Extracto
Antecedentes
El cáncer de pulmón está emergiendo rápidamente como la principal causa de muerte en pacientes con cáncer chinos. Los factores causales para el desarrollo de cáncer de pulmón chinos siguen en gran medida poco clara. Aquí se empleó una pantalla de pérdida de función basada en la biblioteca shRNA de una manera en todo el genoma e imparcial para interrogar a los candidatos potenciales supresores de tumores en el pulmón humano línea de células epiteliales inmortalizadas BEAS-2B.
Métodos /Resultados
ensayos de agar blando se llevaron a cabo para la selección de células BEAS-2B infectadas con la biblioteca shRNA retroviral con la característica adquirida de crecimiento independiente de anclaje, de gran tamaño (& gt; 0,5 mm de diámetro) y colonias bien separadas se aislaron para la proliferación . Se realizaron PCRs para amplificar el fragmento shRNA integrado a partir de ADN genómico individuo extraído de cada colonia, y cada producto de PCR se sometieron a secuenciación de ADN para revelar la integrado shRNA y su gen diana. Un total de supresores de transformación 6 candidatos, incluida INPP4B, Sesn2, TIAR, ACRC, Nup210, se identificaron LMTK3. Hemos validado Sesn2 como candidato del supresor de tumores de cáncer de pulmón. Desmontables de Sesn2 por un shRNA orientación 3 'UTR de Sesn2 transcripción potentemente estimula la proliferación y la transformación maligna de pulmón bronquial de células epiteliales BEAS-2B través de la activación de la señalización de Akt-mTOR-p70S6K, mientras que la expresión ectópica de Sens2 re-suprimió la transformación maligna provocada por el Sesn2 shRNA. Por otra parte, desmontables de Sesn2 en células BEAS-2B promovió el crecimiento de tumores de xenoinjerto trasplantado células BEAS-2B en ratones desnudos. Por último, la secuenciación de ADN indicó mutaciones del gen Sesn2 son raros, los niveles de proteína de Sesn2 de 77 pacientes con cáncer de pulmón chinos varía en gran medida en comparación con sus tejidos normales adyacentes, y el bajo nivel de expresión de los asociados Sesn2 con los pobres la supervivencia de estos pacientes examinados por Kaplan Meier.
Conclusiones
Nuestra pantalla basada en shRNA ha demostrado Sesn2 es un supresor tumoral potencial en las células epiteliales del pulmón. El nivel de expresión de Sesn2 puede servir como un marcador pronóstico de los pacientes con cáncer de pulmón chinas en la clínica
Visto:. Xu H, Sun H, H Zhang, Liu J, F Fan, Li Y, et al. (2015) Un ShRNA pantalla genético basado Identificado Sesn2 como un supresor tumoral en el cáncer de pulmón potencial a través de la supresión de la Akt-mTOR-p70S6K señalización. PLoS ONE 10 (5): e0124033. doi: 10.1371 /journal.pone.0124033
Editor Académico: Max Costa, Escuela de Medicina de la Universidad de Nueva York, Estados Unidos