Extracto
cáncer de pulmón de células pequeñas (SCLC) es uno de los cánceres más agresivos, sin embargo, la mecanismos moleculares subyacentes a su resultado clínico devastador siendo difícil de alcanzar. En este estudio, se investigó si microARN (miARN) los perfiles de expresión pueden predecir los resultados clínicos de los pacientes con CPCP. Un total de 82 pacientes con CPCP limitado, que fueron tratados con resección quirúrgica y quimioterapia adyuvante, se inscribieron en este estudio. En primer lugar, estudiamos la expresión de 924 miRNAs de 42 pacientes con CPCP para descubrir miRNAs supervivencia relevantes y desarrollar modelos de pronóstico, que luego fueron validados en una cohorte independiente de 40 casos utilizando cuantitativa en tiempo real PCR. Se encontró que la firma de miR-150 /miR-886-3p se correlacionó significativamente con la supervivencia global (SG) de los pacientes con CPCP (p = 0,02) en el conjunto de entrenamiento, y tanto los niveles de expresión de los genes miARN eran mucho más bajos en las muestras que SCLC muestras pulmonares normales. La firma miARN también demostró ser un predictor significativo de la supervivencia en el conjunto de validación. Los pacientes con alto riesgo miARN firmas tenían peor supervivencia global (p = 0,005) y la supervivencia libre de progresión (p = 0,017) en comparación con aquellos con puntuaciones de bajo riesgo. Estos resultados retenidos significación estadística después de ajustar por edad, sexo y tabaquismo (HR: 0,26, 95%: IC 0,10-0,69, p = 0,007), lo que sugiere que puede ser un predictor independiente de supervivencia. En resumen, hemos desarrollado una firma de miR-150 /miR-886-3p pronóstico y la expresión validado en un conjunto de datos independiente de SCLC resecable. Estos resultados preliminares indican que los miRNAs pueden servir como marcadores pronósticos moleculares prometedores y nuevas dianas terapéuticas para el CPCP
Visto:. Bi N, J Cao, Canción Y, Shen J, Liu W, Fan J, et al. (2014) un microARN Firma predice supervivencia en su etapa inicial de células pequeñas de cáncer de pulmón tratados con cirugía y quimioterapia adyuvante. PLoS ONE 9 (3): e91388. doi: 10.1371 /journal.pone.0091388
Editor: Bernard Mari, IPMC, CNRS UMR 7275 UNS, Francia |
Recibido: November 26, 2013; Aceptado: 10 Febrero 2014; Publicado: 17 Marzo 2014
Derechos de Autor © 2014 Bi et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el Programa Nacional 973 clave fundamental de Investigación de China (2009CB521801, 2010CB912800) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81021061, 81071830). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de pulmón sigue siendo la principal causa de muerte en el mundo, y el cáncer de pulmón de células pequeñas (SCLC) representa el 15-25% de los casos [1]. Clínicamente, SCLC se distingue de cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) por el crecimiento rápido del tumor y la aparición temprana de metástasis. A diferencia de la mayoría de los países occidentales, las tasas de SCLC siguen aumentando en China, donde la prevalencia del tabaquismo también sigue aumentando. Aunque SCLC se considera muy sensible a la quimioterapia y la radioterapia, a menudo se produce una recaída dentro de los dos años y la supervivencia global (SG) más allá de cinco años es de aproximadamente 3% a 8%. Para mejorar los resultados clínicos, los nuevos medicamentos han sido desarrollados, pero es desalentador que la supervivencia para los dos localizada y CPCP avanzado se ha estancado en los últimos 20 años.
