Extracto
Frizzled receptor homólogo 3 fue hasta reguladas en varios cánceres gastrointestinales tales como cánceres esofágicos y gástricos. Por otra parte, homólogo de frizzled 3 ha informado recientemente que se expresa en muestras de adenoma colorrectal. En el presente estudio, se investigó el significado clínico de la proteína frizzled homólogo 3 en pacientes con cáncer colorrectal. El uso de inmuno tinción, rizado expresión homólogo 3 se examinó en 186 muestras de cáncer colorrectal, 79 especímenes colorectal adenoma, 133 especímenes de pólipos colorrectales, 127 especímenes de cáncer colorrectal con ganglios linfáticos y /o metástasis a distancia, 310 especímenes de varios carcinomas metastásicos de cáncer no colorrectal y 40 especímenes con ocurrencia simultánea de cáncer colorrectal, adenoma colorrectal y pólipos colorrectales. Se utilizó el análisis estadístico para correlacionar la expresión de proteínas rizado homólogo 3 de la clinicohistopathological factores, la recurrencia /metástasis y la supervivencia después de un seguimiento durante 42 meses en pacientes con cáncer colorrectal. Frizzled proteína homólogo 3 se expresó en los especímenes 100% cáncer colorrectal, 89% especímenes adenoma colorrectal, pólipos especímenes colorrectal 75% y 69% normales tejidos epiteliales colorrectales. Por otra parte, frizzled homólogo 3 puntuaciones de inmuno fueron altamente correlacionado con la progresión del cáncer colorrectal. Además, homólogo de frizzled 3 se expresó en un porcentaje relativamente bajo de carcinoma hepatocelular metastásico y carcinoma de células claras renal metastásico con tinción focal y muy débil que otros tipos de tumores metastásicos. Por otro lado, los frizzled homólogo 3 inmunocitoquímicos decenas de adenomas colorrectales con carcinomas colorrectales sincrónicos fueron significativamente más altos que los de los adenomas colorrectales puros. El análisis estadístico mostró que frizzled homólogo 3 puntuaciones de inmuno se asociaron con Dukes estadio y el estado de los ganglios linfáticos. Finalmente, los grupos estratificadas de pacientes con cáncer colorrectal tenían diferencias significativas en su recurrencia /metástasis y supervivencia. En conclusión, el presente estudio a gran escala ha demostrado claramente que la proteína rizado homólogo 3 puede generar información clínicamente importante para los pacientes con cáncer colorrectal.
Visto: Wong SCC, El CW, Chan LMC, Chan AKC, Wong HT, Cheung MT, et al. (2013) Importancia clínica de Frizzled Homólogo 3 de proteínas en pacientes con cáncer colorrectal. PLoS ONE 8 (11): e79481. doi: 10.1371 /journal.pone.0079481
Editor: Masaru Katoh, Centro Nacional del Cáncer, Japón
Recibido: 5 de Mayo, 2013; Aceptado: September 23, 2013; Publicado: 8 Noviembre 2013
Derechos de Autor © 2013 Wong et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo recibió el apoyo de la donación directa de la Universidad china de Hong Kong (Código del proyecto: 2.041.412) y una donación privada. Sin embargo, los proveedores de fondos no tiene función alguna en el diseño del estudio, la recogida y el análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito.
Conflicto de intereses: Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
El cáncer colorrectal (CCR) es el tercer cáncer más frecuentemente diagnosticado en todo el mundo, lo que representa más de. 1 millón de casos y 600.000 muertes cada año [1]. El desarrollo de CRC es un proceso de múltiples pasos y esta enfermedad se puede manejar si se detecta en su etapa temprana, cuando es principalmente asintomáticas [2-4]. A pesar de considerables mejoras en la detección, el diagnóstico y el tratamiento del CCR en las últimas décadas, el pronóstico a largo plazo de los pacientes con CCR metastásico sigue siendo pobre [5,6]. La evidencia clínica demuestra que los criterios de estadificación actuales que se basan en los hallazgos clínicos y patológicos, aunque recientemente revisada, no reflejan la variación en el pronóstico y la supervivencia de CCR metastásico [7]. Por lo tanto, un marcador pronóstico exacto cuales 1) determina la naturaleza biológica y el comportamiento de CRC, y 2) refleja las diferencias en la supervivencia y experiencias clínicas, sería de suma importancia para optimizar el tratamiento individual de los pacientes con CCR.
