genoma, así como la alteración de la función de genes [1,2] . L1 está presente en todos los mamíferos incluyendo los seres humanos y comprende aproximadamente el 17% del genoma humano [3,4]. Aunque la actividad L1 es normalmente reprimida en las células somáticas a través de mecanismos epigenéticos, como la metilación del ADN, algunos L1 son activadas por factores ambientales, incluyendo carcinógenos y compuestos proinflamatorias [5-8]. Es importante destacar que, se detectaron inserciones L1 en varios tipos de cánceres humanos, incluyendo los cánceres colorrectales [9-11]. La hipometilación de las islas CpG en la L1 5'-UTR se ha informado no sólo en el cáncer, sino también en los trastornos inflamatorios humanos [12,13] lo que sugiere un papel potencial para L1 transposición en condiciones inflamatorias. Esta posibilidad es particularmente importante en la carcinogénesis gastrointestinal, debido a la inflamación crónica es uno de los factores de riesgo más importantes para la malignidad gastrointestinal [14,15]. Sin embargo, la forma L1-retrotransposition (L1-RTP) está implicada en la inflamación gastrointestinal y los tumores malignos que queda por esclarecer. Nuestra hipótesis es que L1-RTP en las células somáticas podría contribuir al cáncer asociado con la colitis (CAC). Para hacer frente a esta posibilidad, se empleó un modelo experimental de CAC con el azoximetano carcinógeno (AOM), junto con la inducción de colitis por dextrano sulfato sódico (DSS) en el agua potable en conjunción con un sistema indicador L1 de ratón transgénico. El mecanismo de este modelo CAC ha sido ampliamente investigado usando varios tipos de ratones con genes manipulados. Por ejemplo, TNF-receptor 1 (TNFR1) ratones deficientes mostraron disminución de los números de tumores, que eran dependientes de la deficiencia de TNFR1 de sus células hematopoyéticas [16]. Como una señal de aguas abajo de TNFR1, se informa de transcripción factor nuclear kappa B (NF-kB) a ser crítico en el desarrollo asociado con la inflamación de cáncer con colitis [17]. IL-6 también promueve el crecimiento tumoral, posiblemente a través de la activación de la quinasa activada por Janus (JAK) y el transductor de señal y activador de la transcripción (STAT) 3 vías [18-20].
En este estudio, encontramos que L1-RTP se asoció positivamente con la gravedad de la colitis. La activación de L1 se correlacionó con la hipometilación de las islas CpG en la L1 5'-UTR. Sin embargo, L1-RTP no fue mayor en los tumores en este modelo que sugiere que L1-RTP no está implicado de manera significativa en la iniciación del tumor en este modelo de CAC.
Materiales y Métodos
declaración Ética
Todos los experimentos con ratones se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices institucionales para el Cuidado y uso de Animales de laboratorio de Investigación con la aprobación del Comité de Cuidado y uso de Animales del Instituto de Investigación, Centro Nacional para la Salud Global y Medicina (número de autorización 14039). Los animales fueron sacrificados con ketamina y xilacina y se hizo todo lo posible para minimizar el sufrimiento.
Ratones y el modelo CAC
Una línea de ratones transgénicos que alberga un gen reportero EGFP-L1 humana (
HL1-EGFP), llamado Línea 4, fue desarrollado en nuestro centro [5] y se utiliza en todos los experimentos. Los ratones se mantuvieron en condiciones libres de patógenos específicos durante los experimentos. protocolos modelo CAC se muestran en la Fig. 1A. inyección peritoneal semanal de azoximetano (AOM, 10 mg /kg, Sigma-Aldrich Japón) se inició a 6 semanas de edad y se repite cuatro veces. Los ratones se mantuvieron en ayunas durante la 12 h antes de la inyección de AOM para mejorar el efecto de la carcinogénesis con AOM [21]. Los ratones del grupo experimental se les dio un 3,5% (W /V) de dextrano sulfato sódico (DSS, Sigma-Aldrich Japón) en el agua de bebida durante 5 días a las 7 semanas de edad, y este tratamiento se repitió cuatro veces sobre una base mensual. A las 22 semanas de edad (fase tumor), se obtuvieron tejidos de colon. tumores visibles se cortaron de la mucosa y se analizaron por separado de la mucosa de fondo. En algunos experimentos, tejidos de colon se obtuvieron a partir de ratones de 8 semanas de edad, los siguientes dos inyecciones de AOM y dentro de siete días después de interrumpir el tratamiento DSS (fase aguda).