Se piensa
SCLC para realizar una variedad de anormalidades moleculares que son muy diferente de NSCLC. Por ejemplo, las mutaciones TP53, Rb inactivación y la amplificación de c-Myc son comunes en SCLC en comparación con NSCLC [2], [3]. En contraste, las mutaciones del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), las mutaciones K-ras y la inactivación P16 se encuentran frecuentemente en NSCLC, pero no en SCLC [2] - [4]. Sin embargo, los mecanismos subyacentes por los cuales SCLC progresa rápidamente aún no se han definido, y la identificación de estos mecanismos podrían promover el desarrollo de nuevos agentes terapéuticos y mejorar el manejo de esta enfermedad que se
.
Los microARN (miRNA) son una clase de RNAs no codificantes que son aproximadamente 22 nucleótidos de longitud y son reguladores post-transcripcional de la expresión génica. Debido a su papel fundamental en el desarrollo y la diferenciación, la participación en los mecanismos biológicos tumorigénesis y progresión, así como de baja complejidad, la estabilidad, y la fácil detección subyacentes, miRNAs representan una clase prometedora de biomarcadores en tejidos y basados en sangre de cáncer.
Un número de investigadores han demostrado que la expresión de los genes miARN aberrantes está estrechamente relacionada con el desarrollo y progresión de muchos tipos de cáncer, comportándose como supresores de tumores u oncogenes [5] - [10]. Datos recientes de múltiples estudios apoyan fuertemente el potencial de microARNs como biomarcadores para el NSCLC [11] - [17]. Además, la expresión de microARN alterado también se asocia con la progresión del tumor y la supervivencia en pacientes con cáncer de NSCLC. Un patrón global de expresión de los genes miARN evaluó a través de se ha establecido análisis basado microarray, y se han propuesto varias "firmas miARN" NSCLC para mejorar la estadificación molecular y clasificación de NSCLC [18] - [21]. Sin embargo, la importancia clínica de miRNAs en SCLC no ha sido bien establecida.
Para investigar el papel de los perfiles de expresión de los genes miARN aberrantes en SCLC, primero encuestados 924 miRNAs conocidos en muestras incluidas en parafina fijado en formol (FFPE) de 42 pacientes y se identificaron una firma de doble miARN para predecir el resultado clínico de los pacientes con CPCP etapa temprana tratados con resección quirúrgica seguida de quimioterapia adyuvante. Esta asociación fue validado con la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa cuantitativa análisis (QRT-PCR) de 40 muestras de los pacientes, y el valor pronóstico de la firma parece ser independiente de la edad, el sexo y el consumo de tabaco en el análisis de regresión de Cox.
Materiales y Métodos
Ética Declaración
Este estudio retrospectivo fue aprobado por el Comité de Ética del hospital del cáncer y el Instituto de la Academia china de Ciencias médicas y Pekín Unión Medical College. Todos los registros de los pacientes utilizados en este estudio se realizaron en el anonimato y aplica el anonimato antes del análisis.
Pacientes y muestras
Se han estudiado retrospectivamente fijado en formol e incluido en parafina (FFPE) muestras de pacientes que fueron diagnosticados con resecable CPCP limitado y se sometieron a cirugía seguida de quimioterapia adyuvante (regímenes basados en platino tales como cisplatino /etopósido y carboplatino /etopósido) en el hospital del cáncer y el Instituto de la Academia china de Ciencias médicas (Pekín, china) entre enero de 2000 y diciembre 2005. Todos los pacientes tenían un estado funcional ECOG de 0-1, y se excluyeron los pacientes con carcinoma /células grandes de células pequeñas mixta o carcinoma de células pequeñas combinadas. En total, se analizaron 82 muestras de pacientes de SCLC, entre los que se utilizaron 42 muestras como de selección definidos para identificar miRNAs asociados con la supervivencia usando un microarray miRNA. El miRNAs seleccionados han sido validados en los 40 pacientes restantes utilizando PCR en tiempo real. Hematoxilina y eosina (H & amp; E) secciones de todas las muestras fueron examinadas por un patólogo para confirmar el diagnóstico. Tres muestras de tejido pulmonar normales (NL) se obtuvieron de zonas no afectadas macroscópicamente 2-3 cm de distancia de los nódulos benignos de los pacientes sometidos a resección quirúrgica. Todos los tejidos se evaluaron histopatológicamente NL y eran morfológicamente normal.