factores Wnt comprenden una gran familia de glicoproteínas secretadas que participan en el desarrollo embrionario mediante la regulación de los patrones de tejido, la organogénesis, la especificación de la estructura corporal y promover la homeostasis del tejido en el adulto [8]. A nivel celular, los factores Wnt control de la proliferación, la diferenciación, la supervivencia, la motilidad y la polaridad [9]. El control estricto de la señalización de Wnt es crucial para la orquestación correcta del desarrollo y la activación constitutiva aberrante de la vía de señalización de Wnt dará lugar a la proliferación incontrolada de células, el crecimiento y la supervivencia, por lo tanto, promover el desarrollo del cáncer [9]. proteínas homólogo rizado (FZD) es una de siete pasadas tipo de receptor transmembrana y diez miembros (FZD1-FZD10) se han identificado en los seres humanos [10]. Wnt es un ligando de FZDs y consta de 19 genes de la familia en los seres humanos [11]. La unión de ligandos Wnt a sus receptores de la superficie celular transduce señales intracelulares a través de vía de señalización de Wnt, ya sea canónico o no canónico. En la vía canónica de señalización Wnt, Wnt se unen a un complejo de FZD y relacionados con los receptores de lipoproteínas de baja densidad 5 y 6 [12-14]. Las señales resultantes impiden la fosforilación de β-catenina por un complejo multiproteicos compuesto de la poliposis adenomatosa coli, la glucógeno sintasa quinasa 3β, casin quinasa 1 y axins, y promueven la estabilización de β-catenina citosólica, que algunos de ellos se transloca en el núcleo [12- 14]. La β-catenina nuclear se asociará con las células T /factor de linfocitos factores mejorador de transcripción para activar genes diana implicados en la supervivencia celular, la proliferación o la invasión [12-14]. La vía de señalización de Wnt no canónica consiste en la Wnt /Ca
2 + vía y Wnt /c-Jun N-terminal quinasa (polaridad celular plana) y la vía Wnt y se unen a un complejo compuesto por FZD, receptor tirosina quinasa receptor huérfano 2 /receptor relacionadas con tirosina quinasa para la activación de la señalización aguas abajo [12-14]. En Wnt /Ca
2 + vía, Wnt activa intracelular de Ca
2 + de señalización, así como Ca
2 + - proteínas quinasas dependientes, como la proteína quinasa C y la calmodulina proteína quinasa dependiente II [12- 14]. En la vía Wnt /JNK, la estimulación del receptor activa Dishevelled, que a su vez activa la familia Rho de GTPasas como RhoA y Rac [12-14]. RhoA estimula la expresión de c-Jun a través de la fosforilación de c-Jun por la quinasa Rho asociada [12-14]. En resumen, FZD juega un papel crucial en ambas vías canónicas y no canónicas.
Human
FZD3
fue mapeado en el cromosoma 8p21 [10,15].
FZD3
ARNm se expresa en varios tejidos normales (músculo esquelético, riñón, páncreas, el cerebelo y la corteza cerebral) [10] que es hasta reguladas en varios tipos de cáncer (carcinoma de esófago, carcinoma de células escamosas de pulmón, aguda primaria y la leucemia linfoblástica, mieloma, linfoma y sarcoma de Ewing) [16-19]. Un informe reciente ha demostrado que
FZD3
ARNm se expresó en una pequeña cohorte de adenoma esporádico y familiar adenomatosos tejidos poliposis adenoma [20]. La importancia de que no se sabe todavía y por lo tanto será interesante para examinar la expresión de la proteína FZD3 en una gran cohorte de muestras primarias y metastásicas de CRC y muestras de adenoma colorrectal (CAD). La información obtenida será muy útil para nosotros para examinar el potencial pronóstico de la proteína FZD3 en pacientes con CCR. Además, la expresión de la proteína FZD3 en otros tipos de cánceres metastásicos también se examinó con el fin de explorar si la proteína FZD3 se puede utilizar como un marcador de diagnóstico adjunto para CCR metastásico.