(a) El calendario esquemático de la OMA + DSS colitis modelo de ratón. Las flechas indican los puntos de tiempo asociadas con las fases inflamatorias y tumorales agudos para la cosecha de los tejidos y /o tumores de colon. (B) los niveles L1-RTP se analizaron con el ADN genómico extraído de tejidos de colon distal enteros y /o tumores. La copia /genoma EGFP se calculó mediante el uso de ß-actina como control interno. Las muestras etiquetadas como "aguda AOM + DSS" fueron obtenidos durante la fase aguda en el panel A, y otros fueron recogidos durante la fase del tumor. AOM + DSS indica el tejido del colon residual después de la eliminación de tumores visibles. Los datos se muestran como media ± desviación estándar. Los valores de p se calcularon con una prueba t de dos colas no apareada.
La cuantificación de L1-RTP
Para el ensayo de PCR, ADN genómico fue preparado a partir de los tejidos y las células utilizando un ADN sistema de extracción (QuickGene; Fujifilm, Tokyo, Japón). El método para la detección de la frecuencia de L1-RTP con una PCR focalización retrotranspositioned EGFP se describió anteriormente [22]. Para el análisis de los tumores, un tumor seleccionado al azar de la cada ratón se sometió a extracción de ADN y análisis L1-RTP.
El análisis histológico y microdisección láser
tejidos de colon entero que resulte durante la fase inflamatoria aguda se enrolla y se congelaron en nitrógeno líquido. Las secciones congeladas se fijaron con acetona fría y se tiñeron con hematoxilina y eosina para el análisis histológico. las puntuaciones histológicas para el grado de pérdida de cripta y la infiltración de células se asignaron a ciegas a cada colon. pérdida cripta se evaluó como la disminución relativa de área de la célula epitelial en comparación con el colon naïve usando una imagen capturada analizados por software imagen J (NIH, Bethesda, MD, EE.UU.): 0-ningún cambio o menos de 10% de disminución de dos puntos naïve , 10/01/30% de las células epiteliales se perdieron, 02.30.50%, 3-50-70%, 4-70-90%, 5-más de 90%. puntajes de infiltración celular: 0: no hay cambio desde dos puntos ingenuo, de infiltración 1-focal limitada a la capa de la mucosa, la infiltración 2-focal en ambas capas mucosa y submucosa, la mucosa de 3 difusa y la infiltración de la submucosa. Una puntuación de cada ratón se determina como la suma de la puntuación de la cripta y la puntuación de la infiltración de células. La infiltración de neutrófilos se determinó por la morfología nuclear. En algunos experimentos se obtuvo ADN genómico a partir de las secciones congeladas utilizando un sistema de microdisección por láser (LMD 7000, Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
separación de células
Las células epiteliales (ECs ) fueron aisladas de los dos puntos y se trató con EDTA 10 mM en solución salina equilibrada de Hank (HBSS, Sigma Aldrich). lámina propia (LP) células (LPC) se aislaron mediante un suave MACS Disociador (Milteny Biotech, Colonia, Alemania) con el kit de la lámina propia disociación para el ratón (Milteny Biotech). LPC se tiñeron con isotiocianato de fluoresceína (FITC) -, R-ficoeritrina (PE) -, o aloficocianina (APC) marcado con anti-CD3, anti-CD11b, anti-CD11c, anti-B220, anti-Gr-1, o anti -EpCAM anticuerpos (BD Biosciences, Franklin Lakes, Nueva Jersey, EE.UU.), y 7-aminoactinomicina D para identificar células viables, y las células se clasifican con un citómetro de flujo (MoFlo, Beckman Coulter, Tokio, Japón). El tipo de células de clasificación se realizó con los siguientes marcadores de superficie: las células T, EpCAM