ARN extracción
ARN de bajo peso molecular se aisló de ARN total, que se extrajo con TRIZOL, utilizando una solución de PEG precipitación método [22]. En resumen, para obtener ARN de bajo peso molecular, el ARN total fue precipitado con la misma cantidad de solución de PEG, y el sobrenadante se precipitó con isopropanol. Todos los extractos de ARN fueron evaluados y no mostró signos de degradación del ARN.
Se realizó el análisis de microarrays miARN
Análisis de microarrays como se describe anteriormente [23]. Brevemente, el ARN se marcó mediante el método de marcaje de ARN ligasa T4. La hibridación se realizó a través de un panel de microARN personalizada de microarrays (CapitalBio, Pekín, China), que incluía sondas, por triplicado para 924 humano maduro y secuencias de genes miARN ratón y ocho oligonucleótidos cortos que poseían ninguna homología con ninguna secuencia de ARN conocido como controles externos. Las matrices hibridadas fueron escaneados con un escáner 10K-A confocal láser LuxScan, y las imágenes obtenidas se analizaron entonces usando el software LuxScan 3,0 (CapitalBio, Beijing, China) [6]. Para el procesamiento de los datos, se examinó sólo los datos de los miRNAs humanos (546 de 924). En primer lugar, los datos brutos se pre-procesados para filtrar los miRNAs con intensidades máximas de menos de 300 para reducir el sesgo en la etapa de normalización. Después de la filtración, 456 (83,5%) de 546 miRNAs se incluyeron para el análisis adicional. Entonces, los valores medios de las manchas idénticas para cada uno de los genes miARN se restan de fondo, y las señales se normalizaron mediante la herramienta de la mediana central de los genes con el software Cluster 3.0.
Las razones de riesgo (HR) a partir del análisis de regresión de Cox univariante , un método estándar en bioestadística para examinar los datos de supervivencia que minimiza el sesgo por la simple eliminación de los pacientes censurados, se utiliza para identificar qué miRNAs se correlaciona con el sistema operativo de los pacientes [21]. Se utilizó un valor de p de 0,1 como punto de corte para la selección de genes. Una puntuación de riesgo para el pronóstico de supervivencia firma miARN se calculó de acuerdo a una combinación del nivel de expresión de los genes miARN ponderada por el coeficiente de regresión derivado de un análisis de regresión de Cox univariante [21], [24], [25]. También se realizó una comparación de la clase con la prueba de Mann-Whitney no paramétrico para identificar de manera diferente expresado miRNAs entre las 42 muestras de SCLC y las tres muestras NL.
Todos los datos en bruto fueron depositados en una base de datos compatible con MIAME (ArrayExpress , GEO:. GSM678225 - GSM678266)
miARN cuantitativa en tiempo real RT-PCR
ADNc se preparó a partir de 100 ng de ARN total con cebadores específicos para el miR-886-3p, miR-150 o U6 como control interno. Para la detección de miRNAs maduros, cuantitativa miARN RT-PCR se realizó utilizando el método de tallo-bucle qRT-PCR [26]. Los oligonucleótidos utilizados fueron el cebador inverso común miARN, GTGCAGGGTCCGAGGT; miR-150, TCTCCCAACCCTTGTACCAGTG; miR-150 RT imprimación, GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCACTGG; miR-150 cebador directo, GTCTCCCAACCCTTGTACCA; miR-886-3p, CGCGGGTGCTTACTGACCCTT; miR-886-3p RT imprimación, GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACAAGGGT; miR-886-3p cebador directo, CACGCGGGTGCTTACTGAC; U6 cebador directo, CTCGCTTCGGCAGCACA; y U6 cebador inverso, AACGCTTCACGAATTTGCGT. QRT-PCR se realizó con un sistema de detección de secuencias ABI Prizm 7300 con el ADN LightCycler Maestro mezcla SYBR Green I (Roche Molecular Biochemicals, Mannheim, Alemania) siguiendo las instrucciones del fabricante. El nivel de miRNAs se determinó utilizando el 2
-ΔΔCt método con el software SDS 1.3, normalizada a nivel del control interno, U6, y se representa para la comparación inter-celular.