Materiales y Métodos
Ética Declaración
El estudio se realizó de acuerdo con los principios expresados en la Declaración de Helsinki. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes o los familiares para el uso de dichas muestras en la investigación. Desde el consentimiento del paciente no era posible que los tejidos de archivos ya que algunos pacientes habían fallecido en el momento del estudio, el comité de ética renuncia específicamente la necesidad del consentimiento de los pacientes. El estudio fue aprobado por el Comité de Investigación Clínica de Ética del Hospital Queen Elizabeth, Hong Kong Región Administrativa Especial (RAE).
muestras de tejido
Siete cohortes de formol fija, embebido en parafina (FFPE ) especímenes fueron reclutados: 1) CRC con Dukes sistema de clasificación de la etapa A (43), la etapa B (48), la etapa C (63), etapa D (32), en total: 186, 2) CAD con displasia leve (25), displasia moderada (28), displasia grave (26), en total: 79, 3) de pólipos de colon que se define específicamente como pólipos no adenomatosos o no neoplásicas que consisten en juvenil (35), hiperplásico (40), síndrome de Peutz-Jeghers ( 28) y pólipos inflamatorios (30), total: 133, 4) un bloque de FFPE con metástasis en los ganglios linfáticos de cada ejemplar Dukes C, en total: 63, 5) un bloque FFPE cada uno con metástasis ganglionar y distante de cada espécimen Dukes D, en total: 64, 6) trescientos diez-CRC no carcinomas metastásicos el que el tumor primario fue, respectivamente, el carcinoma hepatocelular (HCC) (23), el carcinoma renal de células claras (RCCC) (25), el carcinoma de células escamosas (SCC1) (30) , adenocarcinoma de pulmón (LAC) (25), de pulmón no de carcinoma de células pequeñas (LNSCC) (27), carcinoma papilar de tiroides (PTC) (24), carcinoma de mama (BC) (28), carcinoma de células claras de ovario (OCCC) ( 30), no pequeñas carcinoma cervical de células (CNSCC) (20), las trompas de Falopio adenocarcinoma seroso (FTSAC) (22), carcinoma de células transicionales (TCC) (23), carcinoma de células pequeñas (SCC2) (15) y el carcinoma con neuroendocrino diferenciación (CND) (18), 7) especímenes de cuarenta pacientes con CRC (10 Dukes a, 10 B de Dukes, 12 Dukes C, 8 Dukes D) con la aparición simultánea de CRC, adenoma y pólipos (120), fueron recuperados de los archivos (2005-2008) de la Anatomía Patológica y Citología Laboratorio, Departamento de Patología, hospital Queen Elizabeth, RAE de Hong Kong, por FZD3 inmuno tinción (CPI).
La mayoría de los casos de los adenocarcinomas colorrectales en la primera cohorte fueron moderadamente diferenciados (78%), mientras que el resto fue bien diferenciado (5%) o pobremente diferenciado (17%). La distribución por sexo de los pacientes con adenocarcinoma fue de 58% hombres y 42% mujeres. La edad varió de 42 a 89 años de edad. De los 79 especímenes adenoma examinados en la cohorte 2, el 59% era tubular, 35% era tubulovelloso, y 6% era adenomas vellosos. Los porcentajes de displasia leve, moderada y grave en los adenomas fueron 32, 35 y 33, respectivamente. La distribución por sexo de los pacientes con adenoma fue de 53% hombres y 47% mujeres. La edad varió de 28 a 85 años de edad. Los pólipos evaluados en la cohorte 3 fueron menores (26%), hiperplásico (30%), Peutz-Jeghers (21%), y los pólipos inflamatorios (23%). De los 133 pólipos, la distribución por sexos fue de 51% hombres, 49% mujeres y la edad varió de 23 a 76 años de edad. La información clínica de los pacientes con aparición simultánea de CRC, adenomas y pólipos en la séptima cohorte fueron moderadamente diferenciados (75%), bien diferenciado (7%) o pobremente diferenciado (18%). La distribución por sexo de los pacientes con adenocarcinoma fue de 60% hombres y 40% mujeres. La edad varió de 45 a 87 años de edad Masculino
Anticuerpo
anticuerpo monoclonal FZD3 antihumano de ratón (dilución 1: 100, clon 169310, MAB1001, R & amp; D Systems, Inc., de Minneapolis. , se utilizó EE.UU.).