CD3
+ CD11b
-CD11c
-; Las células B incluyendo las células plasmáticas B220-baja, EpCAM
-B220
+ CD11b
-CD11c
-; células dendríticas /macrófagos, una mezcla de EpCAM
CD3
-CD11b
+ células, EpCAM
CD3
-CD11c
+ células, y EpCAM
CD3
-F4 /80
+ células; granulocitos, EpCAM
-GR-1
pilas de gran; Las células no epiteliales no hematopoyéticas, EpCAM
CD3
-B220
-CD11b
-CD11c
-F4 /80
-GR-1
-. células
metilación del ADN de ensayo
Para evaluar el estado de metilación de L1, bisulfito de pirosecuenciación se realizó con una máquina de pirosecuenciación PyroMark Q24 (QIAGEN, Hilden, Alemania) utilizando el kit de piro LINEA (LINE-CpG PyroMark Q24 1 de 4 x 24, Cat. no.970042, QIAGEN).
el análisis estadístico
el análisis estadístico se realizó mediante el programa estadístico Prisma 6 (GraphPad Software, Inc., la Jolla, CA, EE.UU.) con los métodos indicados en la figura de leyendas. Para el análisis de la diferencia no apareados se utilizaron pruebas t de Student de una o dos colas. Las correlaciones fueron probados con cálculos de Pearson de dos colas. Los valores de P & lt; 0,05 se consideraron significativos.
Resultados y Discusión
niveles L1-RTP aumentaron en la fase aguda de la colitis
El protocolo experimental para el modelo CAC se ilustra en la Fig. 1A. Los ratones transgénicos que albergan un gen humano L1-EGFP reportero (
HL1-EGFP
) [5] se utilizaron en todos los experimentos. En este modelo, se obtuvieron con éxito tumores de colon de los ratones de 22 semanas de edad, después de cuatro inyecciones de AOM y cuatro ciclos de DSS colitis. De tres a veinticuatro tumores se encuentran en cada uno de dos puntos (media = 11,5, 11 ratones). Sin tratamiento (naïve) o ratones tratados sólo con otitis media aguda o DSS no desarrollaron tumores de colon. Para examinar la inducción de L1-RTP, se obtuvo primero el tejido del colon entero de cada grupo de ratones durante la fase de tumor (22 semanas de edad) o durante la fase aguda después de la primera administración de DSS (8 semanas de edad). Inicialmente se intentó detectar células que expresan EGFP o histológicamente con citometría de flujo; sin embargo, la expresión de EGFP no era visible, probablemente debido a la baja incidencia de L1-RTP. Por lo tanto, se cuantificó la frecuencia de L1-RTP con una PCR dirigidos retrotranspositioned EGFP como se describe anteriormente [22]. Como resultado, se encontró que L1-RTP se incrementó significativamente durante la fase aguda en el grupo de colitis AOM + DSS, pero no en los tumores o en el fondo mucosa de dos puntos portadores de tumor (Fig. 1B). La inducción de la L1-RTP no se observó en los ratones tratados sólo con AOM o DSS. Estos resultados indican que la inducción de L1-RTP está asociado con la colitis aguda, pero no se mantiene hasta que la fase del tumor, ni directamente implicado en la tumorigénesis en este modelo de tumor colitis asociada.