Puntos finales
El objetivo primario de este estudio fue la SG. Los objetivos secundarios incluyeron la supervivencia libre de progresión (PFS), el control local-regional (LRC), y la supervivencia libre de metástasis a distancia (CPOS). OS se calculó a partir de la fecha de diagnóstico hasta la muerte por cualquier causa o la última fecha conocida de que el paciente estaba vivo. SLP se define como la duración de la fecha de diagnóstico a la fecha de la falla, ya sea en el tórax o en sitios distantes, la fecha de muerte por cualquier causa, o la fecha del último seguimiento de los pacientes.
LRC se calcula a partir de la fecha de diagnóstico de la primera recurrencia locorregional (tórax), y CPOS se calcula a partir de la fecha de diagnóstico de la primera metástasis a distancia, la fecha de muerte por cualquier causa, o la fecha del último seguimiento de los pacientes -up.
el análisis estadístico
las características clínicas de los diferentes grupos se compararon mediante la prueba del estudiante independiente t, χ
2 test o prueba exacta de Fisher. La correlación entre los microarrays de datos y los datos de QRT-PCR se analizó la correlación de Spearman. SG, SLP, LRC y CPOS se estimaron con el método de Kaplan-Meier y log-rank test. CRI se calcularon con el análisis de regresión de Cox. Un modelo de regresión de Cox se utilizó para probar si la firma miARN fue un factor pronóstico independiente cuando se ajustó por edad, sexo y tabaquismo. Todos los análisis se realizaron con el paquete estadístico SPSS (versión 11.5, SPSS Inc., Chicago, IL). Un valor de p bilateral de menos de 0,05 se consideró estadísticamente significativa.
Resultados
Las características clínicas de los 82 pacientes con CPCP se enumeran en la Tabla 1. La mediana de seguimiento el tiempo fue de 57,2 meses. Cuarenta y cuatro pacientes siguen vivos. Cuarenta y dos pacientes tuvieron recurrencia de la enfermedad, y el tiempo medio de un diagnóstico de la recaída fue de 12,3 meses.
En el conjunto de entrenamiento, se identificaron dos miRNAs, miR-150 y miR-886-3p, que se asociaron con OS pobres utilizando el modelo de regresión de riesgos proporcionales de Cox. Ambos eran de protección (Tabla 2). La comparación entre NL y tejidos SCLC también verificaron que el miR-150 y miR-niveles de expresión en tumores 886-3p SCLC eran mucho más bajos que en las muestras NL (figura 1).
A continuación, derivado de una fórmula para calcular la puntuación de riesgo para cada paciente desde el nivel de expresión de los dos miRNAs asociados con el sistema operativo, ponderadas por los coeficientes de regresión de Cox: escala de riesgo = (0,545 nivel × expresión de miR-150) + (0,617 nivel × expresión del MIR -886-3p). Los pacientes en el grupo de aprendizaje se dividieron en grupos de alto riesgo o de bajo riesgo utilizando la mediana de la puntuación de riesgo de la firma miARN como punto de corte. Se espera que los pacientes con una puntuación más alta de riesgo de tener mala OS. En comparación con los pacientes con un bajo riesgo miARN firma, los pacientes con una firma de alto riesgo tenían significativamente más corto mediana de SG (12,6 meses en comparación con los no alcanzado, p = 0,02) (Fig. 2A). Del mismo modo, los pacientes en el grupo de alto riesgo tenían PFS más cortos y tiempos de CPOS que aquellos en el grupo de bajo riesgo (ambos valores de p fueron 0,045) (Fig. 2B-C). Sin embargo, LRCs fueron similares entre los dos grupos (p = 0,36) (Fig. 2D).