tinción CPI y evaluación
secciones de tejido de serie (4 m de espesor) fueron cortadas y la recuperación de antígenos se realizó a través de bonos de recuperación del epítopo Solución 2 en el automatizado Bond-max immunostainer (Vision BioSystems, Mount Waverley, Australia) a 100 ° C durante 25 minutos. La tinción se realizó de acuerdo con un protocolo estándar en el immunostainer. sistema de detección de polímero se selecciona para evitar el problema de la no específica tinción biotina endógena. carcinoma de esófago se utilizó como control positivo [16], que se montan en todas las diapositivas de prueba y los controles negativos se realizaron mediante la sustitución del anticuerpo con solución salina tamponada con tris. Con el fin de medir la expresión FZD3 en cada muestra de paciente con precisión, un número máximo de células diana con la intensidad de la tinción que refleja el patrón de expresión en general es el criterio principal para la puntuación. Los portaobjetos teñidos fueron evaluados en por lo menos 5 campos con el mayor número de células diana bajo microscopio de luz con una ampliación de X 400 por 2 observadores independientes, sin conocimiento de los resultados clínicos y en el caso de desacuerdo, se alcanzó un consenso después de una discusión detallada y un examen diapositivas utilizando una microscopio de múltiples cabezas. Aproximadamente 250 células se contaron en cada campo y, por tanto, al menos 1.250 células serían contados para cada muestra de paciente. Todas las diapositivas se anotó semi-cuantitativamente y se expresan como una puntuación CPI multiplicando el "porcentaje de células positivas" y la "intensidad de la tinción", tal como se describe anteriormente [21]. intensidad de la tinción se puntuó como sigue: 0 = negativo; 1 = débil; 2 = moderado; 3 = fuerte; y 4 = muy fuerte. La puntuación de la CPI varió de 0 a 400. La puntuación de porcentaje y la intensidad de la tinción fue atacado a 1) células CRC, 2) células CAD y 3) las células epiteliales normales adyacentes. tinción membranosa debe ser el resultado esperado. Sin embargo, nuestra experiencia demostró que la tinción ICC usando diaminobencidina como cromógeno produciría una tinción membranosa espesada que fue similar a la tinción citoplásmica. Además, el anticuerpo usado en este estudio tenía el mejor rendimiento entre los anticuerpos que habían sido probadas.
El análisis estadístico
La diferencia en las puntuaciones de la CPI de la proteína FZD3 entre CRC, CAD y células epiteliales colorrectales normales adyacentes se estudió mediante la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis. Además, se utilizó la prueba no paramétrica de correlación de Spearman para examinar si las puntuaciones de la CPI FZD3 se correlacionaron con la progresión de la CRC y etapas de clasificación de Dukes. Se utilizó la prueba U de Mann-Whitney para examinar si las puntuaciones de la CCI de CAD con carcinomas colorrectales sincrónicos tenían una diferencia significativa de las de CAD puro. Para correlación con parámetros clínicos, se utilizó la regresión multivariante para analizar si las puntuaciones de la CPI FZD3 se correlacionaron con los factores clínico-histopatológico de los pacientes y la prueba de chi-cuadrado se utilizó para examinar la asociación entre las puntuaciones de la CPI FZD3 y recurrente o metastásica CRC. La supervivencia global se define como que a partir de la fecha de la operación a la fecha de la muerte por cáncer. Se utilizó el método de Kaplan-Meier para determinar la probabilidad de supervivencia y el log-rank test fue utilizado para comparar la supervivencia entre los grupos y de riesgos proporcionales de Cox modelo se aplicó para determinar los factores pronósticos independientes de supervivencia. (Paquete Estadístico para el software de Ciencias Sociales versión 16.0 para Windows, las estadísticas de IBM SPSS, Chicago, IL., EE.UU.). Un
P
valor & lt; 0,05 fue considerado estadísticamente significativo en todos los análisis. Todos los
valores de p son de dos colas.