niveles L1-RTP se correlacionan con la colitis la gravedad, pero no con los números tumorales
Aunque L1-RTP se indujo significativamente durante la fase aguda del modelo de CAC, los niveles de inducción mostraron considerables diferencias individuales (Fig. 1B). Por lo tanto, hemos examinado aún más la relación de L1-RTP con la gravedad de la colitis. Encontramos que las puntuaciones histológicas, compuestos de la pérdida de cripta y la infiltración de células, se correlacionó positivamente con la frecuencia de L1-RTP (Fig. 2A). Debido a que se observó que la inflamación histológicamente grave se caracteriza por la infiltración masiva de granulocitos con una amplia gama de la pérdida de células epiteliales (Fig. 2B), las muestras se clasificaron por la presencia o ausencia de la infiltración de granulocitos. Se observó una tendencia hacia una mayor L1-RTP en los tejidos con la infiltración de granulocitos que los que no los granulocitos (Fig. 2C). Aunque significativa L1-RTP no se detectó en los tumores, pensamos que es posible que los tumores podrían haber crecido por la expansión clonal de células negativas L1-RTP, pero ocurrencia de L1-RTP en la mucosa colónica fondo podría haber facilitado el desarrollo de tumores. Por lo tanto, hemos examinado la relación entre el número de tumores y la frecuencia de L1-RTP en la mucosa de fondo; sin embargo, no hubo correlación significativa entre estos dos factores (Fig. 2D). Estos resultados sostienen que L1-RTP se induce durante la colitis aguda de acuerdo con la gravedad de la inflamación; sin embargo, la L1 en el colon no se mantiene en un estado activado de la inflamación aguda en el desarrollo de tumores de colon después de episodios de colitis repetido. Por lo tanto, L1-RTP no parece estar directamente implicados en la iniciación del tumor de colon
.
(A) La puntuación histológica colitis y los niveles L1-RTP en todo el colon distal durante la fase aguda de los ratones mostró una correlación positiva. (B) Las imágenes histológicas típicas de la colitis con infiltración de neutrófilos (izquierda) y sin infiltración de neutrófilos (derecha) se muestran. La barra representa 100 micras. niveles (C) La L1-RTP se compararon entre el tejido del colon sin /con la infiltración de neutrófilos en la lámina propia del colon durante las fases agudas y tumores. Los datos se muestran como media ± desviación estándar. El valor P se calculó con el test t de una cola no apareado. (D) El nivel L1-RTP del Fondo de los números de tumores visibles mucosa del colon y no se correlacionaron.
L1-RTP se enriqueció en la fracción de LP del colon en la fase aguda de la colitis
a continuación, queríamos identificar los tipos de células, donde L1-RTP se llevó a cabo en el colon. Nos separamos células epiteliales y no epiteliales por microdisección de la capa de la mucosa del colon obtenido durante la fase aguda de la inflamación. ECs se troquela, y luego se disecó la capa de la mucosa restante y se sometió a extracción de ADN (Fig. 3A). Inesperadamente, L1-RTP se enriqueció en la fracción de células no epiteliales de LP (Fig. 3B). Por lo tanto, el próximo intentó identificar los tipos de células con L1-RTP mediante el aislamiento de LPC con la digestión de la colagenasa y la clasificación de células mediante citometría de flujo. Como resultado, L1-RTP no se detectó en CD3
+ células T, B220
+ B células /células plasmáticas, CD11b
+ /CD11c
+ /F4-80
+ macrófagos /células dendríticas, o Gr1
+ granulocitos (Fig. 3C). L1-RTP fue alta en la fracción de células, que fue negativa para estos marcadores de la superficie. Basándose en estos resultados, las células de tipo mesenquimal (MES) son más probable que sea responsable de la mayor L1-RTP durante colitis de fase aguda. Por otro lado, la frecuencia de L1-RTP en otros tipos de células se mantuvo en niveles bajos. Un análisis más detallado detallado para identificar los tipos de células que inducen L1-RTP que queda por investigar.