Para validar los datos de microarrays de expresión de hibridación, los niveles de expresión de los dos miRNAs asociados con el sistema operativo se cuantificaron utilizando QRT-PCR en 10 tejidos de SCLC elegido al azar del conjunto de entrenamiento. Se observó una correlación significativa entre log 2-transformado intensidades de señal de la matriz y los valores de QRT-PCR Ct tanto para miR-150 (r = 0,94, p & lt; 0,001) y miR-886-3p (r = 0,75, p = 0,01) (Fig. 3).
(C) Correlación entre la expresión de ARN U6 de QRT-PCR y log 2-transformado expresión de matriz media global. (D) Expresión de U6 ARN en pulmón humano normal (NL, n = 3) y cáncer de pulmón de células pequeñas (SCLC, n = 42) muestras por el método de microarray. Bigotes representan los percentiles 10 y 90. p valor se calcula mediante la prueba de Mann-Whitney.
A continuación, se utilizó la misma fórmula índice de riesgo del conjunto de entrenamiento para calcular la puntuación de riesgo de la firma miARN de 40 pacientes en el conjunto de pruebas, para los que los niveles de miARN en muestras FFPE se determinaron mediante qRT-PCR. Una vez más, el alto riesgo de firma miARN puntuación de los pacientes mostraron una supervivencia más corta que en el grupo de bajo riesgo (OS mediana 18,9 meses en comparación con los no alcanzado, p = 0,005) (Fig. 4A). PFS, CPOS, y LRC también fueron significativamente más corto en el que la alta en el grupo de bajo riesgo (p = 0,017 PFS, DMFs p = 0,019 y p = 0,031 LRC, Fig. 4B, 4C, y 4D). Se realizó el análisis de Cox-de regresión multivariante para evaluar más a fondo si la doble-miARN firma es un factor pronóstico independiente asociado con la supervivencia en este conjunto de pruebas. Nuestros resultados mostraron que la firma miARN siguió siendo un factor pronóstico independiente para el sistema operativo (HR: 0,26, 95%: IC 0,10 hasta 0,69, p = 0,007), la SLP (HR: 0,36, 95%: 0,15 a 0,86 IC, p = 0,02) , CPOS (HR: 0,34, 95%: 0,13 a 0,86 IC, p = 0,02) y LRC (HR: 0,26, 95%: IC desde 0,07 hasta 0,99, p = 0,05) después del ajuste por edad, sexo y tabaquismo (tabla 3).
Discusión
en este estudio, hemos iniciado un ejercicio de la fase de descubrimiento para identificar miRNAs clave mediante encuestas a la expresión de 924 miRNAs conocidos en FFPE especímenes de 42 SCLC casos. Descubrimos que una doble-miARN firma, miR-150 y miR-886-3p, se asoció con el sistema operativo y la SSP. Estos resultados fueron confirmados posteriormente en una cohorte independiente de 40 pacientes con CPCP utilizando el método de QRT-PCR, y la concordancia entre estas dos plataformas fue alta.
La aplicación de un método de normalización óptima es particularmente importante para los perfiles de miARN para reducir al mínimo técnico variaciones y conseguir cambios biológicos significativos. Sin embargo no existe un método de normalización de consenso y recomendaciones en la actualidad para los métodos de cualquiera de microarrays o QRT-PCR en términos de miARN perfiles. En este estudio, se utilizó un método de normalización global en el conjunto de entrenamiento, que se considera más adecuado para la gran escala de perfiles de miARN-conjuntos de datos [27]. En el conjunto de pruebas, se utilizó ARN U6 para la normalización de datos, ya que es el gen de referencia más frecuente para los estudios de expresión de genes miARN en el cáncer de pulmón en la literatura [21], [28] - [30]. También hemos correlacionado las expresiones de los dos miRNAs en QRT-PCR con expresiones de matriz, y confirmó que los diferentes métodos de perfiles de miARN-no influyó en los resultados de miR-150 y miR-886-3p expresiones (figura 3A-B). Además, se observó la correlación de expresión U6 en QRT-PCR con expresión de matriz media global (r = 0,71, p & lt; 0,001; Fig. 3C). U6 ARN mostró absoluta veces cambia inferior a 1,2 veces y no tenía diferencias significativas entre las muestras de NL y SCLC (p = 0,96, Fig. 3D).