Resultados
CPI tinción
Como se mencionó en la sección de tinción de la CPI y la evaluación, se detectó una tinción membranosa engrosada que se parecía a la tinción citoplasmática. Entre las 955 diapositivas que hemos examinado, se encontró variación entre individuos sólo en 16 diapositivas (1,7%) y se llegó a un consenso después de una discusión con un microscopio de múltiples cabezas.
tinción CPI mostró que la proteína se expresó en FZD3 100% (186/186) de las muestras de CRC, el 89% (70/79) de las muestras de CAD, el 75% (100/133) de las muestras de pólipos colorrectales y 69 % (129/186) de los tejidos epiteliales colorrectales normales adyacentes a los tejidos de CRC. Una microfotografía representativa de cada tipo de muestra en la primera cohorte se muestra en la Figura 1. El control positivo de carcinoma esofágico mostró una intensa tinción citoplásmica positiva mientras que el control negativo no tenía ninguna tinción CPI (Figuras 1E y 1F). El análisis detallado mostró que la inmunorreactividad de la proteína FZD3, como lo muestran las puntuaciones de la CPI, tuvo diferencia significativa entre los CRC, CAD, pólipo de colon y los tejidos epiteliales colorrectales normales (Figura 2,
P Hotel & lt; 0,0001, Kruskal-Wallis prueba) y el rango y la mediana de las puntuaciones de la CPI en diversos tipos de muestras se muestran en la Tabla 1. FZD3 puntuaciones de la CPI están altamente correlacionados con las etapas de la progresión del CCR (
P Hotel & lt; 0,0001, test de Spearman de correlación de rangos ). Por otra parte, las puntuaciones de la CPI de la proteína FZD3 en muestras de CRC se correlacionó significativamente con Dukes etapa (Figura 3,
P Hotel & lt; 0,0001, prueba de correlación de rangos de Spearman). Además, nuestros resultados mostraron que la proteína FZD3 se expresó en células metastásicas de CRC 100% en los ganglios linfáticos o /y órganos distantes de Dukes 3 y 4 muestras, respectivamente (Figura 4). En línea con estos resultados, continuamos examinar si FZD3 puede ser utilizado como un marcador de diagnóstico complementario para la CRC metastásico mediante la realización de FZD3 tinción CPI en 310 no CRC muestras de carcinoma metastásico. Los resultados mostraron que la proteína FZD3 se expresó en el 17% (4/23) de HCC, 12% (3/25) de RCCC, el 80% (24/30) de SCC1, el 84% (21/25) de ALC, 82% (22/27) de LNSCC, el 88% (21/24) de PTC, el 86% (24/28) de la Columbia Británica, el 80% (24/30) de la OCCC, el 85% (17/20) de CNSCC, el 82% (18/22) de FTSAC, 74% (17/23) de TCC, 100% (15/15) de SCC2 y 100% (18/18) de CND (Figuras 5A y 5B). En los casos con resultados positivos, examen detallado demostró que la tinción era focal y muy débil en HCC, RCCC en comparación con los de otros tipos de tumores (Figuras 5B y 6).
El cáncer colorrectal
colorectal adenoma colorrectal
pólipo
normal adyacente tejido epitelial
Número de specimens18679133186Range de scores243 ICC 4000 a 3470 a 3600 anota ICC 279Median 32724119297.5Table 1. El alcance y la mediana de las puntuaciones de la CPI en diferentes tipos de muestras.
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(A) Porcentaje de diversos carcinomas metastásicos no CRC con FZD3 tinción CPI y (B ) las puntuaciones de la CPI FZD3 en diversos carcinomas metastásicos no CRC. (CHC = carcinoma hepatocelular, RCCC = carcinoma renal de células claras, SCC1 = carcinoma de células escamosas, LAC = adenocarcinoma de pulmón, LNSCC = pulmón no pequeñas carcinoma de células, PTC = carcinoma papilar de tiroides, carcinoma BC = mama, OCCC = ovario carcinoma de células claras , CNSCC = cervical carcinoma de células no pequeñas, FTSAC = tubo de Falopio adenocarcinoma seroso, TCC = carcinoma de células transicionales, SCC2 = carcinoma de células pequeñas y carcinoma de CND = con diferenciación neuroendocrina).
similar observaciones se encontraron resultados para las muestras con la aparición simultánea de carcinoma colorrectal, pólipos de colon y CAD. Se observó tinción ICC para FZD3 en el 100% (40/40) de la Convención, el 93% (37/40) de CAD, el 70% (28/40) de los pólipos de colon. Por otra parte, las puntuaciones de la CPI FZD3 están altamente correlacionados con las etapas de la progresión del CCR (
P Hotel & lt; 0,0001, prueba de correlación de rangos de Spearman). De interés, las puntuaciones de la CCI de CAD con carcinomas colorrectales sincrónicos fueron significativamente más altos que los de CAD puro (
P Hotel & lt; 0,001, prueba de Mann-Whitney U, Figura 7).