(A) fotografía representativa de una sección después de microdisección para las células epiteliales (CE, la parte superior), lámina propia (LP, fondo) y los tejidos restantes (incluyendo la submucosa y la capa muscular) de la sección de colon mediante microdisección por láser. (B) los niveles L1-RTP se analizaron en el colon EC, el LP, y la submucosa, más muscular capa (SM) aislaron por microdisección de ratones en la fase de colitis aguda. El valor relativo L1-RTP se normalizó mediante el uso de ß-actina como control interno. Cada parcela indica un ratón individual. Los valores de p se calcularon con una prueba t de una cola no apareado. (C) L1-RTP niveles fueron examinados en ECs o aislado EpCAM ordenados negativo cerrada fracciones no comunitarios por citometría de flujo a partir de ratones en la fase de colitis aguda, de la siguiente manera: las células T (EpCAM
CD3
+) , las células B (EpCAM
-B220
+), células dendríticas de macrófagos /(MΦ /DC, EpCAM
-CD11b
+ /CD11c
+ /F4 /80
+) , neutrófilos (EpCAM
-GR
-1
+) y otros tipos de células, las células mesenquimales más probables (MES, EpCAM
CD3
-B220
-CD11b
-CD11c
-F4 /80
-GR-1
-). Se indican los niveles de L1-RTP de fracciones de células agrupadas obtenidas a partir de cuatro ratones.
niveles de metilación del ADN del promotor Tg-L1 se correlacionaron inversamente con los niveles L1-RTP
Dado que el ADN la metilación del promotor de L1 es conocido para evitar la retrotransposición, se investigaron los niveles de metilación de ADN del promotor L1 humana en los ratones transgénicos. Se seleccionaron diversas muestras de colon de los ratones no tratados previamente y ratones con colitis aguda más AOM, focos de criptas aberrantes inducidos por cuatro inyecciones de AOM, ECs, y LPC, junto con 2-amino-1-metil-6-fenilimidazo [4,5-b ] piridina (PhIP) ratones tratado con (control positivo para el reportero L1-RTP humano [8]), y midieron los niveles de metilación del ADN de la isla CpG asociada con L1 humano usando pirosecuenciación bisulfito de la región 5'UTR del transgén. Como era de esperar, los niveles de metilación de ADN fueron generalmente alta (& gt; 80%) en todas las muestras. Sin embargo, se observó una correlación negativa estadísticamente significativa entre los niveles de metilación de ADN y L1-RTP (Fig. 4) en estas muestras. Inesperadamente, los niveles de metilación de ratones L1-RTP no tratados previamente no eran el más alto entre estas muestras, lo que sugiere diversos niveles de metilación de ADN del promotor HL1 en ratones ingenuos individuales.
Se analizaron los niveles de metilación de ADN del promotor L1 humano transgénico por pirosecuenciación bisulfito con los cebadores dirigidos solamente la secuencia promotora L1 humano. La correlación entre los niveles de los niveles de metilación de ADN promotora y L1-RTP L1 humana se analizaron utilizando tejidos de colon distal enteros con fracciones AOM + colitis DSS aguda (sin etiqueta), aislado del colon EC (EC) o LP (LP) de AOM + DSS colitis, focos de criptas aberrantes (ACF) inducida por AOM, colon entero de un ratón naïve, o el 2-amino-1-metil-6-fenilimidazo [4,5-b] piridina (PhIP) ratones tratado con (un control positivo de la humana reportero L1-RTP [8]). El valor P se determinó mediante un cálculo de Pearson de dos colas.