En la actualidad, sólo hay dos estudios publicados que examinan la expresión de los genes miARN en muestras de SCLC humanos [31], [32]. Lee et al. investigado la expresión de un panel de siete miRNAs (miR-21, miR-29b, miR-34a /b /c, miR-155, y let-7a) en 31 tumores SCLC [31]. Se informó de que la expresión de estos siete miRNAs no estaba relacionado con las características clínicas de los pacientes con SCLC y no era pronóstico en términos de sistema operativo o PFS, ni el nivel de expresión predictivo de la respuesta al tratamiento. Estos datos fueron consistentes con nuestros hallazgos. Ranade y sus colegas evaluaron la expresión de 880 maduras miRNAs humanos validados con un adicional de 473 validado pre-miRNAs humanos en 34 muestras de tumores, SCLC incluidas en parafina fijadas en formalina y se encontró que el miR-92a-2 * se asoció independientemente con la supervivencia. Aunque este estudio mostró por primera vez que los miRNAs pueden ser de pronóstico para el CPCP, incluyó casos con ambas estadio localizado (12,1%) y la etapa extensa (87,9%) de cáncer al momento del diagnóstico, y los pacientes con enfermedad en estadio tienen cánceres que se consideran más heterogénea. Además, en este estudio, los tejidos tumorales se recogieron no sólo de tumores primarios sino también de los ganglios linfáticos y metástasis a distancia, lo que confundir los resultados de la evaluación porque la expresión de los genes miARN se considera que es específico de tejido. Además, sólo la mitad de los pacientes de este estudio recibieron radiación durante el tratamiento de primera línea. Esto es importante ya que la radiación puede afectar significativamente la supervivencia en tanto limitado-etapa [33] y en estadio SCLC [34]. Hasta la fecha, nuestro estudio es el primero que muestra que en pacientes con CPCP etapa temprana tratados con cirugía y quimioterapia adyuvante, una firma de miR-150 /miR-886-3p predice SG y SLP, tanto en la formación y las pruebas conjuntos. Esta asociación fue independiente de la edad, sexo y tabaquismo. Estos hallazgos indican que la firma de miR-150 /miR-886-3p podría ser un buen candidato como marcador pronóstico molecular y potencialmente podría ayudar a los médicos a identificar a los pacientes con alto riesgo que podrían beneficiarse de más extensa terapia adyuvante.
también encontró que tanto el miR-150 y miR-886-3p se asoció negativamente con el sistema operativo. La comparación de los niveles de miRNA entre NL y tejidos SCLC además han verificado que el miR-150 y miR-niveles de expresión 886-3p en SCLC eran mucho más bajos que en las muestras NL. Debido al pequeño tamaño de la muestra NL, no fuimos capaces de identificar un patrón de valores de p persistentemente pequeños. Sin embargo, estos datos sugieren consistentemente que el miR-150 y miR-886-3p podrían servir como supresores de tumor importantes en el desarrollo y progresión de la SCLC y pueden funcionar con objetivos potenciales contra el cáncer. Nuestro estudio experimental previo ha demostrado un mecanismo mediado por el miR-886-3p novela que subyace a la expresión aberrante de la quinasa en el polo de tipo 1 (Plk1) y factor de crecimiento transformante beta 1 (TGF-β1) en el CPCP [23]. regiones 3 'no traducidas de Plk1 y TGF-β1 contiene muy conservadas motivos de unión de miR-886-3p, y las interacciones directas con el miR-886 regula por disminución Plk1 endógeno y los niveles de proteína TGF-beta 1. También demostramos que miR-886-3p sobre-expresión inhibió la proliferación, la migración y la invasión en las células de SCLC, así como suprimir el crecimiento y la metástasis de xenoinjertos de SCLC en ratones desnudos. Finalmente, se reveló que el mecanismo detrás de la expresión regulada hacia abajo de miR-886-3p en SCLC fue mediada por la hipermetilación del ADN de su promotor. En conjunto, estos resultados establecen un /TGF-b1 nexo miR-886-3p-Plk1 como nuevo regulador y prometedora diana terapéutica para el CPCP.