multivariado análisis de regresión
Se aplicó un análisis de regresión multivariable para examinar si las puntuaciones de la CPI FZD3 se correlacionaron con los factores clinicohistopathological de los 186 pacientes Dukes A a D CRC. Se encontraron asociaciones significativas con Dukes etapa (
P Hotel & lt; 0,001) y el estado de los ganglios linfáticos (
P Hotel & lt; 0,05), pero no para la edad (
P = 0,547
) , sexo (
P = 0,813
), el estadio tumoral (
P = 0,284
) y el grado de diferenciación (
P = 0,462
).
recurrente o metastásica CRC
La mediana del número de FZD3 ICC marca desde el 154 Dukes C a pacientes de CRC era 321,5. El uso de este número mediana como punto de corte, 27 pacientes con ICC FZD3 puntuación de & gt; 321,5 y 8 pacientes con FZD3 puntaje CPI ≤ 321,5 tenían CRC recurrente o metastásico tras el seguimiento durante 42 meses y la asociación entre las puntuaciones FZD3 ICC y recurrente o metastásica CRC fue altamente significativa (prueba de Chi-cuadrado: χ
2 = 13.34 ;
P Hotel & lt; 0,001).
La supervivencia global de los pacientes de CRC
curvas de supervivencia global se representaron para los pacientes con CRC FZD3 ICC anota & gt; 327 y aquellos con puntuaciones de ≤ FZD3 ICC 327, donde 327 es el número medio de FZD3 ICC marca desde el 1
st cohorte de 186 pacientes Dukes A a D CRC. Nuestros resultados mostraron que la supervivencia de los 2 grupos de pacientes fue significativamente diferente (
P Hotel & lt; 0,0001, prueba de log-rank, Figura 8A). Con el fin de analizar los datos de una manera más específica, las puntuaciones FZD3 ICC fueron divididos en 4 grupos después de alinear en orden descendente: 1) la expresión de alto FZD3: más alto 25% (76% a 100%) las puntuaciones de la CCI, 2) moderadamente expresión FZD3 alta: segundas más altas puntuaciones ICC 25% (51% a 75%), 3) moderadamente baja expresión FZD3: segunda más baja de 25% (26% a 50%) las puntuaciones de la CPI y 4) baja expresión FZD3: más bajo 25% (0 25% de las puntuaciones%) de la CCI. Como se muestra en las Figuras 8B y 8C, la supervivencia entre los grupos 1 y 4 y los grupos 2 y 3 fueron significativas (
P
& lt; 0,0001 para A vs D y
P
& lt; 0,05 para B vs C, log-rank test). Por último, se encontró que los factores pronósticos independientes de supervivencia global identificado por el modelo de regresión de riesgos proporcionales de Cox para ser FZD3 puntuación ICC (
P = 0,016
) y el estado de los ganglios linfáticos (
P = 0,037
) .
Discusión
FZD3 es un receptor de la vía Wnt de señalización y-proteína es necesaria FZD3 para el desarrollo de las principales zonas de la fibra en el sistema nervioso central rostral [22], la cresta neural [23] y el desarrollo del folículo piloso [24]. Por otra parte, la proteína FZD3 tiene un papel preponderante en el desarrollo de neuritas inducida por Wnt en las células tumorales del sarcoma de Ewing [25] y es altamente expresado en los tejidos pobremente diferenciado carcinoma esofágico de células escamosas [16]. A lo mejor de nuestro conocimiento, este estudio es el primero en examinar el significado clínico de expresión de la proteína FZD3 en una gran cohorte de CDN y sus CAD y pólipo colorrectal especímenes pre-malignas. A pesar del hecho de que la proteína FZD3 se expresó en 100% de las muestras de CRC, 89% de las muestras de CAD, 75% de las muestras de pólipos de colon y los tejidos epiteliales colorrectales normales 69% adyacentes, la inmunorreactividad de FZD3 tenía diferencia significativa entre los 4 grupos de muestras. Por otra parte, la expresión de proteínas en FZD3 CAD como se muestra por nosotros coincide con los de un estudio previo que FZD3 ARNm expresado en el 79% (11/14) muestras de CAD con una mediana de cambio de 6,5 veces [26]. Sin embargo, sólo se FZD3 ARNm se encontró que tenía una regulación significativa en el 39% (9/23) especímenes de CRC en el mismo estudio [26]. Las razones que explican este resultado contradictorios pueden explicarse por las siguientes razones: 1) un pequeño número (23) de muestras de CRC fueron reclutados en comparación con el nuestro, 2) mRNA se detectó mientras que no se detectó la proteína en nuestro estudio, la normalidad 3) adyacente los tejidos se mezclaron con los tejidos de CRC como no microdissection se realizó en su estudio. El último punto es especialmente importante porque grados variables de los tejidos normales adyacentes por lo general se encuentran en especímenes quirúrgicos y nuestros resultados mostraron que la proteína FZD3 fue no expresa sólo en el 69% de los tejidos epiteliales colorrectales normales adyacentes, sino también en los fibroblastos, células endoteliales, linfocitos e histiocitos (datos no mostrados). tinción CPI de una sección de tejido nos permite examinar la célula individual bajo el microscopio y por lo tanto la expresión de la proteína FZD3 en células tumorales y normales se pueden cuantificar por separado. En realidad, la tinción de la proteína ICC FZD3 no sólo era más fuerte en el frente invasivo que en el centro del tumor, sino también muy intensa en todos los ganglios linfáticos metastásicos y órganos distantes. Este notable hallazgo puede demostrar que la proteína FZD3 tiene un papel importante no sólo en la carcinogénesis temprana CRC, sino también en el CCR metastásico vía a los ganglios linfáticos y órganos distantes. Sin embargo, la distribución polarizada focal de FZD3 como se muestra por Pourreyron et al. no se ha encontrado en nuestra cohorte de muestras [27]. Continuamos para investigar el potencial de la proteína FZD3 como un marcador de diagnóstico coadyuvante en CCR metastásico mediante la realización de tinción CPI en diversos tipos de carcinomas metastásicos no CRC. Nuestros resultados son muy interesantes porque tinción ICC para FZD3 fue positiva en diversos grados en todos los carcinomas metastásicos. Sin embargo, la tinción positiva en sólo el 17% de HCC y 12% de RCCC muestra que la proteína FZD3 puede no ser tan esencial en el proceso metastático de esos 2 carcinomas (Figuras 5A y 5B). En resumen, FZD3 tinción CPI puede ser útil para excluir esos 2 carcinomas en el diagnóstico patológico debido a que la tinción era focal y muy débil en los casos de CHC FZD3 tinción y RCCC positivos en comparación con los de otros tipos de tumores. Por otro lado, la proteína se expresó en FZD3 carcinomas metastásicos, que incluyen SCC1, LAC, LNSCC, PTC, BC, OCCC, CNSCC, FTSAC, TCC, SCC2 y CND. Estos nuevos resultados pueden demostrar que la proteína FZD3 puede estar involucrado en el proceso metastásico de estos carcinomas. De hecho, la fuerte tinción de la proteína FZD3 en todos los casos de CND y SCC2 no es sorprendente porque la proteína FZD3 es bien conocido por estar involucrado en el desarrollo del sistema nervioso central [22,23,28]. En línea con estos resultados, en este momento estamos examinar la expresión de la proteína FZD3 en sus respectivos tumores primarios de esos 11 tipos de carcinomas metastásicos no CRC que tienen alto nivel de expresión de la proteína FZD3 con el fin de tener una mayor comprensión sobre el papel de la proteína FZD3 en diversas vías de la carcinogénesis.
Otro hallazgo interesante de este estudio es que la mediana de la puntuación de la ICC CAD asociado con carcinomas colorrectales sincrónicos es mucho mayor que la del grupo que consiste en CAD puro, lo que sugiere que una proteína de alta FZD3 expresión en CAD puede significar un potencial de malignidad superior.
El objetivo final de este estudio es explorar el significado clínico de la proteína FZD3 en pacientes con CCR. Como en la actualidad no es escasa marcador pronóstico utilizado patológicamente por la CRC y por lo tanto es muy valiosa para investigar el potencial pronóstico de la proteína FZD3 que se demuestra en este estudio por la correlación significativa de las puntuaciones de la CPI FZD3 al estadio de Dukes, los ganglios linfáticos, la recurrencia o metástasis. Por otra parte, a largo plazo de seguimiento de los pacientes con CRC mostró que los pacientes con una puntuación más alta CPI FZD3 puede tener una menor probabilidad de supervivencia. En realidad, los especímenes con puntajes FZD3 ICC & gt; 327 eran principalmente de las fases III y IV los pacientes, mientras que aquellos con puntuaciones de FZD3 ICC ≤ 327 eran en su mayoría de las fases I y II de los pacientes. Esta puede ser una explicación de por qué los estadios III y IV los pacientes tienen un mayor riesgo de recurrencia, metástasis y supervivencia más corta que las fases I y II los pacientes. Un análisis más detallado de los datos clasificándola en 4 grupos en función de su nivel de expresión nos puede proporcionar más información sobre el significado pronóstico de la proteína FZD3 en pacientes con CCR. La diferencia significativa en la supervivencia entre los grupos de alto y bajo de expresión se espera que la diferencia significativa marginal (
P
& lt; 0,05) en la supervivencia entre los grupos moderadamente altos y moderadamente baja expresión proporciona una evidencia sólida de que la proteína tiene FZD3 importante pronóstico poder. Tomados todos esos hallazgos juntos, FZD3 tinción ICC potencialmente puede ser una herramienta valiosa para el pronóstico de la CRC. Con el fin de validar estos hallazgos, se está preparando un gran ensayo multicéntrico con un largo plazo de seguimiento en el examen de su importancia pronóstica. Wnt5A humana, WNT5B y Wnt11 son representativos no canónica Wnt de transducción de señales de polaridad celular de Wnt /planas a través de receptores FZD3 [10,29-31]. Un estudio reciente ha demostrado que las vías de respuesta Wnt se reorganizaron en la carcinogénesis colorrectal temprano como regulador negativo de la vía de señalización de Wnt, la cutícula desnuda homólogo 1 de inducción fue acompañada por la regulación del receptor FZD3 β-catenina-independiente en el CAD y el CRC [26]. Por otra parte, FZD3 no respondió a la estabilización de β-catenina
in vitro Opiniones y requiere una señal Wnt ligando [26]. Por lo tanto, FZD3 puede proporcionar una indicación del grado de la señalización de Wnt ligando en el tumor colorrectal. De hecho, una pequeña cohorte de muestras (20) con fuerte y débil FZD3 positivo fueron reclutados y se realizaron una comparación directa de FZD3 inmunotinción a los de la beta-catenina y se encontró que no había correlación entre FZD3 y inmunotinción beta-catenina (datos no mostrados). Este hallazgo puede fortalecer el papel de FZD3 en vía de señalización Wnt no canónica. Junto con los resultados de este estudio, la expresión de la proteína FZD3 en diferentes etapas clínicas de CRC puede demostrar adicionalmente la importancia clínica de FZD3 en pacientes con CRC. Nuestro siguiente paso es examinar los mecanismos moleculares subyacentes que regulan la expresión FZD3 y los genes directos transcripcional objetivo de FZD3 utilizando caída específica de FZD3 por pequeños ARN de interferencia en las líneas celulares de CRC, porque la terapia dirigida utilizando marcadores moleculares es un objetivo importante para la mejora de los resultados de pacientes con CCR. Además, la detección de la proteína FZD3 en el suero del paciente usando un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas también se explorará el fin de evaluar si la proteína FZD3 suero se puede utilizar como un marcador no invasivo. Sin embargo, una limitación importante de este estudio es que no tenemos la información clínica para evaluar el rendimiento de la proteína FZD3 mediante la comparación de su expresión al marcador CRC convencional, tal como el antígeno carcinoembrionario sérico.
En resumen, la expresión de proteínas FZD3 como se muestra por tinción con ICC está estrechamente relacionada con la carcinogénesis colorrectal y la progresión, y potencialmente puede servir como un nuevo marcador pronóstico. Por otra parte, FZD3 tinción CPI puede ser útil para excluir CHC y RCCC en sitios metastásicos.
Reconocimientos
Estamos muy agradecidos con el Profesor Benjamin Y.M. Yung y el Sr. Chiu Ka Yue por su destacado apoyo.