Este es el primer informe en el que L1-RTP se demostró directamente
in vivo
, inducida por la administración de un agente carcinógeno con la inducción de colitis. En este estudio de CAC, se muestra que L1-RTP no es inducida en las células epiteliales o células hematopoyéticas, pero muy probablemente en un tipo de célula mesenquimal. Además, se midió con éxito los niveles de metilación del ADN del promotor L1 humano en este modelo de ratón, y se encontró una correlación negativa entre L1-RTP y la metilación del ADN de su promotor. Este resultado apoya la idea de que la hipometilación de L1 está asociada con L1-activación. Por otra parte, no hemos encontrado L1-RTP en los tumores de colon o de su mucosa fondo en este modelo de cáncer de colon murino, a pesar de una correlación se ha establecido entre L1-RTP y el cáncer en los seres humanos como se describe en una revisión reciente [23]. En su lugar, L1-RTP se asoció con inflamación aguda. La correlación positiva de los niveles de L1-RTP con las puntuaciones histológicas y el grado de infiltración de células sugiere una posible contribución de L1-RTP a la gravedad de la colitis aguda. En este sentido, L1-RTP pueden estar implicados en el mecanismo de la exacerbación de la inflamación. Nuestra especulación inicial fue que la frecuencia de L1-RTP se aumentó durante el curso del desarrollo del tumor asociado con la inflamación. Sin embargo, nuestros resultados globales indican que L1-RTP tiene un impacto directo limitado en la tumorigénesis. Las posibles razones para este resultado inesperado son los siguientes. En primer lugar, nuestro
in vivo
sistema no detecta el ratón endógeno L1-RTP, aunque la detección de la RTP del transgén L1 humano era clara. Los niveles de humano L1-RTP en el colon fueron en general bajas, y esta sensibilidad de detección pueden no representar exactamente el retrotransposition endógeno en los ratones, que podrían afectar a la frecuencia de la CAC. Sin embargo, el hecho de que se detectaron aumentó L1-RTP en la colitis aguda, pero no en los tumores indica que el impacto de L1-RTP en la tumorigénesis es al menos indirecta. En segundo lugar, el estudio anterior informó de que L1 retrotransposition estaba presente en el hígado preneoplásicas pero no en el adenocarcinoma de hígado posterior [24]. Los autores argumentaron que la progresión del tumor podría haber elegido para la pérdida del cromosoma que contiene la L1 activo. En caso de CAC, la aparición de la pérdida cromosómica en tumores también podría disminuir la frecuencia de L1-RTP en los tumores. Por último, en este sistema modelo de ratón, la expansión del tumor se limita a la capa de la mucosa del colon, y los tumores no proceder a las etapas avanzadas, como los cánceres humanos que muestran características malignas de la invasión y la metástasis. Por lo tanto, esto puede no ser un modelo adecuado para la investigación de la etapa avanzada de cánceres malignos. Por lo tanto, nuestros resultados indican que el impacto de L1-RTP en la iniciación del cáncer de colon es limitada en este modelo CAC; sin embargo, posibles funciones de L1-RTP en la progresión tumoral y la metástasis permanecen sin determinar. Para evaluar la posible participación de L1-RTP en el cáncer avanzado estado requeriría el establecimiento de diferentes modelos de cáncer avanzado, tales como líneas de células tumorales malignas mediante la inducción de mutaciones en oncogenes o anti-oncogenes en estos ratones transgénicos
.
Recientemente, el papel de las células estromales mesenquimales en diversas condiciones inflamatorias que incluyen colitis ha sido reportado. Las propiedades reparadoras y anti-inflamatorios de células estromales mesenquimales han sido probados en una variedad de modelos animales y han sido aplicadas en entornos clínicos específicos [25]. Se han demostrado que las células madre mesenquimales en particular, en la OMA + DSS modelo de colitis inducida, derivadas de médula ósea que tiene propiedades anti-cancerígenas a través de crecimiento transformante-beta de señalización del factor [26]. Estos resultados sugieren la posibilidad de que L1-RTP, que encontramos en las células mesenquimales, puede perturbar la función de células anti-inflamatoria. Más investigación de células mesenquimales como un tipo de célula diana de retrotransposition será interesante y puede dilucidar su papel potencial para influir en la gravedad de la colitis en la fase temprana de CAC.
Reconocimientos
pL1-EGFP (PEF -06R) construyen para la preparación de los ratones transgénicos fueron proporcionados amablemente por el Dr. Eline Tjetske Luning Prak, Laboratorio de Inmunología clínica del hospital de la Universidad de Pennsylvania.