La observación de miR-150 como un supresor de tumores en el CPCP es consistente con observaciones similares en el cáncer de páncreas [35], cáncer de hígado [36], el cáncer colorrectal [37], NSCLC [38], linfoma maligno [39] y la leucemia aguda [40]. Sin embargo, su participación en SCLC no se ha informado, y los mecanismos moleculares precisos detrás de su expresión alterada no están claros. Jiang et al. Recientemente se encontró que el miR-150 es reprimida por la maduración MYC en la leucemia asociada al MLL. Además, el miR-150 se divulga para ser un miARN protectora que se dirige directamente a c-Myb y otros factores [36], [40]. miR-150 interactúa con el 3'UTR de ARNm c-Myb, y la sobre-expresión de miR-150 regula a la baja los niveles de proteína c-Myb [36]. Curiosamente, ambos miembros de la familia myc y el gen c-Myb son dos proto-oncogenes conocidos y dominantes que se encuentran con frecuencia para ser amplificada o sobreexpresada en SCLC [41]. Tomados en conjunto, estos datos recientemente publicados junto con la nuestra, sugiere que el miR-150 tiene un efecto supresor de tumores en el CPCP debido a los bajos niveles de expresión de miR-150 se correlacionó con la supervivencia de los pobres. Sin embargo, se necesitan estudios adicionales para dilucidar los mecanismos moleculares de la causa y efecto de la expresión de miR-150 alterado en el desarrollo y progresión de la SCLC.
Las limitaciones de este estudio incluyen su relativamente pequeño tamaño de la muestra, una necesidad debido a que sólo un pequeño número de pacientes (menos de 5%) con enfermedad periférica temprana [42] son candidatos quirúrgicos. Más de ochocientos pacientes de SCLC fueron tratados con quimioterapia en nuestro hospital durante el mismo período de tiempo. Como resultado, biomarcador análisis de pacientes de SCLC se presentan con mucha menor frecuencia en comparación con los pacientes de NSCLC. Además, debido a este hecho, la corrección de pruebas múltiples no hubiera sido aplicado en este estudio debido a que estas correcciones evitan errores de tipo I a costa de un aumento de los errores de tipo II. Sin embargo, la correlación entre la firma de miRNA y los resultados clínicos fueron confirmados independientemente en un segundo grupo de pacientes. Se necesitan estudios de mayor escala para confirmar nuestros hallazgos. Otra limitación es el diseño retrospectivo. Sin embargo, todas las mediciones se llevaron a cabo de una manera ciega. Por último, la posible interacción entre el miR-150 y miR-886-3p debe investigarse más para dilucidar el mecanismo detrás del papel pronóstico de esta firma dual-miARN.
En conclusión, nuestros resultados preliminares sugieren que el MIR firma -150 /miR-886-3p podría predecir la progresión del cáncer y la supervivencia en pacientes con CPCP en etapa temprana y podría ser un biomarcador pronóstico prometedor y potenciales dianas terapéuticas para los pacientes con SCLC.
Reconocimientos
Este estudio fue aceptado para su presentación oral en la 15ª Conferencia Mundial sobre cáncer de pulmón, Sydney, Australia 31 de octubre de 27 de octubre de 2